ettan ipgphor 3 簡易マニュアル...s 1 stp 500 v 0 00 hr s 2 stp 0 v 0 00 hr s 3 stp 0 v 0 00...

30
Ettan IPGphor 3 簡易マニュアル 71-3704-31 IPGphor II からの主な変更点 ストリップホルダーの蓋を固定するために本体付属のリッドアダプターを 使用します。(詳しくは 8 ページを参照してください。)

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  • Ettan IPGphor 3

    簡易マニュアル

    71-3704-31

    IPGphor IIからの主な変更点ストリップホルダーの蓋を固定するために本体付属のリッドアダプターを

    使用します。(詳しくは 8ページを参照してください。)

  • 4IPGphor 3 5Immobiline DryStrip 6-7IPGphor 3 8

    9-101112

    IPGphor 3 13-17

    - -SE260 SDS-PAGE 18-20

    Appendix A : 21

    Appendix B : 22

    Appendix C : 2324-2627

    2-D Clean-Up KitDeStreak Rehydration Solution

  • GE

    IPGphor 3Ettan IPGphor 3

    115V230V

    Ettan IPGphor 3 Safety HandbookEttan IPGphor 3 Software ManualEttan IPGphor 3 Instrument Manual

    Customer Service Information

    TEL: 03-5331-9336FAX: 03-5331-9370e-mail: [email protected]

    Q&A WEBhttp://www.gelifesciences.co.jp Q&A Q&A

  • IPGphor 3

    Evening Day 1

    Morning Day 2 Evening Day 2

    ( Hour ) 0.5 10 2.5

    0.5 2 6 2 2 ( Hour )

  • 8 M Urea2 % CHAPS0.5 % IPG Buffer0.002 % BPB7 mg / 2.5 ml DTT

    Immobiline DryStrip pH

    Appendix A, 21

    Appendix B, 22

    + pH

    ” “

    ” “

    Immobiline DryStrip

    Immobiline DryStrip 1

    DryStrip cm 1 l125

    11 20013 25018 34024 450

    Immobiline DryStrip1

    Immobiline DryStrip

    Immobiline DryStrip +

    Immobiline DryStrip

  • CO2

    Immobiline DryStripImmobiline DryStrip

    Immobiline DryStrip

    Immobiline DryStrip

    Immobiline DryStrip Cover Fluid1 ml

    Immobiline DryStrip

  • IPGphor 3

    Immobiline DryStrip 1

    pH12

    Immobiline DryStrip

    IPGphor 3

  • IPGphor 3

    Prot 1 File 1Rehydrate 0 00 Hr @ 20IEF @ 20 50uA/Strip 1 Strips 0 steps

    “ Hr”Prot 1 File 1Rehydrate 10 00 Hr @ 20IEF @ 20 50uA/Strip 1 Strips 0 steps

    “__ ”

    Prot 1 File 1Rehydrate 10 00 Hr @ 20IEF @ 20 50uA/Strip 1 Strips 0 steps

    ON

    10

    00:00 99:59(10 )

    10:00

    15-3020

    5

    2-3

    “File”

    16

  • IEF“IEF @” “__ ”

    Prot 1 File 1Rehydrate 10 00 Hr @ 20IEF @ 20 50uA/Strip 1 Strips 0 steps

    “ uA/strip”Prot 1 File 1Rehydrate 10 00 Hr @ 20IEF @ 20 50uA/Strip

    1 Strips 0 steps

    Edit

    IEFImmobiline DryStrip IEF ImmobilineDryStrip

    “Stp” “Grd ”

    Prot 1 0 StepsS 1 Stp 0 V 0 00 HrS 2 Stp 0 V 0 00 HrS 3 Stp 0 V 0 00 Hr

    “ V”Prot 1 0 StepsS 1 Stp 500 V 0 00 HrS 2 Stp 0 V 0 00 HrS 3 Stp 0 V 0 00 Hr

    “ ”Prot 1 0 StepsS 1 Stp 500 V 0 30 HrS 2 Stp 0 V 0 00 HrS 3 Stp 0 V 0 00 Hr

    Step 4 “S ”

    Voltage Step-n-hold Vhr

    Edit

    500V

    t

    V

    Immobiline DryStrip13 17

    15-30 20

    0-200 A/strip1500 A

    50 A/strip50 A/strip Strip

    Step-n-hold or Gradient

    0 10000V

    Hr or Vhr“Hr”

    “Vhr”

    Hrs 0:00 99 59volt-hours 0-300,000

    V

    t

  • Prot 1 File 1Rehydrate 10 00 Hr @ 20IEF @ 20 50uA/Strip 1 Strips 3 steps

    STARTStrip

    Immobiline DryStrip

    Number of strips 1Press START to continue

    START

    Starting protocol 13 steps 2 40 Hr

    Running Prot 1Rehydretion for 10 00 Hr0 01 Hr ElapsedRehydrate at 20

    Running Prot 1 @ 20Step 1 of 3 0 30 Hr Step 0 10 Hr Elapsed500 V 40uA /Strip 0.0W

    Run ended at5000V 7000 Vhrs Total50uA 2 40 Hr TotalPress Stop to reset

    STOP

    Hr

    VhS VhVhT VhElapsed VhRemaining Vh

  • IPGphor 3

    80-6452-78

    STOP

    Paused in step 1Press START to continue

    STRAT STOPSTOP

    Run ended at8000V 12000 Vhrs Total50uA 8 00 Hr TotalPress STOP to reset

    STOP

  • 50 µA/Strip5 Step and Hold 300 500V 12h

    Immobiline DryStrip

    Ettan IPGphor 3 7 cm Immobiline DryStrip

    12.0-16.05:15-6:00Total

    3.6-7.60:45-1:305000Step and Hold4

    7.52:305000Gradient36.2-7.5 1

    0.71:001000Gradient25.3-6.5

    0.21:00 2300Step and Hold1

    7.0-10.03:20-3:55Total

    1.6-4.60:20-0:555000Step and Hold4

    4.51:305000Gradient37-11 NL 1

    0.71:001000Gradient2

    0.20:30 2300Step and Hold1

    6.0-8.02:42-3:06Total

    1.0-3.00:12-0.365000Step and Hold43-5.6

    4.51:305000Gradient34-7

    0.30:301000Gradient23-10 NL

    0.20:30 2300Step and Hold1

    5.0-6.52:26-2:45Total

    0.5-2.00:06-0:255000Step and Hold46-11 1

    4.0 1:205000Gradient33-10

    0.30:301000Gradient23-11 NL

    0.20:30 2300Step and Hold17 cm

    kVhrpH

    12 1 4

    3 1 6 3 kVh4 3 kVh

    4 Cup Loading Strip Holder2

    2 Vhr 4

    Ettan IPGphor3

  • Ettan IPGphor 3 11 cm Immobiline DryStrip

    12 1 4

    3 1 6 3 kVh4 3 kVh

    4 Cup Loading Strip Holder2

    2 Vhr 4

    28.0-35.07:40-8:50Total

    16.2-23.22:40-3:506000Step and Hold4

    10.53:006000Gradient36.2-7.5 1

    0.81:001000Gradient25.3-6.5

    0.51:00 3500Step and Hold1

    15.0-20.05:20-6:10Total

    4.9-9.90:50-1:406000Step and Hold4

    8.82:306000Gradient37-11 NL 1

    0.81:001000Gradient2

    0.51:00 2500Step and Hold1

    11.0-15.04:40-5:20Total

    0.9-4.90:10-0:506000Step and Hold4

    8.82:306000Gradient33-5.6 NL

    0.81:001000Gradient24-7

    0.51:00 2500Step and Hold1

    9.0-12.04:05-4:40Total

    0.7-3.70:10-0:406000Step and Hold46-11 1

    7.0 2:006000Gradient33-10

    0.81:001000Gradient23-11 NL

    0.51:00 2500Step and Hold111 cm

    kVhr

  • 38.0-48.07:55-9:10Total

    23.2-33.22:55-4:108000Step and Hold4

    13.53:008000Gradient36.2-7.5 1

    0.81:001000Gradient25.3-6.5

    0.51:00 3500Step and Hold1

    21.0-25.05:45-6:15Total

    6.2-10.20:45-1:158000Step and Hold4

    13.53:008000Gradient37-11 NL 1

    0.81:001000Gradient2

    0.51:00 2500Step and Hold1

    16.0-20.04:55-5:25Total

    3.4-7.40:25-0:558000Step and Hold43-5.6 NL

    11.32:308000Gradient34-7

    0.81:001000Gradient23-10 NL

    0.51:00 2500Step and Hold1

    14.0-17.04:40-5:00Total

    1.4-4.40:10-0:308000Step and Hold46-11 1

    11.3 2:308000Gradient33-10

    0.81:001000Gradient23-11 NL

    0.51:00 2500Step and Hold113 cm

    kVhr

    Ettan IPGphor 3 13 cm Immobiline DryStrip

    12 1 4

    3 1 6 3 kVh4 3 kVh

    4 Cup Loading Strip Holder2

    2 Vhr 4

  • 12 1 4

    3 1 6 3 kVh4 3 kVh

    4 Cup Loading Strip Holder2

    2 Vhr 4

    Ettan IPGphor 3 18 cm Immobiline DryStrip

    70.0-85.013:45-15:40Total

    54-696:45-8:408000Step and Hold4

    13.53:008000Gradient36.2-7.5 1

    1.5 (2.2) 42:00 (3:00) 41000Gradient25.3-6.5

    12:00500Step and Hold1

    40.0-50.08:10-9:30Total

    25.2-35.23:10-4:308000Step and Hold4

    13.53:008000Gradient37-11 NL 1

    0.8 (6.0) 41:00 (8:00) 41000Gradient26-9 1

    0.51:00500Step and Hold1

    27.0-36.06:30-7:40Total

    12.2-21.21:30-2:408000Step and Hold43-5.6 NL

    13.53:008000Gradient34-7

    0.8 (6.0) 41:00 (8:00) 41000Gradient23-10 NL

    0.51:00500Step and Hold1

    21.0-27.05:46-6:30Total

    6.2-12.20:46-1:308000Step and Hold46-11 1

    13.5 3:008000Gradient33-10

    0.8 (6.0) 41:00 (8:00) 41000Gradient23-11 NL

    0.51:00500Step and Hold118 cm

    kVhr

    Strip Holder Cup Loading Strip HolderCup Loading Manifold Immobiline DryStrip

  • 12 1 4

    3 1 6 3 kVh4 3 kVh

    4 Cup Loading Strip Holder2

    2 Vhr 4

    Ettan IPGphor 3 24 cm Immobiline DryStrip

    110-13018:45-21:15Total

    94-11411:45-14:158000Step and Hold4

    13.53:008000Gradient36.2-7.5 1

    1.5 (3.8) 42:00 (5:00) 41000Gradient25.3-6.5

    12:00500Step and Hold1

    90-10016:10-17:30Total

    74-849:10-10:308000Step and Hold4

    13.53:008000Gradient3

    1.5 (3.8) 42:00 (5:00) 41000Gradient2

    12:00500Step and Hold1

    3.5-4.5

    60-8510:36-13:45Total

    45-705:36-8:458000Step and Hold4

    13.53:008000Gradient37-11 NL 1

    0.8 (3.8) 41:00 (5:00) 41000Gradient26-9 1

    0.51:00500Step and Hold1

    45-608:45-10:36Total

    30-453:45-5:368000Step and Hold43-5.6 NL

    13.53:008000Gradient34-7

    0.8 (5.2) 41:00 (7:00) 41000Gradient23-7 NL

    0.51:00500Step and Hold13-10 NL

    35-457:30-8:45Total

    20-302:30-3:458000Step and Hold4

    13.5 3:008000Gradient33-10

    0.8 (6.0) 41:00 (8:00) 41000Gradient23-11 NL

    0.51:00500Step and Hold124 cm

    kVhr

    Strip Holder Cup Loading Strip HolderCup Loading Manifold Immobiline DryStrip

  • SE260 SDS-PAGE

    Immobiline DryStrip

    Immobiline DryStripSDS

    A50 mM Tris-HCl (pH 8.8) 6 M Urea30 % 1 % SDS 0.25 % DTT( )

    B50 mM Tris-HCl (pH 8.8) 6 M Urea30 % 1 % SDS 4.5 %

    Immobiline DryStrip A

    5

    B 15

    Immobiline DryStripSDS- PAGE

    Immobiline DryStrip

    ADTT(

    B

    SH

    Immobiline DryStrip

  • SE260 SDS-PAGESDS 500 ml

    Immobiline DryStrip SDS

    SDS-PAGEImmobiline DryStrip

    Immobiline DryStripImmobiline DryStrip

    0.5 %

    30

    SDS

  • SE260

    SDS 150 ml 250 ml

    10

    2

    600 V 40 mA 50 W

    2

    CBB

    CBB 15

    30

    SE260

    Immobiline DryStrip

  • Appendix A

    8M

    FW 60.06 8 M 1.2 gCHAPS 2% w/v 50 mg

    IPG Buffer Pharmalyte 0.5% w/v 12.5 µlDTT FW154.2 40 mM 15.4 mg1%(w/v) Bromophenol Blue 0.002%(w/v) 5 µl

    2.5 ml

    7M 2M

    8M

    FW 60.06 7 M 1.05 gFW76.12 2 M 381 mg

    CHAPS 4% w/v 100 mgIPG Buffer Pharmalyte 0.5% w/v 12.5 µl

    DTT FW154.2 40 mM 15.4 mg1%(w/v) Bromophenol Blue 0.002%(w/v) 5 µl

    2.5 ml

    DTT IPG Buffer Pharmalyte

    Immobiline DryStrip

    pHAppendix B:

    2-D Quant Kit 80-6483-56

  • Appendix B

    IEF

    1 200 g CBB

    1 mg/mlImmobiline DryStrip

    Narrow and Medium 3-5.6 NL 5.3-6.5 6.2-7.5 7-11 NL 3.5-4.5 5.5-6.7 Immobiline DryStrip

    g of protein

    Immobiline DryStrip Length / pH7 cm 4-7 4-8 25-150

    6-11, 7-11 NL, 6.2-7.5, 3-5.6NL, 5.3-6.5 8-16 40-240 3-10, 3-10 NL, 3-11 NL 3-6 25-60

    11 cm 4-7 10-20 50-300 6-11, 3-5.6 NL, 5.3-6.5, 6.2-7.5, 7-11 NL 20-40 100-600 3-10, 3-11 NL 7-15 50-120

    13 cm 4-7 15-30 75-450 6-11, 3-5.6 NL, 5.3-6.5, 6.2-7.5, 7-11 NL 30-60 150-900 3-10, 3-10 NL, 3-11 NL 10-20 50-240

    18 cm 4-7 30-60 150-900 6-11, 6-9, Narrow and Medium 60-120 300-1500 3-10 , 3-10 NL, 3-11 NL 20-40 100-500

    24 cm 4-7, 3-7 NL 45-90 200-13006-9, Narrow and Medium 80-200 400-20003-10, 3-10 NL, 3-11 NL 30-60 200-600

  • Appendix C:

    Sample Grinding Kit Albumin and IgGRemoval Kit

    2-D Flactionation Kit

    2-D Clean-Up Kit Mini Dialysis KitDeStreak RehydrationSolution

    2-D Quant Kit

    No Yes

    No

    No

    Yes

    Yes

    or

  • 2-D Clean-Up Kit

    90 50 100 l

    4 % SDS 40 mM Tris 20 g7 cm Immobiline DryStrip pH 4-7 Ettan IPGphorSDS-PAGE (12.5 %) / Hoefer SE 260 (8 9 cm gel)PlusOne Silver Staining Kit, Protein

    pH 4-7 pH 4-7

    2-D Clean-Up Kit

    2-D Clean-Up Kit

    90

    1

    PrecipitantCo-precipitantWash bufferWash additive

    1.5 ml 1.5 ml

    Wash buffer 20 1

  • 1 100 µl 1 100 µg1 100 µl 1 100 µg

    12,000 g

    1 100 µl 1 100 µg 1.5 ml

    300 µl Precipitant 45 15

    300 µl co-precipitant

    12,000 g 4 5

    12,000 g 4 5 10

    co-precipitant 40 µl5

    12,000 g 4 5

    25 µl

    20 Wash buffer 1 ml Wash additive 5 µl

    5 4

    20 30 10 20 30

    12,000 g 4 5

    5

    30

    12,000 g 4 5

    -80

    Wash buffer

    20 1

    15Appendix A

    Sample Grinding Kit

  • 100 µl 100 µg100 µg

    12 8,000 g1 ml 12 ml

    100 µg

    3 Precipitant4 5 15

    3 co-precipitant

    8,000 g 4 10

    8,000 g 4 1

    co-precipitant 3 45

    8,000 g 4 5

    10 Wash buffer Wash additive 5 µlWash additive 5 µl

    5 4

    20 30 10 20 30

    8,000 g 4 10

    5

    30

    12,000 g 4 5

    -80

    wash buffer

    20 1

    15Appendix A

    Sample Grinding Kit

  • DeStreak Rehydration Solution

    DeStreak Rehydration Solution DeStreak Reagent 2

    streakingImmobiline DryStrip

    DTT pH 7

    DeStreak Rehydration Solution SH

    DeStreak Rehydration SolutionImmobiline DryStrip pH IPG Buffer DeStreak

    Rehydration Solution 3 ml 60 l IPG Buffer

    DeStreak ReagentDTT DTT 1 ml 12 l DeStreak Reagent

    Immobiline DryStrip pH 7-11NL pH 6-9 pH 6-11 Cup Loading Manifold Manifold Light Kit Cup Loading

    EttanTM DIGE EttanTM DIGE

    DeStreak

    DeStreak Rehydration Solution

    Mouse liver proteins, 80 µgImmobiline DryStrip pH 6-9, 24 cm

    8 M Urea 0.5 % CHAPS 10 mM DTT 1 % IPG Buffer pH 6-11 1 % IPG Buffer pH 6-11DeStreak Rehydration Solution

    pH6 pH9 pH6 pH9

  • 安全上のご注意 必ずお守りください誤った取扱いをした場合に生じる危険や損害の程度を、次の区分で説明しています。

    警告誤った取扱いをした場合に、死亡や重傷を負う可能性があるもの。

    注意誤った取扱いをした場合に、傷害または物的損害が発生する可能性があるもの。

    図記号の意味は次の通りです。

    禁 止

    禁 止は、してはいけない「禁止」を示します。

    は、必ず実行していただく「強制」を示します。

    警告

    禁 止

    電源プラグの抜き差しにより、運転を停止しない

    火災・感電の原因になります。

    禁 止

    電源コード・電源プラグを傷つけない

    ●加工しない ●束ねない ●ねじらない ●折らない ●物をのせない ●加熱しない ●無理に曲げない

    破損して火災・感電の原因になります。

    根元まで差込む

    電源プラグのほこりを取り除き、刃の根元まで確実に差込む

    接続が不十分だと、隙間にほこりが付着して火災・感電の原因になります。

    禁 止

    本体を水につけたり、水をかけたりしない

    ショート・感電の原因になります。

    禁 止

    使用時や使用直後(運転停止後約60分間)は、操作に関係のない部位には触れない

    高温部に触れ、やけどの原因になります。

    禁 止

    同梱の電源コード・電源プラグ以外のコード・プラグを使用しない

    故障・火災・感電の原因になります。

    禁 止

    電源コードを途中で接続しない、タコ足配線をしない

    火災・感電・故障の原因になります。

    禁 止

    修理・分解・改造はしない

    火災・感電の原因になります。

    指定の規格

    取扱説明書に指定された規格のコンセントを使用する

    指定された規格以外で使用すると火災・感電の原因になります。

    禁 止

    電源コードや電源プラグが傷んだり、コンセントの差し込みがゆるいときは使わない

    感電・ショート・発火の原因になります。

    プラグを抜く

    異常時は、運転を停止して電源プラグを抜く

    異常のまま運転を続けると火災・感電の原因になります。

    禁 止

    同梱の電源コード・電源プラグを他の電気機器に使用しない

    故障・火災・感電の原因になります。

    このしおりには、弊社機器に関する一般的な注意事項を記載しています。取扱いの詳細は必ず製品添付の使用説明書をご覧ください。

  • 注意

    禁 止

    設置時は、次のような場所には置かない

    ●不安定な場所  ●湿気やほこりの多い場所●油煙や湯気が当たる場所●直射日光の当たる場所 ●風雨のあたる場所●熱器具の近く ●高温になる場所●吸・排気口をふさぐような場所

    このような場所に置くと、ショートや発熱、電源コードの被膜が溶けるなどして、火災や感電、故障、変形の原因になることがあります。

    水平

    水平で丈夫な場所に設置する

    低温室で使用する場合の注意

    電源を入れない

    装置を低温室から常温の場所に移動させる場合、常温に設置後、装置内の結露が無くなるまでシステム電源を入れない(状況により異なるが、通常半日から一昼夜)

    感電・漏電火災の原因になります。

    電源を入れておく

    装置を低温環境下でご使用になる場合、システム電源は常時入れておく

    低温環境下で長時間システムの電源を落とした状態で放置すると、結露などにより故障の原因になります。ランプなどの消耗品は OFFにしておくと、劣化を防ぐことができます。

    弊社製品についてのお問合せ (バイオダイレクトライン)

    TEL : 03-5331-9336 受付時間 9 : 00~ 17 : 30土・日・祝日、弊社指定休業日、年末年始を除く

    禁 止

    ぬれた手で電源プラグを抜き差ししない

    感電の原因になります。

    プラグを持つ

    電源プラグを持ってまっすぐ引き抜く

    ななめに引き抜いたり、コードを持って抜くと、プラグの刃や芯線が破損してショート・感電・発火の原因になります。

  • 8

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