góp phần khảo sát thành phần hóa học lá Ô môi cassia grandis l.f họ vang...

7/26/2019 Góp phần khảo sát thành phần Hóa học lá Ô Môi Cassia grandis L.f họ Vang (Caesalpiniaceae)

http://slidepdf.com/reader/full/gop-phan-khao-sat-thanh-phan-hoa-hoc-la-o-moi-cassia-grandis 1/67

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA SƯ PHẠM

------

------

GÓP PHẦN KHẢO SÁT THÀNH PHẦN

HÓA HỌC LÁ Ô MÔI Cassia grandis L.f

HỌ VANG (Caesalpiniaceae)

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP

Ngành: Sư phạm Hóa học

CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN

ThS. Ngô Quốc Luân Võ Nhẫn Hoài

Lớp Sư phạm Hóa học K35

MSSV: 2091966

Cần Thơ, 2013

WW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON

WWW.BOIDUONGHOAHOCQUYNHON.BLOGSPOT.COMóng góp PDF bở i GV. Nguy ễ n Thanh Tú



1. LỜI CẢM ƠN

Trong quá trình thực hiện đề tài luận văn tốt nghiệp, em đã học hỏi được nhiều

kiến thức chuyên môn và kinh nghiệm bổ ích, thiết thực từ quý thầy cô và bạn bè. Với

tấm lòng tri ân sâu sắc, em xin gửi gửi lời cám ơn chân thành đến:

Thầy Ngô Quốc Luân, Bộ môn Sư phạm Hóa học - Khoa Sư Phạm, trường Đại

Học Cần Thơ. Người đã trực tiếp hướng dẫn, tận tình chỉ dạy nhiều kinh nghiệm quý

báu. Thầy đã tạo mọi điều kiện thuận lợi cho em trong quá trình thực hiện đề tài luận

văn.

Quý thầy cô ở Bộ môn Sư phạm Hóa học - Khoa Sư Phạm, trường Đại HọcCần Thơ và phòng Hóa Hợp Chất Thiên Nhiên - Viện Công Nghệ Hóa Học – Thành

phố Hồ Chí Minh, đã truyền đạt cho em kiến thức chuyên môn, hướng dẫn kỹ thuật

trong suốt quá trình nghiên cứu đến lúc hoàn thành luận văn tốt nghiệ p.

Các anh chị, các bạn - những người đã luôn đồng hành cùng em, giúp em thu

hái nguyên liệu, giúp đỡ, chia sẻ và góp ý cho em rất nhiều trong quá trình học tập và

thực hiện đề tài.

Cuối cùng, con xin gửi lời cảm ơn đến những người thân yêu trong gia đình đã

luôn luôn bên cạnh, động viên và giúp đỡ con vượt qua những khó khăn, vất vả trong

suốt thời gian qua.

Cần Thơ, tháng 05 năm 2013

Võ Nhẫn Hoài





2. MỤC LỤC

LỜI CẢM ƠN ...................................................................................................................i

MỤC LỤC ...................................................................................................................... ii

NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN ...................................... v

NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN 1......................................vi

NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN 2.................................... vii

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ....................................................... viii

DANH MỤC CÁC HÌNH, SƠ ĐỒ ................................................................................ix

DANH MỤC CÁC BẢNG .............................................................................................. x

DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC .......................................................................................xi

LỜI MỞ ĐẦU ................................................................................................................. 1

Chương 1: TNG QUAN ............................................................................................... 2

1.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ CÂY Ô MÔI ....................................................................... 3

1.1.1 GIỚI THIỆU CHUNG ................................................................................ 3

1.1.1.1 KHÁI QUÁT[2, 3, 4, 5] ........................................................................... 3

1.1.1.2 MÔ TẢ[2, 3, 4, 5] .................................................................................... 3

1.1.2 NGUỒN GỐC, PHÂN BỐ VÀ SINH THÁI .............................................. 5

1.1.2.1 NGUỒN GỐC, PHÂN BỐ[2, 4] ........................................................... 5

1.1.2.2 SINH THÁI[2, 3, 4, 5] ............................................................................. 5

1.1.3 Y HỌC DÂN GIAN[1, 4]

.............................................................................. 5

1.2 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ CÂY Ô MÔI ............................................................ 6

1.2.1 TÁC DỤNG DƯỢC LÝ[2, 3, 4, 8] .................................................................. 6

1.2.2 HOẠT TÍNH SINH HỌC[18,19,20,22,23,24,25,26] ................................................ 7

1.2.3 THÀNH PHẦN HÓA HỌC ........................................................................ 8

1.2.3.1 CÁC NHÓM HỢP CHẤT CÓ TRONG CÂY Ô MÔI[4, 8, 13, 16, 17, 18] . 8





1.2.3.2 CÁC CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA

HỌC CÂY Ô MÔI[4, 8, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17,18] ....................................................... 8

Chương 2: THC NGHIỆM ......................................................................................... 21

2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ .............................................. 22

2.1.1 NGUYÊN LIỆU ........................................................................................ 22

2.1.1.1 THU HÁI NGUYÊN LIỆU .............................................................. 22

2.1.1.2 XỬ LÝ MẪU NGUYÊN LIỆU ....................................................... 22

2.1.2 HÓA CHẤT .............................................................................................. 22

2.1.3 THIẾT BỊ .................................................................................................. 23

2.2 CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU[6, 7] ................................................... 23

2.2.1 PHƯƠNG PHÁP CHIẾT .......................................................................... 23

2.2.2 PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ ....................................................................... 23

2.2.2.1 PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ BẢN MỎNG ....................................... 24

2.2.2.2 PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ CỘT ..................................................... 24

2.2.3 PHƯƠNG PHÁP PH .............................................................................. 25

2.2.3.1 PH 1H-NMR .................................................................................. 25

2.2.3.2 PH 13C-NMR ................................................................................. 25

2.2.3.3 PH HSQC VÀ HMBC ................................................................... 25

2.3 ĐỊNH TÍNH SƠ BỘ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ Ô MÔI[7] ......... 26

2.3.1 KHẢO SÁT S HIỆN DIỆN CỦA CÁC HỢP CHẤT ALCALOID ...... 26

2.3.2 KHẢO SÁT S HIỆN DIỆN CỦA CÁC HỢP CHẤT COUMARINE .. 27

2.3.3 KHẢO SÁT S HIỆN DIỆN CỦA CÁC HỢP CHẤT FLAVONOID ... 27

2.3.4 KHẢO SÁT S HIỆN DIỆN CỦA CÁC HỢP CHẤT GLYCOSYDE .. 27

2.3.5 KHẢO SÁT S HIỆN DIỆN CỦA CÁC HỢP CHẤT SAPONIN DA

VÀO CHỈ SỐ TẠO BỌT ....................................................................................... 28

2.3.6 KHẢO SÁT S HIỆN DIỆN CỦA CÁC HỢP CHẤT STEROID .......... 29





2.3.7 KHẢO SÁT S HIỆN DIỆN CỦA CÁC HỢP CHẤT TANIN .............. 29

2.3.8 KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH ............................................................................ 30

2.4 CÔ LẬP HỢP CHẤT TỪ CAO THÔ ............................................................ 32

2.4.1 ĐIỀU CHẾ CÁC CAO THÔ .................................................................... 32

2.4.2 CÔ LẬP VÀ TINH CHẾ CÁC HỢP CHẤT TRONG CAO ETHYL

ACETATE .............................................................................................................. 34

2.4.3 CÔ LẬP CÁC HỢP CHẤT TRONG CAO ETHYL ACETATE ............. 34

2.4.4 TINH CHẾ CÁC HỢP CHẤT TRONG CAO ETHYL ACETATE ........ 36

Chương 3: KẾT QUẢ VÀ KIẾN NGHỊ ....................................................................... 42

3.1 KẾT QUẢ CÔ LẬP VÀ TINH CHẾ ............................................................. 43

3.2 KẾT LUẬN .................................................................................................... 44

3.3 KIẾN NGHỊ .................................................................................................... 44

TÀI LIỆU THAM KHẢO ............................................................................................. 45





3. NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN

1. Cán bộ hướng dẫn: ThS. Ngô Quốc Luân

2.

Tên đề tài: Góp phần khảo sát thành phần hóa học lá ô môi Cassia grandis L.f

Họ Vang (Caesalpiniaceae)

3. Sinh viên thực hiện: Võ Nhẫn Hoài MSSV: 2091966

Lớp Sư phạm Hóa học – Khóa 35

4. Nội dung nhận xét:

a. Nhận xét về hình thức luận văn tốt nghiệp:

.....................................................................................................................................

.....................................................................................................................................

b. Nhận xét về nội dung luận văn tốt nghiệp:

Đánh giá nội dung thực hiện đề tài: .............................................................

.....................................................................................................................................

Những vấn đề còn hạn chế: ..........................................................................

.....................................................................................................................................

c. Nhận xét đối với sinh viên tham gia thực hiện đề tài:

.....................................................................................................................................

.....................................................................................................................................

d. Kết luận, đề nghị và điểm:

.....................................................................................................................................

.....................................................................................................................................

Cần Thơ, ngày tháng năm 2013

Cán bộ hướng dẫn

Ngô Quốc Luân





4. NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN 1


2.







.....................................................................................................................................

.....................................................................................................................................



.....................................................................................................................................


.....................................................................................................................................


.....................................................................................................................................

.....................................................................................................................................


.....................................................................................................................................

.....................................................................................................................................


Cán bộ phản biện 1





5. NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN 2


2.







.....................................................................................................................................

.....................................................................................................................................



.....................................................................................................................................


.....................................................................................................................................


.....................................................................................................................................

.....................................................................................................................................


.....................................................................................................................................

.....................................................................................................................................


Cán bộ phản biện 2





6. DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT

1H-NMR : Proton Nuclear Magnetic Resonance (phổ cộng hưởng từ proton)

13C-NMR : Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance (phổ cộng hưởng từ hạt nhânCarbon 13)

BuOH : Buthan-1-ol (CH3CH2CH2CH2OH)

C : M : Chloroform : Methanol

CSB : Chỉ số tạo bọt

đđ : Đậm đặc

DEPT : Distortionless Enhancement by Polarization Transfer

DPPH : α,α-diphenyl-β-picrylhydrazyl

EtOAc : Ethyl acetate(CH3COOC2H5)

EtOH : Ethanol (C2H5OH)

g : gram

H : E : n-Hexan : Ethyl acetate

HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Correelation

HSQC : Heteronuclear Single Quantum Coherence

kg : kilogram

MeOH : Methanol (CH3OH)

m : mét

ml : mililít

mp : melting point (Nhiệt độ nóng chảy)

MPLC : Medium Pressure Liquid Chromatography (Sắc ký cột trung áp)

nm : nano mét

PĐ : Phân đoạn

R f : Retention factor

TLC : Thin Layer Chromatography (sắc ký bản mỏng)





7. DANH MỤC CÁC HÌNH, SƠ ĐỒ

Hình 1.1: Cây ô môi ........................................................................................................ 3

Hình 1.2: Cành và lá ô môi .............................................................................................. 4

Hình 1.3: Hoa ô môi ........................................................................................................ 4

Hình 1.4: Trái ô môi ........................................................................................................ 5

Hình 2.1: Lá ô môi khô và bột lá ô môi......................................................................... 22

Hình 2.2: Ngâm dầm ..................................................................................................... 32

Hình 2.3: Lọc ................................................................................................................. 32

Hình 2.4: Máy cô quay chân không .............................................................................. 32

Hình 2.5: Chiết .............................................................................................................. 32

Hình 2.6: Cột sắc kí sử dụng cho cao EtOAc ................................................................ 34

Hình 2.7: Máy sắc ký cột MPLC sử dụng cho phân đoạn EE ....................................... 37

Hình 2.8: Chất CGLE01 ................................................................................................ 40

Hình 2.9: TLC của chất CGLE01 .................................................................................. 38

Hình 2.10: Máy đo nhiệt độ nóng chảy Electrothemal 9100 (UK) ............................... 39

Hình 2.11: Máy sắc ký cột MPLC sử dụng cho phân đoạn EE5 ................................... 39

Sơ đồ 2.1: Quy trình điều chế các cao thô từ lá ô môi .................................................. 33

Sơ đồ 2.2: Sơ đồ sắc ký cột cổ điển cao EtOAc ............................................................ 35

Sơ đồ 2.3: Sơ đồ sắc ký cột phân đoạn EE .................................................................... 37

Sơ đồ 2.4: Sơ đồ sắc ký cột phân đoạn EE5 .................................................................. 40



http://d/LUAN%20VAN%20TOT%20NGHIEP/Nhan%20Hoai/Hoai%20-%20LVTN%20-%20noi%20dung.docx%23_Toc356921476
















8. DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 1.1: Một số hợ p chất trong cây ô môi đã đượ c cô lậ p ............................................ 8

Bảng 2.1: Độ ẩm lá ô môi .............................................................................................. 26

Bảng 2.2: K ết quả định tính các nhóm hợ p chất trong lá ô môi .................................... 30

Bảng 2.3: K ết quả quá trình sắc ký cột cổ điển cao EtOAc .......................................... 36

Bảng 2.4: K ết quả sắc ký cột MPLC phân đoạn EE ...................................................... 37

Bảng 2.5: K ết quả sắc ký cột MPLC phân đoạn EE5 .................................................... 40

Bảng 3.1: So sánh hợ p chất CGLE01 vớ i Aloe emodin ................................................ 43





9. DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC

Phụ lục 1: Hình ảnh định tính các hợ p chất trong lá ô môi ........................................... 48

Phụ lục 2: Phổ 1H-NMR của Aloe emodin .................................................................... 51

Phụ lục 3: Phổ

13

C-NMR của Aloe emodin ................................................................... 52

Phụ lục 4: Phổ HMBC của Aloe emodin....................................................................... 53

Phụ lục 5: Phổ HSQC của Aloe emodin ........................................................................ 54

Phụ lục 6: Phổ IR của hợ p chất CGLE01 ...................................................................... 55





10. LỜI MỞ ĐẦU

LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI

Thực vật không chỉ là nguồn cung cấp dinh dưỡng cho con ngườ i mà còn là

những phương thuốc chữa bệnh hết sức quý giá. Từ lâu, nhiều cây thuốc quý đã được

nhân dân sử dụng để chữa những bệnh thông thường như: chảy máu, sốt, đau răng, đau

lưng, táo bón, tiêu chảy, côn trùng đốt, rắn cắn, bò cạp cắn... được lưu truyền từ đời

này sang đời khác và trở thành những phương thuốc cổ truyền.

Trong những năm gần đây, việc nghiên cứu và phát triển các dượ c phẩm mớ i từ

các nguồn nguyên liệu thiên nhiên đã trở thành xu hướng chung của thế giới và đangđóng góp mạnh mẽ vào các lĩnh vực điều tr ị chống ung thư, chống nhiễm khuẩn,

chống viêm, điều chỉnh miễn dịch và các bệnh về thần kinh,....

Theo thống kê, trên thế giới có khoảng 250.000 loài thực vật bậc cao, phần lớn

trong số này chưa được khảo sát. Việt Nam nằm trong vùng nhiệt đới gió mùa, được

thiên nhiên ưu đãi, xếp hạng thứ 16 trên thế giới về sự phong phú và đa dạng với hơn

12.000 loài thực vật bậc cao khác nhau. Đây là một lợi thế lớn trong việc nghiên cứu

hóa học các hợp chất thiên nhiên.

Cây ô môi có tên khoa học là Cassia grandis L.f, thuộc họ Vang là loài cây rất

quen thuộc với người dân miền Nam Việt Nam. Ô môi không chỉ là một loại cây độc

đáo của vùng đồng bằng sông Cửu Long mà còn là một vị thuốc bổ. Tuy nhiên, những

công trình nghiên cứu về thành phần hóa học cũng như hoạt tính sinh học của loài cây

này chưa được công bố nhiều trên thế giới cũng như ở Việt Nam.

Với tinh thần đó, đề tài Góp phần khảo sát thành phần hóa học lá ô môi

Cassia grandis L.f Họ Vang (Caesalpiniaceae) được chọn là phù hợp với tình hình

thực tế hiện nay, mong muốn góp một phần nhỏ vào việc nghiên cứu các hợp chất có

nguồn gốc thiên nhiên và sớm đưa cây ô môi thành một vị thuốc có giá trị, nâng cao

hiệu quả kinh tế của loài thực vật quen thuộc này.

MỤC TIÊU ĐỀ TÀI

- Khảo sát định tính sơ bộ thành phần hóa học của lá ô môi.

- Cô lập được một hợp chất tinh khiết trong lá ô môi.





1. Chương 1: TÔNG QUAN





1.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ CÂY Ô MÔI

1.1.1 GIỚ I THIỆU CHUNG

1.1.1.1

KHÁI QUÁT[2, 3, 4, 5]

Tên khoa học: Cassia grandis L.f

Giới: Thực vật (Plantae)

Ngành: Hạt kín (Angiospermatophyta) hay ngành Ngọc lan (Magnoliophyta)

Lớp: Hai lá mầm (Dicotyledoneae) hay lớp Ngọc lan (Magnoliopsida)

Bộ: Đậu (Fabales)

Họ: Đậu (Fabaceae)

Phân họ: Vang (Caesalpiniaceae)

Chi: Cassia

Loài: C.grandis L.f

Tên gọi khác: cây cốt khí, cây quả canh ki na Việt Nam, bò cạp nước, bò cạp đỏ,

mạy khuốm (dân tộc Tày).

1.1.1.2 MÔ TẢ[2, 3, 4, 5]

Cây gỗ trung bình, vỏ thân nhẵn, thân cao 10–20 m, phân cành lớn, mọc ngangthẳng, những cành non có lông màu rỉ sắt, cành già màu nâu đen.

Hình 1.1: Cây ô môi





Lá kép lông chim với 8 - 20 đôi lá phụ dạng thuôn dài 7– 12 cm, rộng 4– 8 cm,

tròn cả hai đầu, có phủ lông mịn, màu xanh bóng, gân rõ.

Hình 1.2: Cành và lá ô môi

Cụm hoa nở rộ khi lá rụng, dạng chùm dài mang hoa lớn, xếp thưa, màu hồng

đậm, thõng xuống. Hoa màu hồng tươi mọc thành chùm ở những kẽ lá đã rụng.

Hình 1.3: Hoa ô môi

Trái hình trụ dẹt dài 40– 60 cm, cong như lưỡi liềm, đường kính 3– 4 cm, có

khoảng 50-60 ô, mỗi ô chứa một hạt dẹt màu vàng cứng, quanh hạt có cơm màu nâu

đen, vị ngọt, mùi hắc. Trái được phân chia thành 50-60 ngăn phân cách nhau bởi

những lớp màng mỏng, màu trắng nhạt, mỗi ngăn chứa một hạt dẹt, hạt bọc bởi cơm

mềm, đặc sền sệt, màu nâu đỏ hay nâu đen, vị ngọt, lúc tươi có vị hơi chua.

Trái ô môi khi chín, hái xuống để càng lâu thì càng tăng vị ngọt. Khi để lâu trái

chín, hạt khô long ra, lúc lắc trái có tiếng kêu. Vỏ trái màu đen, có gân nổi ôm tròn

từng khía.





Hình 1.4: Trái ô môi

1.1.2

NGUỒN GỐC, PHÂN BỐ VÀ SINH THÁI

1.1.2.1 NGUỒN GỐC, PHÂN BỐ[2, 4]

Ô môi có nguồn gốc ở Nam Mỹ. Cây được trồng nhiều ở vùng nhiệt đới như

Campuchia, miền Nam - Việt Nam, Malaysia, đảo Java - Indonesia và Papua Niu

Guinê.

Ở Việt Nam, cây được trồng nhiều nhất ở các tỉnh miền Đông và Tây Nam Bộ, ít

hơn ở miền Trung và rất hiếm ở miền Bắc. Cây ô môi mọc hoang, rải rác khắp đồng

bãi, ven bờ sông, sau này chủ yếu được trồng để lấy bóng mát và lấy trái.

1.1.2.2 SINH THÁI[2, 3, 4, 5]

Cây trồng từ hạt ở các tỉnh phía Nam sau 3 – 4 năm đã bắt đầu có hoa, cho trái.

Cây thụ phấn nhờ gió và côn trùng. Hoa nở rộ vào tháng 2 – 5, lá rụng vào đầu

mùa khô, lá và vỏ ô môi có thể thu hái quanh năm, đặc biệt vào mùa thu, có thể dùng

tươi hay phơi khô.

Mùa trái từ tháng 6 đến tháng 10.Hạt nhiều, tỷ lệ nảy mầm cao (60 – 80%).

1.1.3 Y HỌC DÂN GIAN[1, 4]

Lá, vỏ rễ, cơm và hạt trái ô môi có tác dụng nhuận tràng. Trái ô môi dùng sống

chữa táo bón, liều 4 – 6g có tác dụng nhuận tràng, 10 – 20g gây tẩy.

Chữa trị đau thấp khớp: 50g vỏ ô môi , 100g dây đau xương, 100g cốt toái bổ,

30g nhục quế ngâm trong 1 lít rượu 30 – 400 trong 15 – 20 ngày dùng để chữa trị đau

thấp khớp với liều dùng từ 30 – 60 ml, mỗi ngày hai lần.





Rượu ô môi: được dân gian dùng để chữa đau lưng, đau xương. Khi quả ô môi

đã chín, người ta hái quả về, bỏ vỏ, bỏ hạt, chỉ lấy cơm ngâm rượu. Một trái ô môi có

thể ngâm với 500 ml rượu 25-300 trong 15-20 ngày là dùng được, nhưng càng để lâu

càng tốt. Ngày uống hai lần, mỗi lần một chén nhỏ trước bữa ăn.

Ngoài ra, cơm trái ô môi còn được dùng để làm thuốc bổ, giúp ăn ngon miệng,

giúp kích thích tiêu hóa, nhuận tràng, chữa kiết lỵ, tiêu chảy với liều dùng 5-15g. Lấy

1 kg cơm và hạt ô môi nấu với 1 lít nước rồi nghiền nát, lọc lấy nước và cô cách thủy

đến thành cao.

Trị lở ngứa da, lang ben, hắc lào (lác): Lá ô môi tươi rửa sạch, giã nát vắt lấy

nước, xát vào nơi hắc lào, lang ben, trị lở ngứa da. Cũng có thể chế rượu lá ô môi với

tỷ lệ 1:5 (dùng rượu 25 – 300) để bôi ngoài.

Ngoài ra vỏ cây ô môi được dùng đắp lên nơi rắn cắn và bò cạp cắn.

1.2 CÁC NGHIÊN CỨ U VỀ CÂY Ô MÔI

1.2.1 TÁC DỤNG DƯỢ C LÝ[2, 3, 4, 8]

Tính chất kháng oxi hóa của lá Cassia grandis L.: năm 2009, M.K.Meena,

Kal peshGaur, M.L.Kori, C.S.Sharma, R.K.Nema, A.K.Jain, C.P.Jain nghiên cứu thấyrằng hoạt tính kháng oxi hóa của lá Cassia grandis L. phụ thuộc vào dịch chiết.

Quá trình thực nghiệm với các dịch chiết ether dầu hỏa, chloroform, methanol,

butylated hydroxyl toluene và khả năng cắt đứt gốc tự do hydroxyl, superoxide, nitric

oxide, DPPH.

Nguyên liệu và phương pháp: hòa tan DPPH trong methanol và giữ ở nhiệt độ

250C trong 30 phút. Sau đó, lấy 1,5ml dung dịch này hòa với 1,5ml tác chất Griess

(1% sulphanilamide, 2% phosphoric acid và 0,1% napthyl ethylenediaminedichloride).

Hỗn hợp thu được sau phản ứng được đo cường dộ hấp thụ màu ở bước sóng 546nm.

Kết quả thực nghiệm:

Sự ức chế gốc tự do DPPH: dịch chiết butylated hydroxyl toluene gây ức chế cao

nhất (92,87%), kế đến là dịch chiết methanol (88,75%), làm thực nghiệm ở nồng độ

100 μg/ml.





Sự ức chế gốc tự do nitric oxide: dịch chiết butylated hydroxyl toluene gây ức

chế cao nhất (83,54%), kế đến là dịch chiết methanol (75,72%), làm thực nghiệm ở

nồng độ 100 μg/ml.

Sự ức chế gốc tự do superoxide: dịch chiết butylated hydroxyl toluene gây ức chế

cao nhất (82,87%), kế đến là dịch chiết methanol (76,5%), làm thực nghiệm ở nồng độ

100 μg/ml.

Sự ức chế gốc tự do hydroxyl: dịch chiết butylated hydroxyl toluene gây ức chế

cao nhất (74,56%), kế đến là dịch chiết methanol (69,84%), làm thực nghiệm ở nồng

độ 100 μg/ml.

1.2.2 HOẠT TÍNH SINH HỌC[18,19,20,22,23,24,25,26]

Năm 2003, Harsha Joshi và Virendra P Karpoor nghiên cứu galactomannan hạt

Cassia grandis, chứa khoảng 50% nội nhũ gum. Polysaccharide tinh khiết có đặc điểm

như là một galactomannan tinh khiết với tỉ lệ mannose – galactose là 3,15.

Năm 2004, Juana Tillán Capó và cộng sự nghiên cứu hoạt động của Cassia

grandis trong một thử nghiệm thiếu máu sắt ở chuột, sử dụng bột khô thu được từ trái

ô môi làm chất bổ sung dinh dưỡng. Năm 2005, Emilio Montejo Cuenca và cộng sự đã nghiên cứu Cassia grandis

như một loại thuốc bổ trong dinh dưỡng của bê, chứng minh được hiệu quả của thuốc.

Năm 2007, Singh V và cộng sự đã nghiên cứu loại bỏ chì từ dung dịch nước bằng

cách sử dụng hạt gum Cassia grandis – ghép - poly(methylmethacrylate).

Năm 2008, Joscineia Kelli Clippel và cộng sự nghiên cứu thành phần, phân tích

mức độ polysaccharide lưu trữ thành tế bào và khoáng chất dinh dưỡng trong hạt

giống.

Năm 2009, MA Awal và cộng sự đã nghiên cứu hoạt động kháng khuẩn và độc

tính của chiết xuất từ lá Cassia grandis chống lại các bệnh do vi sinh vật gây ra.

Năm 2010, Sandesh R Lodha và cộng sự nghiên cứu đánh giá hiệu quả của

Cassia grandis làm giảm carbon tetrachloride – nguyên nhân gây ra nhiễm độc gan

cấp tính cho chuột bạnh và kết luận rằng chiết xuất từ Cassia grandis có đặc tính bảo

vệ gan đáng kể. Cũng trong năm này, Sandesh R Lodha và cộng sự đã đánh giá được





tiềm năng điều trị bệnh đái tháo đường đáng kể của Cassia grandis bằng cách sử dụng

một mô hình in-vivo trên chuột bình thường và chuột bị bệnh đái tháo đường gây ra

bởi alloxan.

1.2.3 THÀNH PHẦN HÓA HỌC

1.2.3.1 CÁC NHÓM HỢ P CHẤT CÓ TRONG CÂY Ô MÔI[4, 8, 13, 16, 17, 18]

Trong cơm trái có: đường, chất nhầy, tanin, saponin, calcium oxalate,

anthraglucoside, sáp, tinh dầu và chất nhựa.

Trong hạt có chứa chất béo.

Trong lá có anthraglucoside, flavonoid.

1.2.3.2 CÁC CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨ U VỀ THÀNH PHẦN HÓA

HỌC CÂY Ô MÔI[4, 8, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17,18]

Chi Cassia chứa nhiều nhóm chất anthraquinon, flavonoid, các nghiên cứu về

thành phần hóa học trên chi Cassia đã được thực hiện từ rất lâu, tuy nhiên những

nghiên cứu trên loài Cassia grandis L. thì chưa nhiều.

Các nhà nghiên cứu đã phân lập được một số hợp chất trong cây ô môi và được

thống kê sơ bộ trong bảng 1.1.Bảng 1.1: Một số hợp chất trong cây ô môi đã được cô lập

STT Hợp chất Nguồn tài liệu

1

H3C OH

O

Palmitic acid

palmitic acid

Công thức phân tử: C16H32O2

[16] Meenarani;

Kalidhar SB (1998),

Chemical Examination

of The Stems of Cassia

grandis L. Indian

Journal of

Pharmaceutical

Sciences. 1998 Jan-

Feb, 60(1), p. 59.





Trong rễ cây

2

O

O OHOH

OCH3

1,5-Dihydroxy-8-methoxy-2,3-dimethyl

anthraquinone

1,8-dihydroxy-5-methoxy-2,3-dimethylanthracene-

9,10-dione


[4] Đỗ Huy Bích (chủ

biên) (2003), Cây thuốc

và động vật làm thuốc

ở Việt Nam, tập II, Nhà

xuất bản Khoa Học và

Kỹ Thuật, trang 495 –

496.

Trong vỏ thân

3

O

O

OCH3 OH

OH

OH

H3CO

H3CO CH3

1,3,4-Trihydroxy-6,7,8-trimethoxy-2-methyl

anthraquinone

1,2,4-trihydroxy-5,6,7-trimethoxy-3-

methylanthracene-9,10-dione


[13] R. P. Verma, K.

S. Sinha (1994), An

Anthraquinone from

Cassia grandis Linn,

Natural Product

Letters, Volume 5,

Issue 2, pp.105-110.

4


biên) (2003), Cây thuốc

và động vật làm thuốc



O

O

H3CO

OH

OH

OH

OH

H3CO





1,3,4,5-Tetrahydroxy-6,7-dimethoxy-2 methyl

anthraquinone

1,2,4,5-tetrahydroxy-6,7-dimethoxy-3-




496.

5

O

O

H3CO

OH

OH

OH

H3CO

OH

1,3,5,8-Tetrahydroxy-6,7-dimethoxy-2 methyl

anthraquinone

1,4,5,7-tetrahydroxy-2,3-dimethoxy-6-




biên) (2003), Cây thuốcvà động vật làm thuốc




496.

Trong trái

6

O

OH

OH

HO

O

O

OH

OH

OH

O

O

OH

OH

OHH

OH

Kaempferol-3-O- -D-mannopyranosyl (1->4)-O-

[10] Srivastava YS,

Gupta PC. (1981), A

new flavonol glycoside

from seeds of Cassia

grandis L., Planta

Med. 1981 Apr; 41(4),

pp. 400-402.





-D-glucopyranoside

(2S,3R,4S,5S,6R)-2-((2S,3R,4S,5S,6R)-2-(5,7-

dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-chromen-3-

yloxy)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-

2H-pyran-3-yloxy)-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-

2H-pyran-3,4,5-triol


7

O

O

H3CO

OH

OH

OH

O

H

H OH

H

OH

H

OH

H

O

OH

1,2,4,8-Tetrahydroxy-6-methoxy-3 methyl

anthraquinone-2-O-β-D-glucopyranoside

1,4,5-trihydroxy-7-methoxy-3-methyl-2-

((2S,4R,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-

(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-

yloxy)anthracene-9,10-dione


[12] Ibadur Rahman

Siddiqui, Mithiles

Singh, Dipti Gupta

và Jagdamba (1993),

Anthraquinone-O-β-D-

Glucosides from

Cassia Grandis,

Natural Product

Letters, Volume 2,

Issue 2, 1993, Pages

83-90.

8

O

O

OCH3 OH

OH3CO

H3CO

H

H OH

H

OH

H

OH

H

O

OH

1-hydroxy-6,7,8-trimethoxy anthraquinone-3-O-β-

D-glucopyranoside

[12] Ibadur Rahman

Siddiqui, Mithiles

Singh, Dipti Gupta

và Jagdamba (1993),

Anthraquinone-O-β-D-

Glucosides from

Cassia Grandis,





8-hydroxy-1,2,3-trimethoxy-6-((2S,3S,4R,6R)-3,4,5-

trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-

yloxy)anthracene-9,10-dione


Natural Product

Letters, Volume 2,


83-90.

9

O

O

OCH3

OH3CO

H

H OH

H

OH

H

OH

H

O

OH

CH3

6,8-dimethoxy-2-methyl anthraquinone-3-O-β-D-

glucopyranoside

1,3-dimethoxy-7-methyl-6-((2S,3S,4R,6R)-3,4,5-

trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-

2-yloxy)anthracene-9,10-dione


[12] Ibadur Rahman

Siddiqui, Mithiles

Singh, Dipti Gupta

và Jagdamba (1993),Anthraquinone-O-β-D-

Glucosides from

Cassia Grandis,

Natural Product

Letters, Volume 2,


83-90.

10

O

HHO

OH

OH

OH

O

O

H

HO

OHO

O

O

H

HO

OHOH

Galactomannans

(2S,3R,4R,5S,6R)-2-((2R,3S,4S,5R,6R)-4,5-

dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-methoxytetrahydro-

2H-pyran-3-yloxy)-6-(((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-

trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-

[17] Harsha Joshi và

Virendra P. Kapoor,

Cassia grandis Linn. F.

seed galactomannan:

structural and

crystallographical

studies, Carbohydrate

Research (2003)

Volume: 338, Issue:

18, pp. 1907-1912.





yloxy)methyl)tetrahydro-2H-pyran-3,4,5-triol


11

OHO

OOH

OH

OH

Luteolin

2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy

chromen-4-one


[10] Lê Đỗ Huy (2012),

Luận văn tốt nghiệp

“Góp phần khảo sát

thành phần hóa học trái

ô môi Cassia grandis

L.f Họ Vang

(Caesalpiniaceae)”, Trường đại học Cần

Thơ.

Trong lá

12

O

O OHOH

OH

Aloe emodin

1,8-dihydroxy-3(hydroxy-methyl)-anthraquinone

1,8-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)anthracene-9,10-

dioneCông thức phân tử: C15H10O5

[11] Wandee

Gritsanapan, Bamrung

Tantisewie and

Vichiara Jirawongse

(1984), Chemical

Constituents of Cassia

Timorensis and Cassia

Grandis, J. Sci. Soc.

Thailand, 10(1984), pp. 189-190.

13 N O

OCH3

H3CO

H3CO

Kokusaginine

[14] Valencia E,

Madinaveita A,

Bermejo J, Gonzalez

A, Gupta MP (1995).

Alkaloids from Cassia





(4,6,7-trimethoxyfuroquinoline)

4,6,7-trimethoxyfuro[2,3-b]quinolineCông thức phân tử: C14H13 NO4

grandis. Fitoterapia

1994; Vol 66, No.5;

pp. 476-477.

14

N

N

Fabioline (1,1'-bipiperidine)

1,1'-bipiperidine

Công thức phân tử: C10H20 N2

[14] Valencia E,

Madinaveita A,

Bermejo J, Gonzalez

A, Gupta MP (1995).

Alkaloids from Cassia

grandis. Fitoterapia

1994; Vol 66, No.5;

pp. 476-477.

15

O

OH

OH

OH

OH

HO

Catechin

(2R,3S)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)chroman-3,5,7-triol


[15] A. G. González, J.

Bermejo, E. Valencia,A new C6-C3

compound from Cassia

grandis L., Planta

Medica (1996)

Volume: 62, Issue: 2,

pp: 176-177.

16 O

O

OCH3H3CO

HO

OH

OCH3

OH


Bermejo, E. Valencia,

A new C6-C3


grandis L., Planta

Medica (1996)





Centaureidin

5,7-dihydroxy-2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)-3,6-dimethoxy-4H-chromen-4-one



pp: 176-177.

17

O

O OCH3

CH CH2

Myristicin

6-allyl-4-methoxybenzo[d][1,3]dioxole




A new C6-C3


grandis L., Planta

Medica (1996)


pp: 176-177.

18

CHO

OCH3

O

O

Trans-3-methoxy-4,5-methylene-

dioxycinnamaldehyde

(E)-3-(7-methoxybenzo[d][1,3]dioxol-5-

yl)acrylaldehyde




A new C6-C3


grandis L., Planta

Medica (1996)

Volume: 62, Issue: 2, pp: 176-177.





19

CHO

OH

OH

2,4-Dihydroxybenzaldehyde

2,4-dihydroxybenzaldehyde



Bermejo, E. Valencia,A new C6-C3


grandis L., Planta

Medica (1996)


pp: 176-177.

20

CHO

OCH3H3CO

OCH3

2,4,6-Trimethoxybenzaldehyde

2,4,6-trimethoxybenzaldehyde




A new C6-C3


grandis L., Planta

Medica (1996)


pp: 176-177.

21

CHO

OCH3

OCH3H3CO

3,4,5-Trimethoxybenzaldehyde

3,4,5-trimethoxybenzaldehyde




A new C6-C3

compound from Cassia grandis L., Planta

Medica (1996)


pp: 176-177.





22

H

HO

H H

H

Beta-sitosterol

(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-ethyl-6-methylheptan-2-yl)-10,13-dimethyl-

2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahydro-

1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol

Công thức phân tử: C29H50O



A new C6-C3


grandis L., Planta

Medica (1996)


pp: 176-177.

23 O OHOH

HO OCH3

Emodin-9-anthrone

1,3,8-trihydroxy-6-methoxyanthracen-9(10H)-one


[16] Meenarani;

Kalidhar SB (1998),

Chemical Examination

of The Stems of Cassia

grandis L. Indian

Journal of

Pharmaceutical

Sciences. 1998 Jan-

Feb, 60(1), p. 59.

24

O

OH

OH

OH

HO

[8] Đào Huy Phong

(2011), Luận văn Thạc

sĩ Hóa Học “Nghiên

cứu thành phần hóa học

lá ô môi Cassia grandis





(-)-Epiafzelechin

(2R,3R)-2-(4-hydroxyphenyl)chroman-3,5,7-triolCông thức phân tử: C15H14O5

L.

Họ Vang

(Caesalpiniaceae)”,

Trường Đại học

Cần Thơ.

25

O

OH

OH

OH

HO

OH

(-)-Epicatechin

(2R,3R)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)chroman-3,5,7-triol


[8] Đào Huy Phong





L.

Họ Vang



Cần Thơ.

26

O

O

OH

OH

HO

OH

O

O

OH

OH

HO

Quercitrin

2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-3-

((2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-

methyltetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)-4H-chromen-4-

one

[8] Đào Huy Phong





L.

Họ Vang



Cần Thơ.






Khối lượng phân tử: 448.38

27

O

O

OH

OH

HO

OH

OO

OH

OH

OH

HO

Isoquercitrin

2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-3-

((2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-

(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)-4H-

chromen-4-oneCông thức phân tử: C21H20O12

[8] Đào Huy Phong





L.

Họ Vang



Cần Thơ.

28

OOH

HO

H3CO

OH

OH

2,3,2 -Trihydroxy-6 -methoxy-4 -hydroxymethyl

benzophenone

(2,3-dihydroxyphenyl)(2-hydroxy-4-

(hydroxymethyl)-6-methoxyphenyl)methanone


[8] Đào Huy Phong




lá ô môi Cassia grandisL.

Họ Vang



Cần Thơ.





29

OHO

OH

O

O

OH

O

OH

OH

OH

Afzelin

5,7-Dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-3-

[2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-

yl]oxychromen-4-one


[9] Nguyễn Thị Khánh

Chi (2012), Khóa luận

tốt nghiệp cử nhân Hóa

Học “Khảo sát thành

phần hóa học của cao

ethyl acetate lá ô môi

Cassia grandis L.f

Họ Vang


Trường đại học SP

thành phố Hồ Chí

Minh.





2. Chương 2: THC NGHIỆM





2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ

2.1.1 NGUYÊN LIỆU

2.1.1.1

THU HÁI NGUYÊN LIỆU

Mẫu lá ô môi được thu hái ở huyện Chợ Gạo, tỉnh Tiền Giang.

Thời gian thu hái: tháng 11/2012.

2.1.1.2 XỬ LÝ MẪU NGUYÊN LIỆU

Mẫu nguyên liệu được rửa sạch, loại bỏ phần sâu bệnh, sau đó sấy lại ở nhiệt độ

50 - 600C. Lá ô môi sau khi sấy khô được vò nát thành bột nhuyễn.

Đây là nguyên liệu dùng trong đề tài.

Hình 2.1: Lá ô môi khô và bột lá ô môi

2.1.2 HÓA CHẤT

- Ethanol 960

- n-Hexan

- Ethyl acetate

- Methanol

- Chloroform

- Na2SO4 khan

- H2SO4 đđ

- Các thuốc thử định tính

- Silica gel (230-400 mesh)





2.1.3 THIẾT BỊ

-Becher các loại -Bình ngâm mẫu -Bình sắc ký

-Erlen các loại -Giá ống nghiệm -Bình phun xịt thuốc thử

-Ống đong các loại -Pipette Pasteur -Máy sấy, tủ sấy, tủ hút

-Lọ thủy tinh 50ml -Pipette nhựa -Máy cô quay chân không

-Đũa thủy tinh -Giấy lọc, túi vải -Bình cô quay các loại

-Phễu thủy tinh - Nồi đun cách thủy -Cân phân tích GR-200

-Vi quản -Bếp điện -Cân kỹ thuật GM 612

-Ống nghiệm -Lưới amiăng -Cột sắc ký các loại

-Bình long -Muỗng nhựa, inox -Bản silica gel 60 F254

2.2

CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨ U[6, 7]

2.2.1

PHƯƠNG PHÁP CHIẾT

Chiết là phương pháp dùng dung môi để tách lấy một chất hay một nhóm cácchất từ hỗn hợp cần nghiên cứu. Trong đề tài này sử dụng phương pháp chiết ngâm

dầm. Kỹ thuật này không đòi hỏi thiết bị phức tạp, có thể dễ dàng thao tác với một

lượng lớn mẫu lá cây.

Ngâm nguyên liệu trong một bình chứa thủy tinh hoặc bằng thép không gỉ, có

nắp đậy. Rót dung môi vào bình cho đến ngập bề mặt của nguyên liệu. Giữ yên ở nhiệt

độ phòng để dung môi xuyên thấu vào cấu trúc tế bào thực vật, hòa tan các hợp chất tự

nhiên. Sau đó, lọc dung dịch chiết qua giấy lọc thu được dịch chiết, đem chưng cất

chân không dưới áp suất kém thu được cao chiết. Rót tiếp dung môi vào bình chứa

nguyên liệu, chiết thêm một số lần nữa cho đến khi chiết kiệt mẫu.

2.2.2 PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ

Sắc kí là phương pháp tách, phân li, phân tích các chất dựa vào sự phân bố khác

nhau của chúng giữa pha động và pha tĩnh.





2.2.2.1 PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ BẢN MỎNG

Sắc ký bản mỏng hay còn được gọi là sắc ký phẳng chủ yếu dựa vào hiện tượng

hấp thu, trong đó pha động là một dung môi hoặc hỗn hợp dung môi, di chuyển qua

một pha tĩnh là một chất hấp thu trơ như: silicagel hoặc oxit alumin.

Pha tĩnh được tráng thành một lớp mỏng, đều, phủ lên một nền phẳng như tấm

kiếng, nhôm hoặc plastic.

Bình sắc ký là chậu, hũ, lọ,...bằng thủy tinh, có nắp đậy để bão hòa hơi hệ dung

môi. Pha tĩnh là một lớp silica gel mỏng khoảng 25 nm phủ lên bề mặt một tấm nhôm

phẳng.

Mẫu cần phân tích thường là hỗn hợp gồm nhiều chất với độ phân cực khác

nhau. Sử dụng khoảng 1 l dung dịch mẫu với nồng độ loãng 2 – 5%, nhờ một vi quản

để chấm mẫu thành một điểm gọn trên pha tĩnh, ở vị trí phía trên cao hơn một chút so

với mặt thoáng của chất lỏng đang chứa trong bình.

Pha động là dung môi hoặc hỗn hợp các dung môi di chuyển chầm chậm dọc

theo tấm bản mỏng và lôi kéo mẫu chất đi theo nó. Dung môi di chuyển lên cao nhờvào tính mao quản. Mỗi thành phần của mẫu chất sẽ di chuyển với vận tốc khác nhau,

đi phía sau mức dung môi. Vận tốc di chuyển này tùy thuộc vào hiện tượng hấp thu

của pha tĩnh và tùy vào độ hòa tan của mẫu chất trong dung môi.

2.2.2.2 PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ CỘT

Sử dụng phương pháp sắc ký cột hấp thu.

Pha động là chất lỏng, pha tĩnh là chất rắn (hạt rắn nhuyễn, mịn, có tính trơ). Ở

phương pháp này, các chất của hỗn hợp sẽ hấp thu lên bề mặt của pha tĩnh. Các chất

khác nhau sẽ có những mức độ hấp thu khác nhau lên pha tĩnh và chúng cũng phụ

thuộc vào tính chất của pha động. Kết quả là trong quá trình pha động di chuyển qua

pha tĩnh, chúng sẽ tách nhau ra.

Sự hấp thu xảy ra là do sự tương tác lẫn nhau giữa các phân tử phân cực, do sự

tương tác giữa những phân tử có mang những nhóm phân cực đối với pha rắn là chất





rất phân cực. Trong sắc ký cột hấp thu, pha rắn thường là những hạt silica gel có mang

nhiều nhóm –OH trên bề mặt nên đây là pha tĩnh có tính rất phân cực.

2.2.3

PHƯƠNG PHÁP PHÔ

Sử dụng phương pháp phổ để có thể xác định cấu trúc của một hợp chất hữu cơ.

2.2.3.1 PHÔ 1H-NMR

Cho thông tin về các proton 1H có trong phân tử. Các thông số của phổ 1H-

NMR cho biết độ dịch chuyển hóa học, hình dạng tín hiệu và hằng số tương tác (J)

spin – spin giữa các proton không tương đương kế cận nhau sẽ cho các kiểu ghép vân

phổ (tín hiệu bội), cường độ tích phân của tín hiệu thể hiện số lượng proton tương ứng

với tín hiệu đó.

2.2.3.2 PHÔ 13C-NMR

Cho thông tin về khung carbon của phân tử. Các tín hiệu phổ 13C- NMR xuất

hiện trong khoảng thang chia độ rộng (0 – 250 ppm) (có thể đến 600 ppm cho trường

hợp đặc biệt) nên các tín hiệu tách rõ ràng, mũi đơn dễ quan sát. Mỗi loại carbon trong

hợp chất hữu cơ có độ dịch chuyển hóa học khác nhau. Dựa vào độ dịch chuyển hóa

học của carbon trong phổ 13C- NMR, có thể dự đoán được loại carbon và liên kết củacarbon đó.

Phổ 13C- NMR DEPT cũng là một dạng phổ 13C- NMR, thực hiện đồng thời cả 2

phổ 1H-NMR và 13C- NMR. Kỹ thuật này cho các tín hiệu carbon gắn với 1 ,2 hoặc 3

hydro.

2.2.3.3 PHÔ HSQC VÀ HMBC

Khảo sát hạt nhân 1H ghép cặp với 13C.

Phổ HSQC cho tín hiệu của carbon gắn trực tiếp vào proton, nghĩa là tương tác

ngang qua 1 nối hóa trị.

Phổ HMBC cho biết tương tác xa, ngang qua 2 hoặc 3 nối hóa trị và không xuất

hiện tín hiệu tương tác ngang qua 1 nối hóa trị.

2.3 XÁC ĐỊNH ĐỘ ẨM NGUYÊN LIỆU

Lấy 100g lá ô môi tươi, làm khô trong tủ sấy ở nhiệt độ 50- 60oC đến khối

lượng không đổi.





Cân lại và tính độ ẩm theo công thức sau:

Trong đó: A : độ ẩm (%)

mt : lượng cân mẫu tươi (g)

mk : lượng cân mẫu khô (g)

Kết quả tính độ ẩm là cơ sở lựa chọn phương pháp ly trích, chiết tách, lập và

tính hiệu suất các quá trình.

Sau 3 lần thực hiện, kết quả được trình bày ở bảng 2.1

Bảng 2.1: Độ ẩm lá ô môi

Lần 1 Lần 2 Lần 3

Khối lượng mẫu khô (g) 16,30 16,40 16,45

Trung bình (g) 16,38

Độ ẩm A (%) 83,62

Vậy độ ẩm lá ô môi nguyên liệu là 83,62%.

2.3 ĐỊNH TÍNH SƠ BỘ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ Ô MÔI[7]

2.3.1 KHẢO SÁT S HIỆN DIỆN CỦA CÁC HỢ P CHẤT ALCALOID

Cân 5g bột khô ngâm với 80ml HCl 1% trong 4-6 giờ.

Lọc lấy dịch trong làm mẫu thử.

Thuốc thửnBouchardat: 2,5g I2, 5g KI, 10ml H2O.

Tiến hành: Cho vào ống nghiệm 1ml dịch mẫu, nghiêng ống nghiệm và nhỏ từ từ

từng giọt đến hết 1ml các thuốc thử theo thành ống nghiệm, lắc đều, để yên và quan

sát.

Thuốc thử Bouchardat: Cho kết tủa màu nâu hoặc vàng đậm là dương tính.

(%) .100t k

t

m m

A m





2.3.2 KHẢO SÁT S HIỆN DIỆN CỦA CÁC HỢ P CHẤT COUMARINE

Đun hoàn lưu 5g bột mẫu trong 50ml EtOH 95% trong 30 phút. Lọc lấy dịch

trong làm mẫu thử.

Thuốc thử: 0,5ml dung dịch NaOH 10%, vài giọt HCl đđ, 12ml H2O, 2ml dung

dịch Na2CO3 10%.

Tiến hành:

- Phản ứng mở vòng lacton: Cho vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 2ml dịch thử,

thêm vào 1 trong 2 ống 0,5ml dung dịch NaOH 10%. Đun cả hai ống trên bếp

cách thủy đến sôi, lấy ra để nguội, thêm vào mỗi ống 4ml H 2O. Nếu chất lỏng

trong ống có kiềm trong hơn ống không kiềm có thể xem là dương tính. Tiếp

tục đem acid hóa ống có kiềm với vài giọt HCl đđ, nếu dung dịch đang trong

suốt lại xuất hiện vẩn đục hoặc kết tủa thì đó là dấu hiệu dương tính.

- Phản ứng diazo hóa: Lấy 2ml mẫu vào ống nghiệm, thêm vào 2ml dung

dịch Na2CO3 10% và 4ml H2O. Nếu dung dịch trong ống chuyển sang màu đỏ

thẫm là dương tính.

2.3.3

KHẢO SÁT S HIỆN DIỆN CỦA CÁC HỢ P CHẤT FLAVONOIDĐun hoàn lưu 5g bột mẫu trong 50ml EtOH 95% trong 30 phút. Lọc lấy dịch

trong làm mẫu thử.

Thuốc thử: HCl đđ + bột Mg + alcol isoamylic, dung dịch (CH3COO)2Pb bão

hòa, dung dịch FeCl3 1%.

Tiến hành: Cho vào ống nghiệm 1ml dịch mẫu, thêm vài giọt HCl đđ, sau đó cho

một ít bột Mg vào và lắc đều. Thêm từ từ từng giọt alcol isoamylic, để yên quan sát

nếu thấy xuất hiện vòng màu hồng hay dung dịch có màu tím thì có flavonoid trong

mẫu.

Dung dịch mẫu tạo kết tủa màu xanh lục đen với dung dịch FeCl 3 1%, kết tủa

trắng với dung dịch (CH3COO)2Pb bão hòa.

2.3.4 KHẢO SÁT S HIỆN DIỆN CỦA CÁC HỢ P CHẤT GLYCOSYDE

Lấy 10g bột khô loại các chất không phân cực bằng PE. Tiếp theo chiết với EtOH

50%. Dịch lọc được loại tạp chất bằng (CH3COO)2Pb cho đến khi không còn trầm





hiện. Sau đó loại (CH3COO)2Pb dư bằng Na2SO4 bão hòa. Cô cạn dịch lọc được cao

glycosyde thô. Hòa tan cao này bằng EtOH 90% và lấy dung dịch này làm mẫu thử.

Thuốc thử:

- Tollens: 1ml dung dịch AgNO3 10% + 1ml dung dịch NaOH 10% + từ từ

từng giọt dung dịch NH4OH 25%.

Fehling: Khi sử dụng thì trộn hai dung dịch sau lại với nhau.

Dung dịch A: 40g CuSO4.5H2O + H2O, định mức vừa đủ 1 lít.

Dung dịch B: 200g KNaC4H4O6.4H2O + 150g NaOH + H2O, định mức vừa

đủ 1 lít. Tiến hành: Lấy 1ml mẫu thử, cho vào từng giọt cho đến hết 1ml các thuốc thử.

- Thuốc thử Tollens: Nếu thấy xuất hiện kết tủa màu bạc là dấu hiệu dương

tính.

- Thuốc thử Fehling: Đun sôi ống nghiệm trên đèn cồn trong 1 phút. Nếu

thấy xuất hiện kết tủa màu đỏ là dương tính.

2.3.5 KHẢO SÁT S HIỆN DIỆN CỦA CÁC HỢ P CHẤT SAPONIN

D A VÀO CHỈ SỐ TẠO BỌTChỉ số tạo bọt của saponin là độ loãng của nguyên liệu bằng nước để có chiều cao

bọt 1cm sau khi lắc trong ống nghiệm có kích thước xác định, tiến hành trong điều

kiện quy định.

Cách tiến hành: Cân 1g bột dược liệu cho vào erlen 500ml chứa sẵn 100ml nước

sôi. Tiếp tục đun cho nước trong erlen sôi trong 30 phút nữa. Lọc, để nguội, thêm nước

cất cho đến 100ml. Lấy 10 ống nghiệm có chiều cao 16cm, đường kính 16mm. Cho

vào các ống nghiệm lần lượt 1, 2, 3, 4, 5,..., 10ml dịch lọc. Thêm nước cất vào mỗi ống

cho đủ 10ml. Bịt miệng ống nghiệm rồi lắc theo chiều dọc của ống trong 15 giây. Mỗi

giây lắc 2 lần. Để yên trong 15 phút. Sau đó đo chiều cao các cột bọt.

Chỉ số bọt được tính theo công thức:

CSB = 100.(10/i)

Trong đó: CSB: Chỉ số tạo bọt.

i: ống nghiệm thứ i có cột bọt cao 1cm.





Nếu cột bọt trong các ống nghiệm thấp dưới 1cm (tức chỉ số tạo bọt dưới 100) thì

coi như không có saponin.

2.3.6

KHẢO SÁT S HIỆN DIỆN CỦA CÁC HỢ P CHẤT STEROID

Cân 1g bột khô, cho vào 20ml CHCl3 và ngâm trong 2 giờ. Sau đó lọc lấy dịch

trong là mẫu thử.

Thuốc thử:

- Salkowsky: 1ml H2SO4 đđ

- Libermann-Burchard: 20ml (CH3CO)2O, 1ml H2SO4 đđ

Tiến hành: Cho vào ống nghiệm 1ml dịch mẫu, nghiêng ống và nhỏ từ từ từng

giọt đến hết 1ml các thuốc thử theo thành ống nghiệm. Để yên, quan sát.

- Thuốc thử Salkowsky: Nếu dung dịch có màu đỏ đến nâu đỏ là dương tính.

- Thuốc thử Libermann-Burchard: Nếu thấy xuất hiện một vòng ngăn cách

giữa hai lớp chất lỏng có màu từ hồng đến xanh lá là dương tính.

2.3.7 KHẢO SÁT S HIỆN DIỆN CỦA CÁC HỢ P CHẤT TANIN

Cân 5g bột khô, đun sôi với 100ml nước cất trong 10 phút. Lọc lấy dịch trong

làm mẫu thử. Thuốc thử: - Dung dịch (CH3COO)2Pb: Pha đến bão hòa trong nước.

- Dung dịch FeCl3: Pha nồng độ 1% trong nước.

Tiến hành: Lấy 2ml dung dịch lọc, thêm 2-4 giọt dung dịch thuốc thử.

- Dung dịch (CH3COO)2Pb: Nếu thấy xuất hiện kết tủa màu vàng nhạt là dấu

hiệu dương tính.

- Dung dịch FeCl3: Nếu dung dịch chuyển thành màu xanh đen hoặc lục đen

(do tạo phức) là dấu hiệu dương tính.





2.3.8 K ẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH

Kết quả định tính được tổng hợp và trình bày trong bảng 2.2.

Bảng 2.2: Kết quả định tính các nhóm hợp chất trong lá ô môi

STT HỢP CHẤT THUỐC THỬ HIỆN TƯỢNG KẾT

LUẬN

1 ALCALOID Bouchardat Kết tủa nâu ++

2 COUMARINEPhản ứng mở vòng lacton Không có hiện tượng -

Phản ứng diazo hóa Không có hiện tượng -

3 FLAVONOIDFeCl3 Kết tủa xanh lục ++

(CH3COO)2Pb Kết tủa trắng ++

4 GLYCOSYDETollens Kết tủa màu bạc ++

Fehling Kết tủa đỏ +

5 SAPONIN Tạo bọt CSB > 100 ++

6 STEROIDSalkowsky Dung dịch nâu đỏ ++

Libermann-Burchard Vòng màu xanh ++

7 TANIN(CH3COO)2Pb Kết tủa vàng nhạt +++

FeCl3 Dung dịch xanh đen +++

Chú thích:

- : Âm tính

+ : Dương tính

++ : Dương tính rõ

+++ : Dương tính rất rõ

Qua khảo sát sơ bộ thành phần hóa học hữu cơ, trong lá ô môi có sự hiện diện

của các hợp chất: steroid, flavonoid, alcaloid, saponin, tanin, glycosyde.





Các thành phần khác như: acid hữu cơ, carotenoid...vẫn chưa được khảo sát.

Phần hình ảnh định tính được trình bày ở phần Phụ lục 1: Hình ảnh định tính

các hợp chất trong lá ô môi.





2.4 CÔ LẬP HỢ P CHẤT TỪ CAO THÔ

2.4.1 ĐIỀU CHẾ CÁC CAO THÔ

Bột lá ô môi (7.6 kg) được trích với 30 lít ethanol 960 bằng phương pháp ngâm

dầm, lọc bỏ bã, phần dịch chiết được cô loại dung môi dưới áp suất kém thu được cao

EtOH dạng sệt có khối lượng 1200g.

Đem cao EtOH chiết lần lượt với các dung môi theo thứ tự độ phân cực tăng

dần: n-hexan, EtOAc.

Lọc lấy phần dịch tan sau khi chiết với 25 lít n-Hexan đem cô loại dung môi

dưới áp suất kém thu được cao n-Hexan có khối lượng 609g.

Phần không tan trong n-hexan tiếp tục được chiết với 20 lít EtOAc. Lọc lấy

phần dịch tan sau khi chiết, đem cô loại dung môi dưới áp suất kém thu được cao

EtOAc có khối lượng 279g.

Hình 2.2: Ngâm dầm Hình 2.3: Lọc

Hình 2.4: Máy cô quay chân không Hình 2.5: Chiết





Sơ đồ 2.1: Quy trình điều chế các cao thô từ lá ô môi

- Trong luận văn này chúng tôi chỉ khảo sát cao EtOAc.

Cao EtOH 960 (1200 g)

- C hiết với n-Hexan

- Cô cạn dung môi

Sấy ở 50-600C, vò nát

- Chiết 7.6 kg bột khô với etanol 96 0


Bột khô (8,6 kg)

Mẫu lá

ô môi tươi

Khảo sát

định tính sơ bộ

thành phần

Xác định độ ẩm

nguyên liệu

- Chiết với EtOAc


- Sắc ký cột

- Sắc ký bản mỏng

- Kết tinh lại

Xác định cấu trúc hóa học, nhận danh.

Sản phẩm

Cao EtOAc ( 279 g) Phần

không tan

trong EtOAc

Cao n-hexan (609 g) Phần không tan trong n-Hexan





2.4.2 CÔ LẬP VÀ TINH CHẾ CÁC HỢ P CHẤT TRONG CAO ETHYL

ACETATE

2.4.3

CÔ LẬP CÁC HỢ P CHẤT TRONG CAO ETHYL ACETATE

Tiến hành sắc ký cột cổ điển.

Các thông số cột:

600g silica gel 230 – 400 mesh

Kích thước cột 90 x 600 (mm x mm)

Khối lượng mẫu 279g

Hệ dung môi giải ly: n-Hexan – EtOAc (H : E) với các tỉ lệ thay đổi theo hướng

tăng dần độ phân cực (từ H:E = 75:25 đến 100% EtOAc…).

Theo dõi quá trình sắc ký cột bằng sắc ký bản mỏng (TLC), hiện vết bằng cách

phun xịt dung dịch H2SO4 10% trong EtOH và hơ nóng trên bếp điện. Các phân đoạn

giống nhau trên TLC được gom chung lại thành các phân đoạn.

Hình 2.6: Cột sắc kí sử dụng cho cao EtOAc

Quá trình thực hiện được tóm tắt trong sơ đồ 2.2.





S ơ đ ồ 2 .

2 : S ơ đ ồ s

ắ c k ý

c ộ t c

ổ đ i ể n c a o E t O A c





Bảng 2.3: Kết quả quá trình sắc ký cột cổ điển cao EtOAc

Phân đoạn Hệ dung môi giải ly Kiểm tra với TLC Khối lượng (g)

EA H:E = 75:25 Không thấy vết <0,01

EB H:E = 75:25 Vệt mờ 0.68

EC H:E = 75:25 Vệt mờ 1.27

ED H:E = 50:50 Vệt kéo dài 2.36EE H:E = 50:50 3 vết chính 6.85

EF H:E = 50:50 Vệt kéo dài 5.41

EG H:E = 25:75 Nhiều vết 7.16

EH H:E = 25:75 Nhiều vết 10.21

EI H:E = 25:75 Nhiều vết mờ 3.69

… …

2.4.4 TINH CHẾ CÁC HỢ P CHẤT TRONG CAO ETHYL ACETATE

- Phân đoạn EE có xuất hiện chất kết tinh dạng bột vô định hình, màu cam, tan

hoàn toàn trong EtOAc.

Kết quả TLC của phân đoạn EE nhận thấy có 3 vết, trong đó có một vết chính

màu vàng. Tiếp tục tiến hành sắc ký cột phân đoạn EE với máy sắc ký cột MPLC. Các thông số cột:

150g silica gel 230 – 400 mesh

Kích thước cột 40 x 400 (mm x mm)

Khối lượng mẫu 6.85g

Tốc độ dòng 15 ml / phút

Hệ dung môi giải ly: chloroform – methanol (C : M) tỉ lệ 90:10





Hình 2.7: Máy sắc ký cột MPLC sử dụng cho phân đoạn EE

Sơ đồ 2.3: Sơ đồ sắc ký cột phân đoạn EE

Bảng 2.4: Kết quả sắc ký cột MPLC phân đoạn EE

Phân đoạn Khối lượng (g) Kết quả kiểm tra với TLC

EE1 0.02 Vệt mờ

EE2 0.52 Nhiều vết

EE3 3.86 1 vết tròn màu vàng → CGLE01

EE4 0.17 Vệt mờ

EE5 1.08 2 vết chính

EE6 0.24 Vệt mờ

Tổng cộng 5.89

PHÂN ĐOẠN EE

6.85 g

EE1

0.02 g

EE2

0.52 g

EE3

3.86 g

EE4

0.17 g

EE5

1.08 g

EE6

0.24 g

C:M = 90:10





Hiệu suất thu hồi cột sắc ký: %99.85%10085.6

89.5 x H

Nhận xét:+ Phân đoạn EE3 có xuất hiện chất kết tinh. Sau đó, phân đoạn này được rửa

nhiều lần với hỗn hợp H:E tương đương 70:30, thu được chất kết tinh hình kim

màu cam, có khối lượng là 2.4g. Kí hiệu là CGLE01.

Kết quả kiểm tra với TLC hiện màu bằng dung dịch H2SO4 (10%)/EtOH (hấp

thu UV ở bước sóng 254 nm):

Giải ly bằng hệ CHCl3 100% cho vết tròn màu vàng có R f = 0.15

Giải ly bằng hệ CHCl3 – MeOH 9:1 cho vết tròn màu vàng có R f = 0.51

Giải ly bằng hệ CHCl3 – MeOH 80:20 cho vết tròn màu vàng có R f = 0.71

CGLE01 tan hoàn toàn trong EtOAc, có điểm tan chảy được đo trên máy

Electrothemal 9100 (UK), mao quản không hiệu chỉnh: 2250C.

Hình 2.8: Hợp chất CGLE01 Hình 2.9: TLC của chất CGLE01

C=100% C:M=90:10 C:M=80:20

R f =0.15 R f =0.51 R f =0.71





Hình 2.10: Máy đo nhiệt độ nóng chảy Electrothemal 9100 (UK)

+ Phân đoạn EE5 có xuất hiện chất kết tinh dạng bột vô định hình màu

vàng nhạt. Kiểm tra bằng TLC, hiện màu bằng dung dịch H2SO4 10% trong

EtOH cho 2 vết chính: vết màu tím có R f = 0.5, vết màu nâu có R f = 0.38, hệ

dung môi giải li CHCl3:CH3OH (80:20)

Tiếp tục tiến hành sắc ký cột phân đoạn EE5 với máy sắc ký cột MPLC.

Các thông số cột:

150g silica gel 230 – 400 meshKích thước cột 20 x 400 (mm x mm)

Khối lượng mẫu 1.08g

Tốc độ dòng 5 ml / phút

Hệ dung môi giải ly: chloroform – methanol (C : M) tỉ lệ 80:20

Hình 2.11: Máy sắc ký cột MPLC sử dụng cho phân đoạn EE5





Sơ đồ 2.4: Sơ đồ sắc ký cột phân đoạn EE5

Bảng 2.5: Kết quả sắc ký cột MPLC phân đoạn EE5

Hiệu suất thu hồi cột sắc ký: %7.78%10008.1

85.0 x H

Phân đoạn Khối lượng (g) Kết quả kiểm tra với TLC

EE5a 0.01 Vệt mờ

EE5b 0.13 Vệt kéo dài

EE5c 0.34 2 vết chính

EE5d 0.22 Vệt kéo dài

EE5e 0.15 Vệt mờ

Tổng cộng 0.85

PHÂN ĐOẠN EE5

1.08 g

EE5a

0.01 g

EE5b

0.13 g

EE5c

0.34 g

EE5d

0.22 g

EE5e

0.15g

C:M = 80:20





Nhận xét:

Phân đoạn EE5c thấy xuất hiện chất kết tinh dạng bột vô định hình màu

vàng nhạt. Kiểm tra bằng TLC, hiện màu bằng dung dịch H2SO4 10% trong

EtOH vẫn cho 2 vết chính: vết màu tím có R f = 0.5, vết màu nâu có R f = 0.38,

hệ dung môi giải li CHCl3: CH3OH (80:20).

Tiếp tục tiến hành sắc kí điều chế phân đoạn EE5c bằng máy chấm sắc

kí tự động với 6 bản TLC kích thước 10x10 cm, hệ dung môi giải ly là

C:M=80:20. Cạo phần silicagel cho vết màu tím và màu nâu thành hai phần

riêng biệt. Hòa tan lại phần chất tan bằng methanol, lọc bỏ silicagel bằng màng

lọc, thu được dung dịch chứa chất tan. Nhưng khi cô loại dung môi để thu lại

chất kết tinh thì mẫu chất đã bị hỏng, không thu được chất kết tinh.





3. Chương 3: KẾT QUẢ VÀ KIẾN NGHỊ





3.1 K ẾT QUẢ CÔ LẬP VÀ TINH CHẾ

- Từ 279g cao EtOAc, đã tiến hành sắc ký cột tách được 09 phân đoạn và vẫn đang

tiếp tục tiến hành sắc kí cột.

- Tinh chế phân đoạn EE thu được một chất tương đối tinh khiết ký hiệu là

CGLE01.

- Phổ hồng ngoại IR (KBr) của hợp chất CGLE01 có các mũi hấp thu đặc trưng:

cm-1: 1626 (C=C); 1460.19 (C-H); 1275, 1206, 1085 (C-O)

νmax (KBr), (cm-1) Chuyển động nối

1626 C=C

1460 C-H

1275 C-O

1206 C-O

1085 C-O

Do khảo sát trên cùng đối tượng là cao ethyl acetate của lá ô môi và điều kiện ly

trích tương tự nên khi so sánh các đặc tính của hợp chất CGLE01 với tài liệu tham

khảo [9] thì nhận thấy có nhiều điểm tương đồng. Kết quả so sánh được trình bày

trong bảng 3.1

Bảng 3.1: So sánh hợp chất CGLE01 với Aloe emodin

Hình dạng kết tinh

Màu sắc Kết quả kiểm tra TLCvới hệ C:M=90:10

Nhiệt độnóng chảy

CGLE01 Hình kim Màu cam R f = 0.51 225oC

Aloe emodin Hình kim Màu cam R f = 0.51 223-224oC

Kết quả so sánh cho phép chúng tôi dự đoán hợp chất CGLE01 là Aloe emodin.





* Aloe emodin:

+ Là hợp chất anthraquinone.

+ Danh pháp IUPAC: 1,8-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)anthracene-9,10-dione

+ Công thức phân tử là: C15H10O5, M = 270,24 gam/mol

+ Công thức cấu tạo là:

O

O OHOH

OH

3.2 K ẾT LUẬN

- Từ 1 kg bột lá ô môi, chúng tôi đã tiến hành định tính sơ bộ thành phần hóa học

của lá ô môi. Kết quả cho thấy trong lá ô môi có sự hiện diện của các hợp chất:

alcaloid, flavonoid, glycosyde, saponin, steroid, tanin.

- Từ cao EtOAc, đã cô lập, tinh chế được một hợp chất trong loài Cassia grandis

L.f có khối lượng là 2.4g và kí hiệu là CGLE01.

3.3 KIẾN NGHỊ

- Chạy phổ NMR để giải cấu trúc, nhận danh và thử hoạt tính sinh học của hợp

chất CGLE01 đã phân lập được.

- Tiếp tục cô lập và tinh chế các phân đoạn còn lại của cao EtOAc.

- Khảo sát tiếp tục trên cao MeOH và cao BuOH để làm sáng tỏ thêm thành phần

hóa học và hoạt tính sinh học của các hợp chất có trong lá ô môi.





4. TÀI LIỆU THAM KHẢO

TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT [1] Đỗ Huy Bích (1995), Thuốc từ cây cỏ và động vật , Nhà xuất bản Y Học, trang

389 – 390.

[2] Hoàng Thị Sản (1999), Phân loại học thực vật , Nhà xuất bản Giáo Dục, trang

136 – 137.

[3] Nguyễn Tiến Bân (chủ biên) (2003), Danh mục các loài thực vật Việt Nam, Nhà

xuất bản Nông Nghiệp, trang 737.

[4] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong,

Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn,

Đoàn Thị Thu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2003), C ây thuốc và động vật làm thuốc

ở Việt Nam, tập II, Nhà xuất bản Khoa Học và Kỹ Thuật, trang 495 – 496.

[5] Trần Hợp (2003), Tài nguyên cây gỗ Việt Nam, Nhà xuất bản Nông Nghiệp,

trang 504.[6] Nguyễn Kim Phi Phụng (2005), Phổ NMR sử dụng trong phân tích hữu cơ , Nhà

xuất bản Đại Học Quốc Gia TP. Hồ Chí Minh, trang 204 - 209, 340 – 347.

[7] Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ , Nhà xuất

bản Đại Học Quốc Gia TP. Hồ Chí Minh, trang 80 – 147, 151 – 153, 213 – 223.

[8] Đào Huy Phong (2011), Luận văn Thạc sĩ Hóa Học “Nghiên cứu thành phần hóa

học lá ô môi Cassia grandis L. Họ Vang (Caesalpiniaceae)”, Trường Đại họcCần Thơ.

[9] Nguyễn Thị Khánh Chi (2012), Khóa luận tốt nghiệp cử nhân Hóa Học “Khảo

sát thành phần hóa học của cao ethyl acetate lá ô môi Cassia grandis L.f Họ

Vang ( Caesalpiniaceae)” , Trường đại học sư phạm thành phố Hồ Chí Minh.





[10] Lê Đỗ Huy (2012), Luận văn tốt nghiệp “Góp phần khảo sát thành phần hóa học

trái ô môi Cassia grandis L.f Họ Vang (Caesalpiniaceae)”, Trường đại học Cần

Thơ.

TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG NƯỚC NGOÀI

[11] Srivastava YS, Gupta PC. (1981), A new flavonol glycoside from seeds of Cassia

grandis L., Planta Med. 1981 Apr; 41(4), pp. 400-402.

[12] Wandee Gritsanapan, Bamrung Tantisewie and Vichiara Jirawongse (1984),

Chemical Constituents of Cassia Timorensis and Cassia Grandis, J. Sci. Soc.

Thailand, 10 (1984), pp. 189-190.

[13] Ibadur Rahman Siddiqui, Mithiles Singh, Dipti Gupta và Jagdamba (1993),

Anthraquinone-O- β -D-Glucosides from Cassia Grandis, Natural Product Letters,

Volume 2, Issue 2, 1993, pp. 83-90.

[14] R. P. Verma, K. S. Sinha (1994), An Anthraquinone from Cassia grandis Linn.

Natural Product Letters, Volume 5, Issue 2, pp.105-110.

[15] Valencia E, Madinaveita A, Bermejo J, Gonzalez A, Gupta MP (1995), Alkaloids

from Cassia grandis. Fitoterapia 1994; Vol 66, No.5; pp. 476-477.

[16] A. G. González, J. Bermejo, E. Valencia, A new C6-C3 compound from Cassia

grandis L., Planta Medica (1996) Volume 62, Issue 2, pp. 176-177.

[17] Meenarani; Kalidhar SB (1998), Chemical Examination of The Stems of Cassia

grandis L. Indian Journal of Pharmaceutical Sciences. 1998 Jan-Feb, 60, pp. 59.

[18] Harsha Joshi và Virendra P. Kapoor, Cassia grandis Linn. F. seed

galactomannan: structural and crystallographical studies, Carbohydrate

Research (2003) Volume 338, Issue 18, pp. 1907-1912.

[19] Juana Tillán Capó, Jorge Rodriguez Chanfrau, Juan Miguel Gómez Mirabal,

Zennia Prado (2004), Actividad antianémica de la Cassia grandis L, Rev Cubana

Farm, 38(3), pp. 1-1.





[20] Dr. C. Emilio Montejo Cuenca, Dr. C. Melquiades, Dr. C. Orlando (2005),

Hemolizado y la canãndonga (Cassia grandis) como reconstituyente en la

desnutrición de los terneros (The use of homolyzed and Canadonga (Cassia

grandis) os reonstituent in calve’s malnutrition), Revista Electrónica de

Veterinaria REDVET, 6(9), pp. 1-7.

[21] LI Xiao-Liang, LU Ge, WANG Hao, YE Wen-Cai, ZHANG Xiao-Qi, ZHAO

Shou-Xun (2007), “Study on the Chemical Constituents of Desmodium

styracifolium (Osbeck) Merr.”, Journal of Chinese Medicinal Materials, Volume

30(7), pp. 802-805.

[22] Vannada Singh, Stuti Tiwari, Ajit Kumar Sharma, Rashmi Sanghi (2007),

Removal of lead from aqueous solution using Cassia grandis seed gum-grate-

poly(methylmethacrylate, Journal of Colloid and Interface Science, 316(2), pp.

224-232.

[23] Clippel Joscineia Kelli Clippel, Carmo, Hallan Nunes Chamondo (2008), Análise

química em órgãos de reserva de agmas herbáceas e arbóreas ocorrentes na flora do espírito Santo, Acta Botanica Brasilica, 22(4), pp. 1057-1067.

[24] MA Awal, Syed Ashrafuzzaman, E Ekramul Haque (2009), Studies on

antibacterial activity and Brine Shrimp toxic of leaf extract of Cassia grandis,

Bangladesh Journal of Medical Microbiology, 3(1), pp. 17-19.

[25] Sandesh R Lodha, Shrikant V Joshi, Bhavin A Vyas, Dr. Shailesh A Shah

(2010), Evaluation of the effectiveness of Cassia grandis (Leguminosae) in thealleviation of carbon tetrachloride – incluced acute heptatotoxicity in the rat ,

International Jounal of Drug Formulation and Research, 1(3), pp. 276-282.

[26] Sandesh R Lodha, Shrikant V Joshi, Bhavin A Vyas, Mohini C Upadhye (2010),

Assessment of the antidiabetic potential of Cassia grandis using an in-vivo

model , Original article, 1(3), pp. 330-333.





Phụ lục 1: Hình ảnh định tính các hợp chất trong lá ô môi

1

3.a 3.b

4.a 4.b





5

6.b6.a

7.b7.a





Chú thích:

STT HỢP CHẤT THUỐC THỬ

a b

1 ALCALOID Bouchardat

2 COUMARINE Phản ứng mở vòng lacton Phản ứng diazo hóa

3 FLAVONOID FeCl3 (CH3COO)2Pb

4 GLYCOSYDE Tollens Fehling

5 SAPONIN Tạo bọt

6 STEROID Salkowsky Libermann-Burchard

7 TANIN (CH3COO)2Pb FeCl3





Phụ lục 2: Phổ 1H-NMR của Aloe emodin





Phụ lục 3: Phổ 13C-NMR của Aloe emodin





Phụ lục 4: Phổ HMBC của Aloe emodin





Phụ lục 5: Phổ HSQC của Aloe emodin





Phụ lục 6: Phổ IR của hợp chất CGLE01


góp phần khảo sát thành phần hóa học lá Ô môi cassia grandis l.f họ vang...

Documents