サスペンションアレイシステムを用いた多項目同時測定システムBio-Plexの紹介

バイオ・ラッド ラボラトリーズ株式会社

リサーチソリューションセンター

血清中のサイトカインの測定（従来法）

17種類のサイトカイン濃度を測定する場合・・・

IL-1αIL-1βIL-2IL-3IL-4IL-5IL-6IL-10IL-12p40IL-12p70IL-17 GM-CSFTNF-αIFN-γRantesKCMIP-1α

マウス１マウス２マウス３マウス４マウス５マウス６マウス７マウス８マウス９マウス１０マウス１１マウス１２マウス１３マウス１４マウス１５マウス１６マウス１７

17種類のELISA kit

サイトカインの多項目同時測定（Bio-Plex)

Bio-Plexでは・・・

12.5μlのサンプルから

IL-1αIL-1βIL-2IL-3IL-4IL-5IL-6IL-10IL-12p40IL-12p70IL-17 GM-CSFTNF-αIFN-γRantesKCMIP-1α：

多多項目のデータが項目のデータが１度に･･･！１度に･･･！

12.512.5μμllでで全項目の全項目の測定測定がが可能です可能です

採血が被検者・被検動物の負担になりません

Bio-Plexとは？

ビーズサスペンションアレイテクノロジー

ビーズを用いる事によりマイクロプレート1wellで多項目の生体分子を同時に定量・検出できるテクノロジー

特長

最大100種類の生体分子を定量・検出可能

必要な検体が微量

（例： 血清の場合1ウェル当たり12.5μl）

感度が良く、ダイナミックレンジが広い

労力、コストの削減

Bio-Plex200システム

サスペンションビーズアレイテクノロジー

サスペンションビーズアレイテクノロジー

サスペンションビーズアレイテクノロジー

Bio-Plex200システム

システム構成

• アレイリーダー

• マイクロプレートプラットフォーム

• Bio-Plex Manager ソフトウェア(インストール済み）

• HTFシステム（ フルシステムの場合）

• コンピューター and モニター

その他

• キャリブレーション・バリデーションキット

• MCVプレート

• シース液

アレイリーダー

HTFシステム

マイクロプレートプラットフォーム

コンピューターand モニター

Bio-Plexサイトカインアッセイキット

第二世代マグネティックビーズ採用

All In One パッケージ

プレミックス化キット

アッセイに必要なバッファー類がすべて含まれます

混ぜる必要なし

Bio-Plex Pro Cytokine Assay kit

①Premix Standard②Premix Capture Beads③Streptavidin phicoelyslin④Premix Detection Antibody⑤Wash buffer⑥Assay buffer⑦Sample Diluent⑧Standard Diluent⑨Detection Antibody Diluent⑩Filter Plate⑪Plate Seal

サイトカインアッセイのパフォーマンス例

Bio-Plex Proサイトカインアッセイキットの種類

・プレミックスパネル

– 決められた項目がグループ分けされキット化されています。

・カスタムパネル

– 必要な項目を選択して、ご注文いただくことができます。

•Expressパネル–抗体、ビーズはご自身で使用前にミックスしていただきます。–納期はおおよそ3週間です。

•Ｘ－Plexパネル–抗体、ビーズは予めミックスされた状態で出荷されます。–納期はおおよそ4週間です。

Bio-Plexアッセイキットの実験の流れ

Premixスタンダード

Premix抗体つきビーズ

Premix二次抗体必要量希釈

溶解 希釈系列作成

Bio-Plexアッセイキットの実験の流れ

ビーズ付一次抗体を96 ウェルマイクロプレートに分注

サンプル・スタンダードをウェルに加え，30 分間振とう・インキュベーション

ビオチンつき二次抗体をプレートに分注，30分間振とう・インキュベーション

ストレプトアビジン-PE をプレートに分注，10分間振とう・インキュベーション

WashWash

Wash Wash

アッセイバッファーを加えてビーズを再懸濁し、Bio-Plexで測定

バッファー交換のためのツール

Bio-Plex Pro Wash stationAurum Vacuum Manifold

自動でバッファーを交換するプログラム選択してStartボタンを押す3-4分で終了

マグネティックフォーマット

磁石 磁石

バキュームフォーマット

マニュアルでバッファーを交換する

・誰が操作しても同じ結果

・洗浄時のフィルターの乾燥、目詰まり等による誤差の低減

・インキュベーション時の漏れの低減

・操作の軽減

システム操作の流れ～Bio-Plex Manager Software～

•優れた操作性Quiｃｋ guideとBio-Plex独自のMCVプレートで装置の操作・メンテナンスを行います

MCV Plate

装置の操作はQuick guideにそって進むだけです

測定プロトコール作成も簡単に順番通りに設定するだけです

装置のメンテナンスなど（Start up, Shut Down, Caliburation, Validation ）はMCVプレートと専用Kitを使うだけです

Calibration kit Validation kit

Bio-Plex操作流れ

Bio-Plexの電源を入れる/ソフトウェア起動

Start up…………………蒸留水・70%イソプロパノールによる装置の洗浄

Calibration（装置の校正）………………Calibration Kit を使用

Protocol作成

測定

データ解析、データエクスポート

Shut down…………………蒸留水・10% Bleach による装置の洗浄

ソフトウェア終了/Bio-Plexの電源を消す

レーザー出力を安定させるため30分間warm up

Bio-Plexのメンテナンス

Parameter Specification Measured Value Pass/FailDD Median 4774 - 6593 6265 PassCL1 Median 3134 - 4067 3848 PassCL1 CV% 2.00 - 7.00 4.87% Pass

CL2 Median 3190 - 4142 3750 PassCL2 CV% 3.00 - 8.00 5.31% Pass

RP1 Median 14833 - 19251 16206 PassRP1 CV% 4.00 - 10.00 7.97% Pass

Parameter Specification Measured Value Pass/Fail% Carryover < or = 4.0% 2.4% Pass

A. Calculated Values B. Raw ValuesParameter Specification Measured Value Pass/Fail Bead Median FI

Dynamic Range 4.19 - 4.39 4.30 Pass Blank 7Linearity > 0.995 1.000 Pass 1 37Slope 127.3 - 207.0 192.58 Pass 2 215

Accuracy > 90.00% 97.27% Pass 3 2663Threshold < 20 MFI 7 Pass 4 7054

5 197936 28978

A. Classify EfficiencyClassify Bead Specification Measured Value Pass/Fail

Bead A (1) > 80.0% 97.8% Pass Bead B (4) > 80.0% 92.4% Pass Bead C (40) > 80.0% 92.8% Pass Bead D (54) > 80.0% 94.5% Pass Bead E (100) > 80.0% 92.3% PassB. DD Efficiency

Parameter Specification Measured Value Pass/FailDD Efficiency > or = 75.0% 97.3% Pass

Comments:

Reviewed by: Date:

Template: D001227

RP1 Target Value: 15993 RP1 PMT Voltage: 667.16

Result: Passed

Result: Passed

Result: Passed

Result: PassedI.Optics Validation

II. Fluidics Validation

Test Performed by: BIO-PLEX\Administrator Date/Time: 07-Mar-2008, 1:12 PM Expiration Date: 26-Jun-2009

Reader Serial #: LX10001087020 Access Level: Unrestricted

Validation Kit Control #: 310003920 (High)

III. Reporter Validation

IV. Classify Validation

Suspension Array System Validation Report

専用のValidation kitとMCVプレートを用いてメンテナンス

ガイドに沿って操作を行う事で簡単にメンテナンスを行う事ができる

MCV Plate

Validation kit

Bio-Plexを用いて「べにふうき」によるサイトカインの変動を測定

べにふうき（緑茶）：アレルギーを抑制する作用をもつメチル化カテキンを豊富に含んでいる炎症性タンパク質やサイトカイン産生を抑制する作用（in vivo)が見出されている

②炎症性サイトカインを抑制する食品組み合わせの選択

TNF-αの変動結果

Case studyリン酸化アッセイのデータ例(肺がん細胞におけるEGFRシグナルへのGefitinibの効果)

Bulletin 5576

Gefitinib：上皮成長因子受容体(EGFR) のチロシンキナーゼを選択的に阻害する内服抗がん剤。癌の増殖などに関係する特定の分子を狙い撃ちする分子標的治療薬の一種

リン酸化アッセイを行ったEGFR下流の標的タンパク

細胞増殖

EGFR下流の標的タンパクについてBio-Plexにてリン酸化を検出

Case studyリン酸化アッセイのデータ例(肺がん細胞におけるEGFRシグナルへのGefitinibの効果)

Bulletin 5576

Gefitinibが効かない株 Gefitinibが効く株

EGF↓EGFR

EGF↓EGFR

EGF↓EGFR

EGF↓EGFR

EGF↓EGFR

EGF↓EGFR

EGFRのリン酸化

Bio-Plex

Western解析

ＷＴ

GenotypingツールとしてのBio-Plex

GenotypingツールとしてのBio-Plex

Biomarker探索ツールとしてのBio-Plex

Single Maker Analysis

Biomarker探索ツールとしてのBio-Plex

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