gránulos de estrés como reguladores de la transducción de la señal intracelular del receptor...
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Gránulos de Estrés como reguladores de la transducción de
la señal intracelular del receptor de IL-1 por el secuestro de
TRAF6, en células HUVEC
TM. Antonio Serrano
Estrés Dependiendo de la intensidad
del estrés: los organismos vivos pueden:
Apoptosis Adaptación
Mecanismo de defensa
Reparación del DNA Cambios en repertorio proteico Represión de Traducción
Gránulos de Estrés Estructuras citoplasmáticas densas.
Inducido por: Shock térmico Estrés oxidativo. Radiación UV. Shock osmótico
Contienen RNA
HSPs
Transitoriamente inactivos
Expresión morfológica de un inicio de traducción abortado
Incicio traduccional en estrés
Fosforilación de eIF2
PKR es parte del complejo IKK
PKR
eIF2B
P65
I
P50
eIF2
TNFR
TRAF2 en SGs
IL-1 R
Hipótesis
Señal de Estrés
Fosforilación de eIF2
Secuestramiento de Factores de Traducción como eIF4G a los Gránulos de
estrés
Inhibición de la Traducción
Reducción de actividad celular
Interleuquina-1
Receptor IL-1
Secuestramiento de TRAF6
Inhibición de señalización NF-B.
Inhibición de respuesta Proinflamatoria
Hipótesis
TRAF6 esta secuestrado en los gránulos de estrés interrumpiendo la activación de NF-kB por la señal del receptor de interleuquina 1, en el modelo de células endoteliales de cordón umbilical humano tratadas con arsenita.
La activación de NF-kB por una señal de interleuquina 1 se interrumpe en condiciones de estrés, en el modelo de células HUVEC
Objetivo General
Determinar la influencia de los gránulos de estrés en la transducción de señal de un estimulo proinflamatorio de interleuquina 1
Objetivos Específicos
1. Estandarización del modelo de inducción de formación de gránulos de estrés por tratamiento con arsenita de las células HUVEC
Establecimiento líneas HUVEC Inducción de Gránulos de Estrés con Arsenita Localización intracelular marcadores SGs, TIA-1y eIF2con
microscopia confocal.
Objetivos Específicos
2. Estudiar presencia de TRAF 6 en gránulos de estrés inducidos con arsenita en células HUVEC y su relación con proteínas que lo forman como PKR, eIF2a, eIF4, TIA-1 TIAR, bajo la señal de IL-1R
Estandarización de estimulación de HUVEC con IL-1. Western blot para IRAK activo
Microscopía confocal y colocalización de TRAF6 en SGs de células HUVEC estimuladas con IL-1 recombiante
Coinmunoprecipitación TRAF6 / PKR, eIF2a, eIF4, TIA-1 y TIAR
Objetivos Específicos
3. Evaluar nivel de activación de NF-kB en células HUVEC estimuladas con IL-1 sometidas a estrés con arsenita.
EMSA para evidenciar activación de NF-B
Resultados esperados
IL-1
TRAF6
TRAF6