hilicカラムおよびbehアミドカラムによる高極性 …...1...

1

HHILICILICカラムおよびカラムおよびBEHBEHアミドカラムによるアミドカラムによるHHILICILICカラムおよびカラムおよびBEHBEHアミドカラムによるアミドカラムによる

高極性化合物分析の基礎高極性化合物分析の基礎

日本ウォーターズ株式会社

ＣＯＣＯソリューションセンターソリューションセンター

©2009 Nihon Waters K.K.

ＣＯＣＯソリュションセンタソリュションセンタ

20092009分析展新技術説明会分析展新技術説明会 99月月22日日 1111：：1010～～1111：：3535

アウトラインアウトライン

HILICとは？

HILICの保持メカニズムと特徴HILICの保持メカニズムと特徴

実際のHILIC分析時の検討事項

MSの感度に対する影響

サンプル前処理ステップに対する影響

Sub-2µmパーティクルによる可能性

©2009 Nihon Waters K.K. 2

2

HILICHILICとはとは??

HILIC - Hydrophilic Interaction Chromatography（親水性相互作用クロマトグラフィ）—逆相と区別するために1990年に新たに作られた用語* —逆相と区別するために1990年に新たに作られた用語*

HILICは順相クロマトグラフィの一種だが、ヘキサン等の水と混和しない溶媒は使用せずに行うことができる— “逆逆相” または “水系順相” クロマトグラフィ

固定相は高極性— シリカ、ハイブリッド、シアノ、アミノ、アミド、ジオール


高比率の有機溶媒(> 80%)と低比率の水を含む移動相—水（または極性溶媒）が溶出力の強い溶媒となる

*Alpert、 A. J. J.Chromatogr. 499 (1990) 177-196.

HILICHILICの利点の利点::

逆相では保持されない高極性化合物の保持— マトリックスによる妨害が少ない

逆相と相補的な選択性—極性の代謝物が親化合物よりも強く保持する

マススペクトロメトリーでの感度向上—有機溶媒混合比の高い移動相 (> 80%) により ESI-MS の感度向上—除タンパク（PPT）上清を希釈なしにそのまま注入可—微量サンプルの分析が容易に


微量サンプルの分析が容易に

容易なサンプル前処理手順— エバポレート/再溶解のステップを省いて、有機溶媒混合比が高い前処理（PPT、LLE、SPE）溶液をそのまま注入可能

3

シリカ HILIC カラム(pH1-5)

Waters HILIC Waters HILIC カラムラインアップカラムラインアップ

2種類の異なるカラムプラットフォーム

Atlantis® HILIC Silica

ハイブリッド HILIC カラム(pH1 8)


(pH1-8)

XBridge™ HILIC

ACQUITY UPLC® BEH HILIC

XBridgeXBridgeTMTM HILICHILIC

製品の特長製品の特長

XBridgeXBridgeTMTM HILIC:HILIC:製品の特長製品の特長

製品の特長製品の特長: :

•逆相では保持しない高極性化合物を保持

•逆相と相補的な選択性

•マススペクトロメトリーでの感度向上

•エバポレート/再溶解を必要としない容易なサンプル前処理手順


サンプル前処理手順

•シリカと比較して非常に優れた化学的安定性

•UPLC® との容易な分析法移管

4

NewNew ACQUITY UPLCACQUITY UPLC®® BEH AmideBEH Amide

官能基タイプ: トリファンクショナル結合アミド

粒子径: 1.7 µm (3.5 µm 09年後半予定 )

官能基密度: 7.5 µmol/m2


カーボン化率: 12%

エンドキャッピング: None

pH 範囲: 2-11

HILIC HILIC の保持メカニズムは複合メカニズムの保持メカニズムは複合メカニズム


分配、イオン交換、水素結合の複合•極性化合物は主に移動相、一部は水和相に分配される• チャージした化合物はシラノールおよび/ または官能基と相互作用しイオン交換する• プラスにチャージした化合物とマイナスにチャージした固定相表面のシラノールが水素結合する

5

保持の特徴保持の特徴::HILIC HILIC およびおよび逆相逆相

N

NH

O5.5

Retention Map

Cytosine

N

NH3+

0.5

1.5

2.5

3.5

4.5

Retention Factor

HILICRP


高極性化合物に対してHILICでは逆相に比べて著しく保持が向上

‐0.5

0.5

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

% Acetonitrile

保持の特徴保持の特徴::シリカとハイブリッドシリカとハイブリッド

A

10

12

14

16

act

or

Silica Particle

Nicotinic acidNortriptyline

A

10

12

14

16

act

or

Silica Particle

Nicotinic acidNortriptyline

BEHとシリカ基材で保持挙動は同様— アセトニトリル濃度90%以上で保持が急激に増大する

B

0

2

4

6

8

10

70 75 80 85 90 95

Rete

nti

on

Fa

% Acetonitrile

16

BEH Particle

CytosineMethacrylic acid

B

0

2

4

6

8

10

70 75 80 85 90 95

Rete

nti

on

Fa

% Acetonitrile

16

BEH Particle

CytosineMethacrylic acid

所定の条件下ではシラノールはそれ

ほどチャージしないためBEHはシリカと同様の保持力を示す

—移動相: 10 mM 酢酸アンモニウムwith 0.02% 酢酸


0

2

4

6

8

10

12

14

70 75 80 85 90 95

Rete

nti

on

Fact

or

% Acetonitrile

Nicotinic acidNortriptylineCytosineMethacrylic acid

0

2

4

6

8

10

12

14

70 75 80 85 90 95

Rete

nti

on

Fact

or

% Acetonitrile

Nicotinic acidNortriptylineCytosineMethacrylic acid O

CH2OH

CH3

Methacrylic Acid pKa 4.58

N

NH

O

NH2

CytosinepKa = 12.2

NHCH3

NortriptylinepKa = 10

O

N

OH

Nicotinic AcidpKa = 2.2, 4.8

6

逆相と比較した保持の向上逆相と比較した保持の向上AtlantisAtlantis®® HILIC SilicaHILIC Silica

NH

NH

OO

NH2

逆相Retention Factor

= 0®

Minutes

0.50 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00

NHO

O

Allantoin

Atlantis® dC18

HILICRetention Factor =

1 1HILICでは逆相で


Minutes

0.50 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00

1.1Atlantis® HILIC Silica

保持しない高極性化合物を保持する

逆相と相補的な選択性逆相と相補的な選択性XBridgeXBridgeTMTM HILICHILIC

33

22逆相

XBridgeTM C18

HILICでは逆相と相補的な選択性が

33

11

V0 =0.25

HILIC

1. 6-acetyl morphine

相補的な選択性が得られる


Minutes0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00

1122

V0 =0.26

XBridgeTM HILIC

3. Morphine 3-ß-D-Glucuronide

2. morphine

7

HILIC HILIC 選択性の比較選択性の比較::BEH Amide vs. BEH HILICBEH Amide vs. BEH HILIC

化合物1. Methacrylic Acid 2. Cytosine3. Nortriptyline4. Nicotinic Acid

U

0.40

0.60 1122

33

ACQUITY UPLC® BEH HILIC2.1 x 100 mm、 1.7 µm

0.60

33

AU

0.00

0.2044

ACQUITY UPLC® BEH Amide2.1 x 100 mm、 1.7 µm

New BEH Amide はHILIC


AU

0.00

0.20

0.40 11 22

44

Minutes0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00

アイソクラティック移動相： 90/5/5 ACN/EtOH/10 mM CH3COONH4 in H2O with 0.02% CH3COOH、流速： 0.5 mL/min 、カラム温度：. 25 °C 、注入量：1.5 µ 、各化合物濃度： 60 µg/mL 、サンプル溶解溶媒： 75/25 ACN/MeOH 、検出：UV 210 nm

New BEH Amide はHILIC分離に異なる選択性を提供

BEH Amide vs. BEH HILICBEH Amide vs. BEH HILICアプリケーションアプリケーション

BEH Amide—糖類

BEH HILIC— メラミン糖類

—糖鎖

—水溶性ビタミン

—有機酸

— ヌクレオチド塩基

— ヌクレオチドリン酸塩

—高極性酸性化合物

メラミン

— 4級アミン

—高極性塩基性化合物

など


など

8

UPLCUPLC®® BEH AmideBEH Amideアプリケーションアプリケーション市販食品サンプルの分析市販食品サンプルの分析

ELSD on ACQUITY UPLC® using 0.15mL/min at 85°CIsocratic: 77% Acetone with 0.05% TEA2.1 x 50mm Columns、 0.7µL injection Strawberry

Smoothie

White Bread

Lamb Curry Meal

Tomato Ketchup

Hot Cross Buns

©2009 Nihon Waters K.K. 151) Fructose、 2) Glucose、 3) Sucrose、 4) Maltose、 5) Lactose (1mg/mL each)

Food Sugars1 2 3

4 5

Sports Drink

Minutes0.00 1.00 2.00 3.00 4.00

Raisin Bran Cereal

溶媒の検討溶媒の検討: : 極性有機溶媒と移動相添加剤極性有機溶媒と移動相添加剤

分析対象物の保持を強めるために水の一部を他の極性溶媒に置き換える(例えば、 methanol、 isopropanol)— HILICでは、これらの極性溶媒は水よりも溶出力が弱い—極性溶媒（水など）を全く使用しないとピーク形状と再現性が損なわれる可能性があるバッファ/添加剤—有機溶媒比率の高い移動相では析出する可能性があるためリン酸塩バッファの使用は避けた方がよい（リン酸は問題ない）

— ギ酸アンモニウム、 pH 3*; 酢酸アンモニウム、 pH 5*; 0.2% ギ酸、 pH 2.5*、0.2% リン酸、 pH 1.8*

最適な性能と再現性を得るため、10mM濃度のバッファまたは0.2%の添加剤の


*移動相の有機溶媒混合比が高いため、移動相の実際のpHは1pHユニット高くなる可能性があるCanals、 I.; Oumada、 F. Z.; Roses、 M.; Bosch、 E. J. Chromatogr. A. 911 (2001) 191-202.

濃使用をHILICカラムには推奨する(注: 有機溶媒混合比が高いためこれら比較的

高い濃度のバッファ/添加剤によってMS の感度は低下しない）

9

HILICHILICにおける溶出力の強さにおける溶出力の強さ::溶媒の選択性溶媒の選択性

StrongestWater

極性化合物の保持を強めるために極性の低い溶媒を使用する

Methanol

Ethanol

極性溶出溶媒極性溶出溶媒


Weakest

Isopropanol

AcetonitrilePrimary Solvent

保持についての検討保持についての検討::溶媒の極性溶媒の極性

12 3

490:10 ACN:H2O

Minutes0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00

Minutes0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00

1 23

4

1 23

4

90:5:5 ACN:H2O:MeOH

90:5:5 ACN:H2O:EtOH

溶媒の極性を下げると保持が強くなる


10 mM ammonium acetate with 0.02% acetic acid

Analytes:1: methacrylic acid 2: cytosine 3: nortriptyline4: nicotinic acid

Minutes0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00

Minutes0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00

4

1 2

34

90:5:5 ACN:H2O:IPA

10

酸性化合物の保持についての検討酸性化合物の保持についての検討::移動相移動相 pH pH

salicylic acid

1.2

1.6

tion

to

e (k')

BEH Amide

BEH HILICascorbic acid (Vit C)

8 0

12.0

ion to

e (k')

BEH Amide

BEH HILIC

O

OH OH

O

OH

OH

O

OH

OH

0.0

0.4

0.8

0 2 4 6 8 10mobile phase pH

Relative

Reten

tAcena

phthen

e

nicotinic acid6.0

BEH Amide

BEH HILIC

0.0

4.0

8.0


Relative

Reten

tAcena

phthen

e

methacrylic acid4.0

BEH A id

O

N

OH

O

CH2OH

CH


0.0

2.0

4.0


Relative

Reten

tion

to

Acena

phthen

e (k')

0.0

1.0

2.0

3.0


Relative

Reten

tion

to

Acena

phthen

e (k')

BEH Amide

BEH HILIC

OH CH3

塩基性化合物の保持についての検討塩基性化合物の保持についての検討::移動相移動相 pHpH

cytosine

4 0

6.0

tion

to

e (k')

BEH Amide

BEH HILICallantoin

4 0

6.0

ion to

e (k')

BEH Amide

BEH HILICN

NH

O

NH2

NH

NH

NH

O

OO

NH2

0.0

2.0

4.0


Relative

Reten

tAcena

phthen

e

nortriptyline3.0

BEH Amide

BEH HILIC

norepinephrine8.0

BEH Amide

BEH HILIC

0.0

2.0

4.0


Relative

Reten

tiAcena

phthen

e

OH

NH2

OH

CH


0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0


Relative

Reten

tion

to

Acena

phthen

e (k')

0.0

2.0

4.0

6.0


Relative

Reten

tion

to

Acena

phthen

e (k')

OHNHCH3

11

保持についての検討保持についての検討::移動相移動相 pHpH

移動相のpHを上げることで保持を強めることのできる化合物もある— シリカ基材はpHを上げた場合のパーティクル溶解性が高い

—官能基を結合していないシリカ基材は官能基による保護がないため劣化が促進される

ハイブリッドパーティクルでは化学的耐性が大幅に向上する*

—全般的なカラム寿命が向上


*O.Gara、 J.E.、 Wyndham、 K.D.、 J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol. 2006、 29、 1025 - 1045

Injection 10

XBridgeTM HILIC Atlantis® HILIC Silica

化学的耐性化学的耐性::ハイブリッドハイブリッド vs. vs. シリカベースシリカベース HILIC HILIC カラムカラム

0.40 Injection 101

23 1 2 3

AU

AU

0.00

0.20

0.00

0.20

0.40

0.40

Injection 1000

Injection 2000

2

Injection 800

Injection 1000

2


AU

Minutes Minutes

pH 5.5で2000回インジェクションしても性能の劣化は見られない

0.00

0.20

0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00

1: uracil 2: 5-fluorouracil 3: cytosine

クロマトグラフィ条件:Column: 2.1 x 50 mm、 3.5 µmMobile Phase A: 95:5 acetonitrile: water with 10 mM NH4+ CH3COO- pH 5.5Mobile Phase B: 50:50 acetonitrile: water with 10 mM NH4+ CH3COO- pH 5.5 Flow Rate: 0.5 mL/min Gradient: 1 – 99%B over 2 minutes、1%B at 2.1 min、 hold for 0.4min Injection Volume: 2.0 µL (Full loop)Temperature: 30 oCDetection: UV @ 254 nm

12

実際の分析時の検討事項実際の分析時の検討事項: : 平衡化および再現性平衡化および再現性

購入後初めてのご使用時

— 10mMバッファまたは0.2%添加剤を含むアセトニトリル/水 50:50

合水また初期組成移相（BEH Amideの場合はアセトニトリル/水 60:40または初期組成移動相）

を50カラムボリューム（カラム容積の50倍）流す

カラム平衡化

—最初の組成の移動相を20カラムボリューム（カラム容積の20倍）流して平衡化する

グラジエント分析時


グラジエント分析時

— 5-8カラムボリューム（カラム容積の5-8倍）で再平衡化

平衡化が充分で無い場合、保持時間の変動が起こることがある

実際の分析時の検討事項実際の分析時の検討事項: : 溶媒およびサンプル希釈溶媒溶媒およびサンプル希釈溶媒

どこからはじめるか？

—最初のスカウティンググラジエントではアセトニトリル濃度を95-50%に設定する—少なくとも5%の極性溶媒(水またはメタノールなど)少なくとも5%の極性溶媒(水またはメタノルなど)—化合物が保持しない場合にはアセトニトリル濃度95%のアイソクラティック分析を行う— それでも保持しない場合、水をメタノール、エタノールまたはイソプロパノールと置き換える

洗浄溶媒

— シール洗浄: 10% アセトニトリル in 水

—強洗浄溶媒: 9:1 アセトニトリル/水

— パージ溶媒/弱洗浄溶媒: 初期組成移動相 (塩添加剤バッファは添加しない)


パジ溶媒/弱洗浄溶媒: 初期組成移動相 (塩、添加剤、バッファは添加しない)

サンプル溶解溶媒

—良好なピーク形状を得るためにはアセトニトリル濃度の高い溶媒 (75%) が推奨

13

サンプル溶解溶媒選択の重要性サンプル溶解溶媒選択の重要性

サンプル溶解溶媒は試料溶解性とピーク形状に大きく影響する

(逆相の場合と同様)

サンプル溶解溶媒は少なくともアセトニトリル濃度75%またはできるだけ初期組成の移動相に近い溶媒

ただし、極性化合物は有機溶媒中では溶解性が低いことが多い

汎用の HILIC 溶解溶媒


— 75:25 アセトニトリル:メタノールはほとんどの極性化合物で使用可能—試料溶解性とピーク形状の両方のバランスに優れている—分析対象化合物によって調整

AU 0.30

0.40

0.50

0.60

サンプル溶解溶媒の検討サンプル溶解溶媒の検討: : 極性溶媒として水を使用極性溶媒として水を使用

100% H2O

S1

23 4


l

0.00

0.10

0.20

Minutes0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00

AU

0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

0.60 50 ACN: 50 H2O

1 3 4

S 12

3 4サンプル溶解溶媒中のアセトニトリル濃度が高くなるとピーク

Analytes1. Methacrylic acid2. Cytosine 3. Nortriptyline4. Nicotinic acid


Minutes0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00

AU

0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

0.60

Minutes0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00

75 ACN: 25 H2O

S

12

34

形状が改善する

他の極性有機溶媒を使用した場合はどうでしょうか？

14

AU

020

0.30

0.40

0.50

0.60

サンプル溶解溶媒の検討サンプル溶解溶媒の検討: : 極性溶媒としてメタノールを使用極性溶媒としてメタノールを使用

100% MeOHS1

2

3 4


A l t

0.00

0.10

0.20

Minutes0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00

AU

0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

0.60 50 ACN: 50 MeOHS

12

34

水をメタノールに換えることでピーク形状と試料溶解性が改善

Analytes1. Methacrylic acid2. Cytosine 3. Nortriptyline4. Nicotinic acid


000

Minutes0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00

AU

0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

0.60

Minutes0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00

75 ACN: 25 MeOH

S

12

34

サンプル溶解溶媒中のアセトニトリル濃度が高くなるとピーク形状が改善する

ity 2 0x107

2.5x107

3.0x107

MSMS感度向上感度向上::ハイブリッド、ハイブリッド、逆相逆相 vs. HILICvs. HILIC

N+

O

OCH3

CH3 CH3

CH3

逆相XBridgeTM C18

100% H2O

Inte

ns

0.0

5.0x106

1.0x107

1.5x107

2.0x10

12

12 2. Choline (Ch)

N+ OH

CH3

CH3

CH3

有機溶媒混合比が高い

O3

1. Acetylcholine (Ach)

2

HILICXBridgeTM HILIC

7

3.0x10 710.5 Xresponse

8.6 Xresponse


有機溶媒混合比が高いHILIC移動相ではより効率的に脱溶媒されるため逆相に比べてMSの感度が向上する

81 ACN: 4.5 MeOH: 14.5 H2O

inte

nsity

Minutes

0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80

0.0

5.0x10 6

1.0x10 7

1.5x10 7

2.0x10 7

2.5x10 7

2.00

response

15

MS MS 感度比較感度比較低低pHpH逆相＆高逆相＆高pHpH逆相逆相 vsvs HILICHILIC

ensi

ty 1x106

2x106

低 pH逆相

inte

0

inte

nsity

0

1x106

2x106

6

高 pH逆相 Morphine

HILIC では逆相に比べて感


inte

nsity

0

1x106

2x106

Minutes

0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00

HILICHILIC では逆相に比べて感

度が向上:

高pH逆相に比べて1.4倍低pH逆相に比べて2.1倍

逆相クロマトグラフィ用の逆相クロマトグラフィ用の従来の従来のSPESPE（固相抽出前処理）メソッド（固相抽出前処理）メソッド

従来のSPEメソッドでは有機溶媒混合比の高い溶液で溶出を行う場合が多い

高液適有機溶媒混合比の高い溶出液は逆相カラムに直接注入するのに適さないため、

有機溶媒をエバポレートした後で溶出力の弱い溶媒に再溶解させる必要がある

エバポレート/再溶解はSPE手順において最も時間のかかる操作である場合が多い*

HILICでは有機溶媒混合比の高い溶出液を直接カラムに注入でき、エバポレートおよび再溶解のテプを省略するとができるためルプトが向上する


および再溶解のステップを省略することができるためスループットが向上する

*Jernal、 M.、 Teitz、 D.、 Ouyang、 Z.、 J.Chromatogr. B、 732 (1999) 501.

16

容易なサンプル前処理容易なサンプル前処理: : SPESPE溶出液を直接注入溶出液を直接注入

SPE溶出液をXBridgeTM HILIC カラムに直接注入

コンデシニング/平衡化

ヒト血漿中鎮静剤Oasis® MCX µElution Plate

コンディショニング/平衡化200 µL MeOH/ 200 µL H2O

サンプルのロード300 µL spiked human plasma

with 2% H3PO4

洗浄 1200 µL 2% HCOOH in H2O

洗浄 2200 µL MeOH

洗浄 3

10 ng/mL 6-acetylmorphine spiked into human plasma


脱離50 µL 5% NH4OH in ACN

溶出液をカラムに直接注入（時間のかかるエバポレート/再溶解ステップを省略）

洗浄 3200 µL ACN

Minutes

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00

10 ng/mL morphine spiked into human plasma

SubSub--2µm2µmパーティクルの可能性パーティクルの可能性::HILICHILIC

Sub-2 µm パーティクルにより生産性が向上高いカラム効率、高分離を高スピードで実現

Conditions

N

NH

O

NH2

Cytosine (B)20

30

H (

µm

)

3 µm Atlantis® HILIC Silica

1.7 µm ACQUITY UPLC® BEH HILIC


ConditionsACQUITY UPLC with TUV2.1 x 50 mm column90% ACN with 10 mM ammonium formate (pre-mixed)Inj. = 2.0 µL Full loop injectionTest Probe: Cytosine (k = 2.5)254 nmWNW 90% ACN with 10 mM ammonium formate40 Hz, Tc = 0.01

0

10

0 1 2 3 4 5

linear velocity (mm/sec)

H

17

UPLCUPLC®® へのへの容易な分析法移管容易な分析法移管::神経伝達物質神経伝達物質

N+

O

OCH3

CH3 CH3

CH3

HPLCXBridgeTM HILIC、 3.5 µm

F = 0.5 mL/min3 0 10 7

3.5x10 7

4.0x10 7

4.5x10 7

5.0x10 7

12

2. Choline (Ch)

N+ OH

CH3

CH3

CH3

UPLC® Technologyに

O3

1. Acetylcholine (Ach)

UPLC®

ACQUITY UPLC® BEH HILIC、 1.7 µmF = 1 0 mL/min

inte

nsity

0.0

5.0x10 6

1.0x10 7

1.5x10 7

2.0x10 7

2.5x10 7

3.0x10 7 1

V0 = 0.35 min

4 0x10 7

4.5x10 7

5.0x10 7

12


よりシャープなピークが得られ、HPLCと比較して高い感度が

得られる

F = 1.0 mL/min1.6X Higher Response Ach1.6X Higher Response Ch

2X Faster at Scaled Flow Rate

inte

nsity

0.0

5.0x10 6

1.0x10 7

1.5x10 7

2.0x10 7

2.5x10 7

3.0x10 7

3.5x10 7

4.0x10 7

Minutes0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00

V0 = 0.18 min

ACQUITY UPLCACQUITY UPLC®® BEH AmideBEH Amide有機酸有機酸ののUPLCUPLC®®/MS/MS分析分析（（高高pHpH））

1001.1. MaleicMaleic acid (1 acid (1 ppmppm))

2.2. PyruvicPyruvic acid (50 acid (50 ppmppm))

3.3. Lactic acid (50 Lactic acid (50 ppmppm))

4.4. SuccinicSuccinic acid (50 acid (50 ppmppm))

1ACQUITY UPLC® BEH Amide

HILIC Conditions、 pH 9.0

SIR Mode Electrospray -

%

5.5. FumaricFumaric acid (50 acid (50 ppmppm))

2

3

4

5

SIR Mode、 Electrospray -

©2009 Nihon Waters K.K. 34Minutes

0.00 0.40 0.80 1.20 1.60 2.00 2.400

18

まとめまとめ

ACQUITY UPLC® HSS T3 および Atlantis® T3— 極性化合物に対し良好な逆相保持

— 中性や疎水性化合物においても良好な保持と選択性を示すため極性～疎水性化合物の迅速一斉分析に最適示すため極性疎水性化合物の迅速斉分析に最適

ACQUITY UPLC® BEH C18 および XBridgeTM C18

— 幅広い移動相pH、温度、圧力で使用可能なハイブリッドパーティクルテクノロジー

— 高pH移動相による塩基性化合物のMS感度向上

ACQUITY UPLC® BEH HILIC、 ACQUITY UPLC® BEH Amide、 XBridgeTM HILIC およびAtlantis® HILIC Silica


— 高極性化合物の保持が向上

— 逆相と相補的な選択性

— LC/MSの感度向上— 有機溶媒比率の高いSPE溶出液をそのまま注入できるためサンプルのスループットが向上

— HILIC分離の選択性を変更する新たな選択肢（Amide）

hilicカラムおよびbehアミドカラムによる 高極性 …...1...

Documents

hilicカラムおよびbehアミドカラムによる高極性 …...1...