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HématologieNiveau 1
Alexandra Briend-Marchal
Patricia Crosse
Laboratoire Vebio
www.vebio.fr
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Plan
• Pré-requis techniques
• La physiologie: hématopoïèse, rôle des hématies, rôle des leucocytes
• L’examen d’un frottis sanguin: morphologie des hématies et des leucocytes
• Application: quelques cas cliniques
• Questions à choix multiples
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Les techniques: prise du sang, réalisation et lecture d’un frottis
sanguin
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Les techniques: prise de sang
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Les techniques: prise de sang
• Tube propre (ne pas contaminer le prélèvement)
• EDTA (bouchon violet) non périmé
• Agiter doucement par retournements successifs
• Réaliser un frottis sanguin
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Les techniques: réalisation d’un frottis sanguin
Impossible d’afficher l’image.
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Les techniques: réalisation d’un frottis sanguin
Impossible d’afficher l’image.
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Frottis sanguins inexploitables et exploitable
Impossible d’afficher l’image.
inexploitablescorrect
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Frottis trop épais
Impossible d’afficher l’image.
Superposition des hématies
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Lecture d’un frottis sanguin
Zone de lecture d’un frottis sanguin:2ème tiers vers la queue de frottis
Si trop proche de la base: hématies superposées et formule leucocytaire modifiée (plus de lympho, moins de neutro)
Si trop proche de la queue de frottis: sur-estimationde certains leucocytes (éosino et mono)
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Le microhematocrit centrifugé, HCT
• Micro centrifuger un tube capillaire à grande vitesse (13 000 g)
• Le plasma est en haut
• La couche intermédiaire est constituée de leucocytes et de plaquettes
• Les hématies sont en bas
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Plasma ictérique
Plasma lipémique
Plasma hémolysé
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Les techniques: automates à variation d’impédance
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Compteurs de cellules par variation d'impédance (de type Coulter Counter)
• Comptage dans 2 cuves séparées:
- 1 pour les hématies et les plaquettes
- 1 pour les leucocytes
• Les cellules passent à travers une ouverture créant une différence de potentiel électrique entre deux électrodes
• La variation d’impédance est fonction du volume de la particule, ce qui permet de classer chacune des cellules
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Compteurs de cellules par variation d'impédance (de type Coulter Counter)
• Les numérations érythrocytaire, leucocytaire et plaquettaire sont réalisées
• Le VGM est mesuré
• Une formule leucocytaire approximative est déterminée (par classification des GB en fonction de leur taille)
• L’hémoglobinémie est mesurée par spectrophotométrie après lyse des GR.
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Compteurs de cellules par variation d'impédance (de type Coulter Counter)
Valeurs mesurées:
• Numération des GR
• VGM (volume globulaire moyen)
• Hémoglobinémie
• Numération des plaquettes
• VPM (volume plaquettaire moyen)
• Numération des GB et formule approximative
Valeurs calculées:
• Hématocrite: RBC X MCV
• TCMH (taux corpusculaire moyen en hémoglobine): Hgb / nbre de GR
• CCMH (concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine): Hgb / Hématocrite
• RDW (Indice de variation de la taille des GR)
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Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat)
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Compteurs de cellules par analyse du buffy coat
• Tube capillaire spécial contenant un cylindre de matière plastique (flotteur).
• Lors de la centrifugation, la couche leuco-plaquettaire s’étend le long du flotteur.
• La fluorescence est utilisée pour différencier les couches de cellules.
• L'épaisseur de la couche de chaque type de cellule est corrélée avec sa concentration.
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Compteurs de cellules par analyse du buffy coat
Valeurs mesurées:
• Hématocrite
• CCMH (concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine): Hgb / Hématocrite
• Plaquettocrite
• Fibrinogène
• Buffy coat
Valeurs calculées:
• HGB
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Numération des réticulocytes
• Coloration spéciale des ARN rémanent dans les réticulocytes colorés en bleu foncé par Bleu de Crésyl Brillant
• Comptage des cellules colorées (% des cellules non colorées au total)
• Interprétation de la numération absolue des réticulocytes seulement
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Réticulocytes
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Physiopathologie: l’hématopoïèse et le rôle des différentes populations cellulaires
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Hématopoïèse
L’academie de Dijon
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Hématopoïèse
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Erythropoïèse
• L'hématopoïèse se déroule, après la naissance dans la moelle des os
• L’érythropoïétine agit sur les CFU-E (colonyforming unit - erythocyte) qui répond en se divisant ou en se différenciant en proérythroblastes
• L'érythropoïétine est produite par le rein, en réponse à une hypoxie
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Erythropoïèse: Moelle Osseuse
Erythroblastes acidophile
Erythroblaste polychromatophile
Erythroblastebasophile
Proérythroblaste
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Myélopoïèse
• La myélopoïèse se déroule principalement après la naissance dans la moelle osseuse
• La myélopoïèse est régulée par les cytokines
(exemple CSF)
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Myélopoïèse
Prolifération Maturation Circulation
Moelle osseuse Sang
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Le rôle des hématies:apporter l’oxygène aux tissus
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Le rôle des hématies
• La fonction principale des hématies et à apporter l’oxygène aux tissus
• Toute l'énergie générée par le métabolisme de l’hématie est consacrée au maintien de la forme des cellules, à la structure de la membrane, aux fonctions enzymatiques, au maintien du fer réduit, le but final étant le fait d'optimiser l'apport d'oxygène aux tissus
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Le rôle des leucocytes: défendre l’organisme contre les agressions
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Le rôle des neutrophiles
• Rôle dans l'immunité innée
• La fonction principale des neutrophiles est (associée à l’inflammation aiguë) de lutter contre la pénétration et le développement de l’ensemble des éléments infectieux (bactéries, virus, champignons) et non-infectieux (cellules nécrotiques, corps étrangers)
• Arrivée aux contacts des éléments étrangers, libération de substances actives, phagocytose
• Rôle dans l’immunité adaptive: immunorégulation
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Migration des polynucléaires neutrophiles
1. Margination, adhérence à l'endothélium
2. Migration à travers l'endothélium
3. Migration dans les tissus interstitiels
4. Lutter contre l’infection
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Le polynucléaire neutrophile
• 3 Pools:
- Circulant
- Marginé
- Tissulaire
• Un stress induit une démarginalisation et une augmentation du nombre de neutrophiles circulants.
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Le rôle des lymphocytes:
• Rôle dans l'immunité innée (cellules NK)
• Rôle dans l’immunité adaptive:
Humorale: production des anti-
corps
Cellulaire: cytotoxicité ou
hypersensibilité retardée
• Recrutement des monocytes
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Les lymphocytes
• Production médullaire et périphérique (ganglions lymphatiques, rate et thymus).
• Pools circulant et marginé
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Le rôle des monocytes:
• Rôle dans l'immunité innée
• La fonction principale des macrophages est de lutter contre la pénétration et le développement de l’ensemble des éléments infectieux (bactéries, virus, champignons) et non-infectieux (cellules nécrotiques, corps étrangers)
• Arrivée aux contacts des éléments étrangers, libération de substances actives, phagocytose
• Rôle dans l’immunité adaptive: immunorégulation
• Rôle dans la réparation tissulaire
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Les monocytes
• Taille d’un monocyte: 12-20 microns
• Appartient au (système des phagocytes mononucléés): cellules avec de nombreuses fonctions
• Monocytes circulent dans le sang, puis entrent tissus pour devenir des macrophages.
• Monocytose:
Inflammation
Glucocorticoïdes
NéoplasieMonocyte PNN
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Les polynucléaires éosinophiles
• Taille: 12-15 microns
• Production dans la moelle osseuse est stimulée par les cytokines (IL5 surtout)
• Pools circulant et marginé
• Ils circulent pendant quelques heures max puis entrent dans les tissus, où ils peuvent vivre pendant des semaines.
PNN PNE
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Eosinophilie
Causes:
- parasitose
- phénomène allergique
- syndrome éosinophilique
- syndrome paranéoplasique (mastocytome, autre)
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Le rôle des plaquettes: assurer l’hémostase
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Rôle des plaquettes
• La première fonction des plaquettes est de contribuer à réparer des brèches vasculaires et à prévenir une hémorragie, en participant à la formation des bouchons hémostatiques. Les plaquettes sont consommées dans ce processus.
• L'énergie pour les fonctions plaquettaires est dérivé de l'ATP (généré par la glycolyse aérobie et la phosphorylation oxydative)
• Les plaquettes jouent également un rôle importante dans l’inflammation
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Morphologie des cellules sanguines
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Les hématies
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Examen des hématies
• Cellule anucléée chez mammifères (nucléée chez oiseaux, reptiles, batraciens, poissons)
• Produite par lignée érythroïdemédullaire
• Volume variable en fonction espèce
• Examen de la taille, de la forme, de la couleur
• Uniformité générale
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Examen des hématies: chien
• Disques biconcaves
• Volume: 65-75 fl
Cas particuliers:
Macrocytose Caniche (VGM=80 fl)
Microcytose Akita et Shiba Inu
(VGM= 60 fl)
• Contours réguliers
• Légère pâleur centrale
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Examen des hématies: chat
• Disque biconcave
• Volume: 45-55 fl
• Légère anisocytosephysiologique
• Pâleur centrale peu visible
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Les leucocytes
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Le polynucléaire neutrophile
• Diamètre: 10-12 microns (GR= 7 microns)
• Noyau polylobé (2 à 5 lobes)
• Cytoplasme abondant clair sans granulation
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Polynucléaire éosinophile: Chien
• Diamètre: 12 microns
• Noyau bi ou trilobé
• Chien: granulations rondes, oranges, en nombre et de taille variables
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Polynucléaire éosinophile: Chat
• Diamètre: 12 microns
• Bilobé le plus souvent
• Chat: granulations très nombreuses, en batonnets, oranges
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Polynucléaire éosinophile: chien et chat
PNE de ChienPNE de Chat
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Les polynucléaires basophiles
• Très rarement observés (très faible nombre circulants)
• Plus fréquent chez le chat que chez le chien
• Production dans la moelle osseuse est stimulée par les cytokines
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Le lymphocyte
• Diamètre: 7 à 10 microns
• Noyau rond parfois encoché, cytoplasme clair très réduit
• Rôle dans l’immunité à médiation humorale
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Le monocyte
• Diamètre: 15-20 microns
• Noyau massif grossièrement en U, cytoplasme abondant grisâtre et parfois vacuolisé
• Rôle dans l’immunité à médiation cellulaire
monocyte
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Les plaquettes
![Page 55: Hématologie Niveau 1 - Vebio · des GR) Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat) Compteurs de cellules par analyse du buffycoat • Tube capillaire spécial](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022021618/5b9bc63109d3f2d06f8d7723/html5/thumbnails/55.jpg)
Les plaquettes
• Plaquettes = fragments de cytoplasme de mégacaryocytes médullaires
• Rôle: hémostase primaire (formation du thrombus blanc)
• Chat: plaquettes volumineuses + amas fréquents
Plaquettes (thrombocytose sévère ici)
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Les plaquettes
Plaquettes Amas de plaquettes
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Macroplaquettes: Cavalier King Charles
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Amas de plaquettes
• Très fréquent chez le chat physiologiquement
• Peut être le signe d’un état d’hyperagrégabilitéplaquettaire
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Modifications des hématies
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Modification de taille et de coleur
• Différence de taille entre les GR = anisocytose
• Différence de couleur entre les GR = polychromatophilie
![Page 61: Hématologie Niveau 1 - Vebio · des GR) Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat) Compteurs de cellules par analyse du buffycoat • Tube capillaire spécial](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022021618/5b9bc63109d3f2d06f8d7723/html5/thumbnails/61.jpg)
Anisocytose + polychromatophilie
• Réticulocytes = plus gros et plus bleus que les GR
• Régénération des GR:
Perte de sang
Anémie hémolytique
Réticulocytes
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Réticulocytose: bleu de Crésyl
• Réticulocytes possèdent résidus ARN colorés en bleu foncé par Bleu de Crésyl Brillant
• Classification de l’anémie (régénérative ou pas)
Réticulocytes
![Page 63: Hématologie Niveau 1 - Vebio · des GR) Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat) Compteurs de cellules par analyse du buffycoat • Tube capillaire spécial](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022021618/5b9bc63109d3f2d06f8d7723/html5/thumbnails/63.jpg)
Hypochromie
• Parmi des hématies normales:
- hématies pâles
- hématies petites
- cellules cibles
• Anémie ferriprive
Annulocytes
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Corps de Howell-Joly
• Résidu nucléaire, rond, très basophile
• Fréquent et physio chez chat en petit nombre
• Augmenté chez animal splénectomisé
Corps Howell-Joly
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Erythroblastes circulants
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Acanthocytes
• Hématies dont le membrane est déformée, comme « ondulée »
• Altération du ratio entre différents lipides membranaires (hépatopathie, défaut d’absorption intestinale des lipides)
Acanthocyte
![Page 67: Hématologie Niveau 1 - Vebio · des GR) Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat) Compteurs de cellules par analyse du buffycoat • Tube capillaire spécial](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022021618/5b9bc63109d3f2d06f8d7723/html5/thumbnails/67.jpg)
Schizocytes
• Morceaux d’hématies de formes aléatoires
• Fragmentation mécanique (glomérulopathie, endocardite, néovascularisation tumoraleV)
Schizocytes
![Page 68: Hématologie Niveau 1 - Vebio · des GR) Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat) Compteurs de cellules par analyse du buffycoat • Tube capillaire spécial](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022021618/5b9bc63109d3f2d06f8d7723/html5/thumbnails/68.jpg)
Corps de Heinz
• Oxydation de l’hémoglobine qui précipite sous forme d’un corpuscule rejeté à un pole de l’hématie puis à l’extérieur
• CT >> CN
• Hématies définitivement non fonctionnelle
• Traitement oxydant (paracématol..), additifs alimentaires, oignons
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Corps de Heinz
Corps de Heinz
![Page 70: Hématologie Niveau 1 - Vebio · des GR) Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat) Compteurs de cellules par analyse du buffycoat • Tube capillaire spécial](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022021618/5b9bc63109d3f2d06f8d7723/html5/thumbnails/70.jpg)
Corps de Heinz:bleu de Crésyl
Réticulocyte
Corps de Heinz
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Eccentrocytes
Eccentrocytes
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Sphérocytes
Sphérocytes
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Parasitoses décelables sur le frottis sanguin
• CN: babesiose (dans GR), dirofilariose, hépatozoonose (dansmonocytes), anaplasmose (dans les plaquettes)
• CT: mycoplasmose (dans GR) (haemofelis, haemominutum)
Babesia sp
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Babesiose(Babesia canis)
![Page 75: Hématologie Niveau 1 - Vebio · des GR) Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat) Compteurs de cellules par analyse du buffycoat • Tube capillaire spécial](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022021618/5b9bc63109d3f2d06f8d7723/html5/thumbnails/75.jpg)
Dirofilariose(dirofilaria immitis ou repens)
![Page 76: Hématologie Niveau 1 - Vebio · des GR) Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat) Compteurs de cellules par analyse du buffycoat • Tube capillaire spécial](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022021618/5b9bc63109d3f2d06f8d7723/html5/thumbnails/76.jpg)
Anaplasmose(anaplasma platys)
Anaplasma platys
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Mycoplasmose(Mycoplasma haemofelis ou haemominutum)
Mycoplasma
![Page 78: Hématologie Niveau 1 - Vebio · des GR) Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat) Compteurs de cellules par analyse du buffycoat • Tube capillaire spécial](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022021618/5b9bc63109d3f2d06f8d7723/html5/thumbnails/78.jpg)
Modifications des leucocytes
![Page 79: Hématologie Niveau 1 - Vebio · des GR) Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat) Compteurs de cellules par analyse du buffycoat • Tube capillaire spécial](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022021618/5b9bc63109d3f2d06f8d7723/html5/thumbnails/79.jpg)
Jeunes Polynucléaires Neutrophiles toxiques
• Formes immatures peu lobées
• Parfois cytoplasme spumeux ou corps de Doëhle
• Infection, surtout bactérienne
Jeunes polynucléaires neutrophiles toxiques
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Jeunes PNN
Corps de Doëhle
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Corps de Doëhle
• Corpuscules cytoplasmiques ronds, bleutés, taille variable
• Résidus de reticulum endoplasmique lors de défaut maturation granuleux
• Observés dans infections suppurées
Corps de Doëhle
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Corps de Doëhle
![Page 83: Hématologie Niveau 1 - Vebio · des GR) Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat) Compteurs de cellules par analyse du buffycoat • Tube capillaire spécial](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022021618/5b9bc63109d3f2d06f8d7723/html5/thumbnails/83.jpg)
Neutrophilie
• Physiologique (réaction de fuite, de défense)
• Associé à une augmentation des glucocorticoidescirculants (origine médicamenteuse ou hypercorticisme spontané)
• Inflammatoire
• Tumorale
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Les lymphocytes
• Lymphocytose
Physiologique
Inflammation chronique
Néoplasie
Hypocorticisme
• Lymphopénie
Glucocorticoïdes
Inflammation aïgue
Perte de lymphocytes (épanchement chyleux)
Hypoplasie lymphoïde (immunosuppression)
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Lymphocytes activés
• Plus grands, cytoplasme plus abondant et plus basophile
• Parfois quelques grains cytoplasmiques rougeâtres
Lymphocyte activé
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Cas cliniques
![Page 87: Hématologie Niveau 1 - Vebio · des GR) Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat) Compteurs de cellules par analyse du buffycoat • Tube capillaire spécial](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022021618/5b9bc63109d3f2d06f8d7723/html5/thumbnails/87.jpg)
Cas 1: Chat Sacré de Birmanie 1 ans
![Page 88: Hématologie Niveau 1 - Vebio · des GR) Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat) Compteurs de cellules par analyse du buffycoat • Tube capillaire spécial](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022021618/5b9bc63109d3f2d06f8d7723/html5/thumbnails/88.jpg)
Cas 1: Chat Sacré de Birmanie 1 ans
• HCT: 10%
• HGB: 4 g/dL
• VGM: 55 fl
• Réticulocytes: 138 320/µL
• Plaquettes: 331 000/µL
• Neutrophiles: 38 260/µL
• Coombs: Positif
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Cas 1: Chat Sacré de Birmanie 1 ans
• LIGNÉE ROUGE : Anisocytose et polychromatophilie ++.
• LIGNEE PLAQUETTAIRE : Pas d'anomalies morphologiques notées.
• LIGNEE BLANCHE : Absence d'anomalie morphologique sur les différentes populations leucocytaires observées.
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Cas 1: Chat Sacré de Birmanie 1 ans
• Conclusion: anémie périphéique et Coombs +
- Evoque une anémie à médiation immune
- Un éventuel foyer de saignement ne peut pas être exlu
![Page 91: Hématologie Niveau 1 - Vebio · des GR) Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat) Compteurs de cellules par analyse du buffycoat • Tube capillaire spécial](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022021618/5b9bc63109d3f2d06f8d7723/html5/thumbnails/91.jpg)
Cas 2: Chien épagneul breton 14 ans
![Page 92: Hématologie Niveau 1 - Vebio · des GR) Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat) Compteurs de cellules par analyse du buffycoat • Tube capillaire spécial](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022021618/5b9bc63109d3f2d06f8d7723/html5/thumbnails/92.jpg)
Cas 2: Chien épagneul breton 14 ans
• HCT: 28%
• HGB: 9 g/dL
• VGM: 65 fl
• Réticulocytes: 40 200/µL
• Plaquettes: 257 000/µL
• Leucocytes: 4 820/µL
• Neutrophiles: 3 520/µL
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Cas 2: Chien épagneul breton 14 ans
• LIGNÉE ROUGE: Pas d'anisocytose ni de polychromatophilie.
• LIGNEE PLAQUETTAIRE: Macroplaquettes
• LIGNEE BLANCHE: Absence d'anomalie morphologique sur les différentes populations leucocytaires
observées.
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Cas 2: Chien épagneul breton 14 ans
Conclusion:
Anémie non régénérative modérée compatible avec:
-une inflammation chronique
-une hypoplasie médullaire
-une insuffisance rénale chronique
-une perte de sang chronique (parasitisme interne ou externe
sévère? ulcère digestif?...)
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Cas 2: Chien épagneul breton 14 ans
Prochaine étapes:
1. Cherchez un foyer inflammatoire chronique
2. Myélogramme
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Cas 3: Chien cocker 12 ans
![Page 97: Hématologie Niveau 1 - Vebio · des GR) Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat) Compteurs de cellules par analyse du buffycoat • Tube capillaire spécial](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022021618/5b9bc63109d3f2d06f8d7723/html5/thumbnails/97.jpg)
Cas 3: Chien cocker 12 ans
• HCT: 25%
• HGB: 8,5 g/L
• VGM: 73 fl
• Réticulocytes: 156 000/µL
• Plaquettes: 65 000/µL
• Neutrophiles: 9 000/µL
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Cas 3: Chien cocker 12 ans
• LIGNÉE ROUGE : Anisocytose et polychromatophilie ++
Sphérocytes +
• LIGNEE PLAQUETTAIRE : Pas d'anomalies morphologiques notées.
• LIGNEE BLANCHE : Absence d'anomalie morphologique sur les différentes populations leucocytaires observées.
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Cas 3: Chien cocker 12 ans
Conclusion:
Anémie périphérique compatible avec:
- une anémie à médiation immune
- un éventuel foyer de saignement
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Cas 3: Chien cocker 12 ans
Prochaines étapes:
• Un test de Coombs
• Une biochimie
• Historique d’intoxication médicamenteuse ou de transfusion?
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Alexandra Briend-MarchalDocteur VétérinaireDiplômée du Collège Européende Pathologie Clinique VétérinaireD.U. Cyto-Hématologie HumaineC.E.S. Hémato-Biochimie Vétérinaire
Stéphanie Lafarge-BeurletDocteur VétérinaireD.U. Cyto-Hématologie HumaineMaster de CancérologieDoctorat de Science
Patricia CrosseDocteur VétérinaireDiplômée du Collège Américainde Pathologie Vétériniaire, option Biologie CliniqueAncienne consultante au Royal College de Londres
Expertise, Disponibilité, Indépendance, Qualité
ACTIVITÉSBiologie vétérinaireRecherche et développement cliniques, en interne et en partenariats (publics et privés)Formation continue vétérinaire (articles, conférences, cours, stages ...)
ENGAGEMENTSAffilié à un contrôle qualité externe internationalMatériel de pointe et méthodes validées pour la biologie vétérinaireExpertise, disponibilité et indépendance des biologistes vétérinairesAgrément par le Collège Européen de Biologie Clinique pour la formation de résidents
SERVICESRésultats disponibles sur internet (espace personnalisé et sécurisé)Transport simple et rapide à un coût minimalFourniture de matériel de prélèvement et de kits d’envoi aux normes P650Organisation de cessions de formation continue en biologie clinique (ouvrant droit à des points de formation)
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