evaluation de la génotoxicité dans des mélanges complexes
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d’utilité
publique Congrès SFT – Maison de la RATP – 23/24 novembre 2017 - 1 -
Evaluation de la génotoxicité dans
des mélanges complexes :
Cas des produits de phytothérapies
Dr Fabrice NESSLANY
Chef du service de toxicologie génétique
Institut Pasteur de Lille
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Les plantes médicinales :
Une utilisation ancestrale…
Le Susruta-samhita décrit
- 1120 maladies,
- 700 plantes médicinales,
- 64 préparations de substances minérales
- 57 préparations à base de substances
animales.
Shennong bencao jing (神农本草经),
le Classique de la matière médicale
du Laboureur Céleste
Les traces de leur première utilisation remontent à 2100 avant J-C, en
Chine et Inde.
Le premier écrit date de 600 avant J-C en Inde
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Depuis la fin du 20ème siècle, la phytothérapie est particulièrement en
vogue en Europe occidentale et en Amérique de Nord
Environ 42 % des américains usent régulièrement de médecines
alternatives et 67 % avouent s’être déjà tournés vers les médecines
parallèles
En Europe, 35 % des médicaments prescrits par les médecins
sont d'origine naturelle
Phytothérapie, un nouvel engouement?
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En France, les végétaux sont en cause dans environ 5 % des cas
donnant lieu à un appel à un centre antipoison et de toxicovigilance.
Entre 1985 et 1994 aux Etats-Unis, ce type d’intoxication était classé
au 4ème rang derrière les médicaments, les produits d’entretien
ménagers et les cosmétiques.
Dans la majeure partie des cas ces intoxications restent mineures,
elles peuvent néanmoins être graves et mettre en jeu le pronostic
vital.
Plantes médicinales inoffensives?
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Partie
incriminée
Fruits
Racines,
Bulbes,
Rhizomes
Tiges,
Feuilles Fleurs
Graines
Plante : Rarement toxique dans sa totalité
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Plantes médicinales
Infusions Huiles
essentielles
Extraits et
poudres de
plante
Constituants purs
Tisanes Phytomédicaments
Formes d'utilisation des plantes
médicinales
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Plantes médicinales
Infusions Huiles
essentielles
Extraits et
poudres de
plante
Constituants purs
Tisanes Phytomédicaments
If Taxol (Taxotère)
Pervenche de Madagascar vinblastine
Pavot Morphine, Codéine
Colchique Colchicine
Ipéca Emétine
Quinquina Quinine
Etc….
Formes d'utilisation des plantes
médicinales
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Plantes médicinales
Infusions Huiles
essentielles
Extraits et
poudres de
plante
Constituants purs
Tisanes Phytomédicaments
Formes d'utilisation des plantes
médicinales
Les produits à base de plantes médicinales :
Des mélanges (très) complexes …
Groupes de constituants Exemples
Glucides
Mycopolysaccharides Shiitake ou lentin du Chêne (Lentinus edodes)
Inuline Grande Aunée (Inula helenium)
Mucopolysaccharides Guimauve officinale (Althaea officinalis)
Lipides
Acides gras Huile d'onagre (Œnothera biennis)
Glucosides
Glucosides cyanogéniques Ecorce de cerisier sauvage (Prunus serotina)
Glucosides cardiotoniques (et
digitaliques)
Muguet (Convallaria majalis)
Digitale (Digitalis purpurea)
Van Gogh aurait souffert de Xanthopsie, une
distorsion dans la vision des couleurs
Les objets apparaissent plus jaune qu’ils le
sont réellement, un signe habituel de toxicité de la
digitale
T.C. Lee, Van Gogh's vision, Digitalis intoxication ?
Journal of the American Medical Association, 8, 727 (1981)
Intoxication par la digitale
Vincent van Gogh
« Le Docteur Gachet » (1890)
Musée d’Orsay
« La maison jaune »
Groupes de constituants Exemples
Terpènoïdes
Monoterpènes (a-, mono-, bi-cycliques, irréguliers)
Huile de menthe poivrée (Mentha piperita)
Iridoïde Gentiane jaune (Gentiana lutea)
Sesquiterpènes Giroflier (Syzygium aromaticum)
Sesquiterpènes lactones Grande Camomille (Tanacetum parthenium)
Diterpènes (résines) Marrube blanc (Marrubium vulgare)
Taxol
Triterpènes (saponines, stérols,
stéroïdes)
Igname sauvage (Dioscorea villosa)
Tétraterpènes (pigments
caroténoïdes)
Très nbx exemples…
Polyprènes (isoprènes) Hevea (Hevea brasiliensis)
Les produits à base de plantes médicinales :
Des mélanges (très) complexes …
Groupes de constituants Exemples
Phénoliques
Phénoliques simples Reine-des-prés (Filipendula ulmaria)
Phénopropanoïdes Curcuma (Curcuma longa)
Coumarines Angélique officinale (Angelica archangelica)
Naphtoquinones Droséra (Drosera rotundifolia)
Anthraquinones Nerprun purgatif (Rhamnus cathartica)
Flavonoïdes Aubépine (Crataegus laevigata)
Isoflavonoïdes Trèfle (Trifolium pratense)
Lignanes Chardon-Marie (Silybum marianum)
Tannins Aigremoine eupatoire (Agrimonia eupatoria)
Les produits à base de plantes médicinales :
Des mélanges (très) complexes …
Leur nombre avoisine 5000 molécules [1]
[1) : USDA Database for the Flavonoid:
http://www.nal.usda.gov/fnic/foodcomp/Data/Flav/Flav02-1.pdf
Différentes classes de flavonoïdes
Flavonols (kaempférol, quercétine, myricétine, isorhamnétine …)
Flavanolols (taxifoline)
Flavones (apigénine, lutéoline)
Isoflavones (daidzéine, génistéine …)
Flavanones (hespérétine, naringénine, ériodictyol …)
Flavan-3-ols (catéchines, épicatéchines, théaflavines et théarubigines …)
Anthocyanidines (cyanidine, delphinidine, malvidine, pélargonidine, …)
Chalcones (Lutéine),
Dihydrochalcones (Phlorétine)
Aurones (Sulfurétine)….
Groupes de constituants Exemples
Alcaloïdes
Pipéridines Tabac indien (Lobelia inflata)
Tropanes Jusquiame noire (Hyoscyamus niger)
Purines Guarana (Paullinia cupana)
Isoquinolines Sanguinaire du Canada (Sanguinaria canadensis)
Indoles Éphédra chinois (Ephedra sinica)
Quinolizidines Genêt à balais (Cytisus scoparius)
Les produits à base de plantes médicinales :
Des mélanges (très) complexes …
Plus de 10 000 molécules ont été identifiées…
USDA Database for the Flavonoid:
http://www.nal.usda.gov/fnic/foodcomp/Data/Flav/Flav02-1.pdf
Différentes classes d’alcaloïdes
Pyrroles (méthylpyrrylcétone de la Valériane Officinale) &
Pyrrolidines (hygrine de la Coca)
Pipéridines (lobéline de la lobélie)
Tropanes (alcaloïdes des Solanacées)
Pyrrolizidines (alcaloïdes des Sèneçons)
Isoquinolines et dérivés (morphine, codéine, papavérine du Pavot)
Indoles (ergotamine de l’Ergot de Seigle)
Β-Carbolines (harmine, l'harmaline,etc de la liane Banisteriopsis caapi)
Quinolines (quinine, quinidine du Quinquina)
Quinolizidines (spartéme du Genêt à balai)
Une plante (extrait, poudres) est composée de plusieurs
centaines de constituants différents.
Profils HPLC-DAD des extraits d’Asteracée halophyte obtenus par MAE (a), SFE (b) et ASE (c) dans les
conditions optimales pour chacune des trois techniques.
L. Gourguillon et al. / C. R. Chimie 19 (2016) 1133-1141
Intervention de plusieurs constituants de la plante simultanément
Interaction, synergie d’action
• Par augmentation du taux d’absorption (poivre noir et de Cayenne) ou
par ralentissement du métabolisme (agrumes et réglisse)
• En diminuant l’absorption (plantes contenant fibres, mucilages, ou
tannins, par ex guimauve officinale, plantain, et thé)
• Changements du taux d’élimination du médicament (plantes laxatives,
plantes contenant de la caféine; exemple café, kola nut, maté et guarana)
Plantes médicinales : Différents types
d’interaction possible…
Altération de la biodisponibilité d’un médicament
Effets additifs
• Interactions les plus communes et les plus potentiellement « toxiques » qui
surviennent lorsqu’une plante et un médicament ont des mécanismes d’action
similaires (Extrait de Gingko biloba et inhibiteurs de PAF)
Koch E. Phytomedicine. 2005 Jan;12(1-2):10-6
Effets antagonistes
• Millepertuis et réglisse interagissent pharmacodynamiquement, par opposition
des effets, avec tous les antagonistes calciques à activité anti hypertensive (action
sur CYP 3A4 dim. [plasmatique])
• Réduction de l’efficacité d’un traitement anticoagulant de type AVK (plantes
avec quantités significatives de vitamine K : Griffe du diable, Ginseng,
Angélique de Chine…).
Plantes médicinales : Différents types
d’interaction possible…
Interaction avec les effets d’un médicament
Qualité
Sécurité Efficacité
Phytomédicament
Critères pour
l’enregistrement
Agence européenne des
médicaments
Réglementation et instances officielles
Directive 2004/24/CE relative aux médicaments
traditionnels à base de plantes
Depuis le 1er mai 2011, seuls les médicaments enregistrés ou
autorisés peuvent se trouver sur le marché de l’Union
Procédure d’enregistrement plus simple (ancienneté de l’usage
des médicaments traditionnels à base de plantes + garanties requises
quant à la qualité, la sécurité et l’efficacité),
Fournir une documentation démontrant l’innocuité du produit
concerné dans les conditions d’emploi spécifiées et apporter la
preuve d’un historique de qualité avéré du produit (au moins 30
années d’utilisation en toute sécurité, dont 15 dans l’Union).
Réglementation européenne La directive n°2004/24/CE prévoit un nouveau régime d’autorisation simplifiée dénommé
enregistrement pour les médicaments à base de plantes, qui parce qu’ils satisfont à 5 critères
cumulatifs sont qualifiés de médicaments traditionnels à base de plantes.
Ces 5 critères pour bénéficier de cette qualification sont :
disposer d’indications exclusivement appropriées à des médicaments traditionnels à base
de plantes qui, de par leur composition et leur destination, sont conçus pour, et destinés à
être utilisés sans la surveillance d’un médecin à des fins de diagnostic, de prescription ou de
suivi du traitement ;
être exclusivement destinés à être administrés selon un dosage et une posologie spécifiés ;
consister en des préparations administrées par voie orale, externe et/ou par inhalation ;
avoir un usage médical au moins trentenaire avant la date de la demande, dont au moins
quinze ans dans la Communauté ;
disposer de données suffisantes sur l’usage traditionnel du médicament ; en particulier,
l’innocuité du produit doit être démontrée dans les conditions d’emploi spécifiées et les
effets pharmacologiques ou l’efficacité du médicament doivent être plausibles du fait de
l’ancienneté de l’usage et de l’expérience.
HMPC : Comité européen des médicaments à base de plantes
= Ligne directrice sur la documentation non clinique pour les
médicaments à base de plante pour obtenir l’AMM
Directive sur la documentation non clinique pour les
médicaments à base de plantes :
EMEA/HMPC/32116/2005
- Potentiel génotoxique doit être évalué
- Etudes de cancérogenèse (pas nécessaires quand il n'y a pas de suspicion d'un potentiel
cancérogène),
- Études de toxicité pour la reproduction, fertilité (pas nécessaires sauf si source de
préoccupation ou si le produit est explicitement indiqué durant la grossesse)
Ex activité hormono-mimétique décrite dans la littérature ou usage traditionnel de régulation de la fécondité
Documentation toxicologique (revue de la littérature scientifique ou
études) :
Rapport d’expert (Données toxicologiques publiées, interactions
médicamenteuses, essais non cliniques,...)
Les caractéristiques botaniques et phytochimiques des substances
/ préparations végétales;
Step 1 : Test d’Ames
Si résultats négatifs
Si étude réalisés conformément aux lignes directrices ICH et que le résultat est
clairement négatif, aucun autre test de génotoxicité n'est requis sur la base de la
Ligne directrice du HMPC
Stratégie d’évaluation de la génotoxicité des substances
végétales :
EMEA/HMPC/107079/2007
Si résultats Positif
L'étape suivante dépend de la présence ou non de certains composés génotoxiques
connus dans la préparation végétale.
Step 1a : Une substance génotoxique bien caractérisée et évaluée est
identifiée comme responsable de l'activité génotoxique
Step 2 : Essai de lymphome de souris ou autre essai sur cellules de
mammifères
Si le résultat du test est clairement positif, procéder au test du micronoyau chez le
rongeurs ou autres tests de génotoxicité in vivo
Step 1 : Test d’Ames
Stratégie d’évaluation de la génotoxicité des substances
végétales :
EMEA/HMPC/107079/2007
Step 1b : Réponse génotoxique non attribuée à des constituants spécifiques
S'il n'y a pas de connaissance sur le(s) principe(s) actif(s), la substance à base de
plantes ou la préparation doit être étudiée selon étape 2
Test d’Ames
(OCDE 471)
Recherche de l’origine
de la significativité
+
-
Arbre de décision concernant la génotoxicité d’extraits de plantes
OK (STOP)
(Guideline EMEA)
Revient parfois à chercher ….
Parfois on la
trouve!
Test d’Ames
(OCDE 471)
Recherche de l’origine
de la significativité
-
Arbre de décision concernant la génotoxicité d’extraits de plantes
OK (STOP)
(Guideline EMEA)
Présence de substances mutagènes in vitro
non à risque génotoxique pour l’homme
Flavonoïdes ubiquitaires
(Quercétine, kaempférol,…) ? Tests complémentaires (tests +/- )
Mutagenèse de la quercétine sur S typhimurium TA100 avec
et sans S9 mix
(Schimmer et al, 1988)
Involvement of rat cytochrome 1A1 in the
biotransformation of kaempferol to quercetin: relevance
to the genotoxicity of kaempferol
(Silva ID et al, Mutagenesis. 1997)
+
Test d’Ames sur 3 souches de Salmonella typhimurium sur
podophylline (PD) avec et sans activation métabolique (S9).
Lin, M.C. 2009
Exemples de résultats + Ames test sur extrait de
plantes Podophylline extraite des rhizomes et des racines de plantes vivaces du genre
Podophyllum Émétique & Stimulant laxatif
Exemples de résultats + Ames test sur extrait de
plantes
Test d’Ames sur 3 souches de Salmonella typhimurium sur podophylline (PD) &
podophyllotoxine (extrait de la podophylline) Quercétine, Kaempférol, avec et sans
activation métabolique (S9).
Lin, M.C. 2009
Exemples de résultats + Ames test sur extrait de
plantes
Implication Quercétine (et kaempferol) dans l’effet mutagène observé avec
PD (NB : manque co-exposition)
Test d’Ames sur 3 souches de Salmonella typhimurium sur podophylline (PD) &
podophyllotoxine (extrait de la podophylline) Quercétine, Kaempférol, avec et sans
activation métabolique (S9).
Lin, M.C. 2009
Faible activité mutagène d'un extrait éthanol d’Alchémille (lady’s mantle) observée
dans TA98. L'activité mutagène de cet extrait de plante correspond aux taux de
quercétine dans les plantes activité mutagène attribuée à la quercétine (Schimmer
et al., 1988).
Extrait de Marronnier d'Inde (Horse chestnut) faiblement mutagène avec activation
métabolique et non mutagène sans activation (Schimmer et al., 1994). Les effets
mutagènes sont probablement dus à la quercétine.
Nombreux exemples publiés implication (+/-
exclusive) quercétine / kaempférol
BOTANICAL SAFETY HANDBOOK Second Edition 2013 Edited by Zoë Gardner & Michael McGuffi
Test d’Ames
(OCDE 471)
+
Recherche de l’origine
de la significativité
-
Arbre de décision concernant la génotoxicité d’extraits de plantes
Plante OK
(Guideline EMEA)
Présence de substances mutagènes in vitro
non à risque génotoxique pour l’homme (Ex.
Flavonoïdes ubiquitaires (Quercétine,
kaempférol,…)
Tests complémentaires (tests +/- )
Interférence avec le système d’essai (Ames) (Ex.
Histidine [0.2 µM], AA libres, peptides) ? :
Aminogramme
Tests complémentaires (T&W)[1]
[1] : Thompson C et al, Mutagenesis. 2005
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
50 150 500 1500 3000 5000
Ind
uct
ion
rat
io
Doses µL/plate
Souche TA98 / S9 + Herbal extract XXX
TA98 Assay 1 S9+ PI-
TA98 Assay 2 S9+ PI-
TA98 Assay 2 S9+ PI+
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
50 150 500 1500 3000 5000
Ind
uct
ion
rat
io
Doses µg/plate
Standard vs. Treat & Wash S9+
Test Item
Test item: Treat & Wash
Histidine
Histidine: Treat & Wash
Test d’Ames
(OCDE 471)
+
Recherche de l’origine
de la significativité
-
Arbre de décision concernant la génotoxicité d’extraits de plantes
Plante OK
(Guideline EMEA)
Explique la positivité
Évaluation du
risque
et avis d’expert
Présence de substances mutagènes in vitro
non à risque génotoxique pour l’homme (Ex.
Flavonoïdes ubiquitaires (Quercétine,
kaempférol,…)
Tests complémentaires (tests +/- )
Interférence avec le système d’essai (Ames)
(Ex. Histidine [0.2 µM], AA libres, peptides) :
Aminogramme
Tests complémentaires (T&W)
0,0
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
15 50 150 500 1500 5000
Ind
ucti
on
rati
o
Doses µg/plate
TA 98 / S9 + Extrait PdR
TA98 Assay 1
TA98 Assay 2
0,0
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
50 150 500 1500 5000
Ind
ucti
on
rati
o
Doses µg/plate
TA 98 / S9+ Extrait PdR vs. Quercétine
Test Item
Quercétine
Mais parfois,…
Test d’Ames
(OCDE 471)
+
Recherche de l’origine
de la significativité Explique la positivité
-
Arbre de décision concernant la génotoxicité d’extraits de plantes
Plante OK
(Guideline EMEA)
Évaluation du
risque
et avis d’expert
N’explique pas la
positivité
Recherche des constituants
spécifiques
Recherches bibliographiques
(Mono, Pharmacognosie & phytochimie)
Présence de substances mutagènes in vitro
non à risque génotoxique pour l’homme (Ex.
Flavonoïdes ubiquitaires (Quercétine,
kaempférol,…)
Tests complémentaires (tests +/- )
Interférence avec le système d’essai (Ames)
(Ex. Histidine [0.2 µM], AA libres, peptides) :
Aminogramme
Tests complémentaires (T&W)
Arbre de décision concernant la génotoxicité d’extraits de plantes
Test d’Ames
(OCDE 471)
+
Recherche de l’origine
de la significativité Explique la positivité
-
Plante OK
(Guideline EMEA) Présence de substances mutagènes in vitro
non à risque génotoxique pour l’homme
(Ex. Flavonoïdes ubiquitaires (Quercétine,
kaempférol,…)
Tests complémentaires (tests +/- )
Interférence avec le système d’essai (Ames)
(Ex. Histidine, AA libres, peptides) :
Aminogramme
Tests complémentaires (T&W)
Évaluation du
risque
et avis d’expert
N’explique pas la
positivité
Recherche des constituants
spécifiques
Données bibliographiques
N’explique pas la
positivité
Recherche des constituants spécifiques
Recherches bibliographiques
(Mono, Pharmacognosie & phytochimie)
Existe-t-il une (ou plusieurs)
substances connues mutagènes in
vitro (Ames !) ?
Une (ou plusieurs) sont-elles
génotoxiques in vivo
(cancérogènes) ?
oui
1,8-Cinéole
1-Hydroxyanthraquinone
8-Méthoxy-Psoralen
Acronycine
Alcaloïdes pyrrolizidiniques
Anthraquinone
Aquilide A
Arecaïdine
Arécoline
Acides aristolochiques
Ascaridole
Asiaticoside
Bergapten
β-Asarone
Capsaïcine
Catéchine
Catéchol
Cis-Isosarone
Citral
Clivorine
Colchicine
Coumarine
Cycasine
Diéthylamine
Estradiol
5-Methoxy-Psoralen
Danthron
Méthyl-Eugénol
Liste non exhaustive de substances cancérogènes1
1 Dr. Duke's Phytochemical and Ethnobotanical databases
https://phytochem.nal.usda.gov/phytochem/search/list
Méthyl chavicol
Emodin,
Aloe-emodin
1-Hydroxyanthraquinone
Acides aristolochiques
Alcaloïdes pyrrolizidiniques
β-Asarone
Indole-3-Cabinol
Lucidine
Psoralen
Etc, .....
Liste non exhaustive de substances génotoxiques1
1 Dr. Duke's Phytochemical and Ethnobotatical databases
https://phytochem.nal.usda.gov/phytochem/search/list
Méthyl chavicol
Emodin,
Aloe-emodin
1-Hydroxyanthraquinone
Acides aristolochiques
Alcaloïdes pyrrolizidiniques
β-Asarone
Indole-3-Cabinol
Lucidine
Psoralen
Etc, .....
Liste non exhaustive de substances génotoxiques1
1 Dr. Duke's Phytochemical and Ethnobotatical databases
https://phytochem.nal.usda.gov/phytochem/search/list
Liste des plantes contenant du méthyl-chavicol (Dr. Duke's Phytochemical and Enthnobotantical Databases)
Acorus calamus
Agastache foeniculum
Anethum graveolens
Artemisia dracunculus
Boswellia serrata
Cinnamomum aromaticum
Cinnamomum verum
Cuminum cyminum
Dictamnus albus
Dictamnus hispanicus
Dictamnus albus
Foeniculum vulgare
Hyacinthus orientalis
Hyssopus officinalis
Illicium verum
Magnolia denudata
Magnolia fargesii
Magnolia kobus
Micromeria congesta
Micromeria myrtifolia
Myrtus communis
Ocimum basilicum
Ocimum tenuiflorum
Ocimum sanctum
Ocimum gratissimum
Ocimum canum
Origanum majorana
Persea americana
Pimenta dioica
Pimenta racemosa
Pimenta dioica
Pimpinella anisum
Ravensara aromatica
Satureja hortensis
Syzygium aromaticum
Tarragon
360 substances (toutes parties)
Substances chimiques retrouvées dans ‘Tarragon’ (Artemisia dracunculus) (E)-2-DIHYDROXY-4-METHOXY-4-METHOXYCINNAMIC-ACIDMETHYL-ETHER (E)-ARTEMIDIN (Z)-ARTEMIDIN 1,2-DIMETHOXY-4-ALLYLBENZENE 1,8-CINEOL 1-(BUT-2-YNYL)-ISOCOUMARIN 1-(BUT-2-YNYL)-ISOCOUMARIN TRIMETHOXYCINNAMYLALCOHOL 2-CARBOXYARABINITOL 2-HEPTANONE 2-HYDROXY-4-METHOXYTRANS-CINNAMIC-ACID 3',5'-DIHYDROXY-4',7-DIMETHOXY-FLAVANONE 3,4',5-TRIHYDROXY-3',7-DIMETHOXY-FLAVANONE 3,4',5-TRIHYDROXY-7-METHOXY-FLAVANONE 3-(BUT-CIS-1-YNYL)-ISOCOUMARIN 3-(BUT-TRANS-1-YNYL)-5-HYDROXY-ISOCOUMARIN 3-(BUT-TRANS-1-YNYL)-8-HYDROXY-ISOCOUMARIN 3-(BUT-TRANS-1-YNYL)-ISOCOUMARIN 3-BUT-CIS-1-ENYLISOCOUMARIN 3-BUT-TRANS-1-ENYL-5-HYDROXY-ISOCOUMARIN 3-BUT-TRANS-1-ENYL-8-HYDROXY-ISOCOUMARIN 3-BUT-TRANS-1-ENYLISOCOUMARIN 4-ALLYL-1,2-DIMETHOXYBENZENE 4-HYDROXY-BENZOICACID 4-METHOXYCINNAMALDEHYDE 6,7-DIMETHOXYCOUMARIN 7-(ALPHA-DGALACTOPYRANOSIDE)-PHYDROXYBENZOATEISORHAMNETIN 7-METHOXYCOUMARIN 7-OMETHYLAROMADENDRIN 9-HYDROXYGERANIOL AESCULETIDIN-DIMETHYLETHER AESCULETIDIN-DIMETHYLETHER AESCULETIN ALANINE ALLO-OCIMENE 0 ALPHA-ALANINE ALPHA-CEDRENE ALPHA-PHELLANDRENE ALPHA-PINENE - ALPHA-PROSTAGLANDINF-2 ANETHOLE ANISALDEHYDE ANISIC-ACID ANISIC-ALCOHOL ANISOLE ANNAGENIN ARGININE ARTEMEDINAL ARTEMEDINOL ARTEMIDIN ARTEMIDINAL ARTEMIDINOL ARTEMIDIOL ARTEMISIA-KETONE ARTIMIDINAL ARTIMIDINE ASCORBIC-ACID ASPARAGINE ASPARTIC-ACID ATEMITIN BENZYL-DIACETYLENE BETA-CAROTENE
BETA-MYRCENE BETA-PHELLANDRENE BETA-PINENE
BETA-SITOSTEROL BIOQUERCETIN SHOOT -- 6 BUTYRIC-ACID PLANT -- 102 CAFFEIC-ACID CALCIUM CAMPESTEROL CAMPHENE CAMPHOR CAPILLARIN CAPILLENE CAPILLIN CAR-3-ENE CAR-4-ENE CARBOHYDRATES CARVONE 0 CHAVICOL-METHYL-ETHER CHLOROGENIC-ACID CHRYSOERIOL CINNAMIC-ACID-ACETATE CINNAMIC-ACID-ETHYLESTER CIRSIMARITRIN CIS-ALLO-OCIMENE CIS-ALPHA-OCIMENE CIS-ALPHA-OCIMENE CIS-BETA-OCIMENE CIS-LINALOOL-OXIDE CIS-OCIMENE
CITRAL COPPER COSTUNOLIDE
COUMARIN CYCLOHEXENONE DEHYDROFALCARINDIOL DI-O-CAFFEOYL-QUINICACID DIACETYLENE DIHYDROCOUMARIN DIPHENYL-GLYOXAL ELEMICIN EO ERIODICTYOL ESCULETIN ESCULETIN-DIMETHYLETHER
ESTRAGOLE ESTRAGONOSIDE EUGENOL EUGENOL-4-O-BETA-DGLUCOSIDE EUGENOL-METHYL-ETHER FAT FERULIC-ACID FIBER FRUCTOSE GABA GALLIC-ACID GAMMA-AMINOBUTYRICACID GAMMA-TERPINENE GENTISIC-ACID GERANIOL GLUTAMIC-ACID GLUTAMINE
GLYCINE GLYCINE HEPTA-4,6-DIYNE-1,3-DIOL HERNIARIN HESPERETIN HEX-CIS-3-EN-1-OL-BETAD-GLUCOSIDE HISPIDULIN HYPEROSIDE INULOBIOSE IRON ISOEUGENOL ISOFRAXIDIN ISORHAMNETIN ISOTHUJONE ISOVITEXIN KAEMPFEROL-3-ORHAMNOGLUCOSIDE L-PINITOL LEUCINE LIMONENE LINALOL LINOLENIC-ACID LUTEOLIN LUTEOLIN-7-O-BETA-DGLUCOSIDE LYSINE MAGNESIUM MALTOSE MENTHOL MENTHOL MENTHONE METHYL-AMYL-KETONE METHYL-CHAVICOL METHYL-EUGENOL MYRCENE N-HENTRIACONTANE SHOOT -- NARINGENIN NEROL NEROLIDOL NIACIN O-CRESOL OCIMENE OLEIC-ACID P-COUMARIC-ACID P-CRESOL P-CYMENE P-HYDROXY-BENZOICACID P-HYDROXYCOUMARICACID P-MENTHA-1,8-DIENE PMETHOXYCINNAMALDEHYDE P-METHOXYCINNAMYLALCOHOL PATULETIN-3-OGLUCOSIDE PATULETIN-3-ORHAMNOGLUCOSIDE PECTOLINARIGENIN 0 PEROXIDASE PHELLANDRENE PHENOL PHENOLASE PHENYLALANINE PHLOROGLUCINOL PHOSPHORUS PHYTOSTEROLS PINOCEMBRIN POLYACETYLENES
POLYPHENOL-OXIDASE PLANT -- POTASSIUM PROLINE PROTEIN PROTOCATECHUIC-ACID
QUERCETIN 2 QUERCETIN-3'-METHYLETHER QUERCETIN-3-(BETA-DGALACTOFURANOSYL-6-BETA-
LRHAMNOPYRANOSIDE) 0 QUERCETIN-3-(DGALACTOFURANOSYL-6-BETA-
LRHAMNOPYRANOSIDE 0 QUERCETIN-3-(DGLUCOFURANOSYL-6-BETA-LRHAMNOPYRANOSIDE 0 QUERCETIN-3-GLYCOGALACTOSIDE QUERCETIN-3-O-BETA-DGLUCOSIDE RHAMNETIN RHAMNOSE RIBOFLAVIN RIBOSE ROSMARINIC-ACID RUTIN RUTIN SABINENE SALICYLATES SALICYLIC-ACID SCOPARIN SCOPARONE SCOPOLETIN SERINE SINAPIC-ACID SODIUM SPATHULENOL SQUALENE STIGMASTEROL SUCROSE SYRINGIC-ACID TANNIN THIAMIN THUJONE THUJONE TRANS-ALLO-OCIMENE TRANS-ALPHA-OCIMENE TRANS-ANETHOLE TRANS-BETA-OCIMENE TRANS-ISOELEMICIN TRANS-LINALOOL-OXIDE TRANS-METHYL-ETHERISOEUGENOL TRANS-METHYLISOEUGENOL TRANS-OCIMENE TYROSINE VALDINOL-F VALINE VANILLIC-ACID XYLOSE ZINC
Dr. Duke's Phytochemical and Ethnobotanical Databases
6,7-
DIMETHOXYCOUMARI
N
7-(ALPHA-
DGALACTOPYRANOSI
DE)-
PHYDROXYBENZOATE
ISORHAMNETIN
7-
METHOXYCOUMARIN
7-
OMETHYLAROMADEN
DRIN
9-HYDROXYGERANIOL
AESCULETIDIN-
DIMETHYLETHER
CIS-BETA-OCIMENE CIS-LINALOOL-OXIDE CIS-OCIMENE CITRAL COPPER COSTUNOLIDE COUMARIN CYCLOHEXENONE ERIODICTYOL ESCULETIN ESCULETIN-
DIMETHYLETHER ESTRAGOLE ESTRAGONOSIDE
MALTOSE MENTHOL MENTHOL MENTHONE METHYL-AMYL-
KETONE METHYL-
CHAVICOL METHYL-
EUGENOL MYRCENE N-
HENTRIACONTAN
E SHOOT -- NARINGENIN
POTASSIUM PROLINE PROTEIN PROTOCATECHUIC-
ACID QUERCETIN 2 QUERCETIN-3'-
METHYLETHER QUERCETIN-3-(BETA-
DGALACTOFURANOS
YL 0 QUERCETIN-3-
(DGLUCOFURANOSYL
-6-BETA-
Risk assessment of consumption of methylchavicol and tarragon:
The genotoxic potential in vivo and in vitro. Mutation Research 696
(2010) 1–9. F Nesslany, D Parent-Massin, D Marzin
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
0 250 500 1000
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
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00 P
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Doses (mg/kg (x2))
PC
E/
NC
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In vivo bone marrow micronucleus formation in the rat treated orally with methychavicol
Males
Females -2
-1
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
0/0 0/250 0/800 0/2000
0
10
20
30
40
50
60
70
80
NN
G/
cell
Doses Methylchavicol alone (mg/kg)
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Methylchavicol
NNG/cell
% cells in repair
-2-10123456789
0
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20
30
40
50
60
70
80
NN
G/
cell
Doses Tarragon Leaves / Methylchavicol (mg/kg)
% c
ell
s in
rep
air
Tarragon/MC
NNG/cell
% cells in repair
In vivo UDS in rat hepatocytes with methylchavicol
(MC), desiccated tarragon and desiccated tarragon
enriched with methylchavicol (*).
Percentage of cells in repair (>5 NNG/cell) and net nuclear
grains (NNG) (sampling time 12–16 h).
Les Anthraquinones …
Aloe vera Plant
Cassia marilandica Leaf
Fallopia japonica Root
Frangula alnus Bark
Frangula purshiana Bark
Galium odoratum Plant
Guarea rusbyi Plant
Morinda citrifolia Root
Polygonum multiflorum Root
Rheum palmatum Root, Rhizome
Rheum officinale Root, Rhizome
Rubia cordifolia Root
Rumex crispus Root
Rumex acetosella Plant
Senna obtusifolia Seed
Senna occidentalis Root
Dr. Duke's Phytochemical and Enthnobotantical Databases
0,0
5,0
10,0
15,0
20,0
25,0
30,0
35,0
40,0
45,0
50,0
312,5 625 1250 2500 5000
Ind
ucti
on
rati
o
Doses µg/plate
S9 - Extrait de plante contenant des
Anthraquinones
TA1535
TA1537
TA98
TA100
TA102
Aloe-emodin-induced DNA fragmentation in the mouse in vivo comet
assay. Mutation Research 678 (2009) 13–19
F Nesslany, S Simar-Meintières, H Ficheux, D Marzin
0
2
4
6
8
10
12
0500
10002000
Mean
of
med
ian
s o
f O
TM
(4 a
nim
als
)
Doses (mg/kg)
Aloe-emodin-induced DNA fragmentation in the mouse in vivo comet assay on kidney and colon cells.
Kidney
Colon
*
* *
*
* p<0.05
Génotoxicité des acides aristolochiques
Les acides aristolochiques (dérivés phénanthréniques nitrés) possèdent des activités
toxicologiques remarquables.
*
*
Médiane
fragmentation
de l’ADN
* : Statistiquement significatif
F. Nesslany et al. / Mutation Research 630 (2007) 28–41
Median Olive Tail Moment of DNA from isolated kidney cells
of rats treated with aristolochic acids.
Arbre de décision concernant la génotoxicité d’extraits de plantes
Recherche des constituants
ubiquitaires & spécifiques
Données bibliographiques
Une (ou plusieurs) sont-elles
génotoxiques in vivo
(cancérogènes) ?
Risque Non acceptable
TTC (< 1,5 µg/j),
MOE (TD50, BMDL10)
oui non
Test du micronucleus
in vitro sur Lc
Humains (OCDE 487)
Existe-t-il une (ou plusieurs)
substances connues mutagènes in
vitro (Ames !) ?
Non
oui
Explique
la positivité in vitro?
oui
-
Évaluation du
risque
et avis d’expert
+
Test du micronucleus in vivo
sur MO couplé au TdC
(2 organes : systémique et
local, e.g. foie + organe TGI)
Inconvénients majeurs du MLA/TK (OCDE 490) Cellules d’origine murine, p53- (Honma, 2011)
Faiblement spécifique et peu sensible aux aneugènes
Avantages majeurs du µnoyau (OCDE 487) Type cellulaire d’origine humaine, efficiente p53
Spécifique & sensible (+aneugènes)
Phase analytique & biblio : Certains
constituants pour lesquels tout risque ne peut
pas être exclu
Identification de la (des)
substances responsables ?
Spectres phytochimiques (très) complexes et variables quali et quanti…
en fonction des conditions d’extraction...
Cas des poudres de plantes
Dosage 254 nmDEVELOPPEMENT ANALYTIQUE
Project Name:
Developpement_AMM\TEST AMES\19 Hamamélis NewReported by User: MFE (MelanieF)
System Name HPLC_15
Report Method: Hamamelis 254 nm 14/12/2011Printed 15:46:22 Europe/Paris
SampleName Hamamelis eau
S A M P L E I N F O R M A T I O N
23/11/2011 18:27:03 CETDate Acquired:Sample Name: Hamamelis eau
Dosage Pharmeuropa ZorbaxAcq. Method Set:Sample Type: Unknown 14/12/2011 12:18:22 CETDate Processed:Vial: 6
Processing Method: Dosage Pharmeuropa ZorbaxInjection #: 1
Injection Volume: 20,00 ul Channel Name: 254 nmProc. Chnl. Descr.:Run Time: 55,0 Minutes PDA 254,0 nm
Sample Set Name: Dosage_231111 SampleWeight 1,00000 Dilution 1,00000
Auto-Scaled Chromatogram
Hamamelis eau; Injection Volume 20,00; Date Acquired 23/11/2011 18:27:03 CET; Channel Name 254 nm
2,72
23,
187
3,81
63,
916
4,75
04,
887
5,30
75,
404
6,17
66,
446
6,64
86,
854
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7,3
187,
753
7,94
9
8,82
6
10,0
38
10,9
0711
,466 12
,611
14,8
68
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itann
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15,
541
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16,
136 ac
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16,4
3216
,664
19,1
19
20,7
22
22,0
05 22,3
1122
,562
22,9
80 23,2
0623
,460
23,9
8024
,231
24,5
67 24,8
0625
,043
Fla
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- 25
,420
25,7
33
Gal
lota
nnin
1 -
26,
348
26,7
1027
,119
27,5
47G
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- 2
8,02
7G
allo
tann
in 3
- 2
8,24
528
,567
28,8
7429
,160
30,2
6230
,481
Gal
lota
nnin
4 -
30,
664
30,9
8631
,148
31,4
22
32,4
0432
,596
33,0
7733
,287
34,1
69
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36,
846
AU
0,00
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
0,24
Minutes
0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 30,00 35,00 40,00 45,00
1
2
3
4
5
Name RT Area Height USP Plate Count USP Tailing USP Resolution Processed Channel Descr.
2,722
3,187
3,816
3,916
4,750
24470
12105
37384
16757
7762
3918
1716
4917
2694
1845
4388
4858
4143
1,44 2,62
PDA 254,0 nm
PDA 254,0 nm
PDA 254,0 nm
PDA 254,0 nm
PDA 254,0 nm
Peak Results
Dosage 254 nmDEVELOPPEMENT ANALYTIQUE
Project Name:
Developpement_AMM\TEST AMES\19 Hamamélis NewReported by User: MFE (MelanieF)
System Name HPLC_15
Report Method: Hamamelis 254 nm 14/12/2011Printed 15:45:03 Europe/Paris
SampleName Hamamelis EtOH30%
S A M P L E I N F O R M A T I O N
23/11/2011 19:23:02 CETDate Acquired:Sample Name: Hamamelis EtOH30%
Dosage Pharmeuropa ZorbaxAcq. Method Set:Sample Type: Unknown 14/12/2011 12:22:39 CETDate Processed:Vial: 7
Processing Method: Dosage Pharmeuropa ZorbaxInjection #: 1
Injection Volume: 20,00 ul Channel Name: 254 nmProc. Chnl. Descr.:Run Time: 55,0 Minutes PDA 254,0 nm
Sample Set Name: Dosage_231111 SampleWeight 1,00000 Dilution 1,00000
Auto-Scaled Chromatogram
Hamamelis EtOH30%; Injection Volume 20,00; Date Acquired 23/11/2011 19:23:02 CET; Channel Name 254 nm
2,66
33,
133
3,29
93,
828
4,42
64,
483
4,85
85,
025
5,78
35,
905
6,20
66,
412
6,64
6A
cide
gal
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- 7
,150
7,57
87,
768
8,14
3 8,60
1
9,81
2
10,7
1911
,298 12
,456
13,5
20
14,7
03
Ham
amel
itann
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15,
314
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15,
949
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,267
16,5
19
19,1
43
20,9
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22,2
0222
,511
22,7
2123
,215
23,3
8623
,648
24,1
7924
,446
24,7
61 25,0
0825
,268
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,655
25,9
79
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1 -
26,
588
26,9
4827
,346
27,7
7028
,241
28,4
61G
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in 2
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8,75
7G
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in 3
- 2
9,05
629
,339
29,5
3129
,845
30,3
4830
,498
Gal
lota
nnin
4 -
30,
792
31,1
0031
,231
31,6
0631
,988
32,2
8132
,480 32
,657
33,0
7133
,291
34,1
3334
,454
34,8
17
36,8
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2,97
4
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0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
0,24
Minutes
0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 30,00 35,00 40,00 45,00
1
2
3
4
5
Name RT Area Height USP Plate Count USP Tailing USP Resolution Processed Channel Descr.
2,663
3,133
3,299
3,828
4,426
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30203
3017
2138
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3296
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9179
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PDA 254,0 nm
PDA 254,0 nm
PDA 254,0 nm
PDA 254,0 nm
Peak Results
Dosage 254 nmDEVELOPPEMENT ANALYTIQUE
Project Name:
Developpement_AMM\TEST AMES\19 Hamamélis NewReported by User: MFE (MelanieF)
System Name HPLC_15
Report Method: Hamamelis 254 nm 14/12/2011Printed 15:43:50 Europe/Paris
SampleName Hamamelis EtOH60%
S A M P L E I N F O R M A T I O N
23/11/2011 22:11:02 CETDate Acquired:Sample Name: Hamamelis EtOH60%
Dosage Pharmeuropa ZorbaxAcq. Method Set:Sample Type: Unknown 14/12/2011 13:49:19 CETDate Processed:Vial: 8
Processing Method: Dosage Pharmeuropa ZorbaxInjection #: 1
Injection Volume: 20,00 ul Channel Name: 254 nmProc. Chnl. Descr.:Run Time: 55,0 Minutes PDA 254,0 nm
Sample Set Name: Dosage_231111 SampleWeight 1,00000 Dilution 1,00000
Auto-Scaled Chromatogram
Hamamelis EtOH60%; Injection Volume 20,00; Date Acquired 23/11/2011 22:11:02 CET; Channel Name 254 nm
2,67
53,
129
3,25
03,
824
4,55
9
5,92
96,
455
6,69
3A
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- 7
,179
7,61
17,
797
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7 8,62
2
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9
10,7
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,309 12
,497
13,5
7614
,138
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,514
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1622
,420
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3723
,132
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,563
24,0
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,337
24,6
5324
,896
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54F
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25,5
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4727
,244
27,6
5628
,131
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,195
29,3
8829
,688
30,1
9830
,331
Gal
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600
30,8
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,014
31,4
2131
,789
32,1
1432
,322
32,4
8932
,907
33,1
29 33,9
4434
,246
34,6
04
36,7
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36,
846
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2,85
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0,00
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
0,24
Minutes
0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 30,00 35,00 40,00 45,00
1
2
3
4
5
Name RT Area Height USP Plate Count USP Tailing USP Resolution Processed Channel Descr.
2,675
3,129
3,250
3,824
4,559
16525
10351
17952
18068
42213
2680
1853
1865
2948
3175
4089
10285
2186
1,13
0,88 2,73
PDA 254,0 nm
PDA 254,0 nm
PDA 254,0 nm
PDA 254,0 nm
PDA 254,0 nm
Peak Results
Dosage 254 nmDEVELOPPEMENT ANALYTIQUE
Project Name:
Developpement_AMM\TEST AMES\19 Hamamélis NewReported by User: MFE (MelanieF)
System Name HPLC_15
Report Method: Hamamelis 254 nm 14/12/2011Printed 15:43:06 Europe/Paris
SampleName Hamamelis EtOH90%
S A M P L E I N F O R M A T I O N
23/11/2011 23:07:01 CETDate Acquired:Sample Name: Hamamelis EtOH90%
Dosage Pharmeuropa ZorbaxAcq. Method Set:Sample Type: Unknown 14/12/2011 13:55:37 CETDate Processed:Vial: 9
Processing Method: Dosage Pharmeuropa ZorbaxInjection #: 1
Injection Volume: 20,00 ul Channel Name: 254 nmProc. Chnl. Descr.:Run Time: 55,0 Minutes PDA 254,0 nm
Sample Set Name: Dosage_231111 SampleWeight 1,00000 Dilution 1,00000
Auto-Scaled Chromatogram
Hamamelis EtOH90%; Injection Volume 20,00; Date Acquired 23/11/2011 23:07:01 CET; Channel Name 254 nm
3,1
51
3,8
54
4,6
14
5,9
72
6,5
07
6,7
46
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224
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79 7
,866
8,2
54 8,7
21
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51
10,
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11,
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629
13,
776
14,
345
14,
912
Ham
amel
itann
in -
15,
527
Cat
éch
ine
- 16
,108
aci
de c
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roge
niq
ue -
16,
407
16,
639
19,
058
20,
528 20,
729
22,
042
22,
348
22,
585
23,
048
23,
254
23,
515
24,
042
24,
306
24,
620
24,
860
25,
109
Fla
von
oid
e -
25,4
85
25,
802
Gallo
tanni
n 1
- 2
6,4
08
26,
776
27,
182
27,
587
28,
078
28,
295
Gallo
tanni
n 2
- 2
8,5
80
Gallo
tanni
n 3
- 2
8,8
79
29,
169
29,
365
29,
688
30,
198
30,
331
Gallo
tanni
n 4
- 3
0,6
06
30,
913
31,
048
31,
433
31,
821
32,
328
32,
492
32,
911
33,
123
33,
928
34,
232
34,
586
36,
714 Q
uerc
eto
l -
36,8
09
Kae
mpfe
rol -
42,
780
AU
0,00
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
0,24
Minutes
0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 30,00 35,00 40,00 45,00
1
2
3
4
5
Name RT Area Height USP Plate Count USP Tailing USP Resolution Processed Channel Descr.
3,151
3,854
4,614
5,972
6,507
10966
12875
20499
149526
15524
1985
1954
1739
20808
2059
7259
8191
3371
16079
16321
4,31
3,03
5,30
2,61
PDA 254,0 nm
PDA 254,0 nm
PDA 254,0 nm
PDA 254,0 nm
PDA 254,0 nm
Peak Results
Extrait eau Extrait éthanol 30%
Extrait éthanol 60% Extrait éthanol 90%
1- Un extrait éthanolique de coriandre + dans le test d'Ames dans les souches
TA98 et TA100 de Salmonella typhimurium (Mahmoud et al., 1992) mais
aucune activité mutagène des extraits dans l'eau, le méthanol ou l'hexane (Bersani
et al., 1981, Higashimoto et al., 1993).
BOTANICAL SAFETY HANDBOOK 2nd Edition 2013 Edited by Zoë Gardner & Michael McGuffin
2- Activité mutagène d'un extrait aqueux de citronnelle (Rivera et al., 1994) alors
qu’inversement, un extrait à l'éthanol était antimutagène (Vinitketkumnuen et al.,
1994).
3- Un extrait à l'éthanol de clou de girofle présentait une forte activité mutagène
dans la souche TA100 et une faible activité dans TA98 (Mahmoud et al., 1992) alors
qu’un extrait aqueux n'a montré aucune activité mutagène (dos Santos et al., 2008).
Nécessité de couvrir totalement le spectre des constituants phytochimiques
Utilisation de solvants polaires et non polaires (compatibles avec les tests) : 2/3 tests d’Ames
Exemple de solvants à polarité étendue : eau, éthanol 50%, éthanol absolu
Conséquence dans l’évaluation de la génotoxicité de
poudres de plantes…
Directive EMEA/HMPC/67644/2009
« Lorsque toute la substance végétale est incorporée directement dans le
médicament à base de plantes (capsules, comprimés), le matériel d'essai pour les tests
de génotoxicité, devrait, en théorie, couvrir l'ensemble du spectre des constituants
phytochimiques, y compris les constituants polaires et non polaires.
Les matériaux d'essai pour les essais de génotoxicité devraient donc inclure des solvants d'extraction qui englobent l'ensemble du profil phytochimique. Le choix des solvants devrait être justifié. »
Présence de substances mutagènes in
vitro non à risque génotoxique pour
l’homme : Quercétine
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
3,5
4,0
4,5
5,0
1 3 10 30 100
Ind
uct
ion
rat
io
Doses µL/plate
TA1537 Apolar extract
TA1537 S9- Assay 2
Quercetin S9-
TA1537 S9+ Assay 2
Quercetin S9+
0,0
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
1 3 10 30 100
Ind
uct
ion
rat
io
Doses µL/plate
S9 +/- Apolar extract
TA1537 S9-
TA1537 S9+
TA98 S9-
TA98 S9+
0,0
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
1 3 10 30 100
Ind
uct
ion
rat
io
Doses µL/plate
S9 +/- Polar extract
TA1537 S9-
TA1537 S9+
TA98 S9-
TA98 S9+
0,0
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
1 3 10 30 100
Ind
uct
ion
rat
io
Doses µL/plate
S9 +/- Mid-range extract
TA1537 S9-
TA1537 S9+
TA98 S9-
TA98 S9+
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
1 3 10 30 100
Ind
uct
ion
rat
io
Doses µL/plate
TA98 Apolar extract
TA98 S9- Assay 2
Quercetin S9-
TA98 S9+ Assay 2
Quercetin S9+
Extrapolation des données existantes (EMEA/HMPC/67644/2009 &
EMEA/HMPC/32116/2005 Rev.1 du 22 Août 2017)
Données sur des extraits produits à partir de la même substance végétale avec des
solvants d'extraction étroitement apparentés (ratio éthanol/eau ≠)
S'il existe des données sur la génotoxicité (positive ou négative) d'une substance
végétale ou d'une préparation à base de plantes, elles peuvent être extrapolées à
d'autres substances végétales ou à des préparations à base de plantes au cas par cas
(comparaison du profil phytochimique)
Justification complète démontrant que les différences ne devraient pas modifier la
génotoxicité.
Les 20 dernières années ont montré que la phytothérapie n'est pas sans risque!
Conclusions
Inconnues concernant la composition d’un grand nb de préparations (milliers de
substances différentes / espèce)
Grande diversité des extraits de plantes (partie, solvant(s), teneur,...)!
Existence de résultats positifs détectés confirme la pertinence de l'évaluation du
potentiel de génotoxicité des plantes médicinales : Importance de l’expertise
Challenge analytique!
Les 20 dernières années ont montré que la phytothérapie n'est pas sans risque!
Conclusions
Nécessité d’évaluer les différents événements génétiques (induction de mutations,
clastogenèse et aneuploïdie) Inclure des tests sur cellules de mammifères?
Inconnues concernant la composition d’un grand nb de préparations (milliers de
substances différentes / espèce)
Quid des substances « anti-mutagènes » qui « masquent » la mutagenèse d’autres!
Grande diversité des extraits de plantes (partie, solvant(s), teneur,...)!
Quid d’1 seul test in vivo (même couplé) qd l’origine de la mutagenèse in vitro est
inconnue!? Validité sans réelle preuve d’exposition ?
Poudres de plantes : Nécessité de couvrir tout le spectre phytochimique (≠ polarité)
Selon EMEA/HMPC/32116/2005 & /107079/2007 : évaluation de génotoxicité par
le seul test Ames...
Fondation
reconnue
d’utilité
publique Congrès SFT – Maison de la RATP – 23/24 novembre 2017 - 55 -
Merci à Sophie Simar
Merci pour votre attention
Passiflora herb (Passiflora incarnata L.)
The Community monograph for Passiflora herb includes a range of
aqueous/ethanolic extracts.
Passiflora herb: Aqueous and ethanolic extracts
Herbal preparations
Herbal substance for tea preparation (100% aqueous)
Liquid extract (1:8 ); extraction solvent 25% ethanol
Liquid extract (1:8) ; extraction solvent 45% ethanol
Liquid extract (1:1) ; extraction solvent 25% ethanol
Liquid extract (1:1) ; extraction solvent 70% ethanol
En ce qui concerne les extraits aqueux et éthanoliques de Passiflore, tester les
extrêmes de la gamme, c'est-à-dire des extraits aqueux équivalents à 30% et 100%,
couvrirait en théorie la gamme des extraits de la monographie communautaire. Il
faudrait envisager d'inclure un solvant de milieu de gamme, par ex. 70% aqueux, en
fonction des profils chromatographiques
L Peyrin-Biroulet et al (2004)
Plantes médicinales Hépatotoxicité
Chardon à glu
Impila
Alcaloïdes pyrrolizidiniques
Germandrée petit-chêne
Jin Bu Huan
Extraits hydro-alcooliques de thé vert
Kava
Atractyloside
(Chardon à glu, Impila)
Conclusions :
Les 15 dernières années ont montré que la phytothérapie n'est pas sans
risque!
Les atteintes toxiques concernent la plupart des organes
(insuffisance rénale liée aux plantes chinoises, atteintes cardiaques
par intoxication à l'aconit ou atteintes pulmonaires liées à certaines
menthes....)
Non, la nature ne fait pas
que du bon...
EGCG
(Extrait HA de thé vert)
Ac aristolochiques
(Aristolochiaa)
Diterpènes
(Germandrée)
Liées à des substances chimiques parfois identifiées
MéthylChavicol
(Tarragon,…) Aloe Emodine
(Aristolochiaa)
Conclusions
Problématique PE… phytooestrogènes
(isoflavone, phytostérols, lignanes!...
Resvératrol, forskoline, Génistéine,....