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Extraccin y anlisis de ARN

Gentica Molecular - 2016 Universidad de Morn

Porcentajes de ARN en una clula

ARN mensajero: 1-5% ARN ribosomal: 80% ARN transferencia: 10-15%

La sntesis de ARNm es una expresin dinmica delgenoma de un organismo y es esencial para el flujo deinformacin en una clula

Para que investigar un ARNm?

- Tamao: para examinar presencia de intrones y splicingdiferencial

- Secuencia: predecir el producto proteico- Abundancia: medicin de niveles de expresin- Dinmica de la expresin: en el tiempo, momento de

desarrollo, tipo de tejido

Aislamiento de ARN Aislamiento de ARN

- ARN total a partir de una muestra iol!ica"

1 - con solventes or!#nicos

2 - cromato!ra$%a de a$inidad &'it(

- ARN mensa)ero" a partir de una muestra iol!ica o

de ARN total

* - cromato!ra$%a de a$inidad &'it(

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1 +,traccin con solventesenta)as"

- ers#til" compatile con una !ran variedad de

tipos de muestras

- +scalale. se pueden procesar peueos o

!randes volmenes de muestra

- ecnolo!%a estalecida

- +conmico

3esventa)as"- Uso de solventes or!#nicos &ries!o de salud

descarte complicado(

- No adecuado para muestras mltiples

- 5ontaminacin de ARN con A3N !enmico

2 +,traccin de ARN total con 'it

enta)as "

- +limina el uso de solventes or!anicos

- 5ompatile con di$erentes tipos de muestras

- +l tratamiento con A3Nasa elimina la

contaminacin con A3N !enmico

- Alta purea e inte!ridad

- 7encillo 8 r#pido pueden procesarse muc9as

muestras en paralelo

3esventa)as"

- M#s caro ue e,traccin con solventes

2 +,traccin de ARN total con 'it * Aislamiento de ARNm

- :as molculas de ARNm tienen una colita poliA en su

e,tremo *

- 7e pueden usar oli!onucleotidos oli!o &d( unidos a una

matri" el ARNm 9iridia con el oli!o &d( 8 ueda retenido

- 7e elu8e el ARNm de la matri usando a!ua o un u$$er dea)a $uera inica

- Aislamiento de ARNm a partir de una muestra de ARN total"

permite el procesamiento de muestras ma8ores puede

9aer ma8or rendimiento pero lleva mas tiempo

- Aislamiento de ARNm a partir de una muestra iol!ica" mas

r#pido pero 9a8 una limitacin del tamao de muestra

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*

* Aislamiento de ARNm

Estimacin de la calidad del ARN en

espectrofotmetro

7e mide la asorancia de la muestra de ARN en un

espectro$otometro a 260 2;0 8 2*0 nm

- 260 nm" #cidos nucleicos &A3N ARN nucleotidos(

- 2;0 nm" prote%nas

- 2*0 nm" !uanidina

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Nort9ern lot &continuacin( Nort9ern lot &continuacin(

Tcnicas de anlisis de ARN

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@

+)emplo

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Microarre!los Microarre!los

Microarre!los Microarre!los

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- :os datos de microarre!los se veri$ican muc9as veces con R-