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??

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레트로바이러스를 이용한 유전자 도입

제품명 제조사 TaKaRa Code 용량 가격pDON-AI DNA TKR 3650 20 ㎍ 343,000원

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??

*시판되는 패키징 세포도 있음

** 복제능력을 결손시킨 감염성 virus

LTR Ψ 도입유전자 LTR

숙주염색체빈 입자

패키징(Packaging) 세포*

transfection

삽입

전사

바이러스 패키징

바이러스**바이러스 생산세포

integration

(레트로바이러스 (retrovirus) 벡터의 유전자 도입)

도입유전자를 갖는 레트로바이러스

벡터는 염색체에 삽입된 유전자를

발현하지만, 새로운 바이러스 입자

는 형성되지 않는다.

표적세포

도입유전자의

발현

레트로바이러스(retrovirus) 관련

■ 특징표적세포에 목적유전자를 도입하여 발현시키는 방법에는 electroporation

등의 물리적 방법과 DEAE-dextran이나 리포좀 (liposome), calcium-

phosphate 등을 이용하는 화학적 방법이 있다. 이 외에도 바이러스 벡터를

이용한 외래 유전자의 고효율 도입법 연구도 진행되고 있으며, 현재 사용되

고 있는 대표적인 바이러스 벡터에는 레트로바이러스, 아데노바이러스

(adenovirus), adenovirus associated virus, vaccinia virus 등이 있다. 특히

레트로바이러스 벡터를 이용한 유전자 도입에는 다음과 같은 장점이 있다.

1) 도입유전자가 염색체에 재조합되므로 장기간 안정적으로 유전자를 발현

시킬 수 있다. 반면, 도입유전자가 염색체에 삽입되지 못한 경우 세포 내

에서 분해되거나 세포분열과정에서 희석되어 버리므로 유전자 발현이 일

관성 있게 지속될 수 없다. 레트로바이러스 벡터는 염색체에 재조합되므

로 분열 후에도 안정적으로 전달된다.

2) 레트로바이러스 이외의 다른 바이러스 벡터는 제작과정이 매우 복합하지

만 레트로바이러스는 비교적 쉽게 바이러스 벡터를 제작할 수 있다.

3) 증식기에 있는 많은 세포종에 유전자를 도입할 수 있다. 특히, 물리 · 화

학적 방법으로는 유전자 도입이 어려웠던 조혈모세포에 RetroNectin

(Fibronectin Fragment) (TaKaRa Code T100A/B)을 이용함으로써 레트

로바이러스 벡터를 매개로 조혈모세포에 유전자를 고효율로 도입할 수

있게 되었다.

■ 레트로바이러스(retrovirus) 벡터 pDON-AI DNA를 이용한 유전자 도입 원리

ψ 서열을 제거한 프로바이러스 DNA (helper plasmid)가 도입된 세포에서

는 프로바이러스(provirus)로부터 생성된 RNA 게놈이 바이러스 입자로 들

어가지 않으므로 빈 바이러스 입자가 만들어진다. 이러한 세포는 패키징

(packaging) 세포라고 불린다. 바이러스 게놈 DNA 양말단의 LTR 과 Ψ 서

열만 포함하는 벡터에 원하는 유전자를 삽입한 후 이러한 패키징 세포에 도

입하면, 벡터가 숙주 염색체내로 삽입 (integration)되어 전사에 의해 생긴 벡

터 RNA 게놈(Ψ 배열을 포함)이 바이러스 입자 내에 받아들여져서 바이러

스 입자가 생성된다. 이렇게 제작된 바이러스 생산 세포주(제작 세포;

producer cell)는 감염성의 바이러스 입자를 생산해서 배양액으로 방출한다.

배양액에 존재하는 고역가의 재조합 레트로바이러스를 표적 세포에 감염시

킴으로써 원하는 유전자를 쉽게 도입할 수 있다. 한편, 재조합 바이러스는

복제 능력이 없기 때문에 helper virus와 함께 존재하지 않으면 감염 표적 세

포로부터 바이러스 입자가 새로 만들어지지 않는다. pDON-AI DNA는 종래

의 벡터와는 달리 5’ 방향 LTR의 U3영역에 LTR보다 프로모터 활성이 강한

HCMV의 IE 프로모터를 가지기 때문에 벡터 RNA 게놈의 전사 효율이 높아

고역가의 재조합 레트로바이러스를 얻을 수 있다.

재조합 레트로바이러스(retrovirus) 벡터 제작과 도입 유전자의 발현

■ 사용상의 주의pDON-5-DNA, pMEI-5 DNA를 사용시 다음 사항에 주의하여 주십시오.

본 제품은 연구 목적 이외에는 사용할 수 없습니다. 인간, 동물의 의료, 임상

진단 등에는 사용하지 않도록 주의하여 주십시오. (본 제품에 의해 얻어진

생물재료를 제3자에게 양도할 수 없습니다.) 또, 식품, 화장품, 생활용품 등

으로 사용하지 마십시오.

본 제품을 연구 목적 이외에 사용하는 경우에는 사전에 당사에 문의하십시

오. 본 레트로바이러스 벡터에 의해 생산되는 바이러스 상청 삽입 조각에는

위험한 바이러스가 포함될 위험이 있기 때문에 재조합 레트로바이러스의

생산과 취급에는 적절한 조치를 취할 필요가 있습니다. 이용시 관할 부처 및

조직 안전위원회가 정한 재조합 DNA실험 지침을 따라 주십시오.

본 제품의 사용으로 인한 어떠한 사고, 손해에 대해서도 당사에서는 책임을

지지 않으므로 양해 후 사용해 주십시오.

■ 보존 -20℃

■ 형상 10 mM Tris-HCl (pH8.0)

1 mM EDTA

■ 길이pMEI-5 Neo DNA ：5,820 bp

pMEI-5 DNA ：4,689 bp

■License Notice : [L21]

■ 제품설명pMEI-5 DNA는 고발현 유전자 도입용 retrovirus vector이다. 본 vector는

packaging cell line에 transfection시켜 일시적 혹은 genome에 integration되어

바이러스 packaging signal(ψ), 목적 유전자, selection marker를 포함한 전사 산

물을 안정적으로 발현시킬 수 있다. LTR과 packaging signal(ψ), 이외의 MoMLV

유래 유전자(gag, pol, env)를 포함하지 않고 있으며, splicing 능력이 높은 intron

을 이용하여 높은 전사능을 갖고 있다는 것이 특징이다. 본 vector를 이용하면,

pDON-AI-2 series에 비해 약 2~8배 높은 유전자 발현이 가능하므로, 도입 유전

자를 고발현하고자 할 때 유용하다. pMEI-5 Neo DNA (TaKaRa Code 3655)는

selection marker로 neomycin resistance gene을 가지고 있다.

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pMEI-5 DNA

제품명 제조사 TaKaRa Code 용량 가격pMEI-5 Neo DNA TKR 3655 20 ㎍ 312,000원

pMEI-5 DNA TKR 3656 20 ㎍ 312,000원

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??

pDON-5 DNA 고효율, 고발현 유전자 도입을 위한 레트로바이러스 벡터

제품명 제조사 TaKaRa Code 용량 가격pDON-5 Neo DNA TKR 3657 20 ㎍ 600,000원

pDON-5 DNA TKR 3658 20 ㎍ 600,000원

pMEI-5 DNA Vector의 구조

■ 보존 -20℃

■ 제품설명본 벡터는 LTR과 패키징(packaging) 시그널 (Ψ 서열) 이외의 MoMLV 유래

유전자 (gag, pol, env)를 포함하지 않고, 클로닝사이트 상부에 splicing 능력

이 높은 인간 EF1α유래의 인트론 (intron)을 포함하여 목적유전자를 높은

효율로 발현시키는 것이 특징이다. 또한 5’ LTR의 U3 영역이 보다 강력한

cytomegalovirus 유래의 프로모터로 치환되어 있어 고역가의 재조합 레트

로바이러스 (retrovirus)를 얻을 수 있다. 따라서 본 벡터는 pMEI-5시리즈보

다 고역가의 재조합 레트로바이러스 (retrovirus)를 얻을 수 있고, pDON-AI-

2 시리즈에 비해 높은 유전자 발현을 기대할 수 있다. 또한, pDON-5 Neo

DNA (TaKaRa Code 3657)은 선별마커로 네오마이신 (neomycin) 내성 유

전자를 가지고 있다.

■ 형상10 mM Tris-HCl (pH8.0) 1 mM EDTA

■ 길이 pDON-5 Neo DNA : 5,828 bp pDON-5 DNA : 4,697 bp

pDON-5 Neo DNA의 구조

pDON-5 Neo5828 bp

HCMV

MLV R MLV U5

Intron + SA

MCS

Minimal

Neo

MLV U3MLV R

MLV U5

Amp

r

IE promoter

SV40 promoter

r

PmaCI (1370)Apa I (1375)

Not I (1381)Sac II (1379)

Bgl II (1389)Cla I (1395)Bam HI (1401)Sal I (1407)Hpa I (1413)

5' LTR

3' LTR

SD

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Retrovirus Packaging Kit

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??

제품명 제조사 TaKaRa Code 용량 가격Retrovirus Packaging Kit Eco TKR 6160 10 회 317,000원

Retrovirus Packaging Kit Ampho TKR 6161 10 회 396,000원

■제품설명본 제품은 목적 유전자를 도입한 재조합 retrovirus vector plasmid 2종류와

packaging vector를 인산 칼슘법에 의해 동시에 세포로 도입하여 고역가 재조

합 retrovirus 입자를 생산할 수 있는 kit이다.

Kit에는 packaging vector로 gag-pol 발현 vector와 env 발현 vector (ecotropic

또는 amphotropic)가 포함되어 있어 rat, mouse 세포에 감염 가능한 ecotropic

virus를 생산하는 Retrovirus Packaging Kit Eco와 다수의 포유동물세포에 감염

가능한 amphotropic virus를 생산하는 Retrovirus Packaging Kit Ampho 두 종

류가 있다. Ψ(packaging signal)와 LTR 서열을 가지는 재조합 retrovirus vector

본 plasmid와 packaging vector 그리고 첨부된 transfection 시약을 이용하면

293 세포 등에 함께 도입하여 48 시간 후 일과성으로 고역가(105~107 cfu/ ml)

의 재조합 virus 입자가 생산할 수 있다.

Packaging vector는 virus 입자 형성과 복제에 필요한 retrovirus의 구조 유전자

인 gag, pol 및 env 이외에는 retrovirus 유래의 서열을 전혀 포함하지 않으므로

재조합 retrovirus vector와 재조합에 의해 자기복제능력을 가진 retrovirus의

생산 가능성이 매우 낮다.

■사용상의 주의본 제품을 이용한 실험에 있어서는 아래의 사항을 주의하여 주시기 바랍니다.

1. 본 제품은 연구목적 이외에는 사용할 수 없습니다. 사람, 동물의 치료 및 임상

진단에는 사용하지 않도록 주의하여 주시기 바랍니다. (또한 본 제품에 의해

획득한 생물재료는 제 3자에게 양도할 수 없습니다.) 또한, 식품, 화장품,

가정용품 등으로 사용할 수 없습니다.

2. 본 제품을 연구목적 이외에 사용하는 경우에는 사전에 당사로 문의하여 주시

기 바랍니다.

3. 본 retrovirus로 생성된 virus 상층은 삽입단편에 의한 위험한 바이러스가

함유되어 있으므로 재조합 retrovirus 생산과 취급에는 적절한 처리를 취해야

합니다. 사용시에는 관할 관청에서 정한 재조합 DNA 실험지침에 따라 실험

하시기 바랍니다.

4. 본 제품의 사용과 관련된 사고, 손해에 대해서 당사에서 책임을 지지 않으므

로 주의하여 사용하시기 바랍니다.

■내용pGP Vector (1 ㎍/ ㎕) 50 ㎕

pE-eco (또는 ampho) Vector (1 ㎍/ ㎕) 50 ㎕

Transfection Buffer 500 ㎕ × 10

2 M CaCl2 620 ㎕

25 mM Chloroquine 40 ㎕

■보존 -20℃ (단, kit 내용물 중 *는 융해 후 4℃에 보관)

재조합 Retrovirus의 제작 개요

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Human iPS Cell Generation™ Vector Set인간 iPS세포 유도용 retrovirus vector set

제품명 제조사 TaKaRa Code 용량 가격Human iPS Cell Generation Vector Set TKR 3670 각 5 ㎍ 2,499,000원

■ 내용1. pDON-5 OCT3/4-SOX2 DNA (0.5 ㎍/㎕) 10 ㎕

2. pDON-5 KLF4 DNA (0.5 ㎍/㎕) 10 ㎕

3. pDON-5 LIN28-NANOG DNA (0.5 ㎍/㎕) 10 ㎕

■ 보존 -20℃

■ 제품설명본 제품은 인간iPS세포 유도용 재조합 레트로바이러스(retrovirus) 벡터 제

작을 위한 플라스미드 DNA 세트이다. 고효율, 고발현 유전자도입용 레트로

바이러스 벡터인 pDON-5 DNA (TaKaRa Code 3658)에 iPS세포 유도용 유

전자인 OCT3/4와 SOX2*, KLF4, LIN28과 NANOG*이 각각 탑재되어 있다.

각 벡터와 Retrovirus Packaging Kit Ampho (TaKaRa Code 6161)에 포함

되는 pGP Vector와 pE-ampho Vector를 재조합 레트로바이러스 제작용

G3T-hi 세포(TaKaRa Code 6163)에 모두 도입하여 iPS 세포유도용 재조합

레트로바이러스 벡터를 제작할 수 있다. 이렇게 제작된 재조합 레트로바이

러스는 RetroNectin (Recombinant Human Fibronectin Fragment)

(TaKaRa Code T100A/B)에 대한 친화성이 높기 때문에, 표적 세포에 유전

자 도입시 RetroNectin로 코팅된 세포배양 접시 (petri dish)나 플레이트

(plate)를 이용하면 유전자도입과 iPS 세포유도 효율을 높일 수 있다.

* 2개의 유전자는 단일 mRNA로서 전사되고 SOX2 (혹은 NANOG)은 IRES를 통

해서 OCT3/4 (혹은 LIN28)과는 독립적으로 번역된다.

IRES : Internal Ribosome Entry Site; mRNA내부의 ribosome 진입 사이트

■ 형상10 mM Tris-HCl, pH8.0 1 mM EDTA

■ 길이 pDON-5 OCT3/4-SOX2 DNA : 7,321 bp

pDON-5 KLF4 DNA : 6,092 bp

pDON-5 LIN28-NANOG DNA : 6,838 bp

각 벡터의 구조

*( )의 제한효소 site는 1곳만 절단되지 않습니다.

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Retrovirus Titer Set (for Real Time PCR)바이러스 상등액에서 직접 RNA titer 측정

제품명 제조사 TaKaRa Code 용량 가격Retrovirus Titer Set (for Real Time PCR) TKR 6166 100 회 336,000원

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Provirus Copy Number Detection Primer Set, Human (for Real Time PCR)

Cycling probe로 신속하게 provirus copy수를 측정

제품명 제조사 TaKaRa Code 용량 가격Provirus Copy Number Detection Primer Set, Human (for Real Time PCR) TKR 6167 100 회 360,000원

■ 내용 (100 반응 분 ; 25㎕ 반응계*1)Forward Titer Primer FRT-1 (10 pmol/㎕) 50 ㎕

Reverse Titer primer RRT-1 (10 pmol/㎕) 50 ㎕

RNA Control Template (5 × 108 copies/㎕) 10 ㎕

EASY Dilution (Real Time PCR 용) 1 ㎖ × 2

DNase I (RNase Free) (5 U/㎕) 40 ㎕

10 × DNase I Buffer 50 ㎕

RNase Inhibitor (porcine liver) (40 U/㎕) 10 ㎕ * 1 Real Time RT- PCR 100회 그리고 DNase I 처리 20회임.

■ 보존 -20 ℃RNA Control Template는 반복적인 동결 융해에 의한 분해를 막기 위하여

소량 분주 후 Deep freezer (-70∼-80℃)에서 저장하는 것을 추천합니다.

■ 제품설명본 제품은 Real Time RT-PCR을 이용하여 MLV (murine leukemia virus) 유

래 레트로바이러스 벡터의 RNA 게놈 양을 측정하여 역가(RNA titer)을 산출

하는 제품이다.

본 제품을 One Step SYBR PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time)

(TaKaRa Code RR066A/RR086A)과 함께 사용하여 바이러스 상등액에서

직접 RNA titer를 측정할 수 있고, 약 4시간 안에 결과를 얻을 수 있다. 또한,

MLV의 패키징 시그널(packaging signal)부분을 증폭 대상으로 하고 있어 거

의 모든 MLV 유래 레트로바이러스의 역가(RNA titer)를 측정할 수 있다.

레트로바이러스의 감염역가를 측정할 경우 일반적으로 표적 세포에 레트로

바이러스를 감염시키고 형광이나 약제내성 등을 이용하여 감염효율을 측정

해 역가 (생물학적 titer)을 산출하는 방법이 이용된다. 이 방법은 수일이 소

요되며, 마커유전자나 약제내성유전자가 포함되지 않은 레트로바이러스 벡

터에는 적용할 수 없다. 또한 생물학적 titer를 기준으로 MOI (multiplicity of

infection)를 측정해 세포에 감염시킬 경우, 역가 측정에 며칠이 소요되므로

일단 바이러스 상등액을 동결 보존할 필요가 있고, 동결 융해에 의해 바이러

스 역가가 저하될 가능성이 있으므로 초기 측정값과는 다른 MOI의 바이러

스가 실험에 이용될 수 있다.

본 제품은 레트로바이러스의 RNA 게놈양을 측정하기 때문에 마커유전자나

약제내성유전자와는 관계없이 역가를 측정할 수 있다. 또한 약 4시간 만에

측정 결과를 얻을 수 있으므로 바이러스 상등액을 동결하지 않고 원하는

MOI로 감염시킬 수 있다. 함께 사용하는 One Step SYBR PrimeScript RT-

PCR Kit (Perfect Real Time) 은 SYBR Green I 검출에 의한 1 step Real

Time RT-PCR 키트이다. 신장성이 뛰어나 단시간에 효율적으로 cDNA 합

성이 가능한 역전사 효소 PrimeScript 와 다카라의 대표적인 PCR 효소인

TaKaRa Ex Taq HS를 이용하여 1 step RT-PCR에 최적화하고 있으며 안정

적으로 1 step real time RT-PCR을 실시할 수 있다.

■ 이외에 필요한 시약One Step SYBR PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (TaKaRa

Code RR066A) 또는 One Step SYBR PrimeScript RT-PCR Kit II (Perfect

Real Time) (TaKaRa Code RR086A)

■ 내용 (25 ㎕반응, 100회)

1. Retrovirus Primer Mix for Provirus (각 10 pmol/㎕) 50 ㎕

2. Retrovirus Probe for Provirus (10 pmol/㎕)* 50 ㎕

3. hIFNg Primer Mix for Provirus, Human (각 10 pmol/㎕) 50 ㎕

4. hIFNg Probe for Provirus, Human (10 pmol/㎕)* 50 ㎕

5. DNA Control Template for Provirus, Human (200 pg/㎕) 15 ㎕

6. EASY Dilution (Real Time PCR 용) 1 ㎖×4

*형광 표식 probe (FAM)는 차광한다.

■ 보존 -20 ℃

■ 제품설명Provirus Copy Number Detection Primer Set, Human for (Real Time PCR)

은 MLV (murine leukemia virus) 유래의 레트로바이러스 (retrovirus) 벡터를

매개로 인간 정상세포*에 유전자를 도입할 때, Real Time PCR법으로

provirus copy 수를 측정하는 제품이다. 프로바이러스 (provirus)는 레트로바

이러스 게놈이 숙주세포의 게놈에 포함된 상태이며, 세포내에서 레트로바이

러스 게놈은 숙주의 DNA 유전자에 삽입되어 provirus가 된다.

본 제품은 CycleavePCR Core Kit (TaKaRa Code CY501)와 함께 사용하여

유전자가 도입된 인간 정상세포의 게놈 DNA로부터 provirus copy 수를 측

정할 수 있다. 또한 MLV의 패키징 시그널 (packaging signal) 부분을 증폭

대상으로 하고 있어 거의 모든 MLV 유래의 레트로바이러스 벡터를 매개로

유전자 도입한 인간 정상세포의 provirus copy 수를 측정할 수 있다.

Provirus copy 수를 측정하는 방법으로 유전자 도입한 세포에서 Southern

blotting 으로 평균 provirus copy 수를 산출하는 방법이 있지만, 평균

provirus copy 수를 산출하기 위해서는 다수 클론으로 Southern blotting 해

야하기 때문에 많은 노력과 시간이 필요하다. 본 제품을 사용하면 세포를 복

제화하지 않고 편리하게 평균 provirus copy 수를 산출할 수 있다. 함께 사

용하는 CycleavePCR Core Kit는 특이성이 높은 cycling probe를 위한 Real

Time PCR 키트이며 게놈 DNA의 백그라운드를 억제하며 타겟을 정확하고

간편하게 정량할 수 있다.

■ 이외에 필요한 시약CycleavePCR Core Kit (TaKaRa Code CY501)

[주의]

본 set는 유전자가 도입된 인간 세포용으로 다른 세포에는 사용할 수 없습니

다. 또한, 정상세포 등 상염색체가 이배체인 것에 한정합니다.

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RetroNectinⓇRecombinant Human Fibronectin Fragment

RetroNectinⓇ DishRetroNectin Pre-coated Dish, 35 mmф

제품명 제조사 TaKaRa Code 용량 가격RetroNectin Dish TKR T110A 10 dishes 528,000원

제품명 제조사 TaKaRa Code 용량 가격RetroNectin TKR T100A 0.5 mg 215,000원

RetroNectin TKR T100B 2.5 mg 660,000원

■제품설명RetroNectin을 35 mm dish에 미리 coating한 것이다. Coating 조작이 필요없

고 일정한 유전자 도입 효율을 얻을 수 있다.

■License Notice : [L9, M62]

■보존 4℃

RetroNectin coating법은 바이러스 상청액을 이용하여 감염시킴으로써 통상

50~70%의 효율로 유전자를 도입할 수 있다. 이처럼 RetroNectin을 이용함으로

써 producer 세포와의 공배양, polycation의 첨가 및 성장인자나 stroma 세포의

존재하에서 장기간 배양 (in vitro)하지 않고도 유전자를 도입할 수 있다.

■Plate의 CoatingRetroNectin은 25~100 ㎍/ml의 농도로 5~20 ㎍/cm2가 되도록 plate에

coating한다.

지름 3.5 cm의 dish (10 cm2)인 경우에는 1 well 당 2 ml의 RetroNectin 용액

을 첨가하면 된다. 따라서 1 vial (0.5 mg protein)로 2~10 dishes를 코팅할 수

있다.

■License Notice : [L9, M62]

■형상동결건조품

[CH-296 용액 (50 mM 탄산나트륨 완충액 (pH10.0))을 여과멸균처리 후 동결

건조]

■분자량 62,613 (아미노산서열로부터)

■보존 -20℃ 이하 (용해 후 동결융해의 반복은 피한다)

■순도 SDS capillary 전기영동에서 순도 90% 이상

■기원E. coli expressing human fibronectin fragment CH-296

■제품설명RetroNectin, Recombinant Human Fibronectin CH-296은 human fibronectin

의 cell-binding domain (Type III repeat, 8, 9, 10), heparin-binding domain II

(Type III repeat, 12, 13, 14) 및 CS I 부위 (IIICS의 N말단 25잔기)를 함유하는

분자량 약 63,000(574 아미노산)의 재조합 단백질이다. Retrovirus vector를 매

개로 하여 포유동물세포에 유전자를 도입할 때 배양기의 바닥에 RetroNectin

을 coating 함으로써 그 도입효율을 비약적으로 향상시킬 수 있다. 세포는 주

로 각각의 VLA-4 및 VLA-5의 ligand인 CS-I, 부위와 cell binding domain에

결합하고 virus vector는 heparin-binding domain II에 결합함으로써

RetroNectin상에 함께 배치된다. 따라서 국소적으로 양자의 농도가 높아져 유

전자의 도입이 촉진된다.

■제품설명본 제품은 재조합 아데노바이러스 제작법으로서 「COS-TPC법」뿐 아니라 「Full

length DNA 도입법」으로 재조합 아데노바이러스 를 제작할 수 있는 kit이다.

「COS-TPC법」은 동경대에서 개발된 아데노바이러스 제작 방법으로 고효율로

재조합 아데노바이러스 제작이 가능한 Adenovirus Expression Vector Kit

(TaKaRa Code 6150；현재 종매)로 출시되어 지금까지 많은 연구자에게 호평

을 얻어 왔다. Adenovirus Expression Vector Kit (Dual Version)는 기존의

Adenovirus Expression Vector Kit를 한층 개선 시킨 제품으로 「COS-TPC법」

뿐 아니라 「Full length DNA 도입법」에서도 재조합 adenovirus 제작이 가능해

보다 경제적이며 간편하게 재조합 아데노바이러스 제작이 가능하다.

본 키트는 다음과 같은 특징을 가지고 있다.

•코스미드 벡터로 「Full length DNA 도입법」으로 재조합 아데노바이러스를 저

가로 제작할 수 있다.

•목적 유전자를 코스미드 벡터에 직접 클로닝 할 수 있어 shuttle vector로 클

론화할 필요가 없다.

•pAxCawtit는 강력한 프로모터인 CAG 프로모터를 갖고 있어 목적 유전자를

클로닝 하는 것으로 세포 내에서 고 발현시킬 수 있다.

•Adenovirus genome DNA-TPC (TaKaRa Code 6171)를 이용한 「COS-TPC

법」으로 고효율로 재조합 바이러스를 제작할 수 있다.

■ 사용상의 주의•사용 시 재조합 DNA 실험지침에 따라 실시해야 한다.

•임상 목적 및 생체 외 진단에는 사용할 수 없다.

•본 키트는 293 세포 내에서 포유동물에 감염성을 갖는 재조합 바이러스 입자

를 생산한다. 이 재조합 바이러스는 293 세포 이외에서는 증식할 수 없지만

만일 피부, 기도 등에 부착한 경우 높은 효율로 세포 내에 침투하여 목적 유전

자를 발현한다. 흡입이나 부착을 방지하기 위하여 반드시 안전 캐비넷을 사용

한다.

•본 제품을 사용할 때는 유전자 공학과 세포배양에 관한 기본적인 기술을 갖고

있어야 한다.

•본 제품을 사용하여 발생하는 사고, 손해에 관하여 당사에서는 책임을 지지

않으므로 주의하여 사용한다.

•본 제품을 공업용 목적으로 사용할 경우에는 개별 라이센스 계약이 필요하다.

■License Notice

TaKaRa Code 6170 : [L28, L30, L31]

TaKaRa Code 6171 : [L28]

■내용

Adenovirus Expression Vector Kit (Dual Version)

Cosmid Vector pAxcwit (0.3 ㎍/㎕) 25 ㎕

Cosmid Vector pAxCAwtit (0.3 ㎍/㎕) 25 ㎕

제한효소 Smi I (Swa I) (10 U/㎕) 20 ㎕

10 × H Buffer 100 ㎕

제한효소 BspT104 I (10 U/㎕) 30 ㎕

10× L Buffer 100 ㎕

DNA Dissolution Buffer 50 ㎕

Ligation Solution 50 ㎕

10× TNE 1 ml×2

Proteinase K (20 mg/ml) 200 ㎕

10% SDS 200 ㎕

Control Cosmid pAxCAiLacZit* (0.3 ㎍/㎕) 50 ㎕

* pAxCAwtit 에 β-gal유전자를 도입한 것

I-8

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Adenovirus Expression Vector Kit (Dual Version)재조합 adenovirus 제작 Kit

제품명 제조사 TaKaRa Code 용량 가격Adenovirus Expression Vector Kit (Dual Version) TKR 6170 1 Kit (5 회) 528,000원

Adenovirus genome DNA-TPC TKR 6171 50 ㎕ (5 회) 286,000원

I-a

??

목적 유전자

Recombinant Adenovirus

Recombinant Adenovirus

Full length DNA 도입법

BspT104 IBspT104 I

E1 E3 COSBspT104 I

BspT104 I 절단

ori

E1 E3

[COS-TPC법]

제한효소

TP E3 TP

DNA-TPC

Co-transfectionTransfection

E1

E1

homologusrecombinant

293세포 293세포

증식 증식

감염

목적 단백질

목적 세포

재조합 Adenovirus의 제작과 사용원리

Adenovirus 관련

I-9

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I-a

??

TransITⓇ Transfection Reagents진핵세포용 유전자 도입 시약

제품명 제조사 제조사Code TaKaRa Code 용량 가격

TransIT-LT1 MIR MIR2304 V2304T 0.4 ml 240,000원

TransIT-LT1 MIR MIR2300 V2300 1 ml 340,000원

TransIT-LT1 MIR MIR2305 V2305T 5×1 ml 1,600,000원

TransIT-LT1 MIR MIR2306 V2306T 10×1 ml 3,000,000원

TransIT-LT2 MIR MIR2404 V2404 0.4 ml 240,000원

TransIT-LT2 MIR MIR2400 V2400 1 ml 390,000원

TransIT-LT2 MIR MIR2405 V2405 5×1 ml 1,740,000원

TransIT-LT2 MIR MIR2406 V2406 10×1 ml 3,280,000원

TransIT-293 MIR MIR2704 V2704 0.4 ml 290,000원

TransIT-293 MIR MIR2700 V2700 1 ml 360,000원

TransIT-293 MIR MIR2705 V2705 5×1 ml 1,960,000원

TransIT-293 MIR MIR2706 V2706 10×1 ml 3,710,000원

TransIT-Keratinocyte MIR MIR2804 V2804 0.4 ml 290,000원

TransIT-Keratinocyte MIR MIR2800 V2750 1 ml 450,000원

TransIT-Keratinocyte MIR MIR2805 V2805 5×1 ml 1,960,000원

TransIT-Keratinocyte MIR MIR2806 V2806 10×1 ml 3,710,000원

TransIT-HeLaMONSTER MIR MIR2904 V2904 0.4 ml 300,000원

TransIT-HeLaMONSTER MIR MIR2900 V2900 1 ml 470,000원

TransIT-HeLaMONSTER MIR MIR2905 V2905 5×1 ml 2,090,000원

TransIT-HeLaMONSTER MIR MIR2906 V2906 10×1 ml 3,950,000원

TransIT-CHO MIR MIR2174 V2174 0.4 ml 300,000원

TransIT-CHO MIR MIR2170 V2170 1 ml 420,000원

TransIT-CHO MIR MIR2175 V2175T 5×1 ml 2,090,000원

TransIT-CHO MIR MIR2176 V2176T 10×1 ml 3,950,000원

TransIT-3T3 MIR MIR2184 V2184 0.4 ml 300,000원

TransIT-3T3 MIR MIR2180 V2180 1 ml 470,000원

TransIT-3T3 MIR MIR2185 V2185 5×1 ml 2,090,000원

TransIT-3T3 MIR MIR2186 V2186 10×1 ml 3,950,000원

TransIT-COS MIR MIR2194 V2194T 0.4 ml 300,000원

TransIT-COS MIR MIR2190 VR2190 1 ml 470,000원

TransIT-COS MIR MIR2195 V2195 5×1 ml 2,090,000원

TransIT-COS MIR MIR2196 V2196T 10×1 ml 3,950,000원

TransIT-Neural MIR MIR2144 V2144 0.4 ml 300,000원

TransIT-Neural MIR MIR2140 V2140 1 ml 470,000원

TransIT-Neural MIR MIR2145 V2145 5×1 ml 2,090,000원

TransIT-Neural MIR MIR2146 V2146 10×1 ml 3,950,000원

TransIT-Jurkat MIR MIR2124 V2124 0.4 ml 300,000원

TransIT-Jurkat MIR MIR2120 V2120 1 ml 470,000원

TransIT-Jurkat MIR MIR2125 V2125 5×1 ml 2,090,000원

TransIT-Jurkat MIR MIR2126 V2126 10×1 ml 3,950,000원

TransIT-Prostate MIR MIR2134 V2134 0.4 ml 300,000원

TransIT-Prostate MIR MIR2130 V2130 1 ml 470,000원

TransIT-Prostate MIR MIR2135 V2135 5×1 ml 2,090,000원

TransIT-Prostate MIR MIR2136 V2136 10×1 ml 3,950,000원

TransIT-Express MIR MIR2004 V2004 0.4 ml 260,000원

TransIT-Express MIR MIR2000 V2000 1 ml 400,000원

TransIT-Express MIR MIR2005 V2005 5×1 ml 1,830,000원

TransIT-Express MIR MIR2006 V2006T 10×1 ml 3,450,000원

TransIT-Oligo MIR MIR2164 V2164 0.4 ml 330,000원

TransIT-Oligo MIR MIR2160 V2160 1 ml 520,000원

TransIT-Oligo MIR MIR2165 V2165T 5×1 ml 2,350,000원

TransIT-Oligo MIR MIR2166 V2166 10×1 ml 4,450,000원

TransIT-mRNA Transfection Kit MIR MIR2225 V2225 0.25 ml 440,000원

TransIT-mRNA Transfection Kit MIR MIR2250 V2250 0.5 ml 800,000원

TransIT-mRNA Transfection Kit MIR MIR2255 V2255T 5×0.5 ml 3,590,000원

TransIT-mRNA Transfection Kit MIR MIR2256 V2256 10×0.5 ml 6,790,000원

Transfection Reagents

제품명 제조사 제조사Code TaKaRa Code 용량 가격TransIT-TKO Transfection Reagent MIR MIR2154 V2154 0.4 ml 350,000원

TransIT-TKO Transfection Reagent MIR MIR2150 V2150 1 ml 480,000원

TransIT-TKO Transfection Reagent MIR MIR2155 V2155 5×1 ml 2,530,000원

TransIT-TKOTransfection Reagent MIR MIR2156 V2156 10×1 ml 4,770,000원

■사용 실적이 있는 세포A549, CHO-K1, COS-7, HEK 293, HeLa, Hepa1c1c7, HepG2, MCF-7, NIH

3T3, RAW 264.7, Vero cells

* A549, CHO-K1, HepG2, Vero세포에서는 고효율을 나타내었다.

■보존 4℃

■제품설명TransIT-siQUEST Transfection Reagent는 짧은 dsRNA (siRNA)를 진핵세포에

유전자도입 하기 위한 시약인 TransIT-TKO Reagent 와 조성이 다르다. 세포에

독성이 낮고, 고효율로 siRNA를 도입할 수 있기 때문에 목적 유전자의 발현을

Knock-out시키는 실험에 적합하다. 또한 혈청을 포함한 배지 그대로 사용할 수

있기 때문에 배지 교환이 필요없어 조작이 간편하다. 24 well plate를 사용할 경

우 본 시약 1 ml로 약 500회 유전자도입이 가능하다.

유전자의 발현을 Knock-out시키는 실험에 적합하다.

24 well plate를 사용하는 경우, 본 시약 1 ml로 약 500회 유전자 도입이 가능하

며, TransIT-LT1(TaKaRa Code V2304T/V2300)과 함께 사용하여 siRNA와 플

라스미드 DNA의 co-transfection이 가능하다.

■보존 4℃

■제품설명TransIT-TKO는 짧은 dsRNA (siRNA)를 진핵세포에 유전자 도입을 하기 위한

시약이다. 세포에 독성이 낮고, 고효율로 siRNA를 도입할 수 있기 때문에 목적

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TransIT-TKOⓇ Transfection ReagentsiRNA도입용시약

I-a

??

TransIT-siQUESTⓇ Transfection ReagentsiRNA도입용시약

제품명 제조사 제조사Code TaKaRa Code 용량 가격TransIT-siQUEST Transfection Reagent MIR MIR2114 V2114 0.4 ml 350,000원

TransIT-siQUEST Transfection Reagent MIR MIR2110 V2110 1 ml 480,000원

TransIT-siQUEST Transfection Reagent MIR MIR2115 V2115T 5×1 ml 2,530,000원

TransIT-siQUEST Transfection Reagent MIR MIR2116 V2116 10×1 ml 4,770,000원

T

MSDS

T

MSDS

■내용TransIT-siPAK Trial Kit

TransIT-siQUEST Reagent 0.1 ml

TransIT-TKO Reagent 0.1 ml

TransIT-siPAK Plus Trial Kit

TransIT-siQUEST Reagent 0.1 ml

TransIT-TKO Reagent 0.1 ml

Label IT RNAi Delivery Control Fluorescein 10 ㎍ (0.75 nmol)

10×RNAi Dilution Buffer 75 ㎕

■보존TransIT-TKO, TransIT-siQUEST, 10×RNAi Dilution Buffer : 4℃

Label IT RNAi Delivery Control Fluorescein : - 20℃

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??

TransITⓇ-siPAK Trial KitsiRNA 도입 조건검토를 위한

제품명 제조사 제조사Code TaKaRa Code 용량 가격TransIT-siPAK Trial Kit MIR MIR2260 V2260T 1 개 220,000원

TransIT-siPAK Plus Trial Kit MIR MIR2270 V2270 1 개 310,000원

T

MSDS

TransITⓇ-Insecta곤충세포용 유전자 도입시약

제품명 제조사 제조사Code TaKaRa Code 용량 가격TransIT-Insecta MIR MIR2204 V2204 0.4 ml 250,000원

TransIT-Insecta MIR MIR2200 V2200 1 ml 390,000원

TransIT-Insecta MIR MIR2205 V2205 5×1ml 1,740,000원

TransIT-Insecta MIR MIR2206 V2206 10×1ml 3,290,000원

■특징· 고효율로 DNA를 곤충세포에 도입할 수 있다.

· 종래의 liposome법을 이용한 제품에 비해 세포 독성이 낮다.

· 튜브에 들어 있는 시약을 그대로 사용할 수 있어 시약을 녹여야 하는 번거로

움이 없다.

■보존 4℃ (냉동보관을 하지말자)

■제품설명본 제품은 Sf9나 Sf21, S2 세포 등과 같은 곤충세포에 DNA를 고효율로 유전자

도입을 할 수 있다.

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??

Label ITⓇ Tracker Intracellular Nucleic Acid Localization Kit

제품명 제조사 제조사Code TaKaRa Code 용량 가격Label IT Tracker Cy3 Kit MIR MIR7010 V7010 1 개 480,000원

Label IT Tracker Cy5 Kit MIR MIR7011 V7011 1 개 480,000원

Label IT Tracker CX-Rhodamine Kit MIR MIR7012 V7012 1 개 430,000원

Label IT Tracker TM-Rhodamine Kit MIR MIR7013 V7013 1 개 430,000원

Label IT Tracker Biotn Kit MIR MIR7014 V7014 1 개 430,000원

Label IT Tracker Fluorescein Kit MIR MIR7015 V7015 1 개 430,000원

■제품설명Label IT Tracker Intracellular Nucleic Acid Localization Kit는 one-step 핵산표

식시약인 Label IT Tracker Reagent로 표식한 plasmid DNA 그대로 TransIT -

LT1을 이용하여 핵산세포에 도입하기 위한 Kit이다. 표식한 DNA를 세포에 도입

함으로써 세포내의 위치 및 reporter 유전자의 발현을 동시에 관찰 할 수 있다.

표식 종류는 6종류(Cy3, Cy5, CX-Rhodamine, TM-Rhodamine, Biotin,

Fluorescein) 이다. Kit에는 Label IT Tracker Reagent (50~200㎍의 plasmid

DNA표식용) 와 TransIT-LT1 (35 mm dish를 사용할 경우, transfection 50회분)

이 포함되어 있다.

■내용Label IT Tracker Reagent (동결건조품）

Tracker Reconstitution Solution 60 ㎕

10× Labeling Buffer A 500 ㎕

TransIT-LT1 400 ㎕

■보존 - 20℃

T

MSDS

제품명 제조사 제조사Code TaKaRa Code 용량 가격Label IT siRNA Tracker Cy3 Kit with TransIT-TKO MIR MIR7200 V7200 50 ㎍ 용 560,000원

Label IT siRNA Tracker Cy5 Kit with TransIT-TKO MIR MIR7201 V7201 50 ㎍ 용 560,000원

Label IT siRNA Tracker CX-Rhodamine Kit with TransIT-TKO MIR MIR7202 V7202 50 ㎍ 용 560,000원

Label IT siRNA Tracker TM-Rhodamine Kit with TransIT-TKO MIR MIR7203 V7203 50 ㎍ 용 560,000원

Label IT siRNA Tracker Biotin Kit with TransIT-TKO MIR MIR7204 V7204 50 ㎍ 용 610,000원

Label IT siRNA Tracker Fluorescein Kit with TransIT-TKO MIR MIR7205 V7205 50 ㎍ 용 610,000원

Label IT siRNA Tracker Cy3 Kit with TransIT-siQUEST MIR MIR7206 V7206 50 ㎍ 용 610,000원

Label IT siRNA Tracker Cy5 Kit with TransIT-siQUEST MIR MIR7207 V7207 50 ㎍ 용 610,000원

Label IT siRNA Tracker CX-Rhodamine Kit with TransIT-siQUEST MIR MIR7208 V7208 50 ㎍ 용 560,000원

Label IT siRNA Tracker TM-Rhodamine Kit with TransIT-siQUEST MIR MIR7209 V7209 50 ㎍ 용 560,000원

Label IT siRNA Tracker Fluorescein Kit with TransIT-siQUEST MIR MIR7210 V7210 50 ㎍ 용 560,000원

Label IT siRNA Tracker Biotin Kit with TransIT-siQUEST MIR MIR7211 V7211 50 ㎍ 용 560,000원

Label IT siRNA Tracker Cy3 Kit without Transfection Reagent MIR MIR7212 V7212 50 ㎍ 용 510,000원

Label IT siRNA Tracker Cy5 Kit without Transfection Reagent MIR MIR7213 V7213 50 ㎍ 용 510,000원

Label IT siRNA Tracker CX-Rhodamine Kit without Transfection Reagent MIR MIR7214 V7214 50 ㎍ 용 460,000원

Label IT siRNA Tracker TM-Rhodamine Kit without Transfection Reagent MIR MIR7215 V7215 50 ㎍ 용 460,000원

Label IT siRNA Tracker Fluorescein Kit without Transfection Reagent MIR MIR7216 V7216 50 ㎍ 용 460,000원

Label IT siRNA Tracker Biotin Kit without Transfection Reagent MIR MIR7217 V7217 50 ㎍ 용 460,000원

■보존1.： - 20℃

1. 이외： 4℃

■특징•One step으로 siRNA 표지 (Cy3, Cy5, CX-Rhodamine, TM-Rhodamine,

Fluorescein 및 Biotin)

•siRNA를 실시간으로 트랙킹하여 세포내 국재성의 탐색

•TransIT-TKO(또는TransIT-siQUEST)를 이용한 고효율인 siRNA 유전자도입

•목적 유전자의 발현 억제(유전자 Knock-down)

■내용

1. Label IT siRNA Tracker Labeling Reagent (동결건조품)

2. Label IT Reconstitution Solution 60 ㎕

3. 10×Labeling Buffer A 60 ㎕

4. siRNA Dilution Buffer 1 ml

5. TransIT-TKO Transfection Reagent

orTransIT-siQUEST Transfection Reagent 0.5 ml

* TaKaRa Code V7212 ~ V7217 는1~4 의 Component 포함.

■제품 설명Label IT siRNA Tracker Kit는 one step의 핵산 표지 시약이다. Label IT siRNA

Tracker Reagent로 직접 표식한 siRNA를 siRNA 유전자도입 시약 (TransIT-

TKO 또는TransIT-siQUEST)을 이용해 진핵세포에 도입하는 키트이다. 표식한

siRNA를 세포에 도입하는 것으로써 세포내에서의 국재화를 가시적으로 모니터

링하는 것이 가능하다. 표지의 종류에 의해 6 종류 (Cy3, Cy5, CX-Rhodamine,

TM-Rhodamine, Biotin, Fluorescein)의 키트가 있다. 키트에는 50 ㎍의 siRNA

를 표식할 수 있는 시약과 유전자도입을 할수 있는 500회분 (24-well plate 사용

의 경우)의 시약이 포함되어 있다.

Label IT siRNA Tracker Kit without Transfection Reagent는 transfection 시약을

제외한 siRNA 표지용 시약만 있는 키트이다.

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Label ITⓇ siRNA Tracker Intracellular Localization Kit

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??

T

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TransITⓇ Hydrodynamic Delivery SystemMouse 생체내 세포용 유전자 도입 시약

제품명 제조사 제조사 Code TaKaRaCode Size 가격TransIT-QR Hydrodynamic Delivery Solution MIR MIR5240 V5240 40 회 210,000원

TransIT-QR Hydrodynamic Delivery Starter Kit MIR MIR5210 V5210 10 회 140,000원

TransIT-EE Hydrodynamic Delivery Solution MIR MIR5340 V5340 40 회 280,000원

TransIT-EE Hydrodynamic Delivery Starter Kit MIR MIR5310 V5310 10 회 160,000원

TransIT In Vivo Gene Delivery System MIR MIR5125 V5125 25 회 260,000원

TransIT In Vivo Gene Delivery System MIR MIR5100 V5100 100 회 840,000원

■내용TransIT-QR (or EE) Hydrodynamic Delivery Solution

TransIT-QR (or EE) Hydrodynamic Delivery Solution 120 ml

TransIT-QR (or EE) Hydrodynamic Delivery Starter Kit

TransIT-QR (or EE) Hydrodynamic Delivery Solution 30 ml

Mouse restraint device 1개

3 ml syringes 10개

27 gauge needles 10개

alcohol swab 10개

TransIT In Vivo Gene Delivery System

V5125 V5100

TransIT In Vivo Polymer Solution 0.3 ml 1.2 ml

TransIT In Vivo 10×Delivery Solution 8.5 ml 34 ml

■보존TransIT-QR (or EE) Hydrodynamic Delivery Solution : 4℃

TransIT-QR (or EE) Hydrodynamic Delivery Starter Kit

TransIT-QR (or EE) Hydrodynamic Delivery Solution： 4℃

그 외：실온

TransIT In Vivo Gene Delivery System

4℃ 또는 -20℃보존

다만, 희석 끝난 1×Delivery Solution는 4℃ 보존

■특징•생체내 세포에의 고효율 핵산 도입이 가능

(쥐 간의 약 5~40%의 실질 세포에 도입 가능)

•조작이 매우 간단

•간에서 높은 발현을 기대할 수 있고, 다양한 장기 (비장, 신장, 폐, 심장)의 세

포에 유전자 도입 가능.

•바이러스를 사용하지 않기 때문에 매우 안전

■제품 설명본 제품은 핵산 (DNA, RNA)을 Hydrodynamic법에 의해 쥐의 다양한 조직의 세

포에 높은 효율로 도입하기 위한 시스템이다. 쥐의 꼬리 정맥에 주사하는 것만

으로 용이하고 재현성 있게 핵산을 도입할 수 있다.

도입된 유전자의 발현 레벨이 가장 높은 조직은 간장으로 비장, 신장, 폐, 심장

에서도 도입 유전자의 발현을 확인할 수 있다. 쥐 생체내에서의 유전자 발현 연

구나 특정 조직으로의 유전자 발현 연구 등에 유효하다.

주：도입 유전자의 생체내에서의 발현은 사용한 프로모터나 도입 유전자, 표적으로 하는

조직 등에 의해서 영향을 받을 가능성이 있다.

TransIT-QR (Quick Recovery) Hydrodynamic Delivery Solution은 핵산과 직접

혼합해 쥐의 꼬리 정맥에 주사하는 것으로써 핵산을 도입하는 시약이다. 본 시약

은 주사 후에 쥐가 신속히 회복하는 특징을 가지고 있어 안전하게 핵산 도입을

실시할 수 있다. 본 시약은 siRNA 및 DNA의 도입에 사용할 수 있다.

TransIT-EE (Enhanced Expression) Hydrodynamic Delivery Solution는 DNA와

직접 혼합한 것을 쥐의 꼬리 정맥에 주사하는 것으로써 DNA를 도입해 높은 레

벨로 유전자 발현을 실시할 수 있도록 설계되었다. TransIT-QR (Quick

Recovery) Hydrodynamic Delivery Solution에 비해 모든 장기로 약 2-3배 높은

레벨로 발현이 보인다. 본 시약은 DNA의 도입에 적합하고, siRNA 도입에는 사

용할 수 없다.

또,TransIT Delivery Starter Kit는 Delivery Solution 외에 쥐의 꼬리 정맥주사에

필요한 기구가 세트가 된 키트이다.

TransIT In Vivo Gene Delivery System는 기존 제품으로, DNA와 Polymer

Solution을 혼합해 복합체를 형성시키고 나서 Delivery Solution과 혼합해 쥐 꼬

리 정맥에 주사하여 DNA의 도입을 실시하는 시약이다.

도입 가능한 핵산의 종류 도입하는 핵산 상태 특징 Mouse의 회복에 필요한 시간

TransIT QR Hydrodynamic siRNA (Knock down) Naked 주사 후의 Mouse의 심박출량의 마우스를1분 이내

Delivery Solution DNA (발현) 감소를 최소화해, 신속히 회복시킨다.

TransIT EE Hydrodynamic DNA (유전자 발현) Naked TransIT QR Delivery Solution에 비해, 약 2-3배가

Delivery Solution 높은 발현 레벨. 20분 이내

쥐의 회복에 필요로 하는 시간이 약간 길다.

TransIT In Vivo Gene DNA (발현) Polymer와 기존에 판매하고 있는 오리지날 시약

Delivery Solution 복합체를 형성

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Ingenio™ Electroporation Kit & Solution 핵산 도입이 어려운 포유동물 세포에 대한 electrophoration 시약

제품명 제조사 제조사 Code TaKaRaCode Size 가격Ingenio Electroporation Solution MIR MIR50111 V50111 25 회용 276,000원

Ingenio Electroporation Solution MIR MIR50114 V50114 50 회용 442,000원

Ingenio Electroporation Solution MIR MIR50117 V50117 100 회용 774,000원

Ingenio Electroporation Kit with 0.2 ㎝ cuvettes MIR MIR50112 V50112 25 회용 442,000원

Ingenio Electroporation Kit with 0.2 ㎝ cuvettes MIR MIR50115 V50115 50 회용 774,000원

Ingenio Electroporation Kit with 0.2 ㎝ cuvettes MIR MIR50118 V50118 100 회용 1,437,000원

Ingenio Electroporation Kit with 0.4 ㎝ cuvettes MIR MIR50113 V50113 25 회용 442,000원

Ingenio Electroporation Kit with 0.4 ㎝ cuvettes MIR MIR50116 V50116 50 회용 774,000원

Ingenio Electroporation Kit with 0.4 ㎝ cuvettes MIR MIR50119 V50119 100 회용 1,437,000원

Ingenio Cuvettes, 0.2 ㎝ MIR MIR50120 V50120 25 포장 166,000원

Ingenio Cuvettes, 0.2 ㎝ MIR MIR50121 V50121 50 포장 33,000원

Ingenio Cuvettes 0.4 ㎝ MIR MIR50122 V50122 25 포장 166,000원

Ingenio Cuvettes 0.4 ㎝ MIR MIR50123 V50123 50 포장 332,000원

Ingenio Cell Dropers MIR MIR50124 V50124 25 포장 22,000원

Ingenio Cell Dropers MIR MIR50125 V50125 50 포장 44,000원

■ 내용 (200 회)*1

Ingenio Electroporation Kits

Components

TaKaRaCode Cuvettes Ingenio Solution Cell Droppers

V50112 0.2 ㎝ cuvettes×25 개 6.25 ㎖ 25 개

V50115 0.2 ㎝ cuvettes×50 개 12.5 ㎖ 50 개

V50118 0.2 ㎝ cuvettes×100 개 12.5 ㎖×2 100 개

V50113 0.4 ㎝ cuvettes×25 개 6.25 ㎖ 25 개

V50116 0.4 ㎝ cuvettes×50 개 12.5 ㎖ 50 개

V50119 0.4 ㎝ cuvettes×100 개 12.5 ㎖×2 100 개

Ingenio Electroporation Solution

TaKaRa Code 용량

V50111 6.25 ㎖

V50114 12.5 ㎖

V50117 1 2.5 ㎖×2

■ 보존 Ingenio Solution : 4℃

Ingenio Cuvettes : 실온

Ingenio Cell Dropers : 실온

■ 제품설명Ingenio Electroporation Kit는 핵산도입이 어려운 포유동물세포, 특히

primary cell에 대하여 저비용이면서도 높은 효율의 핵산도입과 저독성을 실

현한 electrophoration전용 시약으로 electrophoration solution, cuvettes,

Cell Dropers로 구성되어 있다. 이 키트는 Bio-Rad사, Lonza사, BTX사,

Eppendolf사 등의 electrophoration 장비에 최적의 효율을 가지도록 고안되

었기 때문에 별도의 전용장치를 구매할 필요가 없다.

Ingenio 0.2㎝ cuvettes는 amaxa Nucleofector Device에 적합하고, Ingenio

0.4 ㎝ cuvettes는 Bio-Rad Gene Pulser Xcell Electroporator에 적합하다.

■ 특징•유전자도입 어려운 세포에의 고효율의 electrophoration 가능

•Cuvettes식 electrophoration장치의 대부분에 적합

•저비용으로 높은 도입 효율 실현

•높은 세포생존율

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■ 원리Cargo molecule은 transport reagent의 2-pyridyldithio group과 결합한다.

Reagent는 cargo molecule의 free thio (cysteine)와 disulfide bond를 형성한다.

이 disulfide bond는 세포내에 도입된 후 절단된다.

■ Tested cell lines•Human Bronchial Epithelial Cells (NHBE)

•Human Epidermal Keratinocytes (NHEK)

•Human Aortic Smooth Muscle Cells (AoSMC)

•Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC)

•Human Dermal Fibroblasts (NHDF)

•Human Neural Progenitors (NHNP)

•NIH3T3

•293

•C2C12

•CHO

•Rat Hepatocytes (rtNHeps)

•Rat Hippocampal/Cortical Neurons

■ 제품설명Transport Protein Delivery Reagent는 배양 세포에 cargo molecules (Protein,

peptide 등)을 직접 고효율로 도입할 수 있는 유전자도입용 시약이다. 목적 세포

내로 cargo molecules 를 직접 도입하기 때문에, DNA transfection 과정 없이

단백질 기능연구 등을 수행할 수 있다. 배양액 속 혈청의 유무에 관계없이 도입

할 수 있고, transport reagent 자체에 세포 독성은 없다. 이 시약을 사용하면 목

적 molecules 의 세포 도입을 1~2시간 내에 완료할 수 있다.

Transport reagent 와 목적 molecules를 혼합해 실온에서 15 ~ 30분 정도 반응

시켜, 배지로 희석하여 배양 세포에 첨가한다. 첨가 후, 30분 ~ 2시간 정도 배양

하면 도입이 완료되고, PBS로 세정 후 바로 실험을 진행할 수 있다.

Cell line 또는 primary cell에도 적용 가능하고, 세포 내에서의 단백질간 상호작

용, signal transduction 연구 및 저해 물질의 도입, 단백질 과발현의 효과,

peptide library 스크리닝 등의 연구에 사용할 수 있다

■ 내용Transport Protein Delivery Reagent 400 ㎍ (동결건조품)

* 약 135 ml의 혼합 용액 (Transport Reagent/목적 단백질/세포 배양용 배지)을 조제

가능

■ 보존 -20 ℃

■내용 (TaKaRa Code V5910)EndoGO Extraction Reagent 2.2 ml

MiraCLEAN Buffer 2.0 ml

■보존4℃ (동결 금지)

■제품 설명본 제품은 핵산의 endotoxin 제거를 간편하고 효율적으로 실시하는 키트이다.

in vivo나 in vitro 또는 유전자도입을 실시할 때, 플라스미드에 혼입된 endotoxin

이 도입 효율에 영향을 주는 것이 알려져 있다. 본 제품은 유전자도입에 이용하

는 DNA의 endotoxin을 제거하여, 안전하고 효율적으로 유전자 도입이 가능하

도록 하였다.

MiraCLEANⓇ Endotoxin Removal KitDNA의 endotoxin 제거에

제품명 제조사 제조사 Code TaKaRaCode Size 가격MiraCLEAN Endotoxin Removal Kit MIR MIR5910 V5910 10 mg DNA 용 200,000원

MiraCLEAN Endotoxin Removal Kit MIR MIR5900 V5900 100 mg DNA 용 610,000원

Transport™ Protein Delivery Reagent배양 세포로 단백질· peptide 고효율 도입 시약

제품명 제조사 제조사 Code TaKaRaCode Size 가격Transport Protein Delivery Reagent LNZ 50568 50568 400 ㎍ 491,000원

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pRI 909/910 DNA식물형질전환용 binary Vector

제품명 제조사 TaKaRaCode Size 가격pRI 909 DNA TKR 3260 10 ㎍ 808,000원

pRI 910 DNA TKR 3261 10 ㎍ 808,000원

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■ 보존 - 20℃

■ 형상10 mM Tris - HCl, pH 8.0 1 mM EDTA

■ 길이 9,168 bp

■ 제품설명본 제품은 식물형질전환을 위한 T-DNA영역을 포함하는 binary 벡터이다.

Rhizobium (Agrobacterium) rhizogenes의 Ri plasmid 유래이지만 vir 부분

은 포함하지 않는다. 본 벡터는 대장균 및 Rhizobium (Agrobacterium)에서

자율적으로 복제되는 셔틀 벡로 pUC계의 plasmid와 같은 복제 기점

(ColE1 ori)을 포함하기 때문에 대장균에서는 high copy plasmid로 유지되

고, Ri plasmid 유래의 변이형 복제 기점(Ri-ori)을 포함하기 때문에

Rhizobium (Agrobacterium) 내에서도 안정하게 유지된다. 대장균,

Rhizobium (Agrobacterium)에서의 선택마커로 카나마이신(kanamycin) 내

성유전자NPT III를, 식물에서의 선택마커로 변이형 kanamycin 내성유전자

NPT II를 포함하고 있다. 클로닝 사이트로 pUC계의 플라스미드에 사용되는

제한 효소 절단 부위를 이용할 수 있다.

Rhizobium (Agrobacterium)과 함께 바이너리 (binary) 벡터법에 의한 식물

형질전환에 이용할 수 있고, 또한 T-DNA상에서 클로닝 사이트가 식물 선택

마커 (NPT II)의 right border (RB)에 배치되어 있기 때문에 목적 유전자가 결

실되지 않고 안정적으로 식물 염색체에 삽입이 가능하다.

■ 순도1. Double strand covalently closed circular form (RF I)을 70%이상 포함하

고 있다.

2. Dideoxy법에 의한 sequence 결과 cloning site를 유지하고 있다는 것을

확인하고 있다.

3. 클로닝 사이트에서만 1곳을 절단하는 제한 효소에 의해 해당 절단을 확

인하고 있다.

■ 용도바이너리(binary) 벡터법에 의해 Agrobacterium을 통해서 식물을 형질전환

하기 위한 벡터로 애기장대, 토마토, 담배, 벼 등의 형질전환에 이용

식물용 벡터

pRI 909/910 DNA

Multi cloning site

Multi cloning site

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pRI 101 DNA 시리즈목적 유전자의 고발현을 위한 식물형질전환 벡터

제품명 제조사 TaKaRaCode Size 가격

pRI 101-AN DNA TKR 3262 10 ㎍ 808,000원

pRI 101-ON DNA TKR 3263 10 ㎍ 808,000원

■ 내용 (농도 0.5 ㎍/㎕)pRI 101-AN DNA 10 ㎍ pRI 101-ON DNA 10 ㎍

■ 보존 - 20℃.

■ 길이 pRI 101-AN DNA 10,417 bp pRI 101-ON DNA 10,454 bp

■ 제품설명pRI 101 DNA 시리즈는 형질전환 식물에서 외래유전자를 고효율로 발현시

키기 위한 벡터이다. Cauliflower mosaic virus (CaMV)의 35S 프로모터 아

래쪽에 ADH (Alcohol Dehydrogenase) 유전자 유래의 5’ untranslated

region (5’-UTR)을 포함하고 있으며, 해당영역이 가지는 translation

enhancer 기능에 의해 식물체에서 목적유전자산물을 고효율로 발현시킬

수 있다. 애기장대 ADH 유래 5’-UTR (AtADH 5’-UTR)을 탑재한 pRI 101-

AN DNA와 벼 ADH 유래 5’-UTR (OsADH 5’-UTR)을 탑재한 pRI 101-ON

DNA의 2종류가 있어서 쌍떡잎 식물에는 pRI 101-AN DNA를, 외떡잎 식물

에는 pRI 101-ON DNA를 이용할 수 있다.

또한 본 제품은 식물형질전환용 바이너리(binary) 벡터인 pRI 910 DNA

(TaKaRa Code 3261)을 기본으로 하는 바이너리 벡터이며, Rhizobium

rhizogenes Ri plasmid 유래의 변이형 복제 기점(Ri ori)을 가지고 있다. pUC

계의 플라스미드와 같은 복제 기점 (ColE1 ori)도 가지고 있어 대장균에서

높은 카피수의 플라스미드로 유지되며, 클로닝 사이트가 T-DNA내 식물선

택마커의 right border (RB)측에 배치되어 있기 때문에 목적 유전자가 결실

되지 않고 안정적으로 식물 염색체에 삽입이 가능하다.

본 벡터는 국립 대학 법인 나라 (奈良) 첨단과학기술대학원대학에서 기술 및

실험자료의 제공을 받고, 다카라바이오가 제품화하였습니다.

■ 순도1. Double strand covalently closed circular form (RF I)을 70%이상 포함하

고 있다.

2. Dideoxy법에 의한 시퀀싱 결과 클로닝 사이트를 유지하고 있다는 것을

확인하고 있다.

3. 클로닝 사이트에서만 1곳을 절단하는 제한 효소에 의해 해당 절단을 확

인하고 있다.

■ 용도바이너리(binary) 벡터법에 의해 Agrobacterium 을 매개로 식물을 형질전환

하기 위한 벡터.

애기장대, 토마토, 담배 등의 쌍떡잎 식물 (pRI 101-AN DNA를 사용) 또는

벼 등의 외떡잎 식물 (pRI 101-ON DNA를 사용)의 형질전환 및 외래 유전자

의 높은 발현을 실현.

pRI 101-AN DNA와 pRI 101-ON DNA