8/10/2019 Folat n Vitb12

1/3

Folat

Senyawaan folat merupakan salah satu kelompok terpenting dalam grup

vitamin B. Sebagian besar vitamers folat telah diketahui, prosedur yang paling

banyak digunakan dan diterima untuk folat adalah uji mikrobiologi menggunakan

L. rhamnosus dan Enterococcus hirae, dimana respon dari organisme untukkeberadaan campuran folat dalam sampel diukur. Prosedur mikrobiologi termasuk

metode yang cukup baik. amun, selama analisis memakan waktu dan menuntut

dalam pelaksanaan. Selain itu, respon dari organisme dengan bentuk folat yang

berbeda tidak selalu identik. Sejumlah faktor yang diketahui mempengaruhi

afinitas protein yang digunakan untuk mengikat folat, misalnya suhu, waktu

inkubasi dan khususnya p!. Sebagai alternatif, uji EPB" dikembangkan untuk

folat dengan memanfaatkan en#im berlabel folat mengikat protein dari susu sapi.

EP" digunakan untuk penentuan folat dalam berbagai sayuran mentah dan

dimasak. Sampel juga dianalisis dengan uji mikrobiologi dan hasil dari dua tes

dibandingkan.

$esepakatan yang baik diperoleh antara metode dengan hubungan linierselama rentang %.&%% g per '%% g ditemukan. EPB" bisa dilakukan dalam satu

hari kerja dibandingkan dengan ()* hari untuk uji mikrobiologi. Prosedur !PL+

menunjukkan bentuk utama folat hadir dalam spouts Brussels adalah ) metil)

-! /%01, -! /*%01 dan )formil -! /(%01. 2ua dari laboratorium yang

digunakan )metil)-! sebagai calibrant, sedangkan P3" digunakan ketiga.

Studi menyimpulkan bahwa pembatasan utama dari kedua EPB" dan 45" adalah

respon dari bentuk folat individu untuk penggunaan BP. $ontrol yang cermat

dari p! buffer uji yang digunakan dan pilihan kalibrasi uji diperlukan, jika tes ini

harus diterapkan pada pengukuran folat makanan.

6ji EPB" untuk folat menawarkan potensi spesifisitas yang luas dan

kepekaan yang cukup untuk pengukuran folat dalam makanan. Bekerja lebih

lanjut, bagaimanapun, diperlukan untuk pembakuan metodologi, terutama dalam

pemilihan kondisi kalibran dan uji, sebelum hasilnya dapat dipercaya

dibandingkan dengan prosedur lain seperti uji mikrobiologi. $etersediaan hayati

folat dalam bahan pangan secara alami tidak dapat dipastikan, karena sebagian

besar bahan pangan belum seluruhnya ditentukan pada kondisi aktual, termasuk

adanya interaksi dengan bahan pangan. Penyerapan folat berlangsung di dalam

usus dua belas jari dengan bantuan pteroilpoliglutamat hidrolase sebagai

peptidasse yang menghidrolisis rantai poliglutamil menjadi monoglutamil yang

dapat diserap melalui suatu proses transfor termediasi pembawa. 4erata

ketersediaan hayati folat yang terkandung dalam bahan pangan hanya %0 bahkankurang.

aktor)faktor yang dapat menyebabkan ketersediaan hayati tidak sempurna

disebakan oleh pengaruh matriks bahan pangan melalui pengikatan nonkovalen

dari folat, penguraian folat !& yang labil dalam lingkungan asam dalam lambung,

dan pengubahan en#imatik yang tidak sempurna dalam usus terhadap poliglutamil

menjadi monoglutamil yang dapat diserap. Penentuan ketersedian hayati folat dari

makanan manusia memerlukan pengukuran langsung pada manusia, tetapi

pengukuran ini memerlukan biaya yang mahal dan juga kebutuhan folat tiap etnis

sangat beragam sehingga tidak cocok untuk pengukuran rutin. 2efisiensi folat

pada hewan uji sulit tercapai karena terjadi ofcoprophagy, tapi pemakaian

8/10/2019 Folat n Vitb12

2/3

kandang kawat tunggal mampu menurunkan folat yang tersimpan dalam jaringan

secara signifikan.

4espons cadangan folat pada pemberian pakan kembali dengan jumlah

folat tertentu digunakan untuk mengukur pengambilan dan pemanfaatan vitamin

tersebut oleh hewan uji. $isaran respon terlebar diperoleh dari serum folat yangjuga lebih mudah diukur secara radioimunologi. 7aringan padat lebih rumit di uji

karena lebih kompleks dan rentan terhadap ketidakpastian dan membutuhkan

waktu lama. Salah satu kesulitan dalam ujiketersediaan hayati vitamin ialah

penggabungan makanan manusia ke dalam pakan hewan pada jumlah yang tepat

dan cukup tinggi untuk memicu terukurnya respon fisiologis. $adar olat serum

meningkat secara signifikan, bahkan pada penambahan yang relative sedikit

dengan cara pemberian pakan semisintetik.

Vitamin B12

8itamin B '( ialah istilah yang digunakan untuk menggambarkansekelompok senyawa yang dikenal sebagai kobalamin, dimana corrinoids

mengandung kobal. Sianokobalamin sebenarnya artefak dari prosedur ekstraksi

yang digunakan di mana sianida ditambahkan untuk menstabilkan kobalamin.

Bentuk dominan dari kobalamin dalam makanan yang adenosilkobalamin

/koen#im B'( dan hiroksokobalamin1. 9akanan yang diperkaya seperti sereal

sarapan saat ini diperkaya dengan sianokobalamin. 9etode tradisional vitamin B

'( yaitu metode analisis mikrobiologi, biasanya dengan L. leichmannii atau

Ochromonas malhamensis sebagai organisme. amun, O. malhamensis

memerlukan waktu inkubasi lebih lama /*& hari1 dibandingkan dengan L.

leichmanniidan kelemahan.

2alam tes klinis vitamin B '(, metode 45" umumnya digunakanberdasarkan persaingan tambah : +o)berlabel sianokobalamin dan bebas,

vitamin berlabel untuk sejumlah situs yang mengikat yang diberikan oleh B '(

protein yang mengikat. aktor intrinsik dan 4)protein keduanya telah digunakan

sebagai bahan pengikat. 9eskipun, 45" telah menggantikan prosedur

mikrobiologi untuk penentuan vitamin B'( dalam darah, sebuah laporan baru)

baru ini telah menyarankan bahwa penggunaan kit 45" tersedia secara komersial

untuk analisis serum kobalamin dapat memberikan hasil yang keliru tinggi. 5ni

telah dikaitkan dengan non)spesifik mengikat bentuk tidak aktif.

Penerapan kit 45" berbasis untuk penentuan vitamin B'( dalam makanan

telah diperiksa oleh beberapa pekerja dan telah ditemukan untuk menjadi ekstraksi

tergantung. !asil yang lebih tinggi diperoleh dengan 45" yang tampaknya

disebabkan oleh prosedur ekstraksi yang lebih kuat digunakan untuk teknik ini

dibandingkan dengan uji mikrobiologi. Pekerja lain menunjukkan bahwa

kehadiran sianida dalam prosedur ekstraksi memberikan hasil yang sama dengan

uji mikrobiologi.

Baru)baru ini, sebuah EPB" telah dikembangkan untuk vitamin B'( untuk

digunakan dengan sediaan farmasi dan daya tahan tubuh vitamin. Pendekatan ini

telah diadaptasi oleh pekerja lain dalam pengembangan format PB" piring

mikrotitrasi untuk analisis vitamin B '( di makanan yang diperkaya. 4)protein

diberi label dengan en#im horseradish pero;idase /!4P1 dan konjugat en#im)

protein selanjutnya dimurnikan dengan PL+. 2alam makanan yang diperkaya, di

8/10/2019 Folat n Vitb12

3/3

mana bentuk B-( vitamin tunggal dominan, misalnya sianokobalamin, 4)protein

dapat digunakan karena memiliki keuntungan dari biaya yang lebih rendah.

ase amobil uji disiapkan dengan pasangan sianokobalamin ke $L!

menggunakan prosedur bromoacetyl bromida, yaitu melalui kelompok alkohol

primer. !al ini berbeda dengan laporan sebelumnya di mana konjugat disintesismenggunakan kelompok karboksil amida pada cincin corrin. Peningkatan

sensitivitas uji ditemukan dengan menggunakan conjugate bromoasetil

dibandingkan dengan karya sebelumnya yang memungkinkan penggunaan en#im

berlabel 4)protein yang jauh lebih tinggi pengenceran. Pelat mikrotitrasi dilapisi

dan en#im berlabel solusi 4)protein yang ditemukan menjadi stabil selama

beberapa bulan tanpa kehilangan yang cukup aktivitas.

Batas deteksi pengujian ini adalah < pg per baik dan ada tingkat rendah

non ) latar belakang tertentu mengikat. PB" digunakan untuk menentukan jumlah

tambahan sianokobalamin dalam sarapan sereal. $esepakatan yang baik yang

ditemukan antara jumlah dianalisis ditentukan oleh EPB" dan tingkat teoritis.

Ekstrak non ) sampel diperkaya diuji untuk campur tangan dalam uji danmemberikan kurva superimposibel dibandingkan dengan solusi standar. Penelitian

ini juga menunjukkan bahwa waktu inkubasi yang lebih pendek dari sekitar ' jam

pada suhu *: = + memberikan hasil yang sama dengan yang diperoleh pada suhu

& = + dengan inkubasi semalam.

2isimpulkan bahwa EP" untuk sianokobalamin analisis dalam makanan

yang diperkaya memiliki sejumlah keunggulan dibandingkan kedua uji

mikrobiologi dan 45". Lebih mudah untuk melakukan, telah potensi

meningkatkan reproduktifitas dan banyak berkurang kali uji dibandingkan dengan

prosedur mikrobiologi. 9eskipun batas deteksi untuk EPB" cukup untuk

digunakan dengan makanan yang diperkaya, untuk mengukur tingkat alami dalam

makanan, perbaikan lebih lanjut dalam sensitivitas assay menggunakan sistem

deteksi alternatif end)point dan ekstraksi atau prosedur pembersihan mungkin

diperlukan. $etersediaan hayati vitamin B'( telah diuji terutama dalam konteks

analisis defisiensi vitamin B'( terkait dengan malabsorpsi. Belum banyak

diketahui mengenai pengaruh komposisi bahan pangan pada ketersediaan hayati

vitamin B'(.

Pada manusia normal, penyerapan vitamin B'( dari telur kurang dari

setengah jumlah sianokobalamin tanpa tambahan bahan pangan. Pektin dan gom)

gom yang serupa dapat menurunkan ketersediaan hayati vitamin B'( dalam tikus,

tetapi pengaruh ini belum diketahui dengan jelas pada manusia. 5ndividu tertentu

yang mengalami defisiensi vitamin B'( disebabkan oleh pencernaan yang burukdan pelepasan kobalamin yang tak sempurna dari matriks bahan pangan meskipun

mereka menyerap senyawa murni itu secara normal. 8itamin B'( hanya sedikit

yang terkandung dalam tanaman , bentuk gannggang tertentu dapat mengandung

vitamin B'( yang lebih banyak. amun, ganggang tidak direkomendasikan

sebagai sumber vitamin B'( karena ketersediaan hayatinya sangat rendah.