hemaglutination inhibitionvlm.ub.ac.id/pluginfile.php/45556/mod_resource/content/1...karena kasus...
TRANSCRIPT
![Page 1: Hemaglutination Inhibitionvlm.ub.ac.id/pluginfile.php/45556/mod_resource/content/1...karena kasus infeksi maupun antibodi hasil vaksinasi. Hemaglutination Test digunakan untuk mendeteksi](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022071300/60918c5eeacfc87f407e3415/html5/thumbnails/1.jpg)
Hemaglutination Inhibition
Laboratorium Mikrobiologi dan Imunologi
Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Brawijaya
Malang
![Page 2: Hemaglutination Inhibitionvlm.ub.ac.id/pluginfile.php/45556/mod_resource/content/1...karena kasus infeksi maupun antibodi hasil vaksinasi. Hemaglutination Test digunakan untuk mendeteksi](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022071300/60918c5eeacfc87f407e3415/html5/thumbnails/2.jpg)
Uji HI
Haemagglutination Inhibiton (HI) atau Hambatan Hemagglutinasi:
pengujian yang ditujukan untuk mengetahui titer antibodi, baik antibodi
karena kasus infeksi maupun antibodi hasil vaksinasi.
Hemaglutination Test digunakan untuk mendeteksi adanya antibodi
spesifik. Seperti antibodi terhadap agen infeksi yang mempunyai
hemagglutinin (contoh: ND, EDS, IB, dan AI) identifikasi/ mengetahui
jenis virus.
![Page 3: Hemaglutination Inhibitionvlm.ub.ac.id/pluginfile.php/45556/mod_resource/content/1...karena kasus infeksi maupun antibodi hasil vaksinasi. Hemaglutination Test digunakan untuk mendeteksi](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022071300/60918c5eeacfc87f407e3415/html5/thumbnails/3.jpg)
Tujuan
Mengukur titer antibodi atau antiserum agar diketahui status kekebalan
tubuh setelah dilakukan vaksinasi virus.
Mengidentifikasi suatu virus.
![Page 4: Hemaglutination Inhibitionvlm.ub.ac.id/pluginfile.php/45556/mod_resource/content/1...karena kasus infeksi maupun antibodi hasil vaksinasi. Hemaglutination Test digunakan untuk mendeteksi](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022071300/60918c5eeacfc87f407e3415/html5/thumbnails/4.jpg)
Prinsip
Prinsip uji HI adalah hambatan aglutinasi RBC oleh virus akibat terikatnya
virus tersebut dengan antibodi spesifik.
Netralisasi antibodi oleh antigen spesifik.
Berbeda dengan pengujian HA, pengujian HI menunjukkan hasil positif
apabila terdapat endapan eritrosit. Sedangkan hasil negatif ditunjukkan tanpa
adanya endapan eritrosit.
![Page 5: Hemaglutination Inhibitionvlm.ub.ac.id/pluginfile.php/45556/mod_resource/content/1...karena kasus infeksi maupun antibodi hasil vaksinasi. Hemaglutination Test digunakan untuk mendeteksi](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022071300/60918c5eeacfc87f407e3415/html5/thumbnails/5.jpg)
Proses Hemaglutinasi oleh Antibodi
![Page 6: Hemaglutination Inhibitionvlm.ub.ac.id/pluginfile.php/45556/mod_resource/content/1...karena kasus infeksi maupun antibodi hasil vaksinasi. Hemaglutination Test digunakan untuk mendeteksi](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022071300/60918c5eeacfc87f407e3415/html5/thumbnails/6.jpg)
ALAT &
Bahan
Microplate V bottom
Micropipet
Tabung falkon
Yellow tip
Vaksin ND/ antigen
Serum darah positif ND
RBC ayam 1%
PBS
![Page 7: Hemaglutination Inhibitionvlm.ub.ac.id/pluginfile.php/45556/mod_resource/content/1...karena kasus infeksi maupun antibodi hasil vaksinasi. Hemaglutination Test digunakan untuk mendeteksi](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022071300/60918c5eeacfc87f407e3415/html5/thumbnails/7.jpg)
Langkah Kerja1. Pembuatan RBC 1%
Diambil darah ayam
Dimasukkan tabung EDTA
Disentrifus 2500 rpm 10 menit
Dibuang supernatan
Ditambah PBS dengan perbandingan PBS dan platelet 1:3
Disentrifus lagi (diulang 3-4 kali), tiap sentrifus PBS supernatant dibuang
Sentrifus terakhir: platelet diambil (100%)
Dibuat konsentrasi RBC menjadi 1% diambil 1 ml RBC 10% dan ditambah 9 ml
PBS (V1M1 = V2M2)
2. Pengenceran antigen untuk uji HI
Antigen dibuat standar 4 HA unit
![Page 8: Hemaglutination Inhibitionvlm.ub.ac.id/pluginfile.php/45556/mod_resource/content/1...karena kasus infeksi maupun antibodi hasil vaksinasi. Hemaglutination Test digunakan untuk mendeteksi](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022071300/60918c5eeacfc87f407e3415/html5/thumbnails/8.jpg)
Pengenceran Antigen
Antigen 4 HA unit
Pada Uji HA digunakan untuk mengetahui titer antigen. Titer antigen yang terbentuk, dibuat
standar 4 HAU (titer HA : 4 HAU).
![Page 9: Hemaglutination Inhibitionvlm.ub.ac.id/pluginfile.php/45556/mod_resource/content/1...karena kasus infeksi maupun antibodi hasil vaksinasi. Hemaglutination Test digunakan untuk mendeteksi](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022071300/60918c5eeacfc87f407e3415/html5/thumbnails/9.jpg)
Hasil 4HAU
Contoh:
1. Titer HA yang terbentuk adalah 128 (pengenceran 2-7), maka:27
22= 25 = 32
Jadi perbandingan antara antigen dan PBS yaitu 1:31 (1 bagian antigen dan 31 bagian PBS).
Volume total ag yang dibutuhkan seluruh well = 96 well × 25µl = 2400µl.2400µl32
= 75µl ag + 2325µl PBS.
2. Titer HA yang terbentuk adalah 512 (pengenceran 2-9), maka:29
22= 27 = 128
Perbandingan antigen:PBS = 1:127
25µl ag + 3175µl PBS.
![Page 10: Hemaglutination Inhibitionvlm.ub.ac.id/pluginfile.php/45556/mod_resource/content/1...karena kasus infeksi maupun antibodi hasil vaksinasi. Hemaglutination Test digunakan untuk mendeteksi](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022071300/60918c5eeacfc87f407e3415/html5/thumbnails/10.jpg)
Langkah Kerja Uji HI
1. Microplate diisi PBS 25 µL pada semua well.
2. Diisi serum di sumuran A1. Dilakukan pengenceran sampai sumuran A11 dengan
mengambil 25 µL dari sumuran pertama dan dimasukkan kedua. Diulangi sampai
sumuran A11
3. Ditambah antigen 25 µL di sumuran A1-A12
4. Diinkubasi suhu ruang 30 menit
5. Ditambah RBC 1% sebanyak 25 µL di semua sumuran
6. Diinkubasi 30 menit
7. Dibaca hasil
Titer antibody angka pengenceran tertinggi yang masih mampu menghambat
aglutinasi eritrosit
![Page 11: Hemaglutination Inhibitionvlm.ub.ac.id/pluginfile.php/45556/mod_resource/content/1...karena kasus infeksi maupun antibodi hasil vaksinasi. Hemaglutination Test digunakan untuk mendeteksi](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022071300/60918c5eeacfc87f407e3415/html5/thumbnails/11.jpg)
Skema
![Page 12: Hemaglutination Inhibitionvlm.ub.ac.id/pluginfile.php/45556/mod_resource/content/1...karena kasus infeksi maupun antibodi hasil vaksinasi. Hemaglutination Test digunakan untuk mendeteksi](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022071300/60918c5eeacfc87f407e3415/html5/thumbnails/12.jpg)
Intepretasi Hasil
Uji HI, hasil dinyatakan positif menghambat aglutinasi eritrosit, jika
setelah inkubasi terdapat endapan eritrosit berbentuk titik di tengah
sumuran mikroplet.
![Page 13: Hemaglutination Inhibitionvlm.ub.ac.id/pluginfile.php/45556/mod_resource/content/1...karena kasus infeksi maupun antibodi hasil vaksinasi. Hemaglutination Test digunakan untuk mendeteksi](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022071300/60918c5eeacfc87f407e3415/html5/thumbnails/13.jpg)
Membaca Hasil
Dibaca dari permukaan, dilihat adanya endapan eritrosit
Mikroplate dapat dimiringkan, dan dibaca dari bawah plate
Jika dimiringkan ada aliran sel darah merah (tilt and flow) = hasilnya positif
tilt and flowEndapan eritrosit
![Page 14: Hemaglutination Inhibitionvlm.ub.ac.id/pluginfile.php/45556/mod_resource/content/1...karena kasus infeksi maupun antibodi hasil vaksinasi. Hemaglutination Test digunakan untuk mendeteksi](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022071300/60918c5eeacfc87f407e3415/html5/thumbnails/14.jpg)
Interpretasi Hasil
Hasil positif Hasil negatif
KV : Kontrol Virus
K : Kontrol
![Page 15: Hemaglutination Inhibitionvlm.ub.ac.id/pluginfile.php/45556/mod_resource/content/1...karena kasus infeksi maupun antibodi hasil vaksinasi. Hemaglutination Test digunakan untuk mendeteksi](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022071300/60918c5eeacfc87f407e3415/html5/thumbnails/15.jpg)
Hasil Uji HI
![Page 16: Hemaglutination Inhibitionvlm.ub.ac.id/pluginfile.php/45556/mod_resource/content/1...karena kasus infeksi maupun antibodi hasil vaksinasi. Hemaglutination Test digunakan untuk mendeteksi](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022071300/60918c5eeacfc87f407e3415/html5/thumbnails/16.jpg)
THANK YOU