estudio comparativo del efecto antibacteriano de...
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UNIVERSIDAD PRIVADA AUTÓNOMA DEL SUR
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
TESIS
“ESTUDIO COMPARATIVO DEL EFECTO ANTIBACTERIANO DE TRES MARCAS DEL TOCOSH (Solanum tuberosum) FRENTE A
Staphylococcus aureus ATCC 25923 AREQUIPA-2019”
PRESENTADA POR: BACH. COAQUIRA MACHACA, SONIA
BACH. QUISPE MAMANI, RUTH VANESSA
PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE QUÍMICO FARMACÉUTICO
Asesora:
Mg. Gisele Delgado Montoya
Arequipa-Perú
2020
UNIVERSIDAD PRIVADA AUTÓNOMA DEL SUR
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
TESIS
“ESTUDIO COMPARATIVO DEL EFECTO ANTIBACTERIANO DE TRES MARCAS DEL TOCOSH (Solanum tuberosum) FRENTE A
Staphylococcus aureus ATCC 25923 AREQUIPA-2019”
PRESENTADA POR: BACH. COAQUIRA MACHACA, SONIA
BACH. QUISPE MAMANI, RUTH VANESSA
PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE QUÍMICO
FARMACÉUTICO
APROBADO POR:
PRESIDENTE DEL JURADO : Mg. Elena Gárate de Dávila
PRIMER MIEMBRO DEL JURADO : Mg. Elvis Gonzales Condori
SEGUNDO MIEMBRO DEL JURADO : Mg. Betty Salazar Pinto
I
DEDICATORIA
A Dios, que, con su infinita gracia e
inmenso amor, le dio luz a nuestras
vidas y razón a nuestra existencia;
gracias por permitirnos redactar el
primer paso hacia un mañana mejor.
A esa luz increíble que ilumina mi vida mis
queridos padres, Miguel y Tomasa, mis
hermanos (as) y tías; por apoyarme siempre
y en todos los momentos de mi vida. Familia
gracias por darme la voluntad y fuerza para
culminar mi carrera.
Sonia
Todo este esfuerzo está dedicado a mi
Madre querida porque sé que ella me ayudo
en las buenas y en las malas y lo sigue
haciendo, además de haberme dado la vida,
siempre confió en mi y nunca me
abandono. Te quiero mamita.
Ruth
II
AGRADECIMIENTO
Principalmente a Dios, quien como guía estuvo presente en el caminar de nuestras vidas,
bendiciéndonos y dándonos fuerzas para continuar con nuestras metas trazadas sin
desfallecer. A nuestros padres y familiares que con apoyo incondicional, amor y confianza
permitieron que logremos culminar nuestra formación profesional.
A todas las personas que nos han apoyado y han hecho que el trabajo se realice con éxito.
En especial a aquellos que nos abrieron las puertas y compartieron sus conocimientos.
III
RESUMEN
En la actualidad en el mercado Arequipeño existen diferentes marcas de Tocosh
que son expendidas para aprovechar sus propiedades medicinales; sin embargo,
existe variabilidad en cuanto a los precios en las diversas marcas, por lo cual en la
presente investigación se tuvo como objetivo principal comparar el efecto
antibacteriano de tres marcas del Tocosh “Solanum tuberosum” frente a
Staphylococcus aureus ATCC 25923. Para lo cual, en primer lugar, se obtuvieron
los extractos etanólicos (Ex-E) de las muestras de Tocosh por el método de
extracción por Soxhlet y el efecto antibacteriano fue determinado por el método de
Kirby Bauer midiendo los diámetros de los halos de inhibición y se consideró
Altamente Sensible (diámetros entre 30 a 35 mm), Sensible (diámetros entre 20 a
30 mm), de Sensibilidad Intermedia (15 a 20 mm) y Resistente (menores a 15 mm).
La sensibilidad de Staphylococcus aureus ATCC 25923 fue evaluada a
concentraciones de 12.5, 25, 50, 60, 70, 80, 90 y 100% del Ex-E las 3 muestras de
Tocosh. El Ex-E de la muestra 1 de Tocosh presentó efecto antibacteriano frente a
Staphylococcus aureus ATCC 25923 resultando Altamente Sensibles a los
extractos de 80, 90 y 100 % y Sensibles frente a extractos de 12.5, 25, 50, 60 y
70%. Por otro lado, el Ex-E de la muestra 2 de Tocosh también presentó efecto
antibacteriano siendo Altamente Sensibles al extracto de 100%, Sensibles frente a
extractos de 50, 60, 70, 80 y 90%, de Sensibilidad Intermedia frente al extracto de
25% y Resistente al extracto del 12.5%. Asimismo, el Ex-E de la muestra 3 de
Tocosh también presentó efecto antibacteriano frente a Staphylococcus aureus
ATCC 25923 siendo Altamente Sensible al extracto de 100%, Sensibles frente a
extractos de 25, 50, 60, 70, 80 y 90% y de Sensibilidad Intermedia frente al extracto
de 12.5%.
Finalmente, el Ex-E obtenido de la muestra 1 de Tocosh tuvo mayor efecto
antibacteriano frente a Staphylococcus aureus ATCC 25923 que los Ex-E de las
muestras 2 y 3 al 95% de confianza; además, no se encontró diferencia significativa
entre los Ex-E de las muestras 2 y 3 de Tocosh.
Palabras clave. Extracto etanólico, Staphylococcus aureus, Tocosh, Sensibilidad
IV
ABSTRACT
Actually, in the Arequipean market there are different Tocosh brands that are sold
to take advantage of their medicinal properties, however, there are variability in
terms of prices in the various brands, so in the present investigation it was aimed at
comparing the antibacterial effect of three Tocosh brands “Solanum tuberosum”
against Staphylococcus aureus ATCC 25923. On the other hand, the ethanolic
extracts (Ex-E) of the Tocosh samples were obtained by the Soxhlet extraction
method and the Antibacterial effect was determined by the method of Kirby Bauer
by measuring the diameters of inhibition halos and was considered Highly Sensitive
(diameters between 30 and 35 mm), Sensitive (diameters between 20 to 30 mm),
Intermediate Sensitivity (diameters de 15 to 20) and resistant (smaller to 15 mm).
The sensitivity of Staphylococcus aureus ATCC 25923 was evaluated at the
concentrations of 12.50, 25.00, 50.00, 60.00, 70.00, 80.00, 90.00 and 100.00% E-
Ex of the 3 Tocosh samples. The Ex-E of Tocosh sample 1 showed an antibacterial
effect against Staphylococcus aureus ATCC 25923, being highly sensitive to
extracts of 80, 90 and 100% and sensitive to extracts of 12.5, 25, 50, 60 and 70%.
on the other hand, the E-Ex of Tocosh sample 2 also has an antibacterial effect
being Highly Sensitive to the 100% extract, Sensitive to 50, 60, 70, 80 and 90%
extracts, of Intermediate Sensitivity to the extract of 25% and Resistant to the extract
of 12.50%, likewise, E-Ex of Tocosh sample 3 was also antibacterial effect against
Staphylococcus aureus ATCC 25923 being highly sensitive to the extract of 100%,
Sensitive against extracts of 25, 50, 60, 70, 80 and 90%, of Intermediate Sensitivity
against the extract of 12.50%.
Finally, the E-Ex obtained from Tocosh sample 1 has a greater antibacterial effect
against Staphylococcus aureus ATCC 25923 than the Ex-E of samples 2 and 3 at
95% confidence, likewise, they do not differ significantly between E-Ex of samples
2 and 3 at 95% confidence.
Keywords. Ethanol extract, Staphylococcus aureus, Tocosh, Sensitivity
V
ÍNDICE DE CONTENIDOS
DEDICATORIA ........................................................................................................ I
AGRADECIMIENTO ............................................................................................... II
RESUMEN ............................................................................................................ III
ABSTRACT ........................................................................................................... IV
ÍNDICE DE CONTENIDOS .................................................................................... V
ÍNDICE DE TABLAS .............................................................................................. X
ÍNDICE DE FIGURAS .......................................................................................... XII
ÍNDICE DE ANEXOS .......................................................................................... XIII
INTRODUCCIÓN ................................................................................................ XIV
CAPÍTULO I ........................................................................................................... 1
EL PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN ................................................................... 1
1.1. Descripción de la realidad problemática .................................................... 1
1.2. Formulación del problema ......................................................................... 3
1.2.1. Problema principal ................................................................................. 3
1.2.2. Problemas secundarios.......................................................................... 3
1.3. Objetivos de la investigación ..................................................................... 4
1.3.1. Objetivo general ..................................................................................... 4
1.3.2. Objetivos específicos ............................................................................. 4
1.4. Justificación del estudio ............................................................................ 5
CAPÍTULO II .......................................................................................................... 7
MARCO TEÓRICO ................................................................................................. 7
2.1. Antecedentes de la investigación .............................................................. 7
2.1.1. A nivel Internacional ............................................................................... 7
2.1.2. A nivel Nacional ..................................................................................... 8
2.1.3. A nivel local ............................................................................................ 9
VI
2.2. Base teórica ............................................................................................ 11
2.2.1. Staphylococcus aureus ........................................................................ 11
2.2.1.1. Factores de virulencia ....................................................................... 11
2.2.1.2. Proceso de infección ........................................................................ 12
2.2.1.3. Diagnóstico ....................................................................................... 12
2.2.1.4. Tratamiento para Stapylococcus aureus .......................................... 12
2.2.2. Papa .................................................................................................... 13
2.2.2.1. Información Taxonómica .................................................................. 14
2.2.3. Tocosh de Papa ................................................................................... 15
2.2.3.1. Harina de Tocosh de papa ............................................................ 16
a. Selección de materia prima ..................................................................... 16
b. Lavado .................................................................................................... 16
c. Cortado ................................................................................................... 16
d. Trituración ............................................................................................... 16
e. Estrujar .................................................................................................... 17
f. Desmenuzado ......................................................................................... 17
g. Secado .................................................................................................... 17
h. Molienda y tamizado ............................................................................... 17
2.2.4. Extractos vegetales .............................................................................. 17
2.2.5. Equipo Soxhlet ..................................................................................... 18
2.2.6. Composición química ........................................................................... 18
2.2.7. Usos comunes del Tocosh ................................................................... 19
A. Penicilina Natural .................................................................................... 19
B. Aumenta el sistema inmunológico ........................................................... 19
C. Úlceras estomacales ............................................................................... 19
D. Gastritis crónica ...................................................................................... 19
E. Afecciones renales .................................................................................. 19
VII
F. Hemorroides ............................................................................................ 19
G. Calor corporal .......................................................................................... 19
2.3. Definición de términos ............................................................................. 20
2.3.1. Bacteria ................................................................................................ 20
2.3.2. Agua de Peptona ................................................................................. 20
2.3.3. Agar Manitol ......................................................................................... 21
2.3.4. Agar Mueller Hinton ............................................................................. 21
2.3.5. Solución Estándar ................................................................................ 21
2.3.6. Antibiograma ........................................................................................ 22
2.3.7. ATCC ................................................................................................... 22
2.3.8. Cepa .................................................................................................... 22
2.3.9. Colonia ................................................................................................. 23
2.4. HIPÓTESIS ............................................................................................. 23
2.4.1. Hipótesis General ................................................................................ 23
2.4.2. Hipótesis Específicas ........................................................................... 23
2.5. VARIABLES ............................................................................................ 24
2.5.1. Definición de variables ......................................................................... 24
- Variable Independiente: .......................................................................... 24
- Variable dependiente: ............................................................................. 24
2.5.2. Definición operacional de variables ..................................................... 24
2.5.3. Operacionalización de variables .......................................................... 24
CAPÍTULO III ....................................................................................................... 25
METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN .......................................................... 25
3.1 Tipo y nivel de investigación ................................................................... 25
3.1.1 Nivel de la Investigación ...................................................................... 25
3.1.2 Tipo de Investigación ........................................................................... 25
3.1.3 Diseño de la investigación ................................................................... 25
VIII
3.2 Descripción del ámbito de la Investigación ............................................. 25
3.2.1 Ubicación espacial y temporal ............................................................. 25
3.2.2 Ubicación temporal .............................................................................. 25
3.3 Población, muestra y muestreo ............................................................... 25
3.3.1 Población de estudio ............................................................................ 25
3.3.2 Muestra ................................................................................................ 25
3.3.3 Muestreo .............................................................................................. 25
3.4 Técnicas e instrumentos para la recolección de datos ............................ 26
3.4.1 Material biológico ................................................................................. 26
3.4.2 Material y equipos. ............................................................................... 26
3.4.2.1 Material ............................................................................................. 26
3.4.2.2 Equipos ............................................................................................. 27
3.4.2.3 Reactivos .......................................................................................... 27
3.4.2.4 Medios de Cultivo ............................................................................. 27
3.4.3 Técnicas ............................................................................................... 28
3.4.4 Método del antibiograma disco-placa .................................................. 28
3.4.4.1 Fundamento ..................................................................................... 28
3.4.4.2 Indicaciones y limitaciones ............................................................... 29
CAPÍTULO IV ....................................................................................................... 30
RESULTADOS ..................................................................................................... 30
4.1. Obtención del Extracto ............................................................................ 30
4.2. Preparación de los Discos de Sensibilidad ............................................. 30
4.3. Escala de Turbidez.................................................................................. 31
4.4. Determinación del Efecto Antibacteriano ................................................ 32
A. Lectura e interpretación ........................................................................... 32
4.4.1. Evaluación del efecto antibacteriano frente a Staphylococcus aureus de
la muestra 1 ...................................................................................................... 33
IX
4.4.2. Evaluación del efecto antibacteriano frente a Staphylococcus aureus de
la muestra 2 ...................................................................................................... 38
4.4.3. Evaluación del efecto antibacteriano frente a Staphylococcus aureus de
la muestra 3 ...................................................................................................... 43
4.4.4. Comparación del efecto antibacteriano frente a Staphylococcus aureus
de los extractos etanólicos al 100 % de las muestras 1, 2 y 3 de Tocosh ........ 48
CAPÍLUTO V ........................................................................................................ 52
DISCUSIÓN ......................................................................................................... 52
CONCLUSIONES ................................................................................................. 57
RECOMENDACIONES ........................................................................................ 58
BIBLIOGRAFÍA .................................................................................................... 59
ANEXOS .............................................................................................................. 63
X
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 1. Valores nutricionales de la papa en cada 100 gramos 14
Tabla 2. Composición Química de la harina de Tocosh 18
Tabla 3. Operacionalización de variables 24
Tabla 4. Halos de inhibición de los extractos etanólicos de Tocosh (Muestra 1)
frente a Staphylococcus aureus 33
Tabla 5. Análisis de Varianza (ANOVA) de una vía para la comparación del efecto
antibacteriano de las concentraciones de los extractos etanólicos de Tocosh
(muestra 1) 35
Tabla 6. Test de Tukey para la comparación del efecto antibacteriano de las
concentraciones de los extractos etanólicos (muestra 1) de Tocosh 36
Tabla 7. Halos de inhibición de los extractos etanólicos de Tocosh (Muestra 2)
frente a Stapylococcus aureus 38
Tabla 8. Análisis de Varianza (ANOVA) de una vía para la comparación del efecto
antibacteriano de las concentraciones de los extractos etanólicos de Tocosh
(muestra 2) 40
Tabla 9. Test de Tukey para la comparación del efecto antibacteriano de las
concentraciones de los extractos etanólicos (muestra 2) 41
Tabla 10. Halos de inhibición (mm) de los extractos etanólicos de Tocosh
(Muestra 3) 43
Tabla 11. Análisis de Varianza (ANOVA) de una vía para la comparación del
efecto antibacteriano de las concentraciones de los extractos etanólicos (muestra
3) 45
Tabla 12. Test de Tukey para la comparación del efecto antibacteriano de las
concentraciones de los extractos etanólicos (muestra 3) 46
Tabla 13. Comparación del efecto antibacteriano frente a Staphylococcus aureus
de las concentraciones de los extractos etanólicos de las muestras 1, 2 y 3.
(Halos de inhibición en mm a concentraciones del 100 %) 48
Tabla 14. Análisis de Varianza (ANOVA) de una vía para la comparación del
efecto antibacteriano frente a Staphylococcus aureus de las concentraciones de
los extractos etanólicos de las muestras 1, 2 y 3 49
XI
Tabla 15. Test de Tukey para la comparación del efecto antibacteriano frente a
Staphylococcus aureus de las concentraciones de los extractos etanólicos de las
muestras 1, 2 y 3 50
XII
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1. Flujograma del proceso de extracción de la harina de Tocosh 28
Figura 2. Comparación con escala de turbidez 32
Figura 3. Prueba de normalidad, frecuencia y residuales de los halos de inhibición
(mm) de los extractos etanólicos de Tocosh (Muestra 1) frente a Staphylococcus
aureus comparados con Amoxicilina 34
Figura 4. Diagrama de cajas y bigotes de los halos de inhibición (mm) de los
extractos etanólicos de Tocosh (Muestra 1) frente a Staphylococcus aureus
comparados con Amoxicilina 37
Figura 5. Prueba de normalidad, frecuencia y residuales de los halos de inhibición
(mm) de los extractos etanólicos de Tocosh frente a Staphylococcus aureus
comparados con Amoxicilina 39
Figura 6. Diagrama de cajas y bigotes de los halos de inhibición (mm) de los
extractos etanólicos de Tocosh (Muestra 2) frente a Staphylococcus aureus
comparados con amoxicilina 42
Figura 7. Prueba de normalidad, frecuencia y residuales de los halos de inhibición
(mm) de los extractos etanólicos de Tocosh (Muestra 3) frente a Staphylococcus
aureus comparados con Amoxicilina 44
Figura 8 Diagrama de cajas y bigotes de los halos de inhibición (mm) de los
extractos etanólicos de Tocosh (Muestra 3) frente a Staphylococcus aureus
comparados con Amoxicilina 47
Figura 9. Test de Tukey de la comparación del efecto antibacteriano frente a
Staphylococcus aureus de las concentraciones de los extractos etanólicos de las
muestras 1,2 y 3 50
Figura 10. Diagrama de cajas y bigotes de la comparación del efecto
antibacteriano frente a Staphylococcus aureus de las concentraciones de los
extractos etanólicos de las muestras 1,2 y 3 51
XIII
ÍNDICE DE ANEXOS
Anexo 1. Cepa de Staphylococcus aureus ATCC 25923 64
Anexo 2. Muestra de la harina de Tocosh 64
Anexo 3. Obtención del extracto y diluciones 65
Anexo 4. Preparación de agar Mueller Hinton, esterilización y distribución en
placas 66
Anexo 5. Preparación de inóculo 67
Anexo 6. Distribución de discos e incubación de placas 67
Anexo 7. Lectura de placas 68
XIV
INTRODUCCIÓN
El Perú posee cerca de 72 % de las zonas de vida en el mundo, hecho que da como
resultado una variedad intensa de especies en flora y fauna, que desde tiempos
antiguos estuvieron a disposición de los pobladores, influyendo notablemente en el
desarrollo de sus hábitos alimenticios y costumbres. Situaciones provocadas por
factores ambientales o sociopolíticos forzaron a los pobladores a observar,
descubrir y aplicar técnicas particulares a los alimentos con el fin de obtener
mejores cosechas, conservarlos y prolongar su vida útil (1).
De acuerdo a costumbres populares, este producto es usado en el posparto, resfrío,
neumonía, en la curación de heridas, como antibacteriano, cicatrizante de
hemorroides y de úlcera gástrica, para evitar las infecciones gastrointestinales y
mal agudo de altura o soroche. Además, podría ser un antibiótico, energizante,
probiótico eficaz y de muy bajo costo (1).
En la actualidad la papa es reconocida por la importancia que brinda en la
alimentación de las personas, así mismo brinda seguridad alimentaria y al
crecimiento del estado económico de los pueblos de todo el mundo quienes lo
incluyen en su alimentación. El 18 de octubre del 2007 se proclamó que el año 2008
sería el “Año Internacional de la papa” por la Organización de la Naciones Unidas
(ONU), con la finalidad de cumplir el objetivo de fomentar conciencia en las
personas sobre el valor que nos brinda la papa como un alimento importante dentro
de la olla familiar y así mismo de producir y generar ingresos en la naciones en
desarrollo; y también de impulsar a nuevas investigaciones y el desarrollo de los
sistemas productores de la papa con la finalidad de contribuir el cumplimiento de
los objetivos del Milenio (2).
Hoy en día la papa se viene convirtiendo en uno de los cultivos de gran importancia
a nivel mundial por su nivel de consumo y por su presencia en la canasta de la
familia, posicionándose así mismo en el cuarto lugar de los cultivos alimenticios
después del arroz, el maíz, trigo. Se sabe que en Bolivia su importancia es alta
porque es considerado un artículo de primera necesidad para los habitantes de la
zona rural y urbano, se evidencia que aproximadamente el 49 % de la población
XV
boliviana es agrícola y 265,000 agricultores están involucrados en la producción de
este tubérculo (3).
Dentro del campo de la tecnología se viene realizando técnicas de conservación
artesanal de la papa y tubérculos andinos por períodos prolongados de dos meses
a más, con el fin de la conservación y transformación de la papa, concluyendo así
en la elaboración del chuño, tunta, papa seca, khaya y umakhaya. En Bolivia el
tubérculo se consume a base de una tecnología realizada llamada ”muraya” que
consiste en previa congelación, seguidamente el producto es llevado al pozo ya
listo con corriente de agua para cumplir su fermentación y finalmente se realiza el
secado, por lo que esta técnica se asemeja al que se realiza en el Perú. Mientras
que dentro del Centro y el Sur del Perú: en las ciudades de Junín, Huancavelica,
Ayacucho y Apurímac; en la actualidad en estas ciudades se vienen realizando y
utilizando esta tecnología la cual consiste en escoger tubérculos medianos, luego
extenderlo en un lugar plano, debajo del césped (4).
Es así que los profesionales de la salud, nos toca el deber de contribuir con nuestros
conocimientos científicos y hacer extensivo las propiedades curativas de nuestras
especies que puedan abarcar el mercado interno y externo. Existe la posibilidad de
industrialización de nuestros recursos naturales para efectos terapéuticos, logrando
así una estabilidad entre lo social y la salud. Los sistemas de promoción han
encontrado dificultades en la definición de las metodologías, para poder comerciarlo
como producto natural, la conversión de huertos caseros en empresas comerciales
de fitofármacos para el mercado interno debe cumplir parámetros de acuerdo a las
normas dadas por la autoridad de salud (5).
Tradicionalmente en diversos pueblos de nuestra costa, sierra y selva recurren a
las plantas medicinales para aliviar sus diversas enfermedades en forma empírica
o en todo caso recurren al curandero para la recomendación de una pócima o un
emplasto para el alivio de sus diversos malestares en diversas partes del cuerpo
(5)
1
CAPÍTULO I
EL PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN
1.1. Descripción de la realidad problemática
Según la OMS, la calidad de vida relacionada con la salud es el valor que se le
asigna a la duración de la vida modificada por la incapacidad, el estado funcional,
la percepción de la salud y las consecuencias sociales debidas a una enfermedad,
accidente, tratamiento o política determinada (6). Por esta razón, la Organización
Mundial de la Salud, ha señalado recientemente que una de las principales
acciones de la actual campaña para disminuir la morbilidad y mortalidad por
infección respiratoria aguda, consiste en instruir a la población para que pueda
saber cuándo la enfermedad requiere la evaluación del médico, y cuándo es leve y
puede ser tratada en la casa. Además, dadas las características socioeconómicas
en las que viven gran parte de la población de los países en vías de desarrollo y
que originan deficiencias en la alimentación, vivienda deficiente en servicios
básicos, el hacinamiento, entre otros, contribuyen a que las infecciones
respiratorias tengan una frecuencia mayor a la esperada (según la OMS los niños
hasta los cinco años pueden desarrollar entre seis a ocho resfríos por año) y que
éstas adquieran mayor severidad (7).
Nuestro país es uno de los más ricos en recursos naturales, los cuales incluyen una
gran variedad de especies de flora y fauna, muchas de estas especies son
aprovechadas por nuestra sociedad desde tiempos remotos y algunas han sido ya
industrializadas, encontrándose en la actualidad en el mercado nacional e
internacional. Por este motivo, resulta de suma importancia conocer de manera
mucho más específica las propiedades de los diferentes productos que son
utilizados sin comprobación científica (8).
Para el personal de salud es necesario contar con el conocimiento de todos estos
remedios ancestrales, puesto que ofrecen alternativas no solo más económicas
sino que, en muchas ocasiones, mucho más seguras. Así se podrá contemplar la
posibilidad de la industrialización de algunos de nuestros recursos naturales,
considerando que, a pesar de la vasta cantidad que se tiene en nuestro alrededor
2
no se ha usado muchos de ellos, de manera que se obtenga muchas más
alternativas de tratamiento, contribuyendo, de igual manera al crecimiento de la
industria farmacéutica en nuestro país (5).
Si se toma en cuenta que, aún sin las complicaciones, los problemas dérmicos
causan un gran malestar en el paciente, se puede asegurar que nos vemos ante un
problema que afecta enormemente a la calidad de vida de las personas. Con mayor
razón, si se trata de pacientes cuyo nivel socio-económico no les permite acceder
a tratamientos de larga duración, que de hecho, son los más frecuentes. Si no se
les ofrece a estos pacientes un tratamiento que posea la misma eficacia y seguridad
que el de una marca comercial, su calidad de vida ligada a la salud podría verse
seriamente afectada, así como su economía al serles necesarios los medicamentos
por un largo tiempo (9).
3
1.2. Formulación del problema
1.2.1. Problema principal
- ¿Cuál será el resultado del estudio comparativo del efecto antibacteriano de
tres marcas de Tocosh Solanum tuberosum frente a Staphylococcus aureus
ATCC 25923?
1.2.2. Problemas secundarios
- ¿Cuál será la actividad antibacteriana que se obtendrá del análisis de la
muestra 1 del Tocosh Solanum tuberosum frente a Staphylococcus aureus
ATCC 25923?
- ¿Cuál será la actividad antibacteriana que se obtendrá del análisis de la
muestra 2 del Tocosh Solanum tuberosum frente a Staphylococcus aureus
ATCC 25923?
- ¿Cuál será la actividad antibacteriana que se obtendrá del análisis de la
muestra 3 del Tocosh Solanum tuberosum frente a Staphylococcus aureus
ATCC 25923?
- ¿Cuál será el resultado al comparar estadísticamente los resultados obtenidos
del efecto antibacteriano de las marcas de Tocosh Solanum tuberosum frente
a Staphylococcus aureus ATCC 25923?
4
1.3. Objetivos de la investigación
1.3.1. Objetivo general
− Comparar el efecto antibacteriano de tres marcas de Tocosh Solanum
tuberosum frente a Staphylococcus aureus ATCC 25923.
1.3.2. Objetivos específicos
− Determinar la actividad antibacteriana que se obtendrá del análisis de la
muestra 1 de Tocosh Solanum tuberosum frente a Staphylococcus
aureus ATCC 25923.
− Determinar la actividad antibacteriana que se obtendrá del análisis de la
muestra 2 de Tocosh Solanum tuberosum frente a Staphylococcus
aureus ATCC 25923.
− Determinar la actividad antibacteriana que se obtendrá del análisis de la
muestra 3 de Tocosh Solanum tuberosum frente a Staphylococcus
aureus ATCC 25923.
− Comparar estadísticamente los resultados obtenidos del efecto
antibacteriano de las tres marcas de tocosh Solanum tuberosum frente
a Staphylococcus aureus ATCC 25923.
5
1.4. Justificación del estudio
El presente proyecto de investigación, se llevó a cabo con la inquietud y la finalidad
de investigar la capacidad antimicrobiana de la papa fermentada sobre la bacteria
de Staphylococcus aureus siendo así su importancia la cual nos permitió demostrar
las propiedades químicas que tiene la papa fermentada para curar las
enfermedades como la gastritis, ulceras, infecciones urinarias, respiratorias,
tópicas, etc., las cuales son ocasionadas por las bacterias mencionadas, donde el
tocosh Solanum tuberosum es considerado como un remedio o alternativa casera
que se utilizaría para aliviar a las personas que sufren de estas enfermedades, así
mismo se podrá iniciar una alimentación nutricional en esos pacientes dejando de
lado a los medicamentos que no cumplen con el efecto esperado, con este fin se
tratara de demostrar a los médicos que la alimentación natural sirve y es efectiva
más que los medicamentos que ellos recomiendan (10).
El estudio y evaluación del producto presentado en este trabajo nos permitió
contribuir con una nueva opción para el tratamiento de diferentes afecciones, lo cual
sería sumamente provechoso para la población debido a su carácter natural, y sus
ya conocidas propiedades antibacterianas (11).
Se buscó contribuir con el conocimiento sobre el efecto antibacteriano del Tocosh
Solanum tuberosum contribuyendo así a dar una respuesta al aumento de
reacciones adversas disponibles en los esquemas actuales de tratamiento. Se
pretendió proporcionar evidencias científicas sobre el uso terapéutico de las
sustancias en estudio a la población y economía de muchos hogares, puesto que
muchas personas no pueden acceder a tratamientos prolongados por el costo de
los mismos y, que son frecuentes en situaciones bacterianas (11).
Ante esta problemática y dado el hecho de que la solución no es proveer
medicamentos, creemos conveniente hacer un estudio experimental con el fin de
buscar nuevas formas de tratamiento que se operativicen en nuestra comunidad,
motivo por el cual esta investigación está orientada a insertar el tocosh Solanum
tuberosum como un ícono para la medicina alternativa, basándonos en sus
principios activos (11).
6
Este estudio está orientado a demostrar la acción antibacteriana de un producto
natural como es la papa fermentada Solanum tuberosum in vitro. De alcanzar su
efectividad será difundido como medio alternativo de tratamiento natural para este
cuadro patológico que es tan frecuente en diferentes partes del mundo (11).
Si no se les ofrece a estos pacientes un tratamiento que posea la misma eficacia y
seguridad que el de una marca comercial, su calidad de vida ligada a la salud podría
verse seriamente afectada, así como su economía al serles necesarios los
medicamentos por un largo tiempo (9).
La información actualizada permitirá a las personas que están involucradas en el
procesamiento de la papa en el producto Tocosh, conocer formas de consumo,
beneficios medicinales y comercialización en la ciudad de Arequipa (12).
7
CAPÍTULO II
MARCO TEÓRICO
2.1. Antecedentes de la investigación
2.1.1. A nivel Internacional
Estrada Orozco S. 2010 DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD
ANTIMICROBIANA IN VITRO DE LOS EXTRACTOS DE ROMERO “Rosmarinus
officinalis” y TOMILLO “thymus vulgaris” ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA
DE CHIMBORAZO Riobamba-Ecuador. Realizó una investigación basada en la
actividad antibacteriana in vitro de los extractos de Romero y Tomillo frente a
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Salmonella typhimurium ATCC 14028,
Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Candida albicans ATCC 10231 y
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. Dicha investigación se realizó en los
laboratorios de Fitoquímica y Microbiología de la Facultad de Ciencias de la Escuela
Superior Politécnica de Chimborazo. Para lograr el efecto deseado, se trabajó con
los extractos que se obtuvo por la técnica de maceración; se colocaron las hojas y
tallos en un balón aforado con hexano y alcohol–agua, se procedió a realizar el
control de calidad y se llevó a evaporación del solvente a Baño María.
Seguidamente se usó tres concentraciones diferentes y la mezcla de los extractos
blandos frente a las distintas bacterias y se logró comprobar sus propiedades
antimicrobianas utilizando el método de Mitscher, este método determinó el
crecimiento de los microorganismos estando presente las concentraciones
crecientes del antimicrobiano (los extractos), que se encuentran diluidos en el
medio de cultivo. Después de 24 y 48 horas de incubación; se demostró que los
extractos de ambas plantas presentan actividad antibacteriana siendo la más
destacada la mezcla de los extractos hexánicos a concentraciones de 10000 y 1000
µg/mL frente a Staphylococcus aureus, Candida albicans y Pseudomonas
aeruginosa debido a la presencia de compuestos fenólicos como el timol, carvacrol
y cineol presentes en el aceite esencial por lo que es recomendable utilizar la
mezcla de ambos extractos en caso de infección por bacterias y hongos (13).
8
2.1.2. A nivel Nacional
Carranza Sánchez R., Huamanchaqui Hilario A. 2017 EFECTO CICATRIZANTE
DE UNA CREMA A BASE DE Solanum tuberosum (TOCOSH) Y MEMBRANA
TESTÁCEA DE HUEVO DE GALLINA EN RATONES ALBINOS CON LESIONES
POR HERIDAS PUNZO CORTANTES UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA
VEGA. LIMA-PERÚ. En su estudio de Tocosh de papa (Solanum tuberosum)
demuestran que es muy utilizado en distintas departamentos de nuestro país por
presentar propiedades medicinales. La investigación tuvo como objetivo general
evaluar el efecto cicatrizante de una crema elaborada a base de Tocosh (Solanum
tuberosum) y membrana testácea de huevo de gallina utilizadas empíricamente con
la misma función. Inicialmente se determinó los metabolitos del Tocosh (Solanum
tuberosum) encontrando compuestos fenólicos y aminoácidos libre en alta
concentración y, flavonoides, alcaloides y azúcares reductores en moderada
concentración. Para la investigación farmacológica tópica, se preparó una crema
base añadiendo las concentraciones de 1.5 % de Tocosh más 0.5 % de membrana
testácea de huevo de gallina, 3.5 % de Tocosh más 1.5 % de membrana testácea
de huevo de gallina y 7 % de Tocosh más 3 % de membrana testácea de huevo de
gallina. En el experimento, se trabajaron ratones machos cepa: BAL–C–53 en
distintos grupos: uno de control, tres experimentales y uno de comparación, se les
realizo una lesión con bisturí en el lomo. Se demostró que la crema a base de
Solanum tuberosum (Tocosh) posee efecto cicatrizante; además, se evidenció que
este es mayor con una concentración del 7 % de Tocosh más el 3 % de membrana
testácea de huevo de gallina, que se logra en siete días con una frecuencia de 2
veces de aplicación diaria (11).
Almonacid Moscoso A. 2012 Efecto antiinflamatorio y cicatrizante del extracto
liofilizado de Aloe Vera presentado en forma de gel farmacéutico
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS LIMA-PERÚ.
Determinaron el efecto antiinflamatorio y cicatrizante del Gel del extracto de Aloe
vera y su contenido (sábila) posteriormente se preparó el Gel del extracto de Aloe
vera al 20 % y fue aplicada por vía tópica en 40 pacientes entre las edades 20 a 50
años, de ambos sexos, en el establecimiento de Salud Ganimedes DISA LIMA
ESTE del Ministerio de Salud, y otro grupo de 40 pacientes (grupo control) sin la
9
aplicación del Gel del extracto de Aloe vera, comparando ambos casos se
determinó la eficacia antiinflamatoria y cicatrizante del Gel del extracto de Aloe vera,
que consistió en el control de la medición de la inflamación y la herida leve cerrada
al paciente, desde su llegada por Emergencia (tópico) al establecimiento de Salud,
por efecto de un trauma accidental o por otra índole; primero se evalúo el estado
general del paciente para un diagnóstico médico, luego se plantea para su
consentimiento del estudio a realizar, iniciando el uso tópico mediante controles de
observación y medición de la zona inflamada y herida leve cerrada, así como el
cambio de color de la piel y reacciones adversas que puede ocasionar el uso tópico
hasta su recuperación total. El estudio del Gel del extracto de Aloe vera (sábila) ha
demostrado su efecto anti inflamatorio y cicatrizante en la parte externa de la piel,
el cual se llevó a cabo por el método mecánico y tópico. El Gel del extracto de Aloe
vera, es un producto natural de bajo costo, de acceso fácil para su elaboración,
presentando actividad antiinflamatoria y cicatrizante, aplicada por vía tópica en los
pacientes tratados en mención. La calidad de la inflamación y la cicatrización
obtenida con Gel del extracto de Aloe vera demuestra que es de gran utilidad en
tratamiento dermatológico o en cirugía plástica, obteniendo mejores resultados en
regeneración de tejido o piel y epitelización de las heridas (5).
2.1.3. A nivel local
RODRIGUEZ LIRA, G. 2012 DETERMINACIÓN DEL EFECTO
ANTIBACTERIANO IN VITRO DE LA Rivina humilis l. (Flor Blanca) SOBRE EL
CRECIMIENTO DE Escherichia coli, Staphylococcus aureus y Pseudomona
aeruginosa UNIVERSIDAD CATOLICA DE SANTA MARÍA AREQUIPA-PERÚ En
la presente investigación determinaron el efecto antimicrobiano de las flores de
Rivina humilis l. (Flor Blanca) frente a los microorganismo Staphylococcus aureus,
Escherichia coli y Pseudomona aeruginosa. Se obtuvieron extractos con distintos
solventes orgánicos que presentaban diferentes polaridades, evaluando el extracto
con mayor porcentaje de rendimiento; de los cuales el extracto etanólico tuvo un
rendimiento de 28.10 %, el acetato de etilo de 15 % y el hexánico de 8.7 %. El
extracto con mayor rendimiento fue el extracto etanólico con la que se realizaron
las pruebas antimicrobianas. posteriormente el extracto etanólico por poseer el
mayor porcentaje de rendimiento se realizó la Concentración Inhibitoria Mínima
10
(CIM) por el método de dilución en tubo, por cada bacteria estudiada se realizó una
repetición de tres veces (bacterias de diferentes procedencias); se obtuvo los
siguientes resultados: para las cepas patógenas de Staphylococcus aureus y
Escherichia coli se halló una CIM de 8 mg/mL y para al Pseudomona aeruginosa
una CIM de 30 mg/ml. Posteriormente se determinó la Concentración Bactericida
Mínima (CBM) con cepas patógenas de Staphylococcus aureus, Escherichia coli y
Pseudomona aeruginosa, por el método de dilución en tubo. Para determinar la
Concentración Bactericida Mínima (CBM), con el método de dilución en tubo
sembrando las diluciones, por 24 horas de incubación en placas con agar Mueller
Hinton, donde se obtuvo los siguientes resultados: para el caso de las cepas
patógenos de Staphylococcus aureus y Escherichia coli se halló un CBM de 9
mg/mL y para la Pseudomona aeruginosa una CBM de 35 mg/ml. Finalmente se
realizó la Cromatografía de Capa Fina (CCF) al extracto etanólico de Rivina humilis
l. (Flor Blanca) observándose que este presentaba terpenos, flavonoides y taninos
(14).
EVANGELINA CCAPA, P. 2017 ESTUDIO DEL MERCADO DEL TOCOSH
(TUQUSH) Solanlim andigenum FERMENTADO – PUTREFACTO Y
COMERCIALIZACIÓN EN LA CIUDAD DE AREQUIPA. A su vez en la época
incaica se consumía el tocosh por los pobladores, en las regiones centrales del
Perú. Además de consumirlo como alimento lo empleaban como un medicamento
natural. Hoy en día el consumo no ha cambiado principalmente en las regiones que
lo producen como en Ancash, Huánuco y Junín siendo estos los grandes
productores de papas.
El procesamiento de la papa es en las alturas y depositadas en los riachuelos de la
sierra por un cierto tiempo, así se obtiene el tocosh, La palabra tocosh deriva del
vocablo tuqush, palabra quechua que significa arrugado y fermentado. El nombre
científico es (tuqush) Solanlim andigenum fermentado – putrefacto, y su nombre
popular es el Tocosh, togosh o tocos.
Este producto se ha investigado científicamente descubriendo su composición
desde el punto de vista bromatológico y nutricional, concentra un alto contenido de
carbohidratos (80.01g %), proteínas (3.91g %), siendo el valor calórico elevado de
343,4 cal-g % y bajo contenido de grasas. Asimismo, contiene alcaloides,
11
aminoácidos, antimicrobiano. El tocosh es uno de los productos que nos ofrece la
madre naturaleza para la conservación de la vida y gozar de buena salud. Es por
ello que la investigación ha desarrollado lo relacionado al estudio del mercado y su
comercialización en la ciudad de Arequipa, para ello se ha tomado en cuenta los
temas correspondientes en cada uno de los capítulos desarrollados y sometidos al
proceso de investigación (12).
2.2. Base teórica
2.2.1. Staphylococcus aureus
Es un microorganismo que se encuentra ampliamente diseminado en el ambiente
ya que posee características particulares de virulencia y resistencia contra
antibióticos, lo cual representa un grave problema de salud, esto es, gracias a que
su distribución se extiende a nivel mundial y el impacto en la morbimortalidad es
considerable a nivel comunitario e intrahospitalario. En los humanos, causa una
amplia variedad de enfermedades infecciosas y su principal impacto es ocasionado
por las cepas de Staphylococcus aureus, que son sumamente resistentes a la
meticilina (MRSA) y otros antibióticos que antes eran eficaces contra el tratamiento
de las infecciones. Desde el punto de vista genómico, la resistencia se produce por
selección natural a través de mutaciones producidas al azar; sin embargo, también
se pueden inducir artificialmente mediante la aplicación de una presión selectiva a
una población, como sería el abuso o la utilización de antibióticos; asimismo,
Staphylococcus aureus tiene características genéticas que le han permitido
convertirse en una de las bacterias más importantes en la clínica y en las
enfermedades transmitidas por alimentos (15).
2.2.1.1. Factores de virulencia
Son aquellas condiciones o características específicas de cada microorganismo
que lo hacen patógeno.
El Staphylococcus aureus se caracteriza por presentar múltiples factores de
virulencia, algunos de los cuales estarían relacionados con la gravedad de la
infección desarrollada en el huésped (16).
12
2.2.1.2. Proceso de infección
Staphylococcus aureus es una de las principales causas de infecciones adquiridas
en la comunidad y a nivel hospitalario, que pueden dar lugar a graves
consecuencias. Las infecciones nosocomiales por Staphylococcus aureus pueden
provocar bacteremias y afectar la piel, los tejidos blandos y el tracto respiratorio
inferior. Puede ser responsable de bacteremia asociada a catéter venoso central y
neumonía. También puede provocar graves infecciones como endocarditis y
osteomielitis. Además de las infecciones mencionadas anteriormente, esta bacteria
es a menudo responsable de enfermedades mediadas por toxinas, tales como
síndrome de choque tóxico, síndrome de la piel escaldada y enfermedades
transmitidas por alimentos (17).
Staphylococcus aureus puede comportarse como un organismo comensal y como
un agente patógeno. La mucosa nasal es el principal sitio de colonización en los
seres humanos. Se ha estimado que aproximadamente del 20 al 30% de la
población general es portadora de esta bacteria. La colonización aumenta
significativamente el riesgo de infecciones, ya que proporciona un reservorio a partir
del cual las bacterias se diseminan cuando las defensas del hospedero se ven
comprometidas (17).
2.2.1.3. Diagnóstico
Estos medios deben almacenarse a 2-8ºC y se recomienda realizar controles de
calidad de los medios con las cepas Staphylococcus aureus ATCC 25923 (sensible
a penicilinas). Proporcionan resultados en 24 horas. Se realiza una primera lectura
a las 24 horas del cultivo y si en las placas no se detecta crecimiento de
microorganismos, se prolonga la incubación hasta las 48 horas. Cualquier
microorganismo con una coloración compatible con lo especificado por el fabricante
se identificará como MRSA (métodos de diagnóstico rápido de Staphylooccus
aureus). Posteriormente se realizan los estudios que se consideren oportunos (18).
2.2.1.4. Tratamiento para Stapylococcus aureus
En el tratamiento de toda infección por Stapylococcus. aureus debe considerarse
en primer lugar, el drenaje de cualquier colección supurada (absceso o empiema),
el desbridamiento del tejido necrótico (celulitis, fascitis) y la retirada del material
extraño (catéter, derivación ventricular, neuroestimulador, material protésico o de
13
osteosíntesis), con objeto de reducir la carga bacteriana para disminuir el riesgo de
desarrollo de resistencia y acortar la duración del tratamiento antibiótico. La
precocidad en el inicio de un tratamiento antimicrobiano eficaz es un factor
pronóstico importante en toda infección grave y lo es especialmente en la infección
estafilocócica.
Si la infección cursa con criterios de sepsis grave o con una carga bacteriana
potencialmente elevada, el tratamiento debe realizarse con dosis de un antibiótico
o asociaciones de antibióticos, que alcancen la concentración sérica óptima desde
la primera administración. Para conseguirlo, hay que tener en cuenta la
conveniencia de emplear una dosis inicial de carga, cuando la semivida de
eliminación del antibiótico sea prolongada (independientemente de la función
renal), ha de valorarse el efecto sobre la concentración sérica del posible aumento
del volumen de distribución y, en pautas de tratamiento empírico, deben elegirse
antibióticos que ofrezcan actividad frente a más del 95% de cepas, si éste es
prevalente en el medio y la infección es de gravedad moderada o alta. Con
frecuencia, la información que puede aportar el laboratorio de Microbiología es
imprescindible para optimizar la eficacia del tratamiento antibiótico de la infección
estafilocócica grave (19).
2.2.2. Papa
La papa se cultiva en los Andes desde hace más de 7.000 años. Según
investigaciones confirmadas recientemente, el origen de la papa, especie Solanum
tuberosum, se centra en la parte norte del lago Titicaca, sur del Perú. Actualmente,
la subespecie Solanum tuberosum es el cuarto cultivo de mayor importancia en el
mundo después del arroz, el trigo y el maíz. Se cultiva en más de 130 países. En el
año 2005 cubrió una superficie de 18652.381 hectáreas a nivel mundial (FAO,
2005) (14).
14
2.2.2.1. Información Taxonómica
A continuación, se presenta la clasificación taxonómica correspondiente a la papa
(tocosh)
Reino: Plantae
División: Agnoliophyta
Clase: Magnoliopsida
Orden: Solanales
Familia: Solanaceae
Género: Solanum L.
Especie: Tuberosum L.
La papa es considerada uno de los alimentos más importantes, tanto en el Perú
como en el mundo, por lo que la hace, el cuarto alimento de mayor consumo a nivel
mundial, teniendo una producción aproximada de 320 millones de toneladas al año,
estando presente su cultivo en 100 países. Existen más de 4 000 variedades de
papa, mostrando así la gran diversidad que va siendo preservada gracias a las
prácticas tradicionales de los agricultores; las variaciones que presentan son en
tamaño, color, forma o textura. La planta de la cual proviene el tubérculo es una
herbácea, teniendo un alto contenido en carbohidratos, colocándola así en una
posición de alto valor genético alimenticio, también aporta proteínas, pero en una
menor proporción, además de contener vitamina C (20).
Tabla 1. Valores nutricionales de la papa en cada 100 gramos:
Fuente. Crissman (20)
INORMACION NUTRICIONAL
Agua 77.00 g
Fibra 1.80 g
Valor calórico 87.00 Kcal
Proteína 1.87 g
Carbohidratos 20.13 g
Lípidos 0.10 g
Vitamina C 13.00mg
Hierro 0.31 mg
Calcio 5.00 mg
Fosforo 44.00mg
15
La papa sigue distintos procesos previos y de transformación, técnicas aplicadas
de tipo casero y artesanal, entre ellos se tienen:
• Prolongar el tiempo de almacenamiento del producto: aprovechan las
condiciones climáticas como el frío y la baja humedad ambiental.
• Producir cambios en la textura, color y sabor: busca una mejor digestibilidad,
como el tostado de granos, por ejemplo, cambia la textura, mejora el sabor,
facilitando así la preparación y/o consumo del producto.
• Inducir cambio en la composición de nutrientes: provocar cambios en la
composición de nutrientes, con la finalidad de obtener sustancias
antibacterianas (20).
2.2.3. Tocosh de Papa
Como se mencionó en el apartado anterior, la técnica de inducir un cambio en la
composición de nutrientes es solamente aplicada para dos tipos de su amplia
variedad de papas, pasando así por un proceso de fermentación.
El Tocosh de papa se caracteriza por su olor desagradable, puesto que es lo
primero en percibirse, razón por la cual su consumo es limitado. En su mayoría se
debe más por las propiedades que contiene, siendo un antibiótico natural, ya que
la penicilina se produce durante el proceso de fermentación y también es capaz de
proteger la mucosa gástrica dañada (15).
La obtención del tocosh de papa comienza por cavar un hoyo en las riveras de ríos,
quebradas, riachuelos, de aproximadamente 1.5m de profundidad y 1m de
diámetro, es cubierto el fondo y las paredes con abundante ichu, se procede al
llenado, y cada 30cm de papas se pone otra capa de ichu, así sucesivamente hasta
su llenado, se cubre de la misma manera para finalmente sellarse con piedras.
Luego se conecta el hoyo con el flujo continuo de agua que tiene cerca y se deja
reposar entre 4 y 24 meses (15).
Se le hace un seguimiento al lugar donde se enterró la papa; cuando en la superficie
del ichu se observa una espuma y olor muy desagradable, es el momento indicado
para recogerlo. Una vez recolectado, se deja ventilar y expuesto al sol, quedando
listo el tocosh de papa para su comercialización (15).
16
La fermentación permite que los nutrientes se encuentren en fracciones más
sencillas fácilmente asimilables, incrementando así el contenido de linoleico y de
calcio, pudiendo ser recomendado como un alimento complementario para los
niños (15).
En la sierra central del Perú se encuentran las tres regiones productoras de tocosh,
las cuales son Ancash, Huánuco y Junín, ya que, en dichos lugares, la producción
de papas es de gran variedad (15).
2.2.3.1. Harina de Tocosh de papa
Para el proceso de la obtención de la harina, disponen la secuencia de operaciones
de la siguiente manera:
a. Selección de materia prima
Antes de realizar el procesamiento, las papas pasan por una inspección, para
separarlas por tamaño, y realizar los demás procesos de manera uniforme. Así
obtenemos un producto final de mejor calidad, que pueda satisfacer a la exigencia
de nuestro público objetivo (15).
b. Lavado
Consiste en introducir el Tocosh de papa en agua cruda, con la finalidad de poder
retirar las impurezas con las que el producto pueda llegar desde la cosecha como
tierra, arena, impurezas o polvo, la limpieza del tubérculo fermentado (15).
c. Cortado
Se realiza de manera manual, en esta etapa se corta el Tocosh de papa en partes
pequeñas, de tal manera que se pueda usar el extractor más eficiente, haciendo
uso de un cuchillo de acero inoxidable, ya que estos no desprenden componentes
que puedan afectar el estado final del producto (15).
d. Trituración
La materia prima cortada es llevada hacia el extractor donde será triturada y en esta
etapa obtendremos dos partes (15).
17
e. Estrujar
Se realiza de manera sucesiva, primero se hace con el bagazo y luego con el zumo,
mediante una tela fina, con agujeros del menor tamaño posible, se exprimen los
productos, cuyo fin es eliminar la mayor cantidad de agua presente en los productos
obtenidos por la trituración (15).
f. Desmenuzado
Se corta el bagazo en partes pequeñas, para que aumente el área de contacto al
ser expuestas al calentador y disminuir el tiempo de secado, usando fuerza
mecánica, y el cuchillo de acero inoxidable (15).
g. Secado
La operación se efectúa mediante la exposición de la materia prima ya
desmenuzada a distintas temperaturas, con el objetivo de obtener una harina
gruesa, que posteriormente será sometido a molienda (15).
h. Molienda y tamizado
El producto ya deshidratado pasa por un proceso de molienda haciendo uso de un
mortero, obteniendo la harina, esta se tamiza y lo que no se logró moler en
partículas finas regresa al mortero y así sucesivamente.
La harina de Tocosh de papa en el Perú tiene un bajo costo y desde el punto de
vista nutricional contiene un alto contenido de carbohidratos (80,03 %) y proteínas
(2,63 %) teniendo bajo contenido en grasas. En la actualidad la harina de Tocosh
de papa presenta dificultades para su consumo final y por poca demanda debido a
la falta de conocimiento de sus propiedades y el desagradable olor que tiene. Por
ello existe un gran mercado para la harina de Tocosh de papa en el Perú que aún
falta por explotar (15).
2.2.4. Extractos vegetales
La extracción es un método por la cual se obtienen los principios activos del material
vegetal, de una manera más concentrada; los componentes solubles contenidos
debidamente preparados, se disuelven en uno o más solventes o líquidos
18
extractores formando así un extracto crudo o total, el cual va a tener la 15 mayor
cantidad de principio activos, pigmentos vegetales y metabolitos secundarios (21).
2.2.5. Equipo Soxhlet
El equipo Soxhlet tiene como función recircular los vapores condensados con ayuda
de un sifón a la fuente de disolvente que se encuentra en evaporación continua,
arrastrando consigo los principios activos de la materia prima contenido en los
cartuchos desechables (22).
La capacidad aproximada en un equipo de laboratorio es de 500 mL de volumen
primario con una recirculación de 100 mL cada cinco minutos aproximadamente en
estado estable. La velocidad de reflujo depende directamente de la eficiencia y el
tamaño del condensador (22).
2.2.6. Composición química
Tabla 2. Composición Química de la harina de Tocosh
METABOLITOS ENSAYOS
RESULTADOS
Triterpenos y esteroides Lieberman –Burchard +
Quinonas Borntrager -
Compuestos fenólicos Cloruro férrico +++
Flavonoides Shinoda ++
Antocianidina Antocianidinas -
Saponinas Espuma -
Alcaloides Dragendorff ++
Alcaloides Mayer ++
Alcaloides Wagner ++
Taninos Gelatina -
Azucares reductores Fehling ++
Aminoácidos libres Ninhidrina +++
Fuente. Carranza y Huamanchaqui (11)
19
2.2.7. Usos comunes del Tocosh
A. Penicilina Natural
• Es un producto obtenido de la pulpa de papa fermentada, proceso que activa
el antibiótico (Penicilina natural).
• Es antimicrobiano (23).
B. Aumenta el sistema inmunológico
• Nos ayudara de gozar de una buena salud (23).
C. Úlceras estomacales
• Diluir una cuchara de harina de Tocosh en un vaso de agua fría (23).
D. Gastritis crónica
• Diluir una cuchara de harina de Tocosh en un vaso de agua fría (23).
E. Afecciones renales
• Diluir una cuchara de harina de Tocosh en un vaso de agua fría (23).
F. Hemorroides
• Diluir una cuchara de harina de Tocosh en un vaso de agua fría.
• Evita la osteoporosis.
• Alivia las afecciones respiratorias altas (bronquitis, faringitis, asma).
• Alimento probiótico.
• Incrementa la flora intestinal, ayudando a mejorar la digestión (23).
G. Calor corporal
• Diluir una cuchara de harina de Tocosh en un vaso de agua, endulzar con
miel con agua caliente.
• Su harina es utilizado como un curativo cuando alguien se hace una herida,
cicatrizante de hemorroides (23).
20
2.3. Definición de términos
2.3.1. Bacteria
Las bacterias son microorganismos unicelulares que presentan un tamaño de unos
pocos micrómetros (entre 0,5 y 5μm, por lo general) y diversas formas incluyendo
esferas (cocos), barras (bacilos) y hélices (espirilos). Las bacterias son procariotas
y, por lo tanto, a diferencia de las células eucariotas (de animales, plantas, hongos,
etc.), no tienen el núcleo definido ni presentan, en general, orgánulos membranosos
internos. Generalmente poseen una pared celular compuesta de peptidoglicano.
Muchas bacterias disponen de flagelos o de otros sistemas de desplazamiento y
son móviles (24).
Además de su tamaño, forma y disposición celular, otro criterio de diferenciación
de las bacterias se basa sobre sus características de tinción, con la coloración de
Gram, con esta técnica de tinción la mayor parte de las bacterias pueden ser
clasificadas como Gram positivas o Gram negativas (24).
El componente rígido de la pared celular de todas las bacterias, está constituido por
peptidoglicano o mureina. Los peptidoglicanos se encuentran en todas las especies
de bacterias excepto en los ureaplasma y micoplasmas, ya que carecen de pared
celular (24).
2.3.2. Agua de Peptona
Medio de enriquecimiento no selectivo, en el cual la peptona proporciona nutrientes
necesarios para el desarrollo microbiano y el cloruro de sodio mantiene el balance
osmótico. Permite recuperar células de entero bacterias dañadas por procesos
fisicoquímicos a los que ha sido sometido el alimento.
Además puede ser utilizado como diluyente de muestras en reemplazo de solución
fisiológica y como medio base de fermentación de hidratos de carbono. En este
último caso se debe adicionar el indicador de Andrade y el hidrato de carbono en
cuestión en concentración final al 1% (25).
21
2.3.3. Agar Manitol
Medio de cultivo para estafilococos, uso al que está destinado Medio selectivo
para el aislamiento de estafilococos patógenos. La mayoría de los
microorganismos, que no sean estafilococos, son inhibidos por la alta concentración
de cloruro de sodio. Por lo general, los estafilococos coagulasa positivo fermentan
el manitol, haciendo virar el medio al amarillo (26).
2.3.4. Agar Mueller Hinton
Medio de cultivo nutritivo no selectivo que promueve el desarrollo microbiano. Por
su composición, ha sido recomendado por el Clinical And National Committee For
Clinical Laboratori Standars (CLSI) antiguamente llamado National Committee For
Clinical Laboratori Standars (NCCLS), para ser utilizado en forma rutinaria en la
realización del antibiograma en medios sólido, debido a que presenta buena
reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad, su contenido en
inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es bajo, la mayoría de los
patógenos microbianos crece satisfactoriamente y una gran cantidad de datos
adicionales que han sido evaluados y avalados usando este medio de cultivo (25).
Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5 %, permite realizar las pruebas
de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos. También, con
el agregado de sangre puede utilizarse para el cultivo y aislamiento de
microorganismos nutricionalmente exigentes (25).
2.3.5. Solución Estándar
La solución estándar es una solución que se prepara para ser utilizada como un
patrón en métodos volumétricos. Se desea que sea estable, lo suficiente para poder
determinar su concentración una sola vez. Así mismo, que sea de reacción rápida con
el analito a estudiar, y que sea una reacción lo mayormente completa para lograr
alcanzar el punto final (27).
Para tener certeza de que una solución estándar consiga un buen resultado, debe
de estar disponible un estándar primario adecuado, ya sea una sustancia que se
encuentre en alto grado de pureza, que no absorba agua (higroscópica), que
22
contenga un alto peso equivalente para que reaccione solamente con la solución
que se va a estandarizar, de una manera estricta, dando un error insignificante en
la determinación del punto final (27).
Por lo tanto, es de alta importancia, mantener con exactitud las soluciones estándar
previo a intervenir en los experimentos dentro del laboratorio. Para ello, es necesario
tener al alcance el equipo y personal necesario para condicionar excelentes
resultados (27).
2.3.6. Antibiograma
El antibiograma es la prueba microbiológica de susceptibilidad in vitro que se lleva
a cabo para conocer el comportamiento de un microorganismo frente a
determinados antibióticos, cuyos resultados se expresan en términos de
sensibilidad y resistencia. La selección de antimicrobianos en el estudio de
susceptibilidad in vitro tiene como objetivo disponer de un adecuado apoyo en la
elección de las terapias antimicrobianas, al igual que promover su uso racional (28).
La interpretación del antibiograma presenta las siguientes características:
− Establecer la probabilidad de éxito o fracaso terapéutico que de un
antibacteriano frente a los microorganismos causantes de infección estudiados
en el antibiograma.
− Utilizar criterios en función del conocimiento microbiológico, para definir una
correlación entre el antibiograma y el éxito terapéutico.
− Realizar un análisis fenotípico de los resultados de sensibilidad según los
mecanismos de resistencia y expresión bacteriana.
− Realizar la detección de la resistencia y la predicción del fracaso terapéutico
(28).
2.3.7. ATCC
American Type Culture Collection (28).
2.3.8. Cepa
Cultivo puro formado por bacterias descendientes de un solo aislamiento (28).
23
2.3.9. Colonia
Crecimiento visible bacteriano, generalmente en medios sólidos, originada por la
multiplicación de una sola bacteria preexistente (28).
2.4. HIPÓTESIS
2.4.1. Hipótesis General
- Dado que el Tocosh “Solanum tuberosum” presenta efecto antibacteriano es
probable que exista diferencia en la actividad antibacteriana en las tres
marcas del Tocosh “Solanum tuberosum” frente a Staphylococcus aureus
ATCC 25923.
2.4.2. Hipótesis Específicas
- Es probable que exista actividad antibacteriana al analizar la muestra 1 del
Tocosh “Solanum tuberosum” frente a Staphylococcus aureus ATCC 25923.
- Es probable que exista actividad antibacteriana al analizar la muestra 2 del
Tocosh “Solanum tuberosum” frente a Staphylococcus aureus ATCC 25923.
- Es probable que exista actividad antibacteriana al analizar la muestra 3 del
Tocosh “Solanum tuberosum” frente a Staphylococcus aureus ATCC 25923.
- Dado que se va a comparar las tres marcas de Tocosh “Solanum tuberosum
es probable encontrar diferencias entre los resultados obtenidos del efecto
antibacteriano frente a Staphylococcus aureus ATCC 25923.
24
2.5. VARIABLES
2.5.1. Definición de variables
- Variable Independiente:
Tocosh “Solanum tuberosum”
- Variable dependiente:
Efecto Antibacteriano
2.5.2. Definición operacional de variables
Las concentraciones del antibacteriano, es decir, del extracto etanólico del Tocosh,
por el método de difusión en agar generan un halo en donde no se ve crecimiento
bacteriano, el cual debe medirse en mm con un instrumento, para establecer que
concentración de antibacteriano tiene mejor actividad (24).
2.5.3. Operacionalización de variables Tabla 3. Operacionalización de variables
Variable INDEPENDIENTE Indicador Subindicador
Tocosh “Solanum
tuberosum”
Marcas
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
Variable DEPENDIENTE Indicador Subindicador
Efecto Antibacteriano Discos de inhibición Tamaño del halo
Fuente. Elaboración propia
25
CAPÍTULO III
METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN
3.1 Tipo y nivel de investigación
3.1.1 Nivel de la Investigación
Descriptiva 3.1.2 Tipo de Investigación
− Según la manipulación de variables: Experimental
− Según número de mediciones: Transversal
− Según la temporalidad: Prospectivo
− Según la naturaleza de los datos: Prospectivo
− Enfoque: cuantitativo
− Paradigma: positivo
3.1.3 Diseño de la investigación
− Experimental
3.2 Descripción del ámbito de la Investigación
3.2.1 Ubicación espacial y temporal
La presente investigación fue desarrollada en los laboratorios de la Universidad
Privada Autónoma del Sur.
3.2.2 Ubicación temporal
El presente proyecto se desarrolló desde septiembre hasta noviembre del 2019.
3.3 Población, muestra y muestreo
3.3.1 Población de estudio
Kilogramos de material sólido.
3.3.2 Muestra
Mililitros de extracto de la harina de Tocosh solanum tuberosum
3.3.3 Muestreo
No probabilístico
26
3.4 Técnicas e instrumentos para la recolección de datos
3.4.1 Material biológico
En la presente tesis en primer lugar se obtuvieron cepas de Staphylococcus
aureus ATCC 25923 y como objeto de estudio se utilizó la harina de Tocosh de
distintas marcas.
3.4.2 Material y equipos.
3.4.2.1 Material
− 1 Asa de Drigalsky
− 2 Matraz 500 mL
− 1 Vernier
− 50 Ependor
− 100 Placas Petri
− 1 Probeta de 50 mL
− 1 Probeta de 100 mL
− 10 Tubos de ensayo
− 1 Varillas de vidrio
− 3 Vasos de precipitado de 50mL
− 3 Vasos de precipitado de 100mL
− 3 Vasos de precipitado de 250 mL
− 1 Gradilla de metal para tubos de ensayo
− 3 Mecheros de alcohol
− 1 Asa de nicromo (siembra)
− 1 Micropipeta graduada
− 3 Frascos estériles color ámbar
− 2 Pinzas
− 1 extensión
− Gasas estériles
− Algodón.
− Papel Aluminio
− Papel parafim
− Papel filtro rápido
− Papel Kraft
27
3.4.2.2 Equipos
− 2 Equipo soxhlet
− 2 Soporte universal
− 4 Pinzas de tres dedos
− 1 Autoclave
− 1 Balanza analítica
− 1 Cocina eléctrica
− 1 Vortex
− 1 Espátulas
− 1 Estufa
− 1 Refrigeradora
3.4.2.3 Reactivos
− Agua destilada
− Etanol de 96 °
− Suero fisiológico 0.9 %
− Cloruro de Bario
− Ácido sulfúrico
3.4.2.4 Medios de Cultivo
− Agar Mueller Hinton
− Caldo de peptona
− Agar Manitol
28
3.4.3 Técnicas
Figura 1: Flujograma del proceso de extracción de la harina de Tocosh
Fuente: Elaboración propia
3.4.4 Método del antibiograma disco-placa
3.4.4.1 Fundamento
El antibiograma disco-placa basado en el trabajo de Bauer, Kirby y colaboradores
es uno de los métodos que el National Committee for Clinical Laboratory Standards
(NCCLS) recomienda para la determinación de la sensibilidad bacteriana a los
antimicrobianos. El antibiograma disco-placa consiste en depositar, en la superficie
de agar de una placa de petri previamente inoculada con el microorganismo, discos
de papel secante impregnados con los diferentes antibióticos. Tan pronto el disco
impregnado de antibiótico se pone en contacto con la superficie húmeda del agar,
el filtro absorbe agua y el antibiótico difunde al agar. El antibiótico difunde
radialmente a través del espesor del agar a partir del disco formándose un gradiente
de concentración. Transcurridas 18-24 horas de incubación los discos aparecen
rodeados por una zona de inhibición. Se mide el diámetro de la 5 zona de inhibición
obtenida por cada una de tales cepas y se grafica dicha medida (29).
Refrigeración
Pesado
Residuo seco
Secado a Baño María
Evaporación
Extracción etanólica
Equipo soxhet
Muestra pulverizada
29
La lectura de los halos de inhibición debe interpretarse como sensible (S),
intermedia (I) o resistente (R) según las categorías establecidas por el National
Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) (29).
3.4.4.2 Indicaciones y limitaciones
El antibiograma está indicado cuando se aísla una bacteria responsable de un
proceso infeccioso y no puede predecirse su sensibilidad, especialmente si se sabe
que este tipo de bacteria puede presentar resistencia a los antimicrobianos más
habituales. Estas pruebas de sensibilidad también son útiles en estudios
epidemiológicos ya que el resultado del antibiograma puede ser considerado como
el primer marcador epidemiológico de que se dispone. El método de disco-placa es
fácil de realizar, rápido y barato. Es una metodología aplicable a una amplia
variedad de bacterias, fundamentalmente bacterias aerobias no exigentes de
crecimiento rápido (29).
30
CAPÍTULO IV
RESULTADOS
La presente investigación tuvo por objetivo principal el determinar la actividad
antibacteriana de Solanum tuberosum procesadas y expendidas como Tocosh,
dicha actividad fue evaluada frente a cepas ATCC 25923 de Staphylococcus aureus
y los resultados se detallaran más adelante.
Los datos obtenidos fueron procesados en el software MINITAB 17 usando
herramientas estadísticas como el Análisis de Varianza (ANOVA) para la
comparación de grupos considerando diferencia significativa valores de la
probabilidad menores del 0.05, así mismo, se utilizó como prueba de confirmación
de hipótesis el test de Tukey. El nivel de confianza en todas las pruebas estadísticas
fue del 95%.
4.1. Obtención del Extracto
− Se trabajó con tres marcas distintas de tocosh “Solanum tuberosum” obtenidas
en el mercado San Camilo de Arequipa (Anexo 1).
− Se obtuvo el extracto seco mediante extracción etanólica con el equipo soxhlet
(Anexo 2), haciendo un cartucho de papel filtro y colocando en el 40 g de
muestra de Tocosh, se empleó para tal fin 200 ml de etanol al 96° GL hasta
agotamiento.
− La solución obtenida se llevó a baño María para evaporación total del solvente,
y así pudimos determinar el rendimiento de cada extracción que fue de 1g de
polvo seco que a continuación se guardó en frascos de vidrio color ámbar. Cada
extracción se repitió 8 veces para poder obtener 8g de cada muestra problema.
4.2. Preparación de los Discos de Sensibilidad
− Para preparar las diluciones se tomó polvo seco y se diluyó en 1ml de etanol,
para preparar la solución al 100 % se pesó 1 g de polvo seco el cual se diluyó
en 1 ml de etanol al 96°GL, para 90 % se pesó 0.9 g, para 80 % 0.8 g, para 70
% 0.7 g, para 60 % 0.6 g para 50 % 0.5 g, para 25 % 0.25 g y para 12.5 % se
31
pesó 0.125 g, cada uno de los cuales fue agregado a 1 ml de etanol y disuelto
en el mismo fácilmente.
− Una vez obtenida las diluciones de cada muestra en distintas concentraciones
100 %, 90 %, 80 %, 70 %, 60 %, 50 %, 25 % y 12.5 %.Se incorporaron los
discos de papel filtro durante 20 minutos, después de los mismos se retiraron
de los ependor y se les dejo secar por 5 minutos quedando listos para su
utilización posterior (Anexo 3).
4.3. Escala de Turbidez
− Se reconstituyó la cepa de Stapylococcus aureus en un tubo de caldo
peptonado para reactivar la cepa, la cual se deja en incubadora por 24 horas
después de las cuales procedio a sembrarlas por barrido en un medio de agar
nutritivo el cual fue incubado por 24 horas, luego, pudimos apreciar colonias
doradas en la superficie de la placa.
− Se procedió a elaborar una escala de Turbidez (0,5 Mc. Farland) para el
inóculo, se preparó mezclando BaCl2 al 1.175 % p/v y H2SO4 al 1 % v/v en
constante movimiento basándonos en el Manual del Instituto Nacional de Salud
(INS), posteriormente se midió la absorbancia a 625 nm (28). Se obtuvo una
solución homogénea logrando una escala de turbidez.
− Se tomó tres colonias de la placa Petri con asa de Nicromo y se le resuspendió
en un tubo con 5 mL de suero fisiológico estéril mediante agitación con vortex,
para luego comparar con la escala de turbidez preparada anteriormente,
(Anexo 5). Luego de la comparación determinamos que la concentración de
bacterias por colonia era de 1500 x 106 mL aproximadamente como se muestra
en la figura 2.
32
Figura 2. Comparación con escala de turbidez
Fuente: Elaboración propia
4.4. Determinación del Efecto Antibacteriano
− Se preparó 36 placas de agar Mueller Hinton según la técnica descrita (Anexo
3).
− Se tomó 30uL del inóculo con una micropipeta y se descargó en la placa, con
ayuda del asa de Drigalsky se giró suavemente en ángulo de 90° para una
distribución uniforme del inóculo bacteriano.
− Se incorporó los discos de papel filtro de las diluciones previamente
preparadas y con ayuda de una pinza estéril se colocaron los discos a una
distancia equitativa, posteriormente se llevó a la incubadora durante 24 horas
a 37°C (Anexo 4). Para cada muestra se realizaron 3 repeticiones de cada
concentración.
A. Lectura e interpretación
− Se retiraron las placas de la incubadora para la lectura de los halos de
inhibición, los cuales se formaron alrededor de los discos de Tocosh.
− Esta lectura se hizo midiendo el diámetro del halo de inhibición utilizando un
Vernier para una lectura más exacta, registrando los datos para su
comparación con los estandarizados.
33
4.4.1. Evaluación del efecto antibacteriano frente a Staphylococcus aureus de
la muestra 1
En la Tabla 4 se observan los halos de inhibición en milímetros
correspondientes a las concentraciones de 12.5 %, 25 %, 50 %, 60 %, 70 %,
80 %, 90 % y 100 % del extracto etanólico de Tocosh (muestra 1) frente a
Staphylococcus aureus. donde se nota que las concentraciones de 80, 90 y
100 % produce halos de inhibición superiores a 30 mm y a concentraciones
menores de 80 % da como resultado halos de inhibición entre 20 y 30 %
aproximadamente, así mismo, la amoxicilina dio como resultado halos de
inhibición promedio de 42.47 mm, en cambio el disco con etanol no presentó
halo de inhibición.
Tabla 4. Halos de inhibición (mm) de los extractos etanólicos de Tocosh
(Muestra 1) frente a Staphylococcus aureus comparados con amoxicilina.
Tratamiento R 1 R 2 R 3 Promedio Interpretación Según el INS
100% 35.70 35.60 36.00 35.77 AS
90% 34.90 35.20 34.60 34.90 AS
80% 32.10 32.50 31.70 32.10 AS
70% 30.00 29.80 29.70 29.83 S
60% 29.50 30.50 28.70 29.57 S
50% 27.60 26.90 28.10 27.53 S
25% 23.90 24.20 23.40 23.83 S
12.50% 23.70 23.90 24.10 23.90 S
Amoxicilina 42.50 42.40 42.50 42.47 AS
Etanol 6.00 6.00 6.00 6.00 NE
*INS: Instituto Nacional de Salud, AS: Altamente sensible, S: Sensible, SI:
Sensibilidad intermedia, R: Resistente, NE: No hay efecto
Fuente. Elaboración propia
34
En la Figura 3 se observa los gráficos correspondientes a la normalidad,
frecuencias y residuales. En cuanto a la normalidad de los datos presentados
en la Tabla se nota que gráficamente existe correlación lineal en los datos lo
cual indicaría que a medida que se incrementa la concentración del extracto
etanólico de la muestra 1 de Tocosh también se incrementan lo halos de
inhibición. Así mismo, en los residuales se nota que la tendencia de los datos
es uniforme en la respuesta obtenida por los extractos y que podría haber
diferencia en los halos de inhibición proporcionados por amoxicilina.
Figura 3. Prueba de normalidad, frecuencia y residuales de los halos de
inhibición (mm) de los extractos etanólicos de Tocosh (Muestra 1) frente a
Staphylococcus aureus comparados con amoxicilina.
Fuente. Elaboración propia
Posteriormente, se realizó el análisis de varianza de una vía de los datos
obtenidos en la Tabla 4 y como resultado se obtuvo la Tabla 5 donde se
observa que la probabilidad es menor a 0.05 lo cual indica que al menos un
grupo es diferente al 95 % de confianza, por lo cual, se realizó una prueba
de confirmación de Hipótesis de Tukey.
35
Tabla 5. Análisis de Varianza (ANOVA) de una vía para la comparación del efecto antibacteriano de las concentraciones de los
extractos etanólicos de Tocosh de la muestra 1 de comparados con amoxicilina.
Origen de las variaciones
Suma de cuadrados
Grados de libertad
Promedio de los cuadrados
F Probabilidad Valor crítico para
F
Entre grupos 2564.24 9 284.91 1675.97 9.02 x 10-27 2.39
Dentro de los grupos 3.40 20 0.17
Total 2567.64 29
Fuente. Elaboración propia
36
El test de Tukey (Tabla 6) dio como resultado al 95 % de confianza, que el
efecto antibacteriano (EA) de amoxicilina difiere significativamente de todos
los tratamientos. El extracto al 100 % y 90 % no difieren significativamente,
así como, las concentraciones de 60 % y 70 % y las concentraciones del
12.5 % y 25 %. Las concentraciones del 80 % y 50 % difieren
significativamente de todos los tratamientos. Por otro lado, el etanol al no
presentar halo de inhibición difiere significativamente de todos los grupos.
Tabla 6. Test de Tukey para la comparación del efecto antibacteriano de las
concentraciones de los extractos etanólicos de la muestra 1 de Tocosh
comparados con amoxicilina
Tratamientos N Promedio Agrupamiento
Amoxicilina 3 42.47 A
100 % 3 35.77 B
90 % 3 34.90 B
80 % 3 32.10 C
70 % 3 29.83 D
60 % 3 29.57 D
50 % 3 27.53 E
12.5 % 3 23.90 F
25 % 3 23.83 F
Etanol 3 6.00 G
Fuente. Elaboración propia
Finalmente, en la Figura 4 se observa que a medida que la concentración
del extracto de la muestra 1 de Tocosh se incrementa el efecto antibacteriano
se incrementa, pero no se iguala a los resultados obtenidos por la
amoxicilina.
37
Figura 4. Diagrama de cajas y bigotes de los halos de inhibición (mm) de los extractos etanólicos de Tocosh (Muestra 1)
frente a Staphylococcus aureus comparados con amoxicilina.
Fuente. Elaboración propia
38
4.4.2. Evaluación del efecto antibacteriano frente a Staphylococcus aureus de
la muestra 2
En la Tabla 7 se observan los halos de inhibición en milímetros
correspondientes a las concentraciones de 12.50 %, 25.00 %, 50.00 %,
60.00 %, 70.00 %, 80.00 %, 90.00 % y 100.00 % del extracto etanólico de
Tocosh (muestra 2) frente a Staphylococcus aureus, donde se nota que la
concentración de 100 % produce halos de inhibición superiores a 30 mm.
Las concentraciones de 50, 60, 70, 80 y 90 % da halos de inhibición entre 20
y 30 mm aproximadamente, por otro lado, la concentración de 25 % da halos
de inhibición menores de 20 mm y la concentración de 12.5 % da como
resultado halos de inhibición menores de 15 mm, así mismo, la amoxicilina
dio como resultado halos de inhibición promedio de 42.47 mm, en cambio el
disco con etanol no presentó halo de inhibición.
Tabla 7. Halos de inhibición (mm) de los extractos etanólicos de Tocosh
(Muestra 2) frente a Staphylococccus aureus comparados con amoxicilina.
Tratamiento R 1 R 2 R 3 Promedio Interpretación Según el INS
100% 31.80 31.50 32.10 31.80 AS
90% 29.30 28.90 29.20 29.13 S
80% 29.30 29.20 29.30 29.27 S
70% 27.30 27.20 27.50 27.33 S
60% 24.20 24.40 24.00 24.20 S
50% 21.40 21.60 21.40 21.47 S
25% 15.20 15.50 15.10 15.27 SI
12.50% 10.90 10.70 11.00 10.87 R
Amoxicilina 42.50 42.40 42.50 42.47 AS
Etanol 6.00 6.00 6.00 6.00 NE
*INS: Instituto Nacional de Salud, AS: Altamente sensible, S: Sensible, SI:
Sensibilidad intermedia, R: Resistente, NE: No hay efecto
Fuente. Elaboración propia
39
En la Figura 5 se observa los gráficos correspondientes a la normalidad,
frecuencias y residuales. En cuanto a la normalidad de los datos presentados
en la Tabla 7 se nota que gráficamente existe correlación lineal en los datos
lo cual indicaría que a medida que se incrementa la concentración del
extracto etanólico de la muestra 2 de Tocosh también se incrementan lo
halos de inhibición. Así mismo, en los residuales se nota que la tendencia de
los datos es uniforme en la respuesta obtenida por los extractos que tienden
hacia el resultado del blanco lo cual indicaría que si se disminuye la
concentración del extracto el efecto disminuiría drásticamente, además,
podría haber diferencia en los halos de inhibición proporcionados por
amoxicilina.
Figura 5. Prueba de normalidad, frecuencia y residuales de los halos de
inhibición (mm) de los extractos etanólicos de Tocosh frente a
Staphylococccus aureus comparados con amoxicilina.
Fuente. Elaboración propia
Posteriormente, se realizó el análisis de varianza de una vía de los datos
obtenidos en la Tabla 7 y como resultado se obtuvo la Tabla 8 donde se
observa que la probabilidad es menor a 0.05 lo cual indica que al menos un
grupo es diferente al 95 % de confianza, por lo cual, se realizó una prueba
de confirmación de Hipótesis de Tukey.
40
Tabla 8. Análisis de Varianza (ANOVA) de una vía para la comparación del efecto antibacteriano de las concentraciones de los
extractos etanólicos de la muestra 2 de Tocosh comparados con amoxicilina.
Origen de las variaciones
Suma de cuadrados
Grados de libertad
Promedio de los cuadrados
F Probabilidad Valor crítico para
F
Entre grupos 3137.36 9 348.59 12303.37 2.01 x 10-35 2.39
Dentro de los grupos 0.56 20 0.02
Total 3137.92 29
Fuente. Elaboración propia
41
El test de Tukey (Tabla 9) dio como resultado al 95 % de confianza, que el
efecto antibacteriano (EA) de amoxicilina difiere significativamente de todos
los tratamientos. El extracto al 80 % y 90 % no difieren significativamente,
En cambio todas las concentraciones restantes si presentan diferencia
significativa respecto los demás tratamientos. Por otro lado, el etanol al no
presentar halo de inhibición difiere significativamente de todos los grupos.
Tabla 9. Test de Tukey para la comparación del efecto antibacteriano de las
concentraciones de los extractos etanólicos de la muestra 2 de Tocosh
comparados con amoxicilina
Factor N Promedio Agrupamiento
Amoxicilina 3 42.47 A
100 % 3 31.80 B
80 % 3 29.27 C
90 % 3 29.13 C
70 % 3 27.33 D
60 % 3 24.20 E
50 % 3 21.47 F
25 % 3 15.27 G
12.5 % 3 10.87 H
Etanol 3 6.00 I
Fuente. Elaboración propia
Finalmente, en la Figura 6 se observa que a medida que la concentración
del extracto de la muestra 2 de Tocosh se incrementa el efecto antibacteriano
se incrementa, pero no se iguala a los resultados obtenidos por la
amoxicilina.
42
Figura 6. Diagrama de cajas y bigotes de los halos de inhibición (mm) de los extractos etanólicos de Tocosh (Muestra 2)
frente a Staphylococcus aureus comparados con amoxicilina.
Fuente. Elaboración propia
43
4.4.3. Evaluación del efecto antibacteriano frente a Staphylococcus aureus de
la muestra 3
En la Tabla 10 se observan los halos de inhibición en milímetros
correspondientes a las concentraciones de 12.5 %, 25 %, 50 %, 60 %, 70 %,
80 %, 90 % y 100 % del extracto etanólico de Tocosh (muestra 3) frente a
Staphylococcus aureus, donde se nota que la concentración de 100 %
produce halos de inhibición superiores a 30 mm. Las concentraciones de 25,
50, 60, 70, 80 y 90 % da halos de inhibición entre 20 y 30 mm
aproximadamente, por otro lado, la concentración de 12.5 % da como
resultado halos de inhibición menores de 20 mm, así mismo, la amoxicilina
dio como resultado halos de inhibición promedio de 42.47 mm, en cambio el
disco con etanol no presentó halo de inhibición.
Tabla 10. Halos de inhibición (mm) de los extractos etanólicos de Tocosh
(Muestra 3) frente a Staphylococcus aureus comparados con amoxicilina.
Tratamiento R 1 R 2 R 3 Promedio Interpretación Según el INS
100% 32.10 32.20 32.00 32.10 AS
90% 29.30 29.80 29.60 29.57 S
80% 28.10 27.90 27.90 27.97 S
70% 26.50 26.70 26.60 26.60 S
60% 24.40 24.60 24.00 24.33 S
50% 23.30 23.50 23.40 23.40 S
25% 19.90 20.00 21.50 20.47 S
12.50% 18.60 19.00 18.80 18.80 SI
Amoxicilina 42.50 42.40 42.50 42.47 AS
Etanol 6.00 6.00 6.00 6.00 NE
*INS: Instituto Nacional de Salud, AS: Altamente sensible, S: Sensible, SI:
Sensibilidad intermedia, R: Resistente, NE: No hay efecto
Fuente. Elaboración propia
44
En la Figura 7 se observa los gráficos correspondientes a la normalidad,
frecuencias y residuales. En cuanto a la normalidad de los datos presentados
en la Tabla 10 se nota que gráficamente existe correlación lineal en los datos
lo cual indicaría que a medida que se incrementa la concentración del
extracto etanólico de la muestra 3 de Tocosh también se incrementan los
halos de inhibición. Así mismo, en los residuales se nota que la tendencia de
los datos es uniforme en la respuesta obtenida por los extractos que se
encuentran equidistantes de los valores del blanco y amoxicilina.
Figura 7. Prueba de normalidad, frecuencia y residuales de los halos de
inhibición (mm) de los extractos etanólicos de Tocosh (Muestra 3) frente a
Staphylococcus aureus comparados con amoxicilina.
Fuente. Elaboración propia
Posteriormente, se realizó el análisis de varianza de una vía de los datos
obtenidos en la Tabla 10 y como resultado se obtuvo la Tabla 11 donde se
observa que la probabilidad es menor a 0.05 lo cual indica que al menos un
grupo es diferente al 95 % de confianza, por lo cual, se realizó una prueba
de confirmación de Hipótesis de Tukey.
45
Tabla 11. Análisis de Varianza (ANOVA) de una vía para la comparación del efecto antibacteriano de las concentraciones de los
extractos etanólicos de la muestra 3 de Tocosh comparados con amoxicilina
Origen de las variaciones
Suma de cuadrados
Grados de libertad
Promedio de los cuadrados
F Probabilidad Valor crítico para
F
Entre grupos 2431.24 9 270.13 2580.94 1.21 x 10-28 2.39
Dentro de los grupos 2.09 20 0.10
Total 2433.34 29
Fuente. Elaboración propia
46
El test de Tukey (Tabla 12) dio como resultado al 95 % de confianza, que el
efecto antibacteriano (EA) de amoxicilina difiere significativamente de todos
los tratamientos. El extracto al 50 % y 60 % no difieren significativamente,
En cambio todas las concentraciones restantes si presentan diferencia
significativa respecto los demás tratamientos. Por otro lado, el etanol al no
presentar halo de inhibición difiere significativamente de todos los grupos.
Tabla 12. Test de Tukey para la comparación del efecto antibacteriano de
las concentraciones de los extractos etanólicos de la muestra 3 de Tocosh
comparados con amoxicilina
Factor N Promedio Agrupamiento
Amoxicilina 3 42.47 A
100 % 3 32.10 B
80 % 3 29.57 C
90 % 3 27.97 D
70 % 3 26.60 E
60 % 3 24.33 F
50 % 3 23.40 F
25 % 3 20.47 G
12.5 % 3 18.80 H
Etanol 3 6.00 I
Fuente. Elaboración propia
Finalmente, en la Figura 13 se observa que a medida que la concentración
del extracto de la muestra 3 de Tocosh se incrementa el efecto antibacteriano
se incrementa, pero no se iguala a los resultados obtenidos por la
amoxicilina.
47
Figura 8. Diagrama de cajas y bigotes de los halos de inhibición (mm) de los extractos etanólicos de Tocosh (Muestra 3)
frente a Staphylococcus aureus comparados con amoxicilina.
Fuente. Elaboración propia
48
4.4.4. Comparación del efecto antibacteriano frente a Staphylococcus aureus
de los extractos etanólicos al 100 % de las muestras 1, 2 y 3 de
Tocosh
En la Tabla 13 se observan los resultados obtenidos en cuanto al efecto
antibacteriano frente a Staphylococcus aureus reportados en las tablas 5, 8
y 11 correspondientes a las concentraciones de los extractos etanólicos al
100 % de Tocosh de las muestras 1, 2 y 3 con el objetivo de comparar el
efecto antibacteriano de los tres extractos.
Tabla 13. Comparación del efecto antibacteriano frente a Staphylococcus
aureus de las concentraciones de los extractos etanólicos de las muestras
1,2 y 3. (Halos de inhibición en mm a concentraciones del 100 %)
N Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3
1 35.7 31.8 32.1
2 35.6 31.5 32.2
3 36.0 32.1.0 32.0
Fuente. Elaboración propia
En la Tabla 14 se observa los resultados obtenidos por el Análisis de
Varianza de una vía de los datos de la Tabla 13. En el ANOVA se nota que
la probabilidad es menor que 0.05 lo cual indica que al menos una marca de
Tocosh da como resultado efecto antibacteriano diferente de los demás
grupos.
Posteriormente, se realizó una prueba de confirmación de Hipótesis de
Tukey (Tabla 15) que se observa en la Tabla 14 donde se observa que la
muestra 1 difiere significativamente de los demás grupos, en cambio las
muestras 2 y 3 no difieren significativamente en cuanto al efecto
antibacteriano frente a Staphylococcus aureus al 95 % de confianza.
49
Tabla 14. Análisis de Varianza (ANOVA) de una vía para la comparación del efecto antibacteriano frente a Staphylococcus aureus
de las concentraciones de los extractos etanólicos de las muestras 1,2 y 3.
Origen de las variaciones
Suma de cuadrados
Grados de libertad
Promedio de los cuadrados
F Probabilidad Valor crítico para
F
Entre grupos 29.26 2 14.63 306.30 9.12 x 10-7 5.14
Dentro de los grupos 0.28 6 0.04
Total 29.55 8
Fuente. Elaboración propia
50
Tabla 15. Test de Tukey para la comparación del efecto antibacteriano frente
a Staphylococcus aureus de las concentraciones de los extractos etanólicos
de las muestras 1,2 y 3.
Factor N Promedio Agrupamiento
Muestra 1 3 35.77 A
Muestra 2 3 32.10 B
Muestra 3 3 31.80 B
Fuente. Elaboración propia
En la Figura 9 se nota que la muestra 2 y 3 en comparación con la muestra
1 reportan efectos antibacterianos menores, además que cuando se
comparan los efectos de las muestras 2 y 3, estas no difieren ya que la
diferencia de sus valores se aproxima a cero según el test de Tukey.
Figura 9. Test de Tukey de la comparación del efecto antibacteriano frente
a Staphylococcus aureus de las concentraciones de los extractos
etanólicos de las muestras 1,2 y 3.
Fuente. Elaboración propia
51
Finalmente, en la Figura 10 se observa que el extracto etanólico de la
muestra 1 de Tocosh presenta el mejor efecto antibacteriano frente a
Staphylococcus aureus que las muestras 2 y 3 que presentan efecto similar.
Figura 10. Diagrama de cajas y bigotes de la comparación del efecto
antibacteriano frente a Staphylococcus aureus de las concentraciones de
los extractos etanólicos de las muestras 1,2 y 3.
Fuente. Elaboración propia
52
CAPÍLUTO V
DISCUSIÓN
En la presente investigación se tuvo como finalidad demostrar que el Extracto
etanólico de Tocosh presentó efecto antibacteriano frente a Staphylococcus aureus
ATCC 25923 , para lo cual adquirimos tres muestras comerciales (anexo 2) del
mercado San Camilo ya que estas tres muestras son producidas en industrias
diferentes presumiendo que los costos, que varían entre S/.7.00 para la muestra 1,
S/.12.00 para la muestra 2 y S/.33.00 para la muestra 3, sería un indicador de
calidad y concentración de antibiótico, lo cual al final demostramos que no era cierto
ya que la muestra más económica fue la que mejor efecto antibacteriano presentó.
Se realizó las extracciones etanólicas de cada muestra mediante técnica de soxhlet,
para las tres muestras tuvimos un rendimiento de 1g de polvo seco luego de la
desecación a Baño María de cada extracto, lo que nos indicaría que los
componentes extraídos prácticamente son equivalentes.
Después de reactivar la cepa de Staphylococcus aureus y resuspender las colonias
en 5ml de suero fisiológico procedimos a comparar las mismas con la escala de
turbidez preparada con cloruro de bario y ácido sulfúrico, en la que determinamos
que la concentración del número de bacterias por mL de solución era de 1500 x 106
UFC/mL, Pesantes (30) determinó en su trabajo “Efecto antibacteriano in vitro de
Solanum tuberosum (papa fermentada) en cepas de Escherichia coli comparado
con gentamicina y ceftriaxona” una concentración equivalente a 1.5 x 108 UFC
similar a la que encontramos nosotros lo que nos indicaría que la técnica fue
adecuada.
A continuación procedimos a realizar la determinación del efecto antibacteriano del
extracto etanólico de tocosh de las tres muestras diferentes a concentraciones
diferentes, observando que hubo diferencias entre las muestras y las
concentraciones de 100 %, 90 %, 80 %, 70 %, 60 %, 50 %, 25 % y 12.5 %.
53
Para la muestra 1 pudimos observar en la tabla 4, que la cepa de Staphylococcus
aureus frente a la concentración de 100 %, 90 % y 80 % es altamente sensibles, ya
que cuando medimos sus halos de inhibición estos presentaron un promedio de
35.77 mm para 100 %, 34.90 mm para 90 % y 32.10 mm para 80% y al comparar
estos resultados con los parámetros dados por el INS indicaron una sensibilidad
alta, aunque no llegó a inhibir tanto como la amoxicilina que tuvo un halo de 42.47
mm entonces podemos decir que sí se podría utilizar en un tratamiento frente a
Staphylococcus aureus mientras que frente a los extractos de 70 %, 60 %, 50 %,
25 % y 12,5 % se determinó que eran sensible. Al aplicar la estadística respectiva,
encontramos que como nos muestra la tabla 6 existe una diferencia significativa
entre las muestras de 80 % y 50 % lo que indicaría dan resultados diferentes, pero
también nos muestra que entre la muestra 100 % y 90 %; 70 % y 60 %; 25 % y 12.5
% no existe diferencia significativa entre si lo cual podríamos interpretar como que
cada grupo tienen el mismos efecto. En comparación con las investigaciones de
Paz, (10) en las cuales encontró que el efecto antimicrobiano in vitro del extracto
acuoso de Tocosh Solanum tuberosum al 25 %, 50 %, 100 % fue cero mm
comparados al del sulfametoxazol + trimetropin sobre Escherichia coli que fue 29.9
mm y de la oxacilina sobre Staphylococcus aureus que fue 17.7 mm.
Concluyéndose que el efecto antimicrobiano in vitro del extracto acuoso de Tocosh
Solanum tuberosum sobre Escherichia coli y Staphylococcus aureus es nulo, lo más
probable es que en su investigación ella utilizó poca muestra (10 g), también que
utilizó un extracto acuoso, a diferencia nuestra que utilizamos un extracto etanólico,
el cual pudo haber extraído diferentes principios activos, otra diferencia podría
deberse al tipo de papa que utilizó para la preparación del Tocosh ya que según la
especie los principios activos también pueden cambiar, y lo más resaltante es que
ella misma elaboró el Tocosh, pudiéndose diferir con el Tocosh elaborado en forma
industrial ya que se cuidaría más el control de calidad del producto.
Para la muestra 2 pudimos observar en la tabla 7, que la cepa de Staphylococcus
aureus frente a la concentración de 100 % es Altamente Sensibles, ya que cuando
medimos sus halos de inhibición estos presentaron un promedio de 31.80 mm y al
comparar estos resultados con los parámetros dados por el INS indicaron una
sensibilidad alta, aunque no llegó a inhibir tanto como la amoxicilina que tuvo un
54
halo de 42.47 mm podemos decir que si se podría utilizar en un tratamiento frente
a Staphylococcus aureus, mientras que frente a los extractos de 90 %, 80 %, 70
%, 60 % y 50 % se determinó que eran sensible frente a Staphylococcus aureus,
mientras que para el extracto de 25 % se determinó que presentó sensibilidad
intermedia frente a Staphylococcus aureus y mientras que frente al extracto de
12.5 % se determinó que era resistente frente a Staphylococcus aureus, al aplicar
la estadística respectiva encontramos que como nos muestra la tabla 9 existe una
diferencia significativa entre las muestras lo que indicaría que las diferentes
concentraciones dan resultados diferentes, pero también nos muestra que entre la
muestra 90 % y 80 % no existe diferencia significativa lo cual podríamos interpretar
como que las dos tienen el mismos efecto. En comparación con las investigaciones
de Rodriguez, (14) en las cuales determinó el efecto antibacteriano in vitro de la
Rivina humilis l. (flor blanca) sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus la cual
obtuvo varios extractos con diferentes solventes orgánicos que presentaban
diferentes polaridades, evaluando así el extracto que presentara el mayor
porcentaje de rendimiento; de los cuales el extracto etanólico tuvo un rendimiento
de 28.10 %, el acetato de etilo de 15.00 % y el hexánico de 8.7 %. El extracto con
mayor rendimiento fue el extracto etanólico por lo que fue elegido para realizar las
pruebas antibacterianas al igual que nuestro estudio ya que utilizó etanol como
solvente esto debido a que el etanol es un solvente con mayor polaridad en
comparación con el otros solventes. Nosotros también utilizamos etanol con ese
propósito de obtener mayor cantidad de principios activos que pudieran ser
antibacterianos.
Para la muestra 3 pudimos observar en la tabla 10, que la cepa de Staphylococcus
aureus frente a la concentración de 100 % es Altamente Sensibles, ya que cuando
medimos sus halos de inhibición estos presentaron un promedio de 32.10 mm y al
comparar estos resultados con los parámetros dados por el INS indicaron una
sensibilidad alta, aunque no llegó a inhibir tanto como la amoxicilina que tuvo un
halo de 42.47 mm podemos decir que si se podría utilizar en un tratamiento frente
a Staphylococcus aureus, mientras que frente a los extractos de 90 %, 80 %, 70
%, 60 %, 50 % y 25 % se determinó que eran sensible a Staphylococcus aureus,
mientras que frente al extracto de 12.5 % se determinó que presento sensibilidad
55
intermedia frente a Staphylococcus aureus, al aplicar la estadística respectiva
encontramos que como nos muestra la tabla 12 existe una diferencia significativa
entre las muestras lo que indicaría que las diferentes concentraciones dan
resultados diferentes, pero también nos muestra que entre la muestra 60 % y 50 %
no existe diferencia significativa lo cual podríamos interpretar como que las dos
tienen el mismos efecto. En comparación con las investigaciones, Pesantes (30),
demostró que al comparar el efecto antibacteriano de Tocosh Solanum tuberosum
versus gentamicina el tubérculo obtuvo una acción antibacteriana sensible en un
90% con respecto al fármaco, el cual mostró solo 43.3 %. Así como un efecto
antibacteriano intermedio o moderadamente sensible con 6.7 % y 30 %
correspondientemente, el Tocosh Solanum tuberosum tuvo baja resistencia con 3.3
% con relación al aminoglucósido que presentó 26.7 %. Comparando el efecto
antibacteriano de Tocosh Solanum tuberosum versus ceftriaxona se demostró un
20 % del tubérculo y un 60 % del fármaco presentaban sensibilidad; un 73.3 % y un
36 % de cepas correspondiente, fueron moderadamente sensibles o con efecto
intermedio y presentaron resistencia un 6.7 % del tubérculo y un 3.3 % del fármaco.
Esto indica que a diferencia de nuestro estudio muestra un efecto deficiente esto
se puede deber a la diferencia de microorganismo utilizado.
Como se observa en la tabla 15 el Test de Tukey para la comparación del efecto
antibacteriano frente a Staphylococcus aureus de las concentraciones de los
extractos etanólicos de las muestras 1, 2 y 3 podemos decir que las muestras 2 y
3 no difieren significativamente entre ellas sin embargo la muestra 1 que es la más
económica si difiere significativamente, por tanto se demostró que no hay veracidad
en cuanto a la información que nos brindan los vendedores del Mercado San Camilo
al afirmarnos que la diferencia de precios se debe a la pureza del producto, lo cual
se pudo comprobar con el estudio realizado ya que la muestra 1 tubo mejor
rendimiento a diferencia de Ccapa (12) que en su “Estudio del mercado del Tocosh
(tuqush) (solanlim andigenum fermentado – putrefacto) y comercialización en la
ciudad de Arequipa” indica que todos los comerciantes manejan un precio uniforme
o relativamente estables sin embargo se pudo comprobar que hay una variación
significativa de precios según cada comerciante.
56
Como se observa en la tabla 15 el Test de Tukey para la comparación del efecto
antibacteriano frente a Staphylococcus aureus de las concentraciones de los
extractos etanólicos de las muestras 1, 2 y 3 podemos decir que las muestras 2 y
3 no difieren significativamente entre ellas sin embargo la muestra 1 si difiere
significativamente, por tanto se demostró que no hay veracidad en cuanto a la
concentración del principio activo en las diferentes marcas y precios, ya que
encontramos una mayor concentración del principio activo en la muestra más
económica adquirida en el mercado San Camilo de Arequipa, a diferencia de Paz
(10) en su investigación encontró que el efecto antimicrobiano in vitro del extracto
acuoso de Tocosh Solanum tuberosum fue cero, esto se pudo presentar por la
diferencia de método de extracción, cantidad de muestra utilizada o control de
calidad de la harina de Tocosh Solanum tuberosum.
Por otro lado Carranza y Huamanchaqui (11) en su estudio de Screening
fitoquímico realizado con el extracto alcohólico de Solanum tuberosum (Tocosh)
determinaron la presencia de metabolitos: compuestos fenólicos, aminoácidos
libres en altas concentraciones; flavonoides, alcaloides y azucares reductores en
moderada concentración; terpenos y esteroides en baja concentración; mediante
pruebas de reactivos químicos de identificación, esto permitiría continuar con la
línea de investigación.
57
CONCLUSIONES
Primera: El extracto etanólico obtenido de la muestra 1 de Tocosh tiene mayor
efecto antibacteriano frente a Staphylococcus aureus ATCC 25923 que los
extractos de las muestras 2 y 3.
Segunda: El extracto etanólico de la muestra 1 de Tocosh tiene efecto
antibacteriano frente a Staphylococcus aureus ATCC 25923 siendo altamente
sensibles a los extractos de 80, 90 y 100% y sensibles frente a extractos de 12.5,
25, 50, 60 y 70%.
Tercera: El extracto etanólico de la muestra 2 de Tocosh tiene efecto antibacteriano
frente a Staphylococcus aureus ATCC 25923 siendo altamente sensibles al extracto
de 100%, sensibles frente a extractos de 50, 60, 70, 80 y 90%, de sensibilidad
intermedia frente al extracto de 25% y resistente al extracto del 12.50%.
Cuarta: El extracto etanólico de la muestra 3 de Tocosh tiene efecto antibacteriano
frente a Staphylococcus aureus ATCC 25923 siendo altamente sensibles al extracto
de 100 %, sensibles frente a extractos de 25, 50, 60, 70, 80 y 90%, de sensibilidad
intermedia frente al extracto de 12.50%.
Quinta: El extracto etanólico obtenido de la muestra 1 de Tocosh al 95% de
confianza tiene mayor efecto antibacteriano frente a Staphylococcus aureus ATCC
25923 que los extractos de las muestras 2 y 3 que entre ellas no presentan
diferencia significativa
58
RECOMENDACIONES
Primero: Fomentar el estudio e investigación de productos naturales que son
comercializados en diferentes mercados de nuestra ciudad.
Segundo: Se sugiere realizar estudios sobre el Tocosh frente a diversidad de
papas en las distintas regiones del Perú.
Tercero: Realizar diversos métodos de extracción con distintos solventes para
obtener un mayor rendimiento del principio activo de la harina de Tocosh y
comparar la actividad antibacteriana.
Cuarto: Según los resultados encontrados en el estudio se recomiendan a los
investigadores desarrollar otras técnicas experimentales para mejorar la extracción
del principio activo de Tocosh.
Quinta: Realizar estudios de toxicidad que pueda presentar el extracto etanólico
de Tocosh Solanum tuberosum, con el propósito de realizar ensayos clínicos que
permitan usar adecuadamente en pacientes.
59
BIBLIOGRAFÍA
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63
ANEXOS
64
Anexo 1. Cepa de Staphylococcus aureus ATCC 25923
Fuente: Elaboración propia
Anexo 2. Muestra de la harina de tocosh
Fuente: Elaboración propia
65
Anexo 3. Obtención del extracto y diluciones
Fuente: Elaboración propia
66
Anexo 4. Preparación de agar Mueller Hinton, esterilización y distribución en
placas
Fuente: Elaboración propia
67
Anexo 5. Preparación de inoculo
Fuente: Elaboración propia
Anexo 6. Distribución de discos e incubación de placas
Fuente: Elaboración propia
68
Anexo 7. Lectura de placas
Fuente: Elaboración propia
Fuente: Elaboración propia
69
Fuente: Elaboración propia