シカジーニアス 分子疫学解析potキット(黄色ブドウ球菌用...

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シカジーニアス 分子疫学解析POTキット(黄 色ブドウ球菌用) Cica Geneus Staph POT KIT 特長 ■キット の構成 (120回分) 1.0mL ×1本 1.0mL ×1本 0.5mL ×1本 0.5mL ×1本 1.0mL ×1本 1.0mL ×1本 試薬A 試薬B 試薬C 試薬D 試薬E 試薬F AptaTaq DNA Master ( 5×Conc.) PCRサプリメント プライマーミックスα プライマーミックスβ ポジティブコントロール 6× ローディングバッファー ■操作手順 個別名称 容 量 ® ® *2 * 2 AptaTaq DNA Master (5×Conc.)は、Roche Diagnostics K.Kの商品です。 * 3 シカジーニアス DNA抽出試薬は別売です。 ® メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)は医療関連感染の主な原因菌であり、この蔓延防止には菌体 間の相同性などを解析し、適切な拡散予防策を講じる必要があります。 藤田医科大学の鈴木匡弘先生により開発されたPCR-based ORF Typing(POT法) * 1 は、マルチプ レックスPCRを用いて複数の特定遺伝子を同時に増幅し、アガロース電気泳動で検出された増幅バン ドパターンを解析し、菌体間の相同性を比較する方法です。 * 1 製品のラインナップが増えた為、POTの意味を広義に変更させて頂きました。 黄色ブドウ球菌 を単離する(培養) DNA 抽出  を行い テンプレート DNA を調製 2 種類の マルチプレックス PCR アガロースゲル 電気泳動(別途準備) バンドパターンの 読み取り POT 値の算出 各検体での POT 値の比較解析 *3 1. Suzuki.M et.al. J.Appl.Microbiol. 101(4):938-947 (2006) 2. Suzuki.M et.al. J.Appl.Microbiol. 107(4):1367-1374 (2009) 最適化したマルチプレックスPCRなので、約4時間以内で分子疫学解析が可能です。 パルスフィールドゲル電気泳動(PFGE)のように特殊な装置は不要です。 解析結果を数値化(POT値)することで、菌体間の相同性を比較できます。 参考文献

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Page 1: シカジーニアス 分子疫学解析POTキット(黄色ブドウ球菌用 ...POT値解析用の計算シートは弊社製品ホームページに掲載しております。

シカジーニアス 分子疫学解析POTキット(黄色ブドウ球菌用)

Cica Geneus Staph POT KIT

特長

■キットの構成 (120回分)

1.0mL ×1本

1.0mL ×1本

0.5mL ×1本

0.5mL ×1本

1.0mL ×1本

1.0mL ×1本

試薬A

試薬B

試薬C

試薬D

試薬E

試薬F

AptaTaq DNA Master(5×Conc.)

PCRサプリメント

プライマーミックスα

プライマーミックスβ

ポジティブコントロール

6× ローディングバッファー

■操作手順

個別名称 容 量

®

®

*2

*2 AptaTaq DNA Master(5×Conc.)は、Roche Diagnostics K.Kの商品です。*3 シカジーニアス DNA抽出試薬は別売です。®

メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)は医療関連感染の主な原因菌であり、この蔓延防止には菌体間の相同性などを解析し、適切な拡散予防策を講じる必要があります。藤田医科大学の鈴木匡弘先生により開発されたPCR-based ORF Typing(POT法)*1 は、マルチプレックスPCRを用いて複数の特定遺伝子を同時に増幅し、アガロース電気泳動で検出された増幅バンドパターンを解析し、菌体間の相同性を比較する方法です。

*1 製品のラインナップが増えた為、POTの意味を広義に変更させて頂きました。

黄色ブドウ球菌を単離する(培養)

DNA抽出  を行いテンプレートDNAを調製

2種類のマルチプレックスPCR

アガロースゲル電気泳動(別途準備)

バンドパターンの読み取りPOT値の算出各検体での

POT値の比較解析

*3

1. Suzuki.M et.al. J.Appl.Microbiol. 101(4):938-947 (2006)2. Suzuki.M et.al. J.Appl.Microbiol. 107(4):1367-1374 (2009)

●最適化したマルチプレックスPCRなので、約4時間以内で分子疫学解析が可能です。●パルスフィールドゲル電気泳動(PFGE)のように特殊な装置は不要です。●解析結果を数値化(POT値)することで、菌体間の相同性を比較できます。

参考文献

Page 2: シカジーニアス 分子疫学解析POTキット(黄色ブドウ球菌用 ...POT値解析用の計算シートは弊社製品ホームページに掲載しております。

BGa-01(201908)

①2つのマルチプレックスPCR の電気泳動結果(図1)からバンドパターン(表1)を読み取ります。②この電気泳動のバンドの有無の結果を用いて、POT 値解析用の計算シートに二進法で入力し、3つのカテゴリーの POT 値を算出します。 ⅰ femA が陽性の場合、その検体は黄色ブドウ球菌(S. aureus)であることが確認できます。また、MRSA の場合、POT 1 の値の合計は64 以上になります。 ⅱ 検体間の POT 値を比較することで、菌体間の相同性を客観的に推測出来ます。 ⅲ 集団感染から得られた菌体はPOT 1 ~ 3 の POT 値が全て同一になります。(例:図1の6と7、8と9)

● POT値解析用の計算シートは弊社製品ホームページに掲載しております。

Reactionmixture 1

Reactionmixture 2

POT No.femAPOT 1-1POT 1-2POT 1-3POT 2-1POT 2-2POT 2-3POT 2-4POT 2-5POT 2-6POT 2-7POT 2-8femAPOT 1-4POT 1-5POT 1-6POT 1-7POT 3-1POT 3-2POT 3-3POT 3-4POT 3-5POT 3-6POT 3-7

増幅サイズ(bp)601530449355304271228197161131106816014773883202732431971711401159578

POT 係数

6432161286432168421

84216432168421

ターゲット領域S. aureus positive controlmecAmec gene complex class BSCCmec type Ⅱa specificTn554プロファージプロファージプロファージプロファージプロファージプロファージGenomic IslandS. aureus positive controlcassette chromosome recombinase A2遺伝的バックグラウンド遺伝的バックグラウンドmec gene complex class Aプロファージプロファージプロファージプロファージプロファージプロファージプロファージ

製品番号

08180-96

08180-97

08178-96

製品番号

72046

46510-79

14575-43

49914-40

01089-23

包 装

10 枚

1 L

10 mL

250 gel lanes

100 g

希望価格(円)

2,800

5,000

5,000

13,000

27,000

        製品名

クロモアガーMRSAスクリーン培地

10×TBE緩衝液

臭化エチジウム溶液(2 mg/mL、点眼瓶入)

Quick-Load Purple 50 bp DNA Ladder

アガロースKANTO HC(短フラグメント用)

製品番号

08187-96

08062-96

08362-97

08106-97

包 装

50回分

30回分

30回分

30回分

希望価格(円)

64,000

42,000

42,000

45,000

        製品名

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット(緑膿菌用)

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット(アシネトバクター属菌用)

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット(大腸菌用)

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット(C. ディフィシル用)

包 装

120回分

30回分

120回分

希望価格(円)

83,000

38,000

22,000

保 存

冷凍(-20~-25 ℃)

冷蔵(2 ℃~8 ℃)

            製品名

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット(黄色ブドウ球菌用)

シカジーニアス® DNA抽出試薬

POTキットシリーズ 関連試薬

*希望価格は税抜きです。★上記の他に必要な機材などがございますので、弊社営業所もしくは販売店へお問合せください。●藤田医科大学 鈴木匡弘先生のご厚意により、電気泳動パターンの実例データをご提供いただきました。●本キットは愛知県から特許許諾を得て、製造販売しております。他メーカーの商品に関するライセンスについては、各メーカーにご確認ください。