hromatografija u kontroli lekova _m.zecevic.ppt
DESCRIPTION
Hromatografija u kontroli lekovaTRANSCRIPT
![Page 1: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/1.jpg)
1
HHROMATOGRAFIJA ROMATOGRAFIJA U ANALIZI I KONTROLI U ANALIZI I KONTROLI
LEKOVALEKOVA
HHROMATOGRAFIJA ROMATOGRAFIJA U ANALIZI I KONTROLI U ANALIZI I KONTROLI
LEKOVALEKOVAMira L. ZečevićMira L. Zečević
![Page 2: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/2.jpg)
2
Separacione metode analize
![Page 3: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/3.jpg)
3
Razdvajanje
KomponenteSmeša
Analitička Identifikacija Određivanje Preparativna Koncentrisanje Prečišćavanje
Šta je hromatografija?
Hromatografija je fizičko-hemijska metoda separaciona pre svega, a sliži u ....
cilj
![Page 4: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/4.jpg)
4
… razdvajanje komponenata se
postiže procesom stalne raspodele
molekula ili jona između pokretne
(mobilne) i neopokretne (stac.) faze.
![Page 5: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/5.jpg)
5
prema fizičkoj prirodi mobilne i stacionarne faze,
prema obliku stacionarne faze,
prema mehanizmu razdvajanja i
prema tehnici rada
Podela hromatografskih metoda
![Page 6: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/6.jpg)
6
Prema fizičkoj prirodi mobilne i stacionarne faze
stacionarna faza mobilna faza
čvrsta tečna
čvrsta gas
tečna tečna
tečna gas
![Page 7: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/7.jpg)
7
… nezavisno od agregatnog stanja pojedinih faza
ili prirode sila koje prouzrokuju razdvajanje…
a) kolonska hr. (gasna, tečna i hromatografija sa
jonskim izmenjivačima)
b) planarna hr. (papirna, tankoslojna i elektroforeza)
Prema obliku stacionarne faze
![Page 8: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/8.jpg)
8
Hromatografija se zasniva na različitim
ravnotežnim procesima (mehanizmima):
adsorpciji (adsorpciona hr.)
različitoj rastvorljivosti (particiona ili podeona hr.)
jonskoj izmeni (jonoizmenjivačka hr.) i
penetraciji kroz pore razl. vel. (gel ekskluziona hr.)
Prema mehanizmima razdvajanja:
![Page 9: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/9.jpg)
9
Adsorpcija - interakcija ili vezivanje komponenti
uzorka na čvrstoj površini (na aktivnim mestima).
adsorpcija desorpcija
raspodela (razdvajanje)
Apsorpcija-Particija-(raspodela)-proces
raspodeljivanja, pri čemu komp. uzorka grade
homogene rastvore u svakoj od faza.
![Page 10: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/10.jpg)
10
Jonska izmena - ravnotežna reakcija
stehiometrijske izmene jona između jona
fiksiranih za smolu i jona u rastvoru.
Penetracija kroz pore - ekskluzija
stac. faza je čvrsta porozna supstanca, najčešće gel
solvatisani molekuli većeg promera od pora ne
penetriraju kroz gel, a manji penetriraju
brzinom zavisnom od veličine
(gel-filtraciona ili gel-ekskluziona hr.)
![Page 11: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/11.jpg)
11
hromatografija eluiranjem
Eluacija – proces u kome mobilna faza ispira sastojke
sa stacionarne faze.
Eluens – rastvarač (ili smeša) koji nosi komponente
smeše kroz stacionarnu fazu.
Eluat – rastvor koji izlazi iz kolone.
Prema tehnici rada
![Page 12: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/12.jpg)
12
hromatografija istiskivanjem
… na stacionarnu fazu se nanosi rastvor uzorka, a zatim
dodaje rastvor pogodne supstance koja istiskuje
komponente uzorka i tako ubrzava njihovo kretanje.
frontalna analiza
… na stacionarnu fazu se stalno dodaje rastvor
uzorka tako da se samo komponenta koja se najbrže
kreće dobija u čistom stanju.
![Page 13: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/13.jpg)
13
Adsorpciona hromatografija
• Tečno-čvrsta (hrom. na koloni i TLC)
• Gasno-čvrsta (GC)• Jonoizmenjivačka• Gel filtracija• HPLC
![Page 14: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/14.jpg)
14
Adsorbciona hromatografija- Koeficijent
raspodele
Koeficijent raspodele
m
s
c
cK
cs – količina adsorbovane supst. po 1g stacionarne faze cm – koncentracija supstance u mobilnoj fazi
Linearna adsorpcina izoterma I dinamička ravnoteža
![Page 15: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/15.jpg)
15
u idealnom slučaju K je const. u širokom opsegu
koncentracija – linearna hr. - Slika 1 (b) – simetričan pik
u praksi linearnost postoji samo sa nižim koncentracijama
supst. Nelinearnost K - Slika 1 (a) i (c)
(a) (b) (c)
k-nije konstantan: Cm›Cs, asimet.pik
k-nije konstantan
Cs›Cm, asimet.pik
k- konstantan
Cm=Cs
![Page 16: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/16.jpg)
16
Kolonska hromatografija
tečna hromatografija stac. f. smeštena u cevi (koloni),
primenjena tehnika eluiranje
kretanje mobilne faze: pod uticajem zemljine teže
ili pod p
preparativna i analitička - kolone
![Page 17: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/17.jpg)
17
Slika 2 - (a) Razdvajanje
smeše sastojaka A i B
eluacionom hrom. na koloni
(b) Izlazni zapis odgovora
detektora na različitim
stupnjevima eluacije
brzina kretanja komponenti = f(koeficijenti raspodele)
![Page 18: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/18.jpg)
18
U osnovi hromatografskog razdvajanja je
razlika u osobinama komponenti smeše što
uslovljava kretanje različitim brzinama i
različitu raspodelu u stacionarnoj i mobilnoj
fazi.
... po kinetičkoj teoriji!
![Page 19: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/19.jpg)
19
• K = 1, (50% supst. U mf i 50% supst. U sf.
• K =9, 90% supst. U sf. A 10% u mf.
• Supstanca sa većim K se zadržava duže u koloni
![Page 20: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/20.jpg)
20
Da bi se supst. uspešno razdvajale neophodna je
dovoljna razlika u K dve supstance koji pokazuje
afinitet supstanci prema stacionarnoj fazi!
stepen adsorpcije zavisi od gustine i jačine aktivnih
mesta na površini adsorbensa kao i od veličine
površine
adsorpcija desorpcija
dinamička ravnoteža - raspodela između faza
![Page 21: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/21.jpg)
21
Često se sve supstance ne mogu eluirati jednim
rastvaračem; drugi rastvarač ili smeše povećavaju
snagu eluacije!
razdvajanje (zone ili trake)..…analiza - detekcija
vizuelno, IR, VIS, UV spektrofotometrija, MS, NMR
intenzitet signala = f(koncentracija komponente)
povećanje pređenog puta bolje razdvajanje
povećanje pređenog puta širenje traka
(ne može se izbeći!)
![Page 22: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/22.jpg)
22
Protok m.f. pospešuje razdvajanje traka i ono je brže od
njihovog širenja. Komponente se uspešno razdvajaju, pod
uslovom da je kolona dovoljno duga, tj. da ima dovoljan
broj teorijskih platoa. “Sposobnost” kolone da daje uske i oštre pikova
efikasnost kolone
broja teorijskih platoa (N)broja teorijskih platoa (N)visina ekvivalentna teorijskom platou (HEPT) visina ekvivalentna teorijskom platou (HEPT) ili (H)ili (H)redukovana visina hredukovana visina hasimetrija pika (As)asimetrija pika (As)
![Page 23: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/23.jpg)
23
a površina pika kvantifikacija
kalibraciona kriva za svaku komponentu
sastav standarda približan sastavu uzorka
kontrolisani eksperimentalni uslovi
sertifikovani standardni materijali
metoda unutrašnjeg standarda
položaj pika detekcija -identifikacija
![Page 24: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/24.jpg)
24
Podeona hromatografija
• Tečno-tečna (hrom. na papiru,TLC)
• HPLC (na koloni)• GC
![Page 25: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/25.jpg)
25
Podeona hromatografija –
koeficijent raspodele• Razdvajanje na osnovu
različite rastvorljivosti komponenata smeše u dve tečne faze koje se ne mešaju - definisano podeonim koeficijentom
• Efikasnost i brzina razdvajanja zavisi od broja teorijskih platoa sf.
![Page 26: Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt](https://reader031.vdocuments.pub/reader031/viewer/2022012309/55cf9b0e550346d033a48e79/html5/thumbnails/26.jpg)
26
• Mehanizam interakcije između sf i komponente nije sasvim definisan.
• Moguće su sve međumolekulske sile: Van Der Waalsove, dipol-dipol, jon-jon, jon-dipol, H-veza, što znači da je osim različite rastvorljivosti prisutan i
• proces adsorpcije.