TEMA: TINCIONES ESPECIALES EN

HISTOQUMICAS

ELABORADO POR:

ALLAUCA VIVIANA COLLAGUAZO GABRIELA DE LA TORRE KATHERINE MARTINEZ NATALY

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO CLINICO E

HISTOPATOLOGICO

Tercer Semestre

INTRODUCCIN

COLORACIN

Es el proceso mediante el cual un cuerpo es tenido por una sustancia colorante, sin perder el color cuando es lavado con el disolvente

utilizado al preparar la solucin colorante.

Tipos de coloraciones:

Ortocromticos : Los tejidos adquieren un color igual a de la solucin colorante empleada.

Metacromticos: una sustancia o un componente se t ie con un color diferente al del colorante empleado.

HEMATOXILINA:

ncleos y regiones acidas.

EOSINA: regione

s bsicas

y colge

no

TINCIONES

ARGENTICAS: Fibras

ret iculares

HEMATOXILINA

FERRICO : Msculos, erit rocitos.

ACIDO PERYODICO DE SCHIFF: molculas ricas en carbohidratos y glucgeno.

COLORANTES DE

WRIGHT Y GIEMSA:

erit rocitos, ncleos de leucocitos. citoplasma

de los monocitos y linfocitos

TRICOMICA DE

MASSON:

ncleos, querat ina, musculo y

citoplasma

COLORANTES Y REACCIN HISTOLGICAS COMUNES

La histoqumica es la aplicacin de las reacciones qumicas y bioqumicas en la tcnica histolgica, con el fin de localizar y determinar de manera cientfica ciertas sustancias o elemento presentes en los tejidos dando un color caracterstico.

La tincin de hematoxilina y eosina (HE) se utiliza rutinariamente en histopatologa para analizar diferentes tejidos del organismo, incluyendo cortes de piel. Sin embargo, esta tcnica no permite apreciar elementos como fibras elsticas o mastocitos, ni diferencia entre pigmento melnico y hemosiderina, de modo que obliga a recurrir a tinciones secundarias o especiales

Durante el procesamiento del tejido previo a la reaccin histoqumica, como la fijacin o la inclusin, hay que evitar daar a la molcula que queremos detectar porque de otra manera resultara en falsos negativos, es decir, no tener tincin cuando en realidad la molcula de inters s est presente en el tejido, aunque deteriorada.

TCNICA DEL PAS (cido Perydico Schiff)

La tcnica de PAS se ut iliza en los preparados para microscopa ptica, permit iendo la t incin de componentes celulares que contienen hidratos de carbono, por ejemplo algunas membranas celulares, clulas caliciformes en la mucosa del intest ino, fibras ret iculares que estn rodeados por hidratos de carbono, etc.

La tcnica de Schiff, es una tincin que se usa comnmente en Histoqumica. Utiliza PAS, cido perydico de Schiff, es un colorante incoloro pero que se torna rojo estable al contacto con los grupos aldehdos.

TCNICA DE TINCIN:

Desparafinar e hidratar

(xilol y decrecientes

alcoholes)

cido perydico

0.5 % 5 min.

Lavar en agua .

Reactivo de Schiff 15- 30

min.

Aclarar en 3 baos de

agua sulfurosa 2 min. Cada

uno.

Lavar en agua

corriente.

Deshidratar, aclarar y montaje.

TINCIN DE GRAM MODIFICADA BROWN- BRENN

Es un tipo de tincin que se utiliza para demostrar gram-

negativas y gram-positivos en el tejido

Cristal Violeta al 1%

Lugol Acetona Fucsina

bsica al 0,25 cido Pcrico

Acetona

TCNICA:

Desparafinar e hidratar al agua dest ilada

Tincin de Cristal Violeta por 1 minuto

Lavar en agua corriente

Aplicar lugol por 1 minuto

Lavar agua corriente

Decolorar con alcohol-Acetona (saca el

exceso del colorante Cristal Violeta)

Lavar en agua corriente

Tincin con Fucsina bsica durante 3

minutos.

Lavar en agua corriente, y secar levemente la

muestra.

Pasar rpidamente por 2 baos de acetona.

Pasar a la mezcla de cido Pcrico solucin

acetona al 0,1% hasta que aparezca un color rosado-amarillo en la

muestra.

Pasar por 2 cambios de acetona

RESULTADOS

Bacterias Gram positivas : azul Bacterias Gram negativas: rojo

Ncleos: rojo Fondo: Amarillo

TINCIN DE ZIEHL-NEELSEN

es una tcnica de t incin diferencial rpida y

econmica, usada para la identificacin de bacterias cido-alcohol resistentes

(BAAR) en cortes de tejido en parafina.

Fucsina fenicada:

0,5 g .fucsina bsica

50 ml agua dest ilada

5 ml etanol absoluto

28,5 g.. cristales de fenol derret idos

Alcohol cido 1%:

Acido Clorhdrico1ml.

Alcohol ABS99ml.

Hematoxilina

Acido peridico al 5 %

Tcnica: Desparafinar e

hidratar los cortes

cido peridico 5%, 10 min

Lavar con agua destilada

Fucsina fenicada, 15 min

Decolorar en alcohol cido al

50%

Lavar con agua destilada

Hematoxilina, 10 min

Carbonato de litio, azulamiento

Deshidratar, aclarar y montar preparaciones

Resultados BAAR: rojo.

Ncleos: azul semiamarillo.

TCNICA DE GRIMELIUS

Se utilizan principalmente para la identificacin de las clulas neuroendocrinas y

sus tumores, tambin para la demostracin de fibras de

reticulina, melanina y calcio.

Impregnacin:

Solucin de Plata 1%: Nitrato de Plata al 1%...4ml.

Buffer de Acetato (0.2mol)10ml. Agua Bidestilada86ml.

Reduccin:

Solucin de Hidroquinona. Hidroquinona1gr.

Sulfato de Sodio5gr.

Agua Bidestilada100ml.

Tcnica: 1.-Desparafinar

hidratar.

2.-Solucin de Plata 58

a 60C3Hrs.

3.-Lavar en Agua.

4.-Solucin de Hidroquinona

40 a 45C1:30Hrs.

5.-Lavar en Agua.

6.-Deshidratar, Aclarar y Montar.

Resultados:

Grnulos Argirofilos (formaciones de proteina ) pardo,

Dorado o Negros..

TECNICA DEL ROJO CONGO

Es considerada como la tcnica ms fiable y prctica

para detectar amiloide y tambin se usa para teir

preparaciones microscpicas, especialmente en t inciones

para el citoplasma y los erit rocitos

Resultados:

El amiloide se t ie en rojo claro, y brilla con luz

polarizada.

Tcnica: 1.- Cortes por

congelacin 10 micras.

2.- Colocarlos en solucin de Rojo congo al 1% en agua,- 30 min.

3.- Poner en carbonato de Litio (a saturacin en agua)-

--15 seg.

4.- Lavar en alcohol de 80, hasta que no

arrastre mas colorante.

5.- Lavar en agua corriente 15 min.

6.- Teir con hematoxilina.

7.- Lavar en agua, deshidratar, aclarar

y montar.

TINCIN DE GOMORI

Tinciones de

retculo

Demuestran tanto las fibras

reticulares como material de la

membrana basal.

Consisten en fibras muy finas de colgeno tipo

III, muy extendidas en el tejido conectivo.

Las membranas basales se compone principalmente de colgeno tipo IV y

laminina.

Distinguir neoplasias epiteliales de no

epiteliales, diversas neoplasias

mesenquimales de otras, y carcinoma in

situ.

Se trata de una tcnica de impregnacin argntica que utiliza como base fuerte el

hidrxido potsico y como agente reductor el formol.

1- Fijacin: formalina al 10%.

2- Cortes: en parafina, congelacin o en celoidina. 2 - 4

TCNICA

XILENO: 2x10min ALCOHOL AL 100%: 2x5min

ALCOHOL AL 96%: 2x5min

LAVAR CON AGUA CORRIENTE

PERMANGANATO POTASICO AL 1%:

2min

AGUA DESTILADA: 5min

ACIDO OXALICO AL 5%: Hasta que

se decolore

LAVAR CON AGUA DESTILADA

ALUMBRE FERRICO AMONIO AL 2%:

2min

AGUA DESTILADA: 5min

SOLUCION DE PLATA

AMONIACAL: 3min

LAVAR CON AGUA DESTILADA

RAPIDAMENTE

FORMOL AL 10%: 3min

LAVAR CON AGUA

DESTILADA

CLORURO DE ORO AL 1/500:

10min

LAVAR CON AGUA

DESTILADA

HIPOSULFITO SODICO AL

5%: 1min

LAVAR CON AGUA

DESTILADA

PASAR POR AGUA

CORRIENTE

ALCOHOL AL 96%: 2x5min

ALCOHOL AL 100%: 2x5min

XILENO Y MONTAR

RESULTADOS:

Fibras reticulares

Negro

Fibras colgenas

Amarillento

Tincin tricrmica de Masson

Se utilizan en combinacin con varios colorantes aninicos

NCLEO CITOPLASMA

Evaluacin del tipo y cantidad

de material extracelular

COLGENO

COMPONENTES:

Etanol de 50, 70, 80, 90,

96 y 100

Xileno

Hematoxilina frrica

de Weigert

Fucsina escarlata

Verde luz

Acido fosfomolidb

ico al 5%

Agua destilada

Agua corriente

TCNICA

2x10 min en xileno para desparafinar

2x10 min en etanol

100

10 min en etanol

96

10 min en etanol

80

10 min en etanol

50

5 min en agua

destilada

5 min en Hematoxilina

frrica de Weigert (10 min si el

colorante lleva ms de 5 das hecho)

5 min en agua corriente para diferenciacin.

3 min lavado en agua destilada

5 min en fucsina-

escarlata.

2 min lavado en

agua destilada

15 min en cido

fosfomolbdico al 5% en

agua destilada.

10 min en verde luz al 2 % (puede ser sustituido por

azul de anilina).

Unos segundos en

agua destilada.

3 min de diferenciacin

con cido actico al 1% en agua destilada

Deshidratado rpido, unos segundos, en

etanol de graduacin

creciente: 80, 96 y 100

2x10 min en xileno

Montaje

RESULTADOS: Colgeno: verde

azulado.

Msculo: rojo,

marrn.

Citoplasma: rosado.

Ncleos: negro.

Citoplasma: rosado.

TINCIONES PARA MUCINA

La mucina es el trmino tradicional utilizado para un gran grupo de macromolculas que contienen un grupo

acido, que se divide en dos categoras principales:

Glicoprotenas: unido a la membrana o secretada

compuestos por :

Un grupo de protenas

Un cido silico que contiene

restos de carbohidratos

Glicosaminoglicanos del estroma que

contienen:

Acido hialurnico que

puede ser tambin

sulfatado.

AZUL DE ALCIANO

AZUL DE ALCIANO

El Alcian Blue es un colorante soluble en agua que deriva de su color azul del

cobre en las molculas.

Es un tinte bsico y por lo tanto tiene

una afinidad por los tejidos que

contienen grupos aninicos tales como mucinas con cido y otros carbohidratos

cidos.

Hay diferentes tipos de PH que colorean

selectivamente diferentes tipos de mucinas cidas. El Alcian Blue puede ser combinado con la tcnica de PAS para demostracin

de mucinas neutrales y cidas.

PREPARACIN

AZUL DE ALCIANO

Agua Destilada :

97 CC

cido Actico

Glaciar: 3 CC

Alcian Blue: 1g

PROCEDMIENTO:

Fijacin en alcohol 96

lavado en agua corriente

Pasar por cido al 1% durante 5

Min

Solucin de Alcian Blue

(filtrado) durante 30 min

Lavado en agua corriente

Teir con Hematoxilina durante 1 min

Lavado en agua corriente durante

1 min

Deshidratar (Alcohol 96 , 100 , 100/

Aclaramiento : Xilol1

Aclaramiento : Xilol2

Montar con blsamo.

NCLEOS

AZULES

MUCINA

S

TINCIN DE GIEMSA

Tcnica muy til para la demostracin de

varios elementos hematolinfoides (incluyendo mastocitos) y microorganismos.

El colorante de Giemsa tambin da excelentes resultados para la

tincin rutinaria de frotes sanguneos.

Debe fijarse primero la muestra con

metanol absoluto por un tiempo mnimo de

tres minutos

Tiempo de coloracin podr ser

de 10 o 20 minutos

El colorante en solucin nunca

se utiliza de manera directa

solucin amortiguadora en una proporcin de

1:10 o 1:20

PREPARACIN

GIEMSA

Metanol: 250 ml

Glicerina caliente : 2.50 ml

Polvo de Giemsa azur

E.M: 3.8 gr

PROCEDMIENTO: (extendidos

citolgicos) Llevar al agua los cortes

histolgicos

Coloca el reactivo de giemsa azur por 4-5

minutos dependiendo de la caducidad del

reactivo.

Lavar en agua corriente Secar al ambiente

Colocar en xilol por unos segundos

Montar

Ncleos

color

violeta

Citoplas

ma color

azul

TINCIN PARA FIBRAS

ELSTICAS Las tcnicas tipo Weiger son bastantes especficas para la

elastina, y son consideradas por muchos como el mtodo de eleccin para la demostracin de estas fibras

extracelulares.

Sim embargo la tincin de Gieson Verthoeff-van (VVG) es la ms

popular porque es rpida

Ambas tcnicas se suelen establecer

en el contexto tricrmico.

Ncleos celulares se tien de marrn

a negro

Se esbozan las fibras elsticas con un fuerte color negro.

El colgeno de rosa a rojo y el musculo y el citoplasma de

amarilla.

PREPARACIN

Hematoxilina alcohlica

Hematoxilina ------------------------------------10 gr.

Alcohol96 -------------------------------------100 ml

Cloruro frrico al 10 %:

Cloruro frrico ----------------------------------10 gr.

Agua destilada ----------------------------------100 ml

Yoduro potsico al 10

%:

Yoduro potsico --------------------------------10 gr.

Agua destilada ----------------------------------100 ml

Solucin de Picrofucsina

Fucsina cida al 1 % ----------------------------1.3 ml

-cido pcrico a saturacin ---------------------- 9.7 ml

PROCEDMIENTO

Hidratar

Hematoxilina de Verhieff por

30 minutos

Lavar Cloruro

frrico al 1% una pasada

Picrofucsina una pasada

Deshidratar con alcohol al

50%

Aclarar con xilol

Montar

Colgeno Citoplasma