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REDVET Rev. Electrón. vet. http://www.veterinaria.org/revistas/redvet 2016 Volumen 17 Nº 12 - http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n121216.html

Estudio de la eficacia de combinar el complejo vitamínico AD3E con ivermectina, doramectina y moxidectina respectivamente, evaluado sobre parámetros bioquímicos y niveles séricos de vitaminas A, D3 y E en bovinos http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n121216/121610.pdf

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REDVET - Revista electrónica de Veterinaria - ISSN 1695-7504

Estudio de la eficacia de combinar el complejo vitamínico AD3E con ivermectina, doramectina y moxidectina respectivamente, evaluado sobre parámetros bioquímicos y niveles séricos de vitaminas A, D3 y E en bovinos - Efficacy study of combining vitamin complex AD3E with ivermectin, doramectin and moxidectin respectively, evaluated on biochemical parameters and A, D3 and E vitamins serum levels in cattle

Alonso-Vaquero Velasco, Javier1.

1 Clínico veterinario equino privado. Contacto: [email protected]

Resumen Objetivo: Evaluar, sobre un grupo de bovinos y de forma comparada, la eficacia de administrar el complejo vitamínico AD3E combinado con cada una de las lactonasmacrocíclicas siguientes: moxidectina (milbemicina), ivermectina (avermectina),ydoramectina (avermectina). Material y métodos: Se realizó un ensayo clínico sobre nueve bovinos, en buen estado de salud, de una explotación extensiva de bovinos de producción cárnica y raza morucha, de Salamanca, España: ocho de los cuales no habían sido desparasitados en el último año, y uno había sido desparasitado en el mes de octubre de 2013. Tras la evaluación clínica, se pesó de forma individual a todos estos bovinos, y después se realizó la extracción de sangre de todos los individuos del ensayo y de heces de cuatro de ellos. Se remitieron todas las muestras de sangre al laboratorio Faustolab, de Salamanca, donde se analizaron todos los parámetros hematológicos y una parte de los bioquímicos. De este laboratorio partieron el resto de muestras al laboratorio Reference Laboratory, de Barcelona, (E), donde se analizaron los niveles séricos de inmunoglobulinas, de la lipasa, de vitamina E(alfa tocoferol), de vitamina D(25-OH-colecalciferol), y de vitamina A(retinol). Las muestras de heces fueron enviadas para su análisis coprológico al departamento de parasitología de la Facultad de Veterinaria de Cáceres, Universidad de Extremadura (E). Tras la recolección de sangre y heces, se administraron las tres moléculas antiparasitarias del ensayo al 1%: moxidectina (Cydectin®), ivermectina, (Ivomec®), y doramectina (Dectomax®), a razón de 0,2 mg. por kilo de peso vivo en los tres casos; estando en unos individuos combinada con el complejo vitamínico AD3E y en otras administradas de forma aislada. Se deja a uno de los bovinos del ensayo sin ningún tratamiento, para utilizarlo como individuo control. A los individuos



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del grupo 2 (cuadro I), cuyo peso medio fue 486 kg., se les administró 4,9 ml. de Vigantol® AD3E por individuo, lo que supuso una dosis de 1 ml. de Vigantol® AD3E por cada 100 kilos de peso vivo, de 2.450.000 U.I. de vitamina A, de 9.188 mg. de vitamina D3, y de 245 mg. -A los 3 días, se extrajo sangre de todos los individuos del ensayo, incluido del individuo control, así como heces de los cuatro individuos a los que se les había extraído el primer día. -A los 15 días, se extrajo sangre de los tres individuos que habían sido tratados con las tres combinaciones del ensayo (moxidectina+AD3E, ivermectina+AD3E, doramectina+AD3E), y del individuo control, para evaluar la evolución de los niveles séricos de las tres vitaminas del ensayo: A(retinol), E(alfa tocoferol), y D(25-OH-colecalciferol). -A los 45 días, tras la administración de los tratamientos, se volvió a pesar a todos los individuos del ensayo.

Resultados: Se observaron diferencias significativas entre las tres combinaciones del ensayo. En el individuo tratado con moxidectina+AD3E se observó una disminución, dentro de los márgenes de la normalidad, de varios parámetros bioquímicos (ALP, ALT, amilasa, hematíes, hemoglobina, IgG, y triglicéridos); una disminución negativa del nivel sérico de vitamina A(retinol); un aumento positivo del nivel sérico tanto de la vitamina E(alfa tocoferol) como de la vitamina D(25-OH-colecalciferol), y un incremento de peso al cabo de los 45 días (superior al de las otras dos combinaciones del ensayo); además de un aumento negativo del nivel sérico de la AST y de la lipasa (muy inferior al observado en las otras dos combinaciones del ensayo). En el individuo tratado con ivermectina+AD3E se observó una disminución, dentro de los márgenes de la normalidad, de los siguientes parámetros bioquímicos: ALP e IgG -ambos menos significativos a los observados con la combinación de moxidectina+AD3E-); una disminución negativa del nivel sérico de la vitamina D(25-OH-colecalciferol), y un nivel de vitamina A(retinol) que no varió tras el tratamiento: hecho que debe considerarse anormal tras haberle administrado vitamina A(retinol) mediante el compleo vitamínico AD3E; un aumento positivo del nivel sérico de vitamina E(alfa tocoferol), un aumento de peso al cabo de 45 días; y aumento negativo de varios parámetros bioquímicos (ALT, AST, amilasa, lipasa, hematíes, hemoglobina, y triglicéridos). En el individuo tratado con doramectina+AD3E se observó una disminución negativa del nivel sérico tanto de la vitamina D(25-OH-colecalciferol) como de la vitamina A(retinol); un incremento negativo de los siguientes parámetros bioquímicos: ALP, ALT, AST, amilasa, lipasa, hematíes, hemoglobina, triglicéridos e IgG); y un aumento positivo del nivel sérico de vitamina E(alfa tocoferol) y del peso al cabo de 45 días.



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Conclusiones: 1. En los individuos tratados con el complejo vitamínico AD3E combinado con cada una de las tres moléculas antiparasitarias del ensayo (moxidectina, ivermectina y doramectina) respectivamente, se han observado más beneficios que en los individuos tratados con cada una de esas tres moléculas antiparasitarias (moxidectina, ivermectina y doramectina) administradas de forma aislada: especialmente en el aumento del nivel sérico de vitamina E y en la ganancia de peso al cabo de 45 días: hecho ya docuentado por otros autores. 2. En el individuo tratado con la combinación de moxidectina+AD3E se observaron parámetros positivos no evidenciados en los individuos tratados con ivermectina+AD3E y con doramectina+AD3E; en cambio, de todos los parámetros negativos observados en los individuos tratados con ivermectina+AD3E y con doramectina+AD3E solo se han evidenciado tres coincidencias: una relevante, la disminución sérica de la vitamina A(retinol), y dos de escasa relevancia, el aumento leve tanto del nivel sérico de la lipasa (que fue compatible con el nivel observado en el individuo control) como el ligero incremento sérico de la AST. 3. Tanto la disminución sérica de vitamina A(retinol) observada en todos los individuos del ensayo (salvo en el individuo control), como la disminución sérica de la vitamina D(25-OH-colecalciferol) observada en los individuos tratados con ivermectina+AD3E y doramectina+AD3E, supone un hallazgo a destacar, el cual revela la existencia de un mecanismo competitivo entre las tres lactonasmacrocíclicas combinadas con AD3E y la vitamina A(retinol), y entre la ivermectina o la doramectina combinadas con el complejo vitamínico AD3E y la vitamina D(25-OH-colecalciferol). Las dos hipótesis que contemplamos como más probables, tanto del descenso del nivel sérico de la vitamina A(retinol) en todos los individuos del ensayo (salvo en el individuo control) como el descenso del nivel sérico de la vitamina D(25-OH-colecalciferol) en los individuos tratados con ivermectina+AD3E y doramectina+AD3E, se centran en una acción activadora o inhibitoria del citocromo P450. 4. El perfil hepático observado en los individuos tratados con ivermectina+AD3E y con doramectina+AD3E, basado en el aumento sobrevenido de transaminasas (ALT, AST, ALP) y de bilirrubina total (BT) inmediatamente después a la administración de esos dos tratamientos, consideramos que, una vez realizado el diagnóstico diferencial, tiene su origen en la naturaleza de esos mismos tratamientos, y evidencia una alteración bioquímica hepática leve, y reversible, que representa el estadio previo a una reacción adversa medicamentosa leve. 5. El perfil pancreático observado en los individuos tratados con ivermectina+AD3E y con doramectina+AD3E, basado en el aumento sobrevenido de lipasa, amilasa y AST inmediatamente después de la



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administración de esos tratamientos, consideramos que tiene su origen, una vez realizado el diagnóstico diferencial, en la naturaleza de ambos tratamientos, y evidencia, el estado previo a una disfunción pancreática mínima con recuperación total del órgano, estadio previo a una pancreatitis aguda leve. - Tanto la alteraciónbioquímica hepática leve como el estadio previo a ladisfunción pancreática mínima con recuperación total del órgano observados en los individuos tratados con ivermectina+AD3E y con doramectina+AD3E, y no evidenciados en el individuo tratado con moxidectina+AD3E, no deben ser interpretadas como hallazgos triviales ni beneficiosos, porque aun no alcanzando el nivel preciso para poner en juego medidas correctoras, representa efectos deletéreos y no esperados en el organismo de los bovinos tratados, provocados con una única dosis, ajustada a la pauta de administración farmacológica aprobada con fines estrictamente profilácticos y/o terapéuticos, y de uso habitual entre los ganaderos del sector. De las tres combinaciones administradas en este ensayo (moxidectina+AD3E, ivermectina+AD3E, y doramectina+AD3E), y a la luz de los resultados expuestos, la que combina moxidectina+AD3E es la que presenta más ventajas, además de las ya reportadas en otros estudios (espectro de acción mayor y más duradero, menores resistencias y mayor ganancia de peso) y menos inconvenientes, además de los ya reportados en otros estudios (no presenta la toxicidad de la ivermectina para los animales, la flora, la fauna, y la seguridad alimentaria), ya que ha sido la que ha presentado mayor ganancia de peso a los 45 días, la que ha presentado mayores porcentajes de nivel sérico de vitamina E(alfa tocoferol), la única en la que se ha observado un incremento del nivel sérico de vitamina D(25-OH-colecalciferol), la única que no aumenta los niveles séricos de triglicéridos y, muy especialmente, la única que no presenta ni la alteración bioquímica hepática leve ni el estadio previo a la disfunción pancreática mínima con recuperación total del órgano. La muestra de este ensayo ha sido pequeña, por lo que los hallazgos clínicos mostrados en este estudio deben abrir la puerta a nuevas investigaciones. Palabras clave:moxidectina, ivermectina, doramectina, endectocidas, lactonasmacrocíclicas, antiparasitarios, complejo vitamínico AD3E, bovinos.



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Abstract

Objective: To evaluate the comparative efficacy in the treatment of cattle with vitamin complex AD3E combined with each of the following macrocyclic lactones: moxidectin (milbemycin), ivermectin (avermectin) and doramectin (avermectin). Material and methods: A clinical trial was conducted on nine cattle, in good health and living conditions, belonging to a holding extensive cattle production, morucha race, in Salamanca, Spain: eight of which had not been wormed in the last year, and one of those nine was dewormed in the month of October 2013. After clinical evaluation, all these cattle were weighed individually. Then, blood samples from all trial cattle were removed, and stool samples of four of these. All blood samples were sent to the laboratoryFaustolab, of Salamanca, where all hematological and some biochemical parameters were analyzed. Faustolab sent the remaining samples to laboratory Reference Laboratory, in Barcelona, Spain, who analyzed the serum levels of immunoglobulins, lipase, vitamin A(retinol), vitamin D3 (25-OH-cholecalciferol), and vitamin E(alpha tocopherol). Coproparasitological study was performed in the Department of Parasitology, Faculty of Veterinary Cáceres, University of Extremadura, Spain. After collecting blood and fecal samples, the three trial antiparasitic molecules were administered at 1%: moxidectin (Cydectin®), ivermectin, (Ivomec®), and doramectin (Dectomax®), at 0.2 mg. per kilo of body weight in the three cases; in some individuals were combined with vitamin AD3E complex, and other cattle were administered alone. Deliberately keep one of the cattle of clinical trial without any treatment, to be used as control subject. All bovine group 2 (Table II), whose average weight was 486 kg., were administrated with 4.9 ml. of Vigantol® AD3E per individual, representing a dose of 1 ml. of Vigantol® AD3E per 100 kgs. live weight, 2,450,000 IU vitamin A, 9,188 mg. vitamin D3, and 245 mg. vitamin E. -3 days after the treatments were administered, blood samples from all trial cattle were collected, including control subject, and fecal samples were also collected from the same four cattle from which these samples were extracted on the first day. -After 15 days of administering the treatments, blood of four individuals were extracted (moxidectin+AD3E, ivermectin+AD3E, doramectin+AD3E, and control subject) to assess the evolution of serum levels of the three test vitamins A(retinol), E(alpha tocopherol), and D(25-OH-cholecalciferol). -At 45 days, we proceeded to reweigh all test subjects. Results: Significant differences were observed between the three combinations



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In cattle treated with moxidectin+AD3E a decrease, in the margins of normality, in several biochemical parameters (ALP, ALT, amylase, erythrocytes, hemoglobin, IgG, and triglycerides), consistent in all of them with the data observed in the control subject, were observed; a negative reduction in serum levels of vitamin A(retinol); a positive increase of serum vitamin E (alphatocopherol) and serum vitamin D(25-OH-cholecalciferol), and a considerable increase in weight after 45 days (greater than that observed in animals treated with other treatments of this trial); and a negative increase of serum of AST and lipase (much lower than it show in the other two combinations of the trial). In cattle treated with ivermectin+AD3E a decrease, in the margins of normality, of the two following biochemical parameters: ALP and IgG -much less evident than that observed in the cattle treated with moxidectin+AD3E- were observed; a negative reduction in serum levels of D(25-OH-cholecalciferol); a serum level of vitamin A(retinol) did not change after treatment: fact to be considered abnormal after administration of vitamin A(retinol), suplied by vitamin AD3E complex; a positive increase of serum level of vitamin E(alpha tocopherol), and an increase of weight after 45 days; and a negative increase in several biochemical parameters (ALT, AST, amylase, lipase, erythrocytes, hemoglobin, and triglycerides). In cattle treated with doramectina+AD3E a negative decrease in serum levels of vitamins A(retinol) and D(25-OH-cholecalciferol) were observed; a negative increase of the following biochemical parameters: ALT, ALP, AST, amylase, lipase, erythrocytes, hemoglobin, triglycerides and IgG; and a positive increase of serum level of vitamin E(alpha tocopherol), and in weight after 45 days. Conclusions: 1. In individuals treated with vitamin complex AD3E combined with each of the three test antiparasitic molecules (moxidectin, ivermectin and doramectin) more benefits were observed than in individuals treated with each of these three antiparasitic molecules (moxidectin, ivermectin and doramectin) managed in isolation: in particular the increase in serum vitamin E(alpha tocopherol) levels and weight gain after 45 days: fact already documented by other authors. 2. In the cattle treated with the combination of moxidectin+AD3E, several positive biochemical parameters were observed, not evidenced in individuals treated with ivermectin+AD3E and doramectina+AD3E; instead, the total of negative biochemical parameters observed in these cattle (ivermectin+AD3E, and doramectin+AD3E), only three coincidences have been observed in cattle treated with moxidectin+AD3E: one relevant, on the decreased serum level of vitamin A(retinol), and two with low relevance, the slight increase in serum levels of lipase (consistent with the data observed in the control individual) as the slight serum increase of AST.



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3. The decreases in serum vitamin A(retinol) observed in all trial subjects (except in the control subject) and the decreased serum level of vitamin D(25-OH-cholecalciferol) observed in individuals treated with ivermectin+AD3E and doramectin+AD3E, is a remarkable finding, which reveals a competitive mechanism between these three macrocyclic lactones combined with AD3E and vitamin A(retinol), and between the combinations of ivermectin and doramectin with vitamin AD3E complex and vitamin D(25-OH-cholecaldiferol). The two hypotheses we consider as most likely source of decrease in serum levels of vitamin A(retinol) in all test subjects (except in the control subject), and the decrease in serum level of vitamin D(25-OH-cholecalciferol) in individuals treated with ivermectin+ AD3E and doramectin+ AD3E, center on an activating or inhibitory action of cytochrome P450. 4. The liver disturbance observed in individuals treated with ivermectin+AD3E and doramectin+AD3E, based on the sudden increase in serum transaminases (ALT, AST, ALP) and total bilirubin (TB) immediately after treatment, originates from these same treatments administered, and is made evident, once the differential diagnosis is made. This change is consistent with a mild hepatic biochemical alteration, previous stage to a mild adverse drug reaction in the liver. 5. The pancreatic profile observed in individuals treated with ivermectin+AD3E and doramectin+AD3E, based on the sudden increase in serum of lipase, amylase (only ivermectin+AD3E) and AST immediately after treatment, we consider to be caused, once the differential diagnosis is made, by the nature of the treatment administered. This change is consistent with a previous state of a minimal pancreatic dysfunction with complete recovery of the organ, which is in turn (in the proper order) the previous stage of a mild acute pancreatitis. - Both mild hepatic biochemical alteration as the previous state to a mininal pancreatic dysfunction with complete recovery of the organ observed in individuals treated with ivermectin+AD3E and doramectin+AD3E, and not evidenced in cattle treated with moxidectin+AD3E, should not be interpreted as trivial or beneficial findings, because even not reaching the level necessary to implement corrective measures, represent unexpected and deleterious effects on the body of the cattle treated, caused by a single dose of treatment, adjusted to the pattern of drug administration, strictly approved for prophylactic and/or therapeutic purposes, and commonly used among farmers of this sector. Of the three combinations administered in this trial (moxidectin+AD3E, ivermectin+AD3E, and doramectin+AD3E), and in light of the above findings, treatment combining moxidectin+AD3E is the most advantageous, in addition to those already reported in other studies (greater spectrum of action and longer, less resistance, and greater weight gain) and less inconvenience, in addition to those already reported in other studies (ivermectin toxicity in



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animals, flora, fauna and a risk to food safety), because cattle treated with moxidectin+AD3E, was the trial subject that has greater weight gain observed at 45 days, which have been presented higher percentages of serum level of vitamin E (alpha tocopherol), the only one in which an increase in serum level of vitamin D (25-OH-cholecalciferol) has been observed, the only one that does not increase the serum levels of triglycerides and, especially, the only one that does not present neither the mild hepatic biochemical alteration nor the previous state of minimal pancreatic dysfunction with full recovery of the organ. The range of the test sample has been small, so the clinical findings shown in this study should open the door to new research. Key words:moxidectin, ivermectin, doramectin, endectocides, macrocyclic lactones, anthelmintics, vitamin AD3E complex, cattle. Introducción La eficacia antiparasitaria de las tres lactonasmacrocíclicas del ensayo (moxidectina, ivermectina y doramectina) está ampliamente avalada1 en la mayoría de las especies de abasto, tanto domésticas como salvajes, incluidas aves. De las tres lactonas del ensayo, la que ha demostrado ofrecer un espectro más amplio, tanto en cuanto a variedad de parásitos como en cuanto tiempo de acción, generar menores resistencias, no tener a penas impacto en flora, fauna, ni en la seguridad alimentaria, y presentar una mayor ganancia media diaria de peso, sin mostrar los efectos tóxicos evidenciados con la administración de la ivermectina2, ha sido la moxidectina. En algunas especies animales en las que son efectivas las tres lactonasmacrocíclicas del ensayo, especialmente en aquellas que requieren un manejo especial, como es el caso de los bovinos de las explotaciones extensivas, se ha popularizado entre veterinarios y ganaderos aprovechar la fecha de desparasitación para incluir un tratamiento de vitaminas. De todas las posibles vitaminas disponibles en el mercado, el complejo vitamínico AD3E es, sin duda, el más popular y más utilizado a nivel mundial en la medicina veterinaria: circunstancia que dinamizó la la introducción en el mercado de productos comerciales que combinaban ivermectina y doramectina, respectivamente, con el complejo vitamínico AD3E. Varios autores han realizado estudios comparativos sobre los efectos de las tres lactonasmacrocíclicas de este ensayo (moxidectina, ivermectina y doramectina), evidenciando que la ivermectina es susceptible de provocar efectos tóxicos sobre los animales tratados, muy graves sobre ciertas especies de flora, fauna y medioambiente3, además de suponer un riesgo para la seguridad alimentaria, así como que las tres lactonas descritas empiezan a presentar ciertas resistencias frente a algunos parásitos, especialmente la



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ivermectina y la doramectina4, pero en niveles muy inferiores a las observadas en el resto de antiparasitarios comerciales; que en los animales tratados con moxidectina no se observan los efectos tóxicos de la ivermectina5; y que de las tres lactonas de este ensayo (moxidectina, ivermectina y doramectina), la que presenta una mayor ganancia media diaria de peso es la moxidectina6. Sin embargo, no se habían realizado ensayos clínicos comparando la eficacia de estas tres lactonasmacrocícliclas combinadas con el complejo vitamínico AD3E: información que resultará de gran importancia para propietarios, veterinarios y ganaderos, toda vez que les permitirá conocer las bondades y debilidades sanitarias, productivas, ecológicas y económicas que ofrecen estas tres moléculas antiparasitarios combinadas con el complejo vitamínico más difundido y utilizado en medicina veterinaria a nivel mundial (moxidectina+AD3E, ivermectina+AD3E, e doramectina+AD3E), tanto en especies de abasto como en domésticas y varias salvajes. Material y métodos Población del estudio - Se realizó el ensayo sobre un grupo de vacas y otro de novillas de raza morucha, de una explotación extensiva de bovinos de producción cárnica, con aporte diario de paja, el aprovechamiento de la poda de robles, y agua potable ad líbitum, de la provincia de Salamanca, España, durante el periodo comprendido entre Febrero y Marzo de 2014. Toda la ganadería está sometida regularmente al programa nacional de erradicación de tuberculosis; habiendo realizado el último control en mayo de 2013, no evidenciando ningún individuo positivo. Selección de los pacientes En el ensayo participaron 9 bovinos de esta explotación, divididos en dos grupos. El primer grupo (grupo 1) estaba comprendido por 5 novillas de 3 años de edad, todas ellas en periodo de gestación de 2 a 4 meses; el segundo grupo (grupo 2) estaba formado por 4 vacas de 5 años de edad, todas ellas destetadas hace más de dos meses, y en periodo de gestación entre 3 y 5 meses. Se utilizó uno de los individuos del grupo 2 como individuo control del ensayo, al cual no se le administró ningún tratamiento. Los individuos de ambos grupos fueron seleccionados de un lote de 42 bovinos, con el fin de estandarizar lo más posible ambos grupos. Se descartó un individuo por presentar temperatura de 37,7º durante el examen clínico, dos por avanzado estado de gestación, uno por diarrea leve, otro por presentar una herida abierta en una de sus extremidades y el resto por razones de edad y/o peso.



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Todos los individuos seleccionados mostraron buen estado general, no evidenciándose ningún signo de enfermedad o dolencia durante el examen clínico. De todos los individuos del ensayo, solo uno fue objeto, por necesidades de la ganadería, de tratamiento en los 12 meses previos al ensayo: se trató de la novilla identificada con el número 7381 (grupo 1), la cual fue desparasitada con ivermectina al 1% en el mes de octubre de 2013. Toma de muestras: Antes de administrar los tratamientos del ensayo y tres días después de aplicarlos, se extrajeron dos muestras de sangre de cada uno de los individuos del ensayo (9) para analizar parámetros hematológicos y bioquímicos. Quince días después de la administración de los tratamientos, se obtuvieron dos muestras de cada uno de los individuos del grupo 2 para evaluar los niveles séricos de las vitaminas A (retinol), D (25-OH colecalciferol), y E (tocoferol). Las muestras fueron identificadas, en todas las pruebas del ensayo, con los números de identificación oficiales de cada individuo, seguidos del tratamiento administrado, según se expone a continuación:

Grupo 1: 4389-MOXIDECTINA. 3590-MOXIDECTINA. 3588-IVERMECTINA. 4810-IVERMECTINA. 7381-DORAMECTINA. Grupo 2: 8346-MOXIDECTINA+AD3E. 4577-DORAMECTINA+AD3E. 3777-IVERMECTINA+AD3E. 4837-TESTIGO.

Para la extracción de sangre se utilizaron agujas BD Vacutainer® de 20 G. y 38 mm., porta-tubos BD Vacutainer®, y tubos de vacío BD Vacutainer®: unos sin aditivo y con un volumen de 8.5 ml., y otros con EDTA y un volumen de 3 ml. Previa limpieza de la zona con alcohol de 96º C., se realizó la toma de sangre por punción estéril en la vena coxígea caudal de cada individuo. La sangre fue separada en dos fracciones: una en el tubo con EDTA y otra en el tubo sin aditivo. Todos los tubos permanecieron a temperatura ambiente (2º C en la primera toma de muestras y 8ºC el segundo día), hasta su entrega en el laboratorio FaustoLab, cosa que se produjo, en ambos casos, dos horas después de su recolección.



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Antes de los tratamientos y tres días después de estos, se extrajeron también muestras de materia fecal fresca de la ampolla rectal de dos individuos del grupo1 (nº7381 y nº4810) y de dos individuos del grupo 2 (nº8346 y nº3777), cuatro en total, remitiéndose todas ellas en bote estéril y hermético para su análisis coproparasitológico al departamento de parasitología de la Facultad de Veterinaria de Cáceres, Universidad de Extremadura, España, mediante transporte urgente, que entregó dichas muestras al día siguiente de su recolección. Pruebas de laboratorio clínico En tres laboratorios distintos, se llevaron a cabo tres tipos de análisis: coproparasitológico, hematológico y bioquímico. El laboratorio FaustoLab, sito en Salamanca (E), se encargó de analizar los parámetros hematológicos y las concentraciones séricas de AST, ALT, ALP, amilasa, y triglicéridos. El laboratorio Reference Laboratory, sito en Hospitalet de Llobregat, Barcelona (E), se encargó de analizar las concentraciones séricas de las vitaminas A(retinol), E( alfa tocoferol) y D(25-OH-colecalciferol), de las inmunoglobulinas IgG, IgA, IgM, IgE, y de la lipasa pancreática. El laboratorio del departamento de parasitología de la Facultad de veterinaria de Cáceres, Universidad de Extremadura (E), se encargó de realizar el análisis coproparasitológico de las muestras de heces. Todas las muestras sanguíneas llegaron al laboratorio FaustoLab, donde se procesó la sangre de todos los tubos, conservando las muestras necesarias para realizar los análisis hematológicos y bioquímicos expuestos (ALT, AST, ALP, amilasa y triglicéridos), remitiendo al laboratorio Reference Laboratory, de Barcelona, el resto del suero para realizar el análisis de los niveles séricos de las vitaminas A(retinol), E( alfa tocoferol), D(25-OH-colecalciferol), de las inmunoglobulinas IgG, IgA, IgM, e IgE y de la lipasa pancreática. Se analizó la hematología completa y las concentraciones séricas de IgE, IgG, IgA, IgM, vitamina A(retinol), vitamina E(alfa tocoferol), vitamina D(25-OH-colecalciferol), AST, ALT, ALP, BT, triglicéridos, lipasa y amilasa de dos individuos del grupo 1 (nº 3590 y nº3588) y de los cuatro del grupo 2 (nº8346, nº4577, nº3777 y nº4837). La IgE fue determinada mediante fluoroinmunoanálisis (CapSystem); las inmunoglobulinas IgG, IgA e IgM fueron determinadas mediante nefelometría; la vitamina D(25-OH-colecalciferol) fue determinada mediante inmunoanálisis; las vitaminas A(retinol) y E(alfa tocoferol) fueron determinadas mediante cromatografía de alta resolución; la lipasa fue determinada mediante técnica cinética; la amilasa y el resto de pruebas bioquímicas fueron determinadas mediante enzimainmunoensayo (Architec-ci-8200); para el resto de pruebas



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(ALT, AST, ALP y triglicéridos) se utilizaron procedimientos convencionales (Cell-din. Abbot). También se realizó un examen coproparasitológico de las muestras de heces de cuatro individuos del ensayo (nº 8346, nº 3777, nº 7381 y nº 4810). El análisis coprológico cualitativo fue realizado mediante flotación en solución sobresaturada de ClNa y sedimentación, cuyo análisis cuantitativo se realizó siguiendo la técnica de McMaster. Pesaje El día previo a iniciar el ensayo y el día 45 tras administrar los tratamientos, en una báscula de una explotación ganadera anexa, cuya precisión calibramos pesando 10 botellas de dos litros de agua, se realizó el pesaje de 7 individuos del ensayo: tres del grupo 1 y cuatro del grupo 2 (cuadro XI). Diseño del ensayo El primer día se realizó un examen clínico de todos los individuos del ensayo, se recolectaron muestras de sangre y heces. A continuación se administraron los tratamientos reflejados en el cuadro I.

Cuadro I Tratamientos administrados a cada individuo del ensayo.

Grupo 1.

Individuo Dosis/Producto mg./ Kg./ P.v./ Producto/% Vía de admon.

4389 0,738 g de moxidectina 0,2 mg./kg.p.v. moxidectina 1% Inyección. s.c. 3590 0,738 g de moxidectina 0,2 mg./kg.p.v. moxidectina 1% Inyección. s.c.

4810 0,738 g de ivermectina 0,2 mg./kg.p.v. moxidectina 1% Inyección. s.c 3588 0,738 g de ivermectina 0,2 mg./kg.p.v. ivermectina 1% Inyección. s.c 7381 0,738 g de doramectina 0,2 mg./kg.p.v. ivermectina 1% Inyección. s.c

Grupo 2. Individuo Dosis/Producto 1 mg./ Kg./ P.v./ Producto/% Vía de admon.

8346 0,738 g de moxidectina 0,2 mg./kg/P.v. moxidectina 1% Inyección. s.c 3777 0,738 g de moxidectina 0,2 mg./kg./P.v. moxidectina 1% Inyección. s.c. 4577 0,738 g de ivermectina 0,2 mg./kg./P.v. moxidectina 1% Inyección. s.c. 4837 0,738 g de ivermectina 0,2 mg./kg./P.v. ivermectina 1% Inyección. s.c.

Grupo 2.

Individuo Dosis/Producto 2 U.I. vit. A/ mg. vit.D/ mg. vit.E. Vía de admon.

8346 4,9 ml. Vigantol® AD3E (1) Inyección. i.m. 3777 4,9 ml. Vigantol® AD3E (1) Inyección. i.m 4577 4,9 ml. Vigantol® AD3E (1) Inyección. i.m 4837 4,9 ml. Vigantol® AD3E (1) Inyección. i.m

(1) A cada individuo se le administró2.450.000 U.I. de vit. A, 9.188 mg. de vit. D3, y 245 mg. de vit. E.

U.I. =Unidades internacionales. mg. = Miligramo. ml.= Mililitro. vit.= Vitamina. g.=gramo. admon. = administración. i.m.= Intramuscular. s.c= subcutánea. kg./P.v.= kilogramo por peso vivo.



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Seguimiento de los pacientes El ganadero y su personal realizaron un seguimiento estrecho de todos los individuos del ensayo, gracias a situarlos en los cercados próximos a la unidad de manejo. A los tres y quince días tras administrar los tratamientos reflejados en el cuadro I, se realizó un examen clínico veterinario básico de cada individuo del ensayo, no evidenciando ningún signo de dolencia o de enfermedad, recolectando a continuación nuevas muestras de sangre y heces. Aspectos éticos

Este ensayo clínico se realizó respetando, de forma escrupulosa, todos los aspectos recogidos en la normativa de bienestar animal de la UE, siguiendo, además, la guía de buenas prácticas clínicas publicada en la página web de la Comisión Europea: http://ec.europa.eu/enterprise/pharmaceuticals/eudralex/vol3_en.htm

Resultados El cuadro XII refleja la presencia de parásitos el primer día del ensayo -antes de administrar los distintos tratamientos- en los individuos 8346, 4810, y 457,7 y ausencia parasitaria en el individuo 7381; así como ausencia de parásitos en esos cuatro individuos (8346, 4810, 4577 y 7381) tres días después de administrar los tratamientos del ensayo. En los cuadros II a X, ambos inclusive, se recogen los datos más relevantes del ensayo, cuyo desglose se expone a continuación. Los niveles séricos de ALP y ALT observados en los dos individuos tratados con moxidectina e ivermectina aumentaron con respecto a los niveles previos al ensayo, siendo ambos, a su vez, superiores a los niveles séricos observados tanto en el individuo tratado con moxidectina+AD3E, cuyo nivel sérico disminuyó en ambos casos con respecto al estadio previo al tratamiento, como en el tratado con ivermectina+AD3E, cuyo nivel sérico de ALT aumentó ligeramente y el nivel sérico de AST disminuyó en los mismos términos (ligeramente) con respecto al estadio previo al tratamiento. El nivel sérico de AST observado en los dos individuos tratados con moxidectina e ivermectina aumentó con respecto al nivel previo al ensayo, siendo superior en el caso de la moxidectina sin combinar (12.08%) que en la combinada (3.85%); en el caso de la ivermectina sin combinar, el aumento fue similar al observado en la moxidectina administrada de forma aislada (12.99%) y muy superior en el caso del individuo al que se le administró ivermectina combinada con el complejo vitamínico AD3E, cuyo incremento fue muy significativo (42.30%).Los niveles séricos de ALP y AST observados en el individuo tratado con doramectina+AD3E comparte la misma tendencia observada en el individuo tratado con ivermectina+AD3E, pero con parámetros superiores en amboscasos (ALT y AST), mientras que el nivel sérico de ALP cursa en dirección opuesta al individuo tratado con ivermectina+AD3E (aumenta).



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El nivel sérico de amilasa observado en los dos individuos tratados con moxidectina e ivermectina, respectivamente, aumentó en mayor proporción al nivel sérico de amilasa observado tanto en el individuo tratado con moxidectina+AD3E como en el tratado con ivermectina+AD3E. Mientras que el individuo tratado con doramectina+AD3E presentó un aumento del nivel sérico de amilasa similar al observado en el individuo control, el individuo tratado con ivermectina+AD3E presentó un aumento superior a ambos(13.90%), y el individuo tratado con moxidectina+AD3E presentó un leve descenso (1.82%). Mientras el individuo tratado con moxidectina presentó una disminución leve del nivel sérico de lipasa (-5.27%), el tratado con moxidectina+AD3E presentó un nivel sérico de lipasa (5.00%) compatible con el observado en el individuo control (6.67%); los individuos tratados con ivermectina (22.23%), ivermectina+AD3E (29.42%) y doramectina+AD3E (29.42%), respectivamente, presentaron, por el contrario, un aumento muy superior al observado en el individuo control. El nivel sérico de IgG observado en el individuo tratado con ivermectina aumentó significativamente, mientras que en el resto de individuos del ensayo se observaron niveles séricos de IgG similares al observado en el individuo control. El nivel sérico de bilirrubina total observado en los individuos tratados con ivermectina y moxidectina es compatible con el observado en el individuo control, mientras que los individuos tratados con moxidectina+AD3E, ivermectina+AD3E, y doramectina+AD3E presentaron un aumento de este parámetro bioquímico, siendo significativo en los individuos tratados con ivermectina+AD3E (66.67%) y doramectina+AD3E, (50.00%) y ligeramente superior al observado en el individuo control (20.00%) en el individuo tratado con moxidectina+AD3E (33.33%). El porcentaje de hematíes observado en el individuo tratado con ivermectina+AD3E aumentó de forma superior a los porcentajes observados tanto en el individuo tratado con ivermectina a solas como en el individuo control. El resto de individuos del ensayo mostraron un porcentaje de hematíes compatible con el observado en el individuo control. El nivel sérico de vitamina E(alfa tocoferol) observado en los individuos tratados con doramectina y moxidectina, respectivamente, disminuyó a los tres días de administrar ambos tratamiento, mientras que con la ivermectina aumentó. El nivel sérico de vitamina E(alfa tocoferol) observado en los individuos tratados con las tres lactonas combinadas (ivermectina+AD3E, moxidectina+AD3E y doramectina+AD3E) aumentó ligeramente a los tres días del tratamiento y de forma significativa (41.82%, 50.00% y 42.86% respectivamente) a los quince.



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El nivel sérico de vitamina D(25-OH-colecalciferol) observado a los tres días en los individuos tratados con las tres lactonas del ensayo administradas de forma aislada fue similar al mostrado en esos mismos individuos antes del ensayo. El nivel sérico de vitamina D(25-OH-colecalciferol) observado a los tres días en los individuos tratados con ivermectina+AD3E y doramectina+AD3E fue similar al mostrado en esos mismos individuos antes del ensayo. El nivel sérico de vitamina D(25-OH-colecalciferol) observado a los tres días del tratamiento en el individuo al que se le administró moxidectina+AD3E fue ligeramente superior al mostrado tanto en ese individuo antes del ensayo como en el individuo control. Los niveles séricos de vitamina A (retinol) observados en los individuos tratados con moxidectina, ivermectina, doramectina, moxidectina+AD3E, ivermectina+AD3E y doramectina+AD3E, respectivamente, disminuyeron en todos los casos a los tres días de administrar los tratamientos, especialmente en los individuos tratados con moxidectina y con moxidectina+AD3E. A los quince días, en los individuos tratados con moxidectina+AD3E y doramectina+AD3E persistieron los niveles séricos bajos, pero con valores más elevados a los observados a los tres días, mientras que el valor observado en el individuo tratado con ivermectina+AD3E fue idéntico al mostrado antes del tratamiento, evidenciando con ello, una corrección de los descensos del nivel sérico de vitamina A (retinol) con el paso de los días.

Discusión. Parásitos. Se evidenció escasa carga parasitaria en los individuos nº8346, nº4577, y nº4810, y ausencia de formas parasitarias en esos mismos individuos tras administrar cada uno de los tratamientos del ensayo (cuadro XII). La muestra de heces del individuo nº7381 (cuadro XII) no mostró formas parasitarias ni antes ni después del tratamiento: resultado compatible con tres hechos: 1. Por haber sido desparasitado con ivermectina al 1% en el mes de octubre. 2. Porque los resultados de los individuos 8346, 4577, y 4810 -que llevaban un año sin desparasitar- evidenciaron una explotación con escasa carga parasitaria. 3. Porque la explotación ha permanecido diez años sin carga ganadera. 4. Y porque, desde la reactivación de la actividad ganadera, la explotación se ha dotado de un sistema donde todo el ganado de la explotación abreva en bebederos automáticos con agua potable o en charcas cuyo caudal se renueva con el agua de la lluvia y con el agua potable de la explotación.



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ALT, AST, ALP, BT. Los aumentos de los niveles séricos de alanina transaminasa (ALT), aspartatoaminotransferasa (AST) y fosfatasa alcalina (ALP) observados en los individuos tratados con ivermectina respaldan el argumento de varios autores que han evidenciado este hecho7. No existen, sin embargo, referencias en la literatura científica de que la combinación de ivermectina+AD3E provoque niveles séricos de ALP y ALT inferiores a los observados cuando se administra la ivermectina de forma aislada, y un nivel sérico de AST muy superior. No existen referencias en la literatura científica de que el tratamiento de bovinos con doramectina+AD3E aumenté los niveles séricos de ALT, AST y ALP con valores superiores a los observados en el individuo tratado con ivermectina+AD3E. No existen referencias en la literatura científica de que el tratamiento de bovinos con moxidectina+AD3E presente niveles séricos de ALT, AST y ALP inferiores a los observados en el individuo tratado únicamente con moxidectina, siendo los valores de ALT y ALP inferiores a los observados antes de administrar los tratamientos: valores que evidencian que la moxidectina combinada con el complejo vitamínico AD3E no presenta el perfil hepático observado en los individuos tratados con ivermectina, ivermectina+AD3E y doramectina+AD3E, respectivamente. Sin embargo, conviene precisar que el aumento leve de las transaminasas y de la BT tras la administración de un fármaco, especialmente si esos fármacos se metabolizan (como lo hacen las tres moléculas antiparasitarias del ensayo) a través del hígado, debe ser considerada como previsible. Sin embargo también, tanto el aumento del 64,79% de AST como el aumento del 50% de la BT observados en el individuo tratado con doramectina+AD3E, como el aumento del 42,30% de AST y el aumento del 66,67% de la BT observado en el individuo tratado con ivermectina+AD3E, unidos a los aumentos de ALT y ALP deben observarse con atención: aun cuando no existe expectativa de que estos valores aumenten, gracias a que son tratamientos unidosis; aun cuando esos valores reviertan a la normalidad con el tiempo; y aun cuando el perfil que forma su conjunto no alcance los parámetros establecidos por el Grupo Internacional de Consenso sobre daño hepático8. Y entendemos que debe observarse con atención porque cualquier incremento de los niveles séricos de ALP, ALT y AST refleja un daño en la membrana celular del hepatocito, que puede cursar desde su inflamación, con alteración de la permeabilidad, a la muerte celular. Y aunque esta elevación plasmática es siempre un indicador sensible de daño hepatocelular, no es un dato específico, porque no existe correlación entre el daño celular hepático y el nivel sérico de transaminasas. Es importante también reseñar que si bien la AST es menos específica que la ALT para determinar el daño hepático en humanos y en pequeños animales, porque la ALT se sitúa fundamentalmente en el citosol del hepatocito, mientras que la AST se encuentra en corazón, músculo esquelético, riñones, cerebro, páncreas, pulmón, eritrocitos y leucocitos, en grandes animales, por



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tener bajas concentraciones hepáticas de ALT, la AST resulta un dato relevante para el diagnóstico de daño hepático. ¿Dónde situar el origen de ese aumento del nivel sérico de las transaminasas y de la BT y qué alcance se puede esperar? El perfil hepático leve observado en los individuos tratados con ivermectina+AD3E y doramectina+AD3E, basado en el aumento sobrevenido de transaminasas (ALT, AST, ALP) y en el aumento de bilirrubina total (BT) inmediatamente después de adminitrar los tratamientos (3 días), y una vez realizado el diagnóstico diferencial, nos lleva a pensar que tiene su origen en la naturaleza de esos mismos tratamientos, y que evidencia una alteración bioquímica hepática leve, estadio previo a una reacción adversa medicamentosa leve, la cual no debe ser interpretada como un hallazgo trivial, ni beneficioso, porque aun no alcanzando el nivel preciso para poner en juego medidas correctoras, representa efectos deletéreos y no esperados en el organismo de los bovinos tratados, provocados con una dosis única de tratamiento, ajustada a la pauta de administración farmacológica aprobada con fines estrictamente profilácticos y/o terapéuticos. Lipasa, amilasa y AST. Los niveles séricos de amilasa y lipasa reflejan valores sensibles a la hora de diagnosticar patologías del páncreas, aunque son poco específicos, ya que sus variaciones no guardan relación con el daño real de este órgano. No había sido reportado en la literatura científica que la combinación del complejo vitamínico AD3E con ivermectina o moxidectina, respectivamente, provoca niveles séricos de lipasa y amilasa en bovinos inferiores a los observados en bovinos tratados únicamente con ivermectina y moxidectina, respectivamente; ni que el individuo tratado con doramectina+AD3E presente un nivel sérico de lipasa igual al observado en el individuo tratado con ivermectina+AD3E; ni que el individuo tratado con moxidectina+AD3E presente valores séricos de amilasa y lipasa compatibles con los observados en el individuo control, evidenciando, con ello, que esta combinación (moxidectina+AD3E) no menoscaba la función pancreática como sí parecen hacerlo las otras dos combinaciones (ivermectina+AD3E y doramectina+AD3E). ¿Dónde situar el origen de ese aumento del nivel sérico de lipasa y amilasa, y qué alcance se puede esperar? La amilasa presenta varios factores limitantes a la hora de ser utilizada en el diagnóstico de patologías del páncreas: tiene una vida media de 3 horas, retornando a sus valores normales a las 72 horas; presenta varios falsos positivos; puede aparecer aumentada en insuficiencia renal, enfermedad del tracto biliar, lesiones en glándulas salivares, paratiroiditis, úlceras gástricas o duodenales, peritonitis, trauma cerebral, tumoraciones ováricas o pulmonares, además de por el efecto de medicamentos9. Los niveles séricos



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de la lipasa, en cambio, mantiene sus niveles en suero durante 7 días, siendo un parámetro mucho más sensible (S: 94%) y específico (E: 96%) que la amilasa para el diagnóstico de las alteraciones del páncreas, además de no presentan muchos de los falsos positivos que se observan con la amilasa10. El aumento conjunto de los niveles séricos de amilasa y lipasa también pueden conducir a un diagnóstico falso negativo en el caso de la patología biliar aguda, gracias a que el conducto biliar común se une al conducto pancreático para transportar enzimas digestivas y bilis al intestino delgado; esta posibilidad, sin embargo, no es contemplable en este caso, ya que para ser una patología biliar debería cursar con la elevación de 1.5 veces la ALP y de 3 veces la GGT, conservando el nivel de transaminasas normales o ligeramente elevadas: circunstancias que no concurren en ningun caso y en ninguno de los individuos del ensayo. El nivel sérico de amilasa observado en el individuo tratado con ivermectina+AD3E es un 10% superior al observado en el individuo control, mientras que el nivel sérico de amilasa observado en el individuo tratado con doramectina+AD3E es compatible con el observado el individuo control: datos que debemos observar teniendo en cuenta que han sido obtenidos a los tres días de administrar ambos tratamientos, y por tanto, en un momento en el que los niveles séricos de la amilasa de ambos individuos estarían retornando a los niveles del primer día del ensayo, antes de administrar los tratamientos. El nivel sérico de lipasa observado tanto en el individuo tratado con ivermectina+AD3E como en el tratado con doramectina+AD3E son, en ambos casos, un 23% superiores al observado en el individuo control, y resultan parámetros más precisos que los de la amilasa, toda vez que la presencia de la lipasa se mantiene durante siete días, y esos datos fueron obtenidos a los tres días de administrar ambos tratamientos. El aumento sobrevenido de los niveles séricos de amilasa y lipasa en individuos que no evidenciaron signos de enfermedad durante el examen clínico del primer día, observados a los tres días de administrar los tratamientos, y existiendo coincidencias entre los individuos que han sido tratados con protocolos semejantes o con familias terapéuticas próximas, en ausencia de más parámetros bioquímicos y de pruebas diagnósticas específicas (radiología, ecografía, T.A.C., o C.P.E.R.) nos hace considerar que la ulcera peptídica, el infarto de mesenterio, el íleo mecánico, el infarto de miocardio, una enfermedad infecciosa, una insuficiencia renal, una intoxicación, u otros procesos abdominales estarían en un segundo plano; adquiriendo mayor protagonismo una patología biliar aguda y/o una pancreatitis leve y/o una disfunción hepática leve y/o una reacción a uno o varios medicamentos. A falta de más pruebas, todo parece indicar que el origen del aumento del nivel sérico de la amilasa y/o la lipasa en los individuos tratados con ivermectina+AD3E y doramectina+AD3E podría tener su origen en la



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naturaleza de estos medicamentos, los cuales habrían provocado una alteración indeseable a nivel del hígado y/o del páncreas leve y transitoria. Por tanto, podríamos considerar como opción más probable del perfil que conforma el aumento de los niveles séricos de lipasa y/o amilasa observados en los individuos tratados con ivermectina+AD3E y con doramectina+AD3E, al estadio previo a una disfunción pancreática mínima con recuperación total del órgano; la cual, a su vez, representa el estadio previo a una pancreatitis aguda leve. Ese estadio previo a la disfunción pancreática mínima con recuperación total del órgano no debe ser interpretada como un hallazgo trivial ni beneficioso, porque aun no alcanzando el nivel preciso para poner en juego medidas correctoras, representa efectos deletéreos y no esperados en el organismo de los bovinos tratados, provocados con una dosis única de tratamiento, ajustada a la pauta de administración farmacológica aprobada con fines estrictamente profilácticos y/o terapéuticos. Vitamina A (retinol) No hay referencias en la literatura científica del descenso del nivel sérico de vitamina A(retinol) observado en todos individuos tratados con cualquiera de las moléculas del ensayo, en todos los casos inferiores a los niveles séricos observados antes del ensayo. En los individuos tratados con el complejo vitamínico AD3E, se observó que a los 15 días tras administrar los tratamientos, los niveles séricos de vitamina A(retinol) se corrigieron con respecto a los niveles observados a los tres días, manteniéndose, sin embargo, disminuidos en el caso los individuos tratados con moxidectina+AD3E y doramectina+AD3E, e igualándose al nivel observado antes del tratamiento en el individuo tratado con ivermectina+AD3E. ¿Dónde situar el origen de la disminución del nivel sérico de vitamina A(retinol)? El origen de un déficit de vitamina A(retinol) puede tener su origen en un consumo inadecuado de fuentes de esta vitamina, en una mayor demanda metabólica de la misma, en un problema de absorción, conjugación o transporte de vitamina A en el organismo, o por un mecanismo de activación o de inhibición inopinado; siendo el último (mecanismo de activación o de inhibición inopinado) el origen más probable de la disminución sérica de vitamina A en todos los individuos de este ensayo (salvo en el individuo control), ya que se trata de una variación sérica generalizada, evidenciada desde el tercer día de la administración de las distintas moléculas, en individuos que no habían mostrado signos de enfermedad durante el examen clínico previo, y en los cuales el único patrón común entre ellos ha sido la administración de los tratamientos recogidos en el cuadro I. Las dos hipótesis de trabajo que barajamos, a la espera de una investigación más amplia, sobre el descenso del nivel sérico de vitamina A(retinol) en todos los individuos del ensayo (salvo en el individuo control), se centran en una



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acción activadora o inhibitoria del citocromo P450. Las reacciones de biotransformación de los medicamentos y xenobióticos pasan por una primera fase donde se produce la oxidación y/o hidrólisis y/o reducción de estos, convirtiéndolos en metabolitos más polares; y una segunda fase de conjugación, donde el sobrante de xenobióticos, junto a los metabolitos polares generados en la fase 1ª, se combinan con moléculas endógenas polares presentes en el organismo. En la fase 1ª de la biotransformación de xenobióticos, el citocromo P450 (CYP450) adquiere una relevancia especial, ya que si se presenta una sustancia que inhibe las enzimas CYP450, generará una ralentización en el metabolismo de los fármacos, provocando un aumento de los niveles del medicamento en el organismo, circunstancia que podría derivar en escenarios de toxicidad o de efectos secundarios; si, en cambio, una sustancia estimula la producción de las enzimas CYP450, provocará una aceleración en el metabolismo de esos fármacos, que derivará en una eliminación demasiado rápida, la cual terminará provocando que las concentraciones de ese medicamento en el organismo sean nímios o inexistentes (hipótesis 1). La segunda hipótesis se centra en un escenario donde se metabolizan al mismo tiempo y en el mismo órgano (hígado) dos o más fármacos, que, a su vez, compiten por las mismas enzimas CYP450, provocando que al ser una vía compartida y saturable, alguno de ellos quede sin metabolizarse (hipótesis 2). Se ha evidenciado11 en un estudio de la farmaceútica Merck que el citocromo responsable del metabolismo de la ivermectina es el P4503A4: citocromo que parece ser diferente del P450 (citocromo al que se le ha atribuido capacidad hepatotóxica); sin embargo, no hay estudios que evalúen la actividad inhibidora o activadora del citocromo en los tratamientos de lactonasmacrocíclicas combinadas con el complejo vitamínico AD3E, de ahí que nuestras dos hipótesis abran una nueva, e interesante, vía de investigación. La verificación de estas dos hipótesis revelaría la necesidad de compensar el déficit sérico de vitamina A(retinol) que provoca la administración de moxidectina, ivermectina, doramectina, moxidectina+AD3E, ivermectina+AD3E y doramectina+AD3E en bovinos con una dosis extra de vitamina A, teniendo en cuenta que una dosis alta de vitamina A(retinol) es susceptible de provocar toxicidad, especialmente a nivel hepático, no siendo, por tanto, recomendable combinar una dosis alta de vitamina A(retinol) con la ivermectina, debido al potencial hepatotóxico que pueden presentar ambas moléculas. Sería igualmente aconsejable formular las combinaciones del ensayo (moxidectina+AD3E, ivermectina+AD3E y doramectina+AD3E) con agentes retardantes que limiten o impidan la competición descrita, siempre que antes se demuestren las hipótesis descritas. Vitamina D (25-OH-colecalciferol) Los niveles séricos de vitamina D(25-OH-colecalciferol) fueron evaluados a los tres días de administrar los tratamientos del cuadro I, para evitar las variaciones séricas que podrían derivar de la exposición al sol. Los individuos



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tratados con moxidectina y moxidectina+AD3E, respectivamente, mostraron un incremento del nivel sérico de vitamina D(25-OH-colecalciferol) con relación al nivel sérico de esta vitamina observado justo antes de administrar ambos tratamientos (3 días), siendo un incremento más pronunciado en el individuo tratado con moxidectina+AD3E que en el que fue tratado solo con moxidectina. Un individuo tratado con ivermectina mostró un incremento leve del nivel sérico de vitamina D(25-OH-colecalciferol) a los tres días del ensayo, mientras que otro no varió su nivel sérico en ese periodo: caso idéntico al individuo tratado con doramectina. Los individuos tratados con ivermectina+AD3E y doramectina+AD3E, respectivamente, mostraron un nivel sérico de vitamina D(25-OH-colecalciferol) ligeramente inferior al observado justo antes de administrar el tratamiento con vitamina D(25-OH-colecalciferol) (3 días). ¿Dónde situar el origen de ese descenso del nivel sérico de vitamina D(25-OH- colecalciferol) en los individuos tratados con ivermectina+AD3E y doramectina +AD3E? El origen de un déficit de vitamina D(25-OH-colecalciferol) puede tener su origen en un consumo inadecuado de fuentes de esta vitamina, en una mayor demanda metabólica de la misma, en un problema de absorción, en el grado y tiempo de exposición al sol, en la conjugación o transporte de vitamina D(25-OH-colecalciferol) en el organismo, o en un mecanismo de activación o de inhibición inopinado; siendo este último (mecanismo de activación o de inhibición inopinado) el origen más probable de la disminución sérica de vitamina D(25-OH-colecalciferol) en estos dos individuos, ya que ha sido evidenciada a los tres días de ser administrados los tratamientos, en individuos que no habían mostrado signos de enfermedad durante el examen clínico previo, sin variaciones de clima en ese periodo, y con tratamientos similares y de familias terapéuticas muy próximas. Las dos hipótesis que barajamos como causas más probables del descenso del nivel sérico de la vitamina D(25-OH-colecalciferol) en los individuos tratados con ivermectina+AD3E y doramectina+AD3E se centran, al igual que en caso del descenso del nivel sérico de la vitamina A(retinol), en la actividad activadora o inhibidora del citocromo P450: una competición de dos sustancias por las mismas enzimas CYP450 (vitamina D con ivermectina y vitamina D con doramectina), siendo la ivermectina y la doramectina quienes monopolizan estas enzimas evitando, con ello, el metabolismo de la vitamina D(25-OH-colecalciferol); o bien una estimulación de la producción de las enzimas CYP450, que provocaría una aceleración en el metabolismo y eliminación de esos fármacos, logrando niveles séricos inferiores a los observados justo antes de administrar los tratamientos. La verificación de estas dos hipótesis revelaría la necesidad de compensar el déficit sérico de vitamina D(25-OH-colecalciferol) que provoca la administración de ivermectina+AD3E y la doramectina+AD3E en bovinos, con una dosis extra de vitamina D(25-OH-colecalciferol), o mediante la



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formulación de dichas combinaciones con agentes retardantes que limiten o impidan la competición entre ivermectina o doramectina con la vitamina D(25-OH-colecalciferol) del complejo vitamínico AD3E. Vitamina E (alfa tocoferol) Los individuos tratados con moxidectina+AD3E, ivermectina+AD3E, y doramectina+AD3E, respectivamente, mostraron un incremento significativo del nivel sérico de vitamina E (alfa tocoferol) a los 15 días, con relación al nivel observado justo antes de administrar ambos tratamientos, siendo un incremento más pronunciado en el individuo tratado con moxidectina+AD3E que en el que en los otros dos individuos. Peso A los 45 días de administrar los tratamientos reflejados en el cuadro I, se observó en los individuos tratados con moxidectina+AD3E, ivermectina+AD3E y doramectina+AD3E, respectivamente, un incremento de peso muy superior al observado en los individuos tratados con moxidectina, ivermectina y doramectina, respectivamente, administradas de forma aislada. El tratado con moxidectina+AD3E fue el que presentó mayor aumento de peso. En la literatura científica se encuentran varios estudios que avalaban el mayor potencial de ganancia diaria de peso de la moxidectina frente a la ivermectina y la doramectina, pero no se habían realizado estudios donde se evalúe, de forma comparada, la ganancia de peso en bovinos tratados con estas tres moléculas (moxidectina, ivermectina y doramectina) combinadas con el complejo vitamínico AD3E.

Conclusiones -En los bovinos tratados con moxidectina, ivermectina y doramectina combinadas, respectivamente, con el complejo vitamínico AD3E, se observa una mayor ganancia de peso diaria que en los individuos tratados con estas moléculas antiparasitarias administradas de forma aislada, siendo el individuo tratado con la Moxidectina combinada con el complejo vitamínico AD3E quien presenta mayor ganancia de peso total. -La disminución sérica de vitamina A(retinol) observada en todos los individuos del ensayo -salvo en el individuo control-, y la disminución sérica de la vitamina vitamina D(25-OH-colecalciferol) observada en los individuos tratados con la ivermectina y la doramectina combinadas con el complejo vitamínico AD3E suponen hallazgos destacables, ya que no se había reportado antes en la literatura científica y coincide con la administración de esa mismas vitaminas en los individuos del ensayo. Este hallazgo revela un mecanismo competitivo entre las tres lactonasmacrocíclicas combinadas con el complejo vitamínico AD3E y la vitamina A(retinol), y entre la ivermectina y la doramectina combinadas con el complejo vitamínico AD3E y la vitamina D(25-OH-colecalciferol). Las dos hipótesis que barajamos para determinar el



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descenso del nivel sérico de la vitamina A(retinol) en todos los individuos del ensayo, y de la vitamina D(25-OH-colecalciferol) en los individuos tratados con ivermectina+AD3E y doramectina+AD3E se centran en la actividad inhibidora o activadora del citocromo P450. Hipótesis 1ª. Se produce una competición entre dos o más sustancias por las mismas enzimas del citocromo P450 (CYP450), siendo las tres lactonasmacrocíclicas, en el caso de la vitamina A(retinol), y la ivermectina y la doramectina, en el caso de la vitamina D(25-OH-colecalciferol), quienes habrían logrado monopolizar esas enzimas (CYP450), evitando, con ello, el correcto metabolismo de ambas vitaminas (retinol y 25-OH-colecalciferol). Hipótesis 2ª. Se produce un aumento inesperado de la estimulación de las enzimas del citocromo P450 por parte de las tres lactonasmacrocíclicas en el caso de la vitamina A(retinol), y de la ivermectina y la doramectina en el caso de la vitamina D(25-OH-colecalciferol), que provocaría una aceleración en el metabolismo y consecuente eliminación de ambas vitaminas (retinol y 25-OH-colecalciferol), provocando niveles séricos fueran inferiores a los observados antes del ensayo. -El perfil hepático leve y transitorio observado en los individuos tratados con ivermectina+AD3E y con doramectina+AD3E, respectivamente, basado en el aumento sobrevenido de transaminasas (ALT, AST, ALP) y en el aumento de bilirrubina total (BT) tras administrar los tratamientos del cuadro I, y cuyo origen sitúa nuestro diagnóstico diferencial en la naturaleza de los medicamentos administrados, evidencia una alteración bioquímica hepática leve y transitoria, estadio previo a una reacción adversa medicamentosa leve. -El perfil pancreático observado en los individuos tratados con ivermectina+AD3E y con doramectina+AD3E, basado en el aumento sobrevenido de lipasa y/o amilasa y AST tras administrar los tratamientos del ensayo, y cuyo origen sitúa nuestro diagnóstico diferencial en la naturaleza de los medicamentos administrados, evidencia un estadio previo a ladisfunción pancreática mínima con recuperación total del órgano, que, a su vez, es el estadio previo a la pancreatitis aguda leve. -Tanto la alteración bioquímica hepática leve transitoria como el estadio previo a la disfunción pancreática mínima con recuperación total del órgano observados en los individuos tratados con ivermectina+AD3E y doramectina+AD3E, y no evidenciados en el individuo tratado con moxidectina+AD3E, no deben ser interpretados como hallazgos triviales ni beneficiosos, porque aun no alcanzando los niveles precisos para poner en juego medidas correctoras, representan efectos deletéreos y no esperados en el organismo de los bovinos tratados, provocados con una dosis única de tratamiento, ajustada a la pauta de administración farmacológica aprobada con fines estrictamente profilácticos y/o terapéuticos.



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-De las tres combinaciones administradas en este ensayo (moxidectina+AD3E, ivermectina+AD3E, y doramectina+AD3E), y a la luz de los resultados expuestos, la que combina moxidectina+AD3E es la que presenta más ventajas, además de las ya reportadas en otros estudios (espectro de acción mayor y más duradero, menores resistencias y mayor ganancia de peso) y menos inconvenientes, además de los ya reportados en otros estudios (no presenta la toxicidad de la ivermectina en animales, flora, fauna, ni riesgo para la seguridad alimentaria), la que ha presentado mayor ganancia de peso a los 45 días, la que ha presentado mayores porcentajes del nivel sérico de vitamina E(alfa tocoferol), la única en la que se ha observado un incremento del nivel sérico de vitamina D(25-OH-colecalciferol), la única que no aumenta los niveles séricos de triglicéridos, y la única que no presenta ni la alteración bioquímica hepática leve y transitoria ni el estadio previo a la disfunción pancreática mínima con recuperación total del órgano. La muestra de este ensayo ha sido, sin embargo, pequeña, por lo que los hallazgos clínicos evidenciado en este estudio deben abrir la puerta a nuevas investigaciones en esa misma dirección.

Cuadro II. Niveles séricos de ALT antes y después del tratamiento.

Individuo Tratamiento administrado

Antes del tratamiento

3 días después del tratamiento

Diferencia No varía % Disminuye % Aumenta

Grupo 1

3590 Moxidectina 98 122 +24 24.49%

3588 Ivermectina 337 349 +12 3.57%

Grupo 2

8346 Moxidectina + AD3E

151 100 -51 33.78%

3777 Ivermectina + AD3E

63 62 -1 1.59%

4577 Doramectina + AD3E

273 306 +33 12.09%

4837TESTIGO Sin tratamiento 330 395 +65 19.70%

Cuadro V. Niveles séricos de BT antes y después del tratamiento.


Antes del

tratamiento



Grupo 1



25

3590 Moxidectina 0.30 0.20 -0.10 33.4% 42.86%

3588 Ivermectina 0.40 0.40 0 X 30.44%

Grupo 2


0.30 0.40 +0.10 33.3%


0.30 0.50 +0.20 66.67%


0.20 0.30 +0.10 50%

4837Testigo Sin tratamiento

0.50 0.60 +0.10 20%

Cuadro VI. Niveles séricos de Lipasa antes y después del tratamiento.


Antes del

tratamiento



Grupo 1

3590 Moxidectina 19 18 -1 5.27%

3588 Ivermectina 18 22 +4 22.23%

Grupo 2


20 21 +1 5%


17 22 +5 29.42%


17 22 +5 29.42%


15 16 +1 6.67%

Cuadro VII.

Niveles séricos de Amilasa antes y después del tratamiento. Individuo Tratamiento

administrado Antes

del tratamiento



Grupo 1



26

3590 Moxidectina 33 39 +6 18.19%

3588 Ivermectina 33 39 +6 18.19%

Grupo 2


55 54 -1 1.82%


36 41 +5 13.90%


50 51 +1 2%

4837Testigo Sin tratamiento 33 34 +1 3%

Cuadro VIII. Niveles séricos de vitamina A antes y después del tratamiento.


Antes del

tratamiento

días después del tratamiento

15 díasdespúes

del tratamiento


Grupo 1

4389 Moxidectina 0.35 0.27 -0.08 22.86%

3590 Moxidectina 0.28 0.20 -0.08 28.58%

3588 Ivermectina 0.27 0.25 -0.02 7.41%

4810 Ivermectina 0.28 0.24 -0.04 14.29%

7381 Doramectina 0.30 0.24 -0.06 20%

Grupo 2 Diferenciaen 15 días

No varíaen 15 días

Disminuyeen 15 días

Aumentaen 15 días


0.45 0.22 0.35 -0.20 22.23%


0.28 0.25 0.28 0 X

4577Testigo Doramectina + AD3E

0.36 0.30 0.33 -0.03 8.34%



27

Cuadro IX. Niveles séricos de vitamina D antes y después del tratamiento.


Antes del

tratamiento



Grupo 1

4389 Moxidectina 12 13 +1 8.34%

3590 Moxidectina 9 12 +3 33.34%

3588 Ivermectina 15 15 0 X

4810 Ivermectina 5 6 +1 20%

7381 Doramectina 10 10 0 X

Grupo 2


33 36 +3 9.1%


29 28 -1 3.45%


39 38 -1 2.56%


14 15 +1 7.15%

Cuadro X.

Niveles séricos de vitamina E antes y después del tratamiento. Individuo Tratamiento

administrado Antes

del tratamiento


15 díasdespúes

del tratamiento


Grupo 1

4389 Moxidectina 6.1 4.5 -1.6 26.23%

3590 Moxidectina 3.8 2.9 -0.9 23.69%

3588 Ivermectina 2.9 3.9 +1 34.49%

4810 Ivermectina 5,1 5.8 +0.7 13.73%



28

7381 Doramectina 9.9 9.3 -0.7 7.09%

Grupo 2 Diferenciaen 15 días

No varíaen 15 días

Disminuyeen 15 días

Aumentaen 15 días


4.6 4.7 6.9 +2.3 50%


5.5 6.2 7.8 +2.3 41.82%


4.2 4.7 6 +1.8 42.86%


4.2 2.9 -1.3 30.96%

Cuadro XI. Pesos antes y después del tratamiento.


Antes del

tratamiento


Diferencia No varía en 45 días

% Disminuye en 45 días

% Aumenta en 45 días

Grupo 1

3590 Moxidectina 373 383 +10 2.69%

4810 Ivermectina 369 375 +6 1.7%

7381 Doramectina 366 374 +8 2.19%

Grupo 2


487 506 +19 3.91%


485 499 +14 2.89%


491 507 +16 3.25%


482 486 +4 0.83%

Cuadro XII.

Parásitos antes y después de los tratamientos. Individuo Tratamiento

administrado Antes

del tratamiento


Grupo 1



29

4810 Ivermectina <100 Huevos Strongylidaspp./ g

heces

No se observan formas parasitarias

7381 Doramectina No se observan formas parasitarias


Grupo 2


<100 Huevos Strongylidaspp./ g

heces



<100 Huevos Strongylidaspp./ g

heces


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REDVET: 2016, Vol. 17 Nº 12

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