Dizel Egzoz Partiküllerinin (DEP) KOAH’lı Hastalardan Elde Edilen

Bronş Epitel Hücrelerinin Canlılığı ve Apoptozisi Üzerindeki Etkisi *

Hasan Bayram1,2, Bülent Gögebakan2, Öner Dikensoy1, Serdar Öztuzcu3, Serpil Güldal1,2, Erhan Ekinci1.

Gaziantep Üniversitesi Tıp Fakültesi, 1Göğüs Hastalıkları AD, 2 Hücre Kültürü Laboratuarı, 3Moleküler Biyoloji Laboratuarı, Gaziantep.

*Gaziantep Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Yönetim Birimi veTÜBİTAK tarafından mali olarak desteklenmiştir.

Giriş-1• Partiküler hava kirliliği ile respiratuar

morbidite ve mortalite arasında ilişki(Samet JM, et al. N Engl J Med 2000)(Atkinson RW, et al. Am J Respir Crit Care Med 2001)

• Dizel egzoz partikülleri (DEP) primer insan bronş epitel hücrelerinden (BEH) inflamatuar mediyatörlerin salınımını artırmaktadırlar. (Bayram H, et al. Am J Respir Cell Mol Biol 1998).

Giriş-2• DEP, serumsuz ortamda, hücre

siklüsünü uyarmak, apopitozisini baskılamak suretiyle canlı A549 hücre sayısını artırmaktadır.

• DEP bu etkilerini oksidatif stresi artırarak, p21CIP1/WAF1 ekspresyonunu baskılayarak, JNK ve NF-B yolaklarını uyararak yapmaktadır(Bayram H et al, Eur Respir J 2006)

Giriş-3• DEP’nin KOAH’lıların BEH canlılığını

etkileyip etkilemedikleri bilinmemektedir.

Amaç• DEP’nin KOAH’ı olan ve olmayan primer

BEH– Canlılığı– hücre apoptozisi üzerine etkisini araştırmak

• N-acetylcysteine (NAC) ve JNK inhibitorünün (SP600125) DEP’nin yol açtığı değişikliklere etkisini araştırmak

Hastaların Demografik Özellikleri

Hastalar Sayı Yaş Ort(min-maks)

K/E

Sigara içmeyen

8 58.5 (28-75) 5/3

Sigara içen 6 55.5 (44-66) 0/6

KOAH olan 12 63.8 (52-75) 0/12

Hücre Kültürü

Hücre Canlılığı• Hücrelerin 0, 5,10, 50 ve 100g/ml DEP

ile 24, 48 ve 72 saat inkübasyonu• 10 ve 100g/ml DEP

varlığında/yokluğunda NAC (3.3, 10,33mM) ve JNK inh (SP600125; 3.3, 10 ve 33M) ile 48s inkübasyonu

• MTT ile hücre canlılığı

Akım Sitometri• Hücrelerin 100g/ml DEP ile 48s

inkübasyon• Akım sitometri (FACS) yöntemi ile

propidium iodide/Annexin V boyası kullanılarak apoptozis tayini

DEP’nin Sigara İçmeyenlerin Bronş Epitel Hücre Canlılığına Etkisi

NS 0 5 10 50 100

0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

Dizel Egzoz Partikülleri ( g/ml)

Opt

ik D

ansi

te

NS 0 5 10 50 100

0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

Dizel Egzoz Partikülleri ( g/ml)

Opt

ik D

ansi

te

NS 0 5 10 50 100

0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

Dizel Egzoz Partikülleri ( g/ml)

***

Opt

ik D

ansi

te

24.saat24.saat 48.saat 72.saat ***p<0.0001

DEP’nin Sigara İçicilerin Bronş Epitel Hücre Canlılığına Etkisi

NS 0 5 10 50 100

0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

Dizel Egzoz Partikülleri ( g/ml)

Opt

ik D

ansi

te

NS 0 5 10 50 100

0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

Dizel Egzoz Partikülleri ( g/ml)

**

Opt

ik D

ansi

te

NS 0 5 10 50 100

0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

Dizel Egzoz Partikülleri ( g/ml)

***Opt

ik D

ansi

te

24.saat24.saat 48.saat 72.saat

***p<0.0001**p<0.001

DEP’nin KOAH’lı Hastaların Bronş Epitel Hücre Canlılığına Etkisi

NS 0 5 10 50 100

0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

Dizel Egzoz Partikülleri ( g/ml)

*Opt

ik D

ansi

te

NS 0 5 10 50 100

0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

Dizel Egzoz Partikülleri ( g/ml)

**Opt

ik D

ansi

te

NS 0 5 10 50 100

0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

***

Dizel Egzoz Partikülleri ( g/ml)

Opt

ik D

ansi

te

24.saat24.saat 48.saat 72.saat

**p<0.001 ***p<0.0001***p<0.01

N-Asetilsisteinin DEP ile 48s İnkübe Edilen KOAH’lı Hücre Canlılığına Etkisi

NS 0 3.3 10 33 0 3.3 10 33 0 3.3 10 330.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

N-Asetilsistein(mM)

*** *** ***

*

#p<0.01 - 0g/ml DEP;*p<0.01 ve ***p<0.0001 - SF/DEP

#

0g/ml DEP0g/ml DEP10g/ml DEP

100g/ml DEP

Opt

ik D

ansi

te

JNK İnhibitörünün DEP ile 48s İnkübe Edilen KOAH’lı Hücre Canlılığına Etkisi

NS 0DMS 3.3 10 33

DMS 3.3 10 33 0DMS 3.3 10 33

0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

JNK İnhibitörü (SP600125, M)

***

**###

##p<0.001, ###p<0.0001 - 0g/ml DEP;**p<0.001 ve ***p<0.0001 - SF/DEP+DMSO

**

##

0g/ml DEP0g/ml DEP10g/ml DEP

100g/ml DEP

Opt

ik D

ansi

te

DEP ile 48s İnkübasyonun KOAH’lı Hücrelerin Apoptozisine Etkisi

LL(A-/P-) LR(A+/P-) UR(A+/P+) UL(A-/P+)0

20

40

60

80

100SFDEP(100g/ml)

*

*

*p<0.05 - SF

Kadranlar

% H

ücre SF

Özet• DEP (100μg/ml) BEH canlılığını

– sigara içmeyenlerde 72 s,– sigara içenlerde 48 ve 72 s,– KOAH’lılarda 24, 48. ve 72. saatlerde azalttı.

• NAC KOAH’lı BEH canlılığını azalttı• JNKinh serumsuz ortamda ve 10g/ml DEP

varlığında KOAH’lıların hücre canlılığını baskılarken, 100g/ml DEP’nin baskıladığı hücre canlılığını artırdı

• 100g/ml DEP KOAH’lı BEH’nin apoptozisini artırdı.

Sonuç• DEP primer bronş epitel hücrelerin

canlılığını baskılamakta ve apoptozisini artırmaktadır. DEP bu etkilerini JNK gibi hücre içi sinyal ileti yolaklarını etkilemek suretiyle gerçekleştirmektedir.

• KOAH’lıların BEH’leri DEP’nin etkilerine daha hassastır.

Teşekkür

Teşekkür

Sabrınız İçin Teşekkür Ederim