histologické - masaryk university · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu...
TRANSCRIPT
![Page 1: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/1.jpg)
Histologické Histologické
aa
(imuno)histochemické(imuno)histochemické
metodymetody
![Page 2: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/2.jpg)
histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismuhistologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu
zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v
humánní medicíně humánní medicíně
histologický preparát zhotovený různými histologickými histologický preparát zhotovený různými histologickými
technikamitechnikami
tenké řezytenké řezy
mikrotommikrotom
barveníbarvení
nejběžnější formou histologického preparátu je tenký řez nejběžnější formou histologického preparátu je tenký řez
určitým organismem, orgánem, tkání, obarvený některou určitým organismem, orgánem, tkání, obarvený některou
z metod histologické techniky a uložený mezi podložním z metod histologické techniky a uložený mezi podložním
a krycím sklíčkema krycím sklíčkem
![Page 3: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/3.jpg)
RozděleníRozdělení
Cytologie Cytologie –– nauka o skladbě buňkynauka o skladbě buňky
Histologie Histologie –– v užším slova smyslu, nauka o v užším slova smyslu, nauka o
skladbě tkánískladbě tkání
Mikroskopická anatomie Mikroskopická anatomie –– nauka o mikroskopické nauka o mikroskopické
skladbě orgánůskladbě orgánů
![Page 4: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/4.jpg)
Cytologický preparátCytologický preparát
Mattesia disporaMattesia dispora
Leidyana ephestiaeLeidyana ephestiae Hepatozoon Hepatozoon sp.sp.
Trypanosoma equiperdumTrypanosoma equiperdum
![Page 5: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/5.jpg)
HistologickHistologick
ý preparátý preparát
Cryptosporidium fragile Cryptosporidium fragile v žaludku ropuchyv žaludku ropuchy
žaludek ropuchyžaludek ropuchy
![Page 6: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/6.jpg)
Zpracování tkání Zpracování tkání -- histologiehistologie
OdběrOdběr
FixaceFixace
Krájení Krájení tkáně prosycené parafínem nebo pryskyřicítkáně prosycené parafínem nebo pryskyřicí
zmrzlé tkánězmrzlé tkáně
BarveníBarvení
![Page 7: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/7.jpg)
OdběrOdběr BiopsieBiopsie
PunkcePunkce
ExcizeExcize
Kyretáž Kyretáž
Peroperační biopsiePeroperační biopsie
NekropsieNekropsie
Postup:Postup:
Oddělení vzorku Oddělení vzorku -- velikost tkáňového bločku max. 1cmvelikost tkáňového bločku max. 1cm22
Opláchnutí ve fyziologickém roztokuOpláchnutí ve fyziologickém roztoku
Vložení do fixační tekutiny Vložení do fixační tekutiny -- ihned po odběru !!!ihned po odběru !!!
Označení vzorkuOznačení vzorku
![Page 8: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/8.jpg)
FixaceFixace rychlá a šetrná denaturace bílkovin bránící autolýze rychlá a šetrná denaturace bílkovin bránící autolýze
tkánítkání
podmínky fixacepodmínky fixace
rychlost rychlost -- odběr, průnik, velikost vzorku odběr, průnik, velikost vzorku (1cm(1cm22, 1mm, 1mm22))
zachování struktury zachování struktury
barvitelnostbarvitelnost
fixace fyzikální fixace fyzikální
fixace chemickáfixace chemická
![Page 9: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/9.jpg)
Fixační tekutinyFixační tekutiny
formaldehyd formaldehyd (4% formaldehyd, neutrální nebo pufrovaný)(4% formaldehyd, neutrální nebo pufrovaný)
Bouinova Bouinova (formaldehyd + k. pikrová)(formaldehyd + k. pikrová)
Zenkerova Zenkerova (dvojchroman draselný, sublimát, formaldehyd)(dvojchroman draselný, sublimát, formaldehyd)
metacarn metacarn (formaldehyd, metanol, voda)(formaldehyd, metanol, voda)
Davidson Davidson (glycerol,formaldehyd,etanol, voda)(glycerol,formaldehyd,etanol, voda)
AFAAFA (ethanol, formaldehyd, kyselina octová ledová)(ethanol, formaldehyd, kyselina octová ledová)
oxid osmičelý, glutaraldehydoxid osmičelý, glutaraldehyd
![Page 10: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/10.jpg)
Parafínové řezyParafínové řezy
Odvodnění Odvodnění -- vzestupná etanolová řadavzestupná etanolová řada
Projasnění Projasnění -- xylenxylen
Prosycení parafínemProsycení parafínem
Zalití do parafínuZalití do parafínu
Krájení na mikrotomu Krájení na mikrotomu (tloušťka řezu 4(tloušťka řezu 4--1010μμm)m)
Rotační x sáňkový mikrotomRotační x sáňkový mikrotom
Napínání a lepení řezů na podložní sklaNapínání a lepení řezů na podložní skla
![Page 11: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/11.jpg)
Prosycení parafinemProsycení parafinem
![Page 12: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/12.jpg)
Výhody a nevýhody parafinových řezůVýhody a nevýhody parafinových řezů
Poměrně tenké řezy, které lze barvit téměř všemi Poměrně tenké řezy, které lze barvit téměř všemi
metodamimetodami
Uchovávání nakrájených řezů na sklíčku a zbytku zalité Uchovávání nakrájených řezů na sklíčku a zbytku zalité
tkáně v parafinovém bloku neomezenou dobutkáně v parafinovém bloku neomezenou dobu
možnost kdykoliv nakrájet další řezy a doplnit barvenímožnost kdykoliv nakrájet další řezy a doplnit barvení
Alkoholová řada i zalití do parafinu ničí enzymy a Alkoholová řada i zalití do parafinu ničí enzymy a
způsobuje vyluhování tukůzpůsobuje vyluhování tuků
Odvodňováním může dojít ke smrštění tkáně a vzniku Odvodňováním může dojít ke smrštění tkáně a vzniku
artefaktůartefaktů
![Page 13: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/13.jpg)
Rotační Rotační
mikrotommikrotom
![Page 14: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/14.jpg)
Barvení parafínových řezů HEBarvení parafínových řezů HE
Odparafinování Odparafinování –– xylen I, xylen II, 100% alk., 96% alk., xylen I, xylen II, 100% alk., 96% alk.,
70% alk., voda 70% alk., voda
Barvení hematoxylinemBarvení hematoxylinem
Praní v tekoucí vodě do zfialověníPraní v tekoucí vodě do zfialovění
Barvení eosinemBarvení eosinem
Oplach ve vodě Oplach ve vodě ––odstranění přebytečného barvivaodstranění přebytečného barviva
Odvodnění vzestupnou alkoholovou řadouOdvodnění vzestupnou alkoholovou řadou
ProjasněníProjasnění
Montování do kanadského balzámu nebo DamaryMontování do kanadského balzámu nebo Damary
![Page 15: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/15.jpg)
HematoxylinHematoxylin--eosineosin
svalovina larvy svalovina larvy Galleria melonellaGalleria melonella
senzila larvy senzila larvy Galleria melonellaGalleria melonella
Při barvení HE jsou jádra buněk modrá
hematoxylinem a cytoplasma růžová
eozinem
![Page 16: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/16.jpg)
Massonův trichrom Massonův trichrom
ModrýModrý Kolagenní vlákna ve tkáni modráKolagenní vlákna ve tkáni modrá
tegument a svalovina larvy tegument a svalovina larvy G. melonellaG. melonella
tegument larvy tegument larvy G. melonellaG. melonella
![Page 17: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/17.jpg)
Massonův trichrom Massonův trichrom
ZelenýZelený Kolagenní vlákna zelenáKolagenní vlákna zelená
Elastická vlákna fialováElastická vlákna fialová
senzyla larvy senzyla larvy G. melonellaG. melonella
svalovina larvy svalovina larvy G. melonellaG. melonella
![Page 18: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/18.jpg)
Hematoxylin Hematoxylin jádra modrá jádra modrá --Bestův karmin Bestův karmin glykogen purpurově červenýglykogen purpurově červený
Gregarina garnhami v caecu sarančete
![Page 19: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/19.jpg)
Polotenké řezyPolotenké řezy
Zalévání do pryskyřice (Spurr Zalévání do pryskyřice (Spurr –– podle autora)podle autora)
Fixace glutaraldehydem nebo osmiemFixace glutaraldehydem nebo osmiem
Odvodnění alkoholová řada + acetonOdvodnění alkoholová řada + aceton
Pryskyřice polymeruje při 60Pryskyřice polymeruje při 60°°CC
Krájení na tzv. polotenké řezy (500nm Krájení na tzv. polotenké řezy (500nm –– 2 2 µµm)m)
Barvení Barvení -- toluidinová modřtoluidinová modř
Nepřikrývají se krycím sklemNepřikrývají se krycím sklem
Po kontrole na světelném mikroskopu se ze vzorku vybere místo, Po kontrole na světelném mikroskopu se ze vzorku vybere místo,
které je zajímavé a ze kterého se budou krájet ultratenké řezy pro které je zajímavé a ze kterého se budou krájet ultratenké řezy pro
transmisní elektronovou mikroskopiitransmisní elektronovou mikroskopii
Řez hlavou Řez hlavou Eudiplozoon nipponicumEudiplozoon nipponicum
![Page 20: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/20.jpg)
Krájení zmrazených tkáníKrájení zmrazených tkání
Zmrazovací mikrotom, kryostatZmrazovací mikrotom, kryostat
Použití: Použití:
Imunohistochemie Imunohistochemie
Barvení tukůBarvení tuků
Průkaz enzymůPrůkaz enzymů
Peroperační biopsiePeroperační biopsie
![Page 21: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/21.jpg)
![Page 22: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/22.jpg)
Výhody a nevýhody zmrazených řezůVýhody a nevýhody zmrazených řezů
Rychlé zhotoveníRychlé zhotovení
Uchování enzymů a tuků pro jejich průkaz (histochemie)Uchování enzymů a tuků pro jejich průkaz (histochemie)
Řezy jsou hodně silnéŘezy jsou hodně silné
Nelze uchovávat nezpracované tkáně k dalšímu dokrájeníNelze uchovávat nezpracované tkáně k dalšímu dokrájení
![Page 23: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/23.jpg)
Průkaz melaninuPrůkaz melaninu (pigment ve vnější kostře hmyzu)(pigment ve vnější kostře hmyzu)
((Lillie’s ferricLillie’s ferric--ferricyanide melanin ferricyanide melanin
staining method with or without staining method with or without
acetocarmine counterstainacetocarmine counterstain))
larva larva G. melonellaG. melonella
parazitovaná kuklicí parazitovaná kuklicí
![Page 24: Histologické - Masaryk University · histologie je nauka o mikroskopické skladbě organismu zkoumá skladbu těla živočišného i rostlinného, důležitá v humánní medicíně](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022040719/5e28cbd63c5eec18176e72e2/html5/thumbnails/24.jpg)
Značení Značení
a a
fluorescenční fluorescenční
mikroskopiemikroskopie
Gregarina polymorphaGregarina polymorpha
Mattesia disporaMattesia dispora