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MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS

Morfologia :

Bacilo de extremo redondeado. Suelen verse aislados,aunque pueden aparecer agrupados en pequeños grupos

de 2 o 3 bacilos

Se colorean como Gram + aunque la coloración típica de esta bacteria es la de Ziehl-Neelsel. Esta técnica aprovecha la acidoalcoholresistencia del M. Tuberculosis.

Mycobacterium tuberculosis perfinges es una bacteria responsable de la mayor cantidad de casos de tuberculosis en el mundo. Fue descrito por primera vez el 24 demarzo de 1882 por  Robert Koch, de ahí su sobrenombre de «Bacilo de Koch», quienposteriormente recibiría el premio Nobel de Fisiología o Medicina en 1905.Su genoma está secuenciado, lo que permitirá aclarar su relación con las otras especiesdel complejo Mycobacterium Tuberculosis.

Es una Bacteria Alcohol-Ácido resistente frecuentemente incolora, aeróbica estricta. Sucrecimiento está subordinado a la presencia de oxígeno y al valor del pH circundante. Esmuy resistente al frío, la congelación y la desecación; por el contrario muy sensible alcalor, la luz solar y la luz ultravioleta. Su multiplicación es muy lenta (se divide cada 16 a20 horas) y ante circunstancias adversas puede entrar en estado latente, pudiendoretrasar su multiplicación desde algunos días hasta varios años. El reservorio

natural delM. tuberculosis

es el hombre, tanto el sano infectado como el enfermo.Puede causar enfermedad en cualquier órgano del cuerpo, siendo lo más frecuente lainfección en los pulmones, desde donde se disemina a otros órganos por vía sanguínea olinfática. Los síntomas aparecen cuando las lesiones son ya muy extensas, de forma queel diagnóstico se establece cuando la enfermedad está muy avanzada. Los síntomas quela delatan son: fiebre, sudoración, adelgazamiento, expectoración purulenta y tos.Provocan lesiones tisulares (tubérculos). Generan una respuesta inmune en dondeparticipan los linfocitos CD4+ y los linfocitos citotoxicos, por su parte las célulasNK (natural killer) se encargan de eliminar macrofagos y linfocitos infectados.

In vitro se destruye mediante pasteurización a 80 °C.

El medio de cultivo más usado y más adecuado es el de Lowenstein Jensen . También seestá utilizando el medio Ogawa. La bacteria requiere por lo menos de 15 diás parapresentar un desarrollo visible macroscópicamente sobre el medio de cultivo y necesitahasta 8 semanas de incubación debiéndose incubar un promedio de 30 días; sus coloniasson de color blanco cremoso, son esféricas, secas, rugosas, opacas, polimorfas y dedimensiones variables. Los laboratorios especializados, realizan pruebas de

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susceptibilidad antibiótica (antibiograma) de las cepas aisladas y que ofrecen resistenciaal tratamiento convencional.

Técnica de coloración de Ziehl-Neelsel

La coloración tiene 3 componentes:

• Solución madre de Ziehl-fucsina básica fenicada.

• Solución de colorante-alcoholacido (etanol 95%)

• Coloración de contraste-azulmetileno de Loeffler.

1) Se fija el preparado.

2) Se cubre la solución de madre de Ziehl, que hemos filtrado primero. Se calientacon un hisopo encendido por debajo del preparado hasta que haga vapor. Esto serepite 3 veces, cada 3 a 5 minutos.

3) La fucsina no debe hervir, pues el bacilo pierde su acidoalcoholresistencia.

4) Se enfría el porta y se lava con agua.

5) Se cubre con solución decolorante: alcohol acido, que no se deja mas de 2minutos.

6) Se lava con agua corriente.

7) Se cubre el porta con el colorante de contraste, no menos de 30 segundos.

8) Se lava con agua y se deja secar a temperatura ambiente.

9) Se observa con el objetivo de inmersión.

Resultados

Las bacterias acidoalcoholresistentes se ven rojas, brillantes sobre u fondo azul.

Fundamento de la coloración:

 Al calentar el preparado se disminuye la tensión superficial de las bacterias. Esto favorecela penetración de la fucsina fenicada al interior de la bacteria. Una vez en el protoplasma,la fucsina se coordina con los lípidos (sobre todo con los ácidos micóliticos). La uniónfucsina – lípidos esta dada por los distintos grados de solubilidad en lípidos y agua deambas sustancias. Esta unión es tan estable que el colorante no la puede romper.

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Modificación de Cooper: como primer colorante usa fucsina básica fenicada con CIN al10%. El decolorante es el mismo, pero como colorante de contraste usa verde demalaquita.

…Estructura del M. tuberculosis.

No tiene ni esposas ni cápsula. No se mueve.

Su pared celular es muy compleja, algo diferente a la de los microorganismos Gram + oGram -.

Tiene un alto porcentaje de lípidos (casi el 60% de su pared son lípidos). La pared celular es “un Glucopéptido basal unido covalentemente a un resto arabino – micolato-galactano”.

Gránulos de Munch: Son granulos Gram + que se ven como cortas cadenas dedisposición irregular. A diferencia del resto del bacilo no son acidoalcoholresistentes.

Al microscopio óptico parecen ser Stafilococos o Streptococos.

La composición química del m. tuberculosis es compleja. Casi un 40% del total sonlípidos, entre los cuales destacan:

•  Acido Fólico: Estimula la formación de las células de Langans y , sobre todo, delas células epiteloides.

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•  Acido micolico: se relaciona con la acidoalcoholresistencia.

• Tubérculo estreárico: estimula la formación de cél. de Langans.

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METABOLISMO:

Son aerobios estrictos. Son acidoalcoholresistentes. Utilizan el glicerol como fuente de

carbono.Son resistentes a los ácidos y a los álcalis debido a su alto contenido de lípidos.Sobreviven unas 36 hs. Expuestos al sol, y en un esputo desecado puede vivir hasta 6meses.

Pero son poco resistentes al calor y a la luz ultravioleta. Los desinfectantes no sonefectivos en este caso.

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Estructura antigénica del bacilo de koch.

Muchos constituyen de la célula bacteriana son antigénicos. Se ha visto que lospolisacáridos y péptidos de la pared celular tienen funciones antigénicas, asi comomuchas proteínas del protoplasma.

Se han identificados 11 Ag. En total. El mejor identificado de todos es una proteínatubérculo – reactiva. También se han aislado los polisacáridos I y II, de poder antigénico.

Clasificación de la tuberculosis:

Mycobacterium tuberculosis tiene tres variantes o subespecies:

Género Especie Subespecie

Mycobacterium Tuberculosis Hominis

Mycobacterium Tuberculosis Bovis

Mycobacterium Tuberculosis Africanum

M. Tuberculosis subespecies homminis TBC humana.

M. Tuberculosis subespecie bovis: TBC del ganado vacuno, que se puede transmitir alhombre por la leche contaminada.

M. tuberculosis subespecie africanum: solo en Africa y Europa.

 Requerimientos nutricionales:

Los bacilos de la tuberculosis son prototróficos para todos los aminoácidos, purina ypirimidina y vitaminas del complejo B. Luego del aislamiento primario, se adaptanfácilmente a las soluciones con sales simples con ion amonio con fuente de nitrógeno yglucosa como fuente de carbono. La fuente mas importante de carbono es el glicerol y laasparagina es la fuente preferida de nitrógeno.

Velocidad de crecimiento:

En muchas condiciones de cultivo, el tiempo de duplicación de los bacilos es de 15 a 20hs. Este también es el tiempo de generación in vivo calculado a partir de los animales

experimentalmente infectados. No se cuenta con una explicación satisfactoria de la lentatasa de crecimiento del bacilo de la tuberculosis. Sin embargo, hallazgos recientesproporcionan evidencia de que la velocidad esta limitada por la ARN polimerasa ADN –dependiente del bacilo y que el efecto en la enzima puede ser una función dereconocimiento limitado de sitios de iniciación en el ADN bacteriano.

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