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GERAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE ANTICORPOS MONOCLONAIS PARA DENGUE
E HANTAVÍRUS ‐ DESENVOLVIMENTO DE INSUMOS COM POTENCIAL
BIOTECNOLÓGICO APLICADO A SAÚDE
Giovanny Camacho Antêvere MazzarottoUNIVERSIDADE FEDERAL DO PARANÁINSTITUTO CARLOS CHAGASPROGRAMA DE PÓS‐GRADUAÇÃO EM PROCESSOS BIOTECNOLÓGICOS
Orientadora: Dra. Claudia N. Duarte dos Santos
Co‐orientador: Dr. Juliano Bordignon
Giovanny Camacho Antêvere Mazzarotto
PROCESSOS BIOTECNOLÓGICOS g
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1 Introdução A dengue1. Introdução ‐A dengue
www.opiniaodeipiau.com.br/.../02/dengue2791.jpg
Não existem vacinas ou drogas antivirais específicas contra a dengue.
http://dengue.zip.net/images/dengue_hemo.jpg
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Direto: isolamento viral, imunohistoquímica e as variações de PCR.
1. Introdução ‐ Diagnóstico da dengue
Indireto: formato do tipo ELISA é o mais comumente utilizado.
Inclusão de anticorpos monoclonais (mAbs) visamelhorar a especificidade dos kits de diagnóstico.
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1. Introdução ‐ A hantavirose
http://emedicine.medscape.com/article/830594-media
Duas manifestações clínicas:
Febre hemorrágica com síndrome renal (FHSR)
Síndrome cárdio‐pulmonar por hantavírus (SCPH)
Não existe vacina drogas antivirais ou imuno‐moduladoras para
Taxa de mortalidade de 50%
Não existe vacina, drogas antivirais ou imuno‐moduladoras paratratamento da hantavirose.
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1. Introdução ‐ Diagnóstico da hantaviroseDireto: isolamento viral PCR e imunohistoquímica
Indireto: Ensaio de imunofluorescência indireta (IFI) e ensaios do tipo ELISA
Direto: isolamento viral, PCR e imunohistoquímica
Kit de diagnóstico desenvolvido pelo ICC.
IBMP EIE IgG e IgM HANTEC
Os mAbs anti‐hantavirus têm aplicação em kits de diagnósticos,pesquisa básica e imunoterapia.
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2. Produção de anticorpos monoclonais (mAbs) utilizando a tecnologia de hibridomas
Baço Ag8xp36531:5
tecnologia de hibridomas
PEG
HAT - 12 diasAdaptado de Kohler & Milstein (1975)
HT - 4 dias{Triagem ELISA rNH
Triagem por IFI
Milstein, (1975).
Expansão/Estabilização/Crescimento
Western blot,
dengue
Diluição Limitante Caracterização
Western blot, IFI, IHC
Cinética de produção deIsotipagem
Cinética de produção de mAbs anti rNH
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3. Resultados ‐ IFI dos mAbs anti‐dengue
DENV-1 DENV-2
DENV-3
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DENV-2
3. Resultados ‐Western blot mAbs anti‐dengue
DENV 3Domínio B da prot. de E
DENV 2 DENV-3prM/E
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3. Resultados ‐ Ensaios dos mAbs anti‐nucleoprotéína de Hantavirus
Ag8xp3653572/7A
Crescimento Vs Secreção de mAbsg p
664/10G
305/5A
572/7A651/6G572/7A
350/8C
423/6BF
651/6G
572/7A651/6G
313/11E
475/8A
572/7A
MAZZAROTTO et al., Production and characterization of
475/8A
581/8G
572/7A
572/7A651/6G 651/6G 651/6G
651/6G
MAZZAROTTO et al., Production and characterization ofmonoclonal antibodies against the recombinantnucleoprotein of Araucaria hantavirus. J Virol Methods. 2009Dec;162(1-2):96-100.
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3. Resultados ‐ Imuno‐histoquímica de um caso fatal de hantavirose
mAb 313/11E
BA
FiFim…
DC
Raboni et al., Evidence of circulation of Laguna Negra-like hantavirus in the Central West of Brazil: case report. J Clin Virol. 2009 Jun;45(2):153-6.