GGénmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikákénmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák

A P elem technikák: enhanszerek A P elem technikák: enhanszerek és gének csapdázásaés gének csapdázása

A mutátor elem felépítése meghatározza A mutátor elem felépítése meghatározza a P elem mutagenezis jellegéta P elem mutagenezis jellegét

enhanszer csapdázásenhanszer csapdázás – génexpresszió, mutagenezis, klónozás

GéncsapdázásGéncsapdázás – génexpresszió, mutagenezis, klónozás

irányított génexpresszióirányított génexpresszió – génfunkció vizsgálata, kölcsönhatások

epitóp jelölésepitóp jelölés – géntermékek követése és tisztítása, in vivo analízis

irányított génszupresszióirányított génszupresszió – génfunkció vizsgálata, null fenotípus

helyspecifikus rekombinációhelyspecifikus rekombináció- génfunkció vizsgálata, többfunkciós gének

irányított géncsereirányított géncsere – mutagenezis, gén és protein funkció vizsgálata

A P-lacW enhanszer csapdázó elem A P-lacW enhanszer csapdázó elem felépítésefelépítése

Génexpresszió Génexpresszió követését teszi követését teszi

lehetővélehetővé

Marker gén lehetővé Marker gén lehetővé teszi a P elem teszi a P elem

követésétkövetését

Bakteriális szekvencia Bakteriális szekvencia a DNS klónozást teszi a DNS klónozást teszi

lehetővélehetővé

P{PZ} enhanszer csapdázó elemben a rosy marker gén található a mini-white helyett

P promóterHsp70 terminátor

szekvencia

lacZlacZ mini-whitemini-white ori ampori amp

EE BB

enhanszerenhanszergéngén

A A patched patched gén közelébe inszertálódott P-lacZ gén közelébe inszertálódott P-lacZ elem expressziós mintázata imágókorongokban elem expressziós mintázata imágókorongokban

lábláb szárnyszárny szemszem

A P-Gal4 alapú enhanszer csapdázás A P-Gal4 alapú enhanszer csapdázás mechanizmusamechanizmusa

P promóterHsp70 terminátor

szekvencia

Gal4Gal4 mini-whitemini-white ori ampori amp

EE BB

enhanszerenhanszer

5xUAS

lacZ/gfplacZ/gfp

géngén

detektálásdetektálás

Gal4Gal4

GFP riporter expressziója P-Gal4 enhanszer GFP riporter expressziója P-Gal4 enhanszer csapdázó vonalakbancsapdázó vonalakban

Enhanszer csapdázó inszerciók létrehozásaEnhanszer csapdázó inszerciók létrehozása

P-lacZP-lacZ

P(wP(w++))

P(P(ΔΔ2-3), Sb2-3), Sb

TM6, TbTM6, TbX

P-lacZP-lacZ

P(P(ΔΔ2-3), Sb2-3), Sb

YY

YY

YY

WW--

WW-- WW--

WW--

WW--

YY

WW--

P-lacZP-lacZ P-lacZP-lacZ

vagyvagy

X

„„jump-starter” hímekjump-starter” hímek

mutátor törzsmutátor törzs transzpozáz forrástranszpozáz forrás

lacZ lacZ expressziójának detektálásaexpressziójának detektálása

A enhanszer csapdázás előnyeiA enhanszer csapdázás előnyei

A riporter gén expressziója speciális sejtmarkerként használhatóA riporter gén expressziója speciális sejtmarkerként használható

Követhetők a sejtek az egyedfejlődés soránKövethetők a sejtek az egyedfejlődés során

Egyedi identitást adhat a sejteknek olyan stádiumban, amikor Egyedi identitást adhat a sejteknek olyan stádiumban, amikor morfológiailag még nem különülnek elmorfológiailag még nem különülnek el

Gyakran nem érinti a gén funkcióját, vagy hipomorf allélt Gyakran nem érinti a gén funkcióját, vagy hipomorf allélt eredményezeredményez

Egyszerű mutációs analízist, és gyors klónozást tesz lehetővéEgyszerű mutációs analízist, és gyors klónozást tesz lehetővé

Az enhanszer csapdázás korlátaiAz enhanszer csapdázás korlátai

Sok enhanszer csapdázó inszerció nem okoz mutációtSok enhanszer csapdázó inszerció nem okoz mutációt

Nem mindig egyértelmű, hogy egy enhanszer szekvencia melyik gén Nem mindig egyértelmű, hogy egy enhanszer szekvencia melyik gén expresszióját befolyásoljaexpresszióját befolyásolja

Gyakran az érintett gén távol helyezkedik el az enhanszertőlGyakran az érintett gén távol helyezkedik el az enhanszertől

Egy riporter gén aktivitását egyszerre több enhanszer szekvencia is Egy riporter gén aktivitását egyszerre több enhanszer szekvencia is befolyásolhatja befolyásolhatja

A kettősen jelölő pGT1 géncsapdázó elem A kettősen jelölő pGT1 géncsapdázó elem felépítésefelépítése

Gal4Gal4 mini-whitemini-whitehs-neohs-neo

SASA SDSD

promóterpromóter exon1exon1 exon2exon2 exon3exon3 poli-Apoli-A

poli-Aexon1exon1 Gal4Gal4 poli-Amini-whitemini-white exon2exon2 exon3exon3

5xUAS

lacZ/gfplacZ/gfp detektálásdetektálás

Gal4Gal4

ww++ szemszín szemszín

GGénmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikákénmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák

A P elem technikák: irányított A P elem technikák: irányított génexpressziógénexpresszió

Irányított génexpresszió a Gal4 moduláris Irányított génexpresszió a Gal4 moduláris rendszerben - 1rendszerben - 1

P promóterHsp70 terminátor

szekvencia

Gal4Gal4 mini-whitemini-white ori ampori amp

EE BB

enhanszerenhanszer

5xUAS

vizsgált génvizsgált gén

géngén

Gal4Gal4

Irányított génexpresszió mechanizmusa -2Irányított génexpresszió mechanizmusa -2

géngénmini-whitemini-white ori ampori amp

UASUASpromóterpromóter

Gal4Gal4 mini-whitemini-white ori ampori amp

Enhanszer csapdázás különleges esete: Enhanszer csapdázás különleges esete: sejtek eliminációjasejtek eliminációja

P promóterHsp70 terminátor

szekvencia

Gal4Gal4 mini-whitemini-white ori ampori amp

EE BB

enhanszerenhanszer

5xUAS

gyilkos géngyilkos gén

géngén

Gal4Gal4

ricin, diftéria toxinricin, diftéria toxinreaper, grim, hidreaper, grim, hid

tetanusz toxintetanusz toxin

poli-A

mini-whitemini-white

SASA SDSD

GFPGFP

FRTFRT FRTFRT

FLP rekombinázFLP rekombináz

GFPGFPpromóterpromóter exon1exon1 exon2exon2 exon3exon3 poli-Apoli-A

SASA SDSD

GFPGFP

Az epitóp jelölés mechanizmusaAz epitóp jelölés mechanizmusa

GFP epitóppal jelölt proteinek GFP epitóppal jelölt proteinek kifejeződésekifejeződése