ﺷ لﯾﻧﻟ ﺔﻘﯾﻗدﻟا ءﺎﯾﺣا مﻠﻋ ó ¥و Â ð ÷ ﺔﺳدﻧﻫ...

I

الجــمهــورية الجـــزائـرية الديـمـقــــراطـية الـشــعـبـية

وزارة التعليم العالي والبحث العلميالطبيعة و الحياةكلية علومجامعة فرحات عباس الميكروبيولوجياقسم

مذكـرة

هادة الماجستیرلنیل شعلم األحیاء الدقیقة في

ميكروبيولوجية هندسة : تخصص

صدراتي نواري:مقدمة من طرف:الموضوع

القمح لنبات)أندوفيت(عزل و تشخيص الكائنات الحية الدقيقة الداخلية و تقدير نشاطها البيولوجي

:أمام لجنة المناقشة المتكونة من...............قدمت يوم

2011

جامعة فرحات عباس سطيفأستاذقشي عبد الهادي. د.أ: الرئيسجامعة فرحات عباس سطيفأستاذ حرزاهللا داود. د.أ: المشرفجامعة فرحات عباس سطيفأستاذ لعور حسين. د.أ: األعضاء

جامعة فرحات عباس سطيفأستاذ محاضرهوب يزّروق محمد م. د

II

شكر و تقدير

.نجاز هذا العمل هللا سبحانه و تعالى الذي وفقني إلإن الشكر و الحمد

على هذا العمل و تابعه أشرفالذيداود حرزاهللا .د.أ: األستاذ المشرفلى بالشكر الجزيل إأتوجه

.على أكمل وجههفي ذلك كل النصح و التوجيه إلتمامانجازه، مقدمباهتمام كبير خالل كل أطوار

:لى السادة األساتذةمعاني الشكر و التقدير إأن أتوجه بأسمىو يشرفني

.جامعة فرحات عباس سطيفالميكروبيولوجيابقسم ، أستاذ قشي عبد الهادي.د.أ-

.جامعة فرحات عباس سطيفبقسم بيولوجيا و فيزيولوجيا النبات ، أستاذ لعور حسين.د.أ-

.جامعة فرحات عباس سطيفالميكروبيولوجيامحاضر بقسم ، أستاذ زروق محمد ميهوب.د-

.على تكرمهم و تشريفهم بقبول مناقشة و إثراء هذا العمل

كما أتوجه بجزيل الشكر إلى األستاذ الدكتور بغياني عبد الرحمان و اآلنسة جرموني مريم و ذلك

.لما قدماه من مساعدة من أجل إتمام و إنجاز هذا العمل

الزمالء زروق أمينة و بلحاج هاني و قندوز علي و يسعـــــدني أيضا أن أوجه جزيل شكـــري و امتناني إلى

. لكل ما قدموه من مساعدة و اهتمام ألجل انجاز هذا العملو معماش و ليد

.و كل الشكر لكل أساتذة كلية علوم الطبيعة و الحياة و كل الزمالء

III

إهداء

و حفظهما اهللا أهدي هذا العمل إلى الوالدين الكريمين و إلى كل األحبة و األصدقـاء كل اإلخوة و األخوات

IV

ـــصـــالملخـ

Triticum)كل من الفطريات و البكترييا اخليطية مت عزهلا من القمح الصلب durum Desf.) صنفمن بني جمموع العزالت املتحصل عليها . 2010حممد بن بشري الذي مت مجعه من والية برج بوعريريج يف شتاء

عزالت نشطة بني الفطريات 10حلصول على و اليت أخضعت إىل إختبار أويل لنشاطيتها املضادة للجراثيم مت اا املضادة للجراثيم و املضادة و البكترييا اخليطية، هذه األخرية مت دراسة و اختبار نشاطية مستخلصاا على إنتاج اإلنزميات اخلارج خلوية و تعزيز لألكسدة، من جهة أخرى مت إختبار هذه العزالت من حيث قدر

نوع بكتريي ممرض، مخرية واحدة و نوعني 12النشاطية املضادة للجراثيم مت إختبارها على .منو نبات القمحمن الفطريات املمرضة للنبات و ذلك بإتباع طريقة أقراص اإلنتشار على سطح اآلقار بعد استخالص

ا الثانوية باستعمال مذيبني عضويني خمتلفني املستخلصات كل . )اإليثيل أسيتات و الكلوروفورم(مستقلباشهدت نشاطية مثبطة للنمو على األقل على كائن حي دقيق ممرض أو أكثر حيث كانت مستخلصات

Escherichiaملم على كل 25اإليثيل أسيتات أكثر فعالية بأكرب منطقة تثبيط coliوCandida

albicans ملم على كل من 23و 20، بينما أكرب منطقة تثبيطية سجلت من مستخلصات الكلوروفورم هيSalmonella typhimuriumوBacillus sp.النشاطية املضادة لألكسدة مت تقديرها عن . على التوايل

من املستخلصات هلا نشاطية مضادة %60، النتائج بينت أن β-carotene/linoleic acidطريق إختبار من جهة أخرى اختبار قدرة هذه العزالت على . 78.96%إىل 50.57%لألكسدة بنسبة تثبيط تراوحت بني

من 90%إنتاج اإلنزميات اخلارج خلوية و الذي مت بإتباع طريقة الزرع على أطباق اآلقار، النتائج دلت على أنه أما تعزيز منو نبات القمح . إنزمي الليباز90%إسترياز و70%الليباز،50%هذه العزالت تنتج إنزمي األميالز،

عزالت خمتربة عزلتني 10ن طرف هذه العزالت اخترب على إنتاش البذور، النتائج بينت أنة من بني الصلب ممن خالل هذه األعمال ميكن القول أن هذه العزالت ميكن أن .كان هلما تأثري إجيايب على منو بذور القمح

تكون مصدر للمركبات النشطة بيولوجيا كما ميكن أن تعمل على تعزيز منو النباتات و اليت تتطلب منا دراسة . أوسع و أكثر تعمقا

ألكسدة، النشاطية ، النشاطية املضادة لا اخليطية الداخليةيري الفطريات الداخلية، البكت:الكلمات المفتاحية

Triticumاملضادة للميكروبات، النشاطية اإلنزميية، القمح الصلب durum Desf..

V

Summary

A total of ten endophytic fungi and actinomycetes have been isolated from wheat

(Triticum durum Desf. Mohamed Ben Bachir variety) collected from Bordj Bou -Arreridj

region (Algeria) during winter 2010. Isolates were screened and evaluated for their

Antimicrobial activity, antioxidant activity, enzymatic activity and host growth promotion.

Antimicrobial activity was evaluated for crude, ethyl acetate and chloroform extracts using

an agar diffusion assay against twelve pathogenic bacteria, yeast, and two phytopathogenic

fungi. All extracts showed inhibitory activity on at least one or more pathogenic

microorganism, with an average zone of inhibition varied between 7 mm to 25 mm. the

more effective activity was observed with ethyl acetate extracts, a large zone of 25 mm

against Escherichia coli and Candida albicans, 20 mm and 23 mm against Salmonella

typhimurium and Bacillus sp respectively. The antioxidant capacity of the extracts was

evaluated by β-carotene/linoleic acid assay. Results showed that 60% of these extracts

have antioxidant activity, exhibiting 50, 57% to 78, 96% inhibitions. On other hand, these

endophytic fungi and actinomycetes were assessed for the production of extracellular

enzymes by culture plate method. 90% of them have amylase activity, 50% lipase, 70%

esterase and 90% protease activity. Growth promotion ability of these endophytes was

tested on seed germination. The result indicated that, among ten isolates tested, two

isolates showed significant growth promotion effects on wheat seeds. From the present

work we can conclude that these microorganisms could be promising source of bioactive

compounds, growth promotion and warrant further study.

KEY WORDS: Endophytic micro-organisms; antimicrobial activity, antioxidant activity,

enzymatic activity, Triticum durum Desf.

VI

Resume

Un total de dix endophytes incluant champignons et actinomycètes ont été isolés a partir

du blé (Triticum durum Desf. Variété Mohamed Ben Bachir) collecté de la région de Bordj

Bou Arreridj(Algérie) au cours de l’hiver 2010. Les dix isolats ayant eu un résultat positif

au dépistage de l’activité antimicrobienne ont étaient examinés et évalués pour leur activité

antimicrobienne, antioxydante, enzymatique et la promotion de la croissance de l’hôte.

L’activité antimicrobienne a été évaluée par les extraits bruts d’éthyle acétate et de

chloroforme en utilisant le test de diffusion sur disques contre douze bactéries et une levure

pathogènes et deux champignons phytopathogènes. Tous les extraits ont montré une

activité inhibitrice sur au moins un ou plusieurs micro-organismes pathogènes, avec une

moyenne des zones d’inhibition variant entre 7 et 25 mm. L’activité la plus efficace a été

observée avec les extraits d’éthyle acétate et la plus grande zone été de 25 mm observé

contre Escherichia coli et Candida albicans, d’autre part les plus grandes zones observé

chez les extraits chloroformiques été de 20 et 23 mm contre Salmonella typhimurium et

Bacillus sp. Respectivement. La capacité antioxydante des extraits a été évaluée pas la

méthode du β-carotène/ acide linoléique. Les résultats ont montré que 60% de ces extraits

ont une activité antioxydante, présentant 50.57% à 78.96% d’inhibitions. D’autre part, ces

champignons endophytes et ces actinomycètes ont été évalués pour leurs production

d’enzymes extracellulaires par la méthode de culture sur boite, 90% d’entre eux ont une

activité amylolitique, 50% une activité lipolytique, 70% estéarasique et 90% proteasique.

La capacité de promotion de la croissance de ces endophytes a été testée sur la germination

des graines. Le résultat a indiqué que parmi les dix isolats testés, deux isolats ont montré

des effets significatifs sur la croissance des semences de blé. Nous pouvons donc conclure

que ces micro-organismes pourraient être une source prometteuse de composés bioactifs, et

permettent la promotion de la croissance, demandant une étude plus large et approfondis.

Mots clé : Micro-organismes endophytes, activité antimicrobienne, activité antioxydante,

activité enzymatique, Triticum durum Desf.

VII

المختصـــراتقـائمة

Butylated hydroxytolueneBHT:

Cellulos AgarCA:

Cellulolysis basal mediumCBM:

Cellulolysis basal mediumCMB:

Carboxymethyl celluloseCMC:

Czabek yeast extract agarCYA :

Dimethyl sulfoxideDMSO:

Deoxyribonucleic acidDNA:

2,2-diphenyl-1-picrylhydrazylDPPH:

Germination indexGI:

Germination percentageGP:

Glucose yeast extract peptoneGYP:

IodineI2:

Indole acetic acidIAA:

Tyrosine agarIPS7:

Basal mineral salts agarIPS9:

Yeast extract-malt extract agarISP2:

Inorganic salts- starch agarISP4:

Glycerol-asparagine agarISP5:

Internal transcribed spacerITS:

Potassium IodideKI:

Malt extract agarMEA:

Minimum inhibitory concentrationMIC:

Modified Ziehl-Neelsen stainMZH:

Meat liver agar:MLA

Nutrient agarNA:

VIII

Nutrient brothNB:

Potato dextrose agarPDA:

Potato dextrose brothPDB:

PikovskayaPKV:

Plumule lengthPL:

Potato sucrose agarPSA :

Ribosomal deoxyribonucleic acidrDNA:

Radicale LengthRL:

Reactive oxygen speciesROSS:

Starch casein agarSCA:

Vigor indeVI:

Yeast extract-malt extract agarYMA:

Ziehl-Neelson stainZN:

Percentage%:

:µLميكرولرت

غ:غراممغ:ملغرامح:حجممل:مللرتغمك:مكروغرام

IX

الفهرس1................................................................................................................................................................................مقــدمة

Iالدراسة النظرية

.1. Iللنباتاتالداخلیةالدقیقةالحیةالكائناتحولمقدمة....................................................................... (Endophytes)3

.1.1. I3..................................................................................................للنبتاتالداخلیةالدقیقةالحیةالكائناتتعریف

.2.1. I4......................................................................للنباتاتالداخلیةالدقیقةالحیةالكائناتدراسةعنتاریخیةلمحة

.2. I6..........................................................................................للنباتاتالداخلیةالدقیقةالحیةللكائناتالبیولوجيالتنوع

.1.2. I6.................................................................................الداخلیةالدقیقةالحیةللكائناتالعائلةالنباتیةالمجموعات

.2.2. I7..........................................................للنباتاتالداخلیةالخیطیةالبكتیریاوللفطریاتالمشكلةالمجموعاتأھم

.3. I8...............................................................................................................................................األندوفیتإیكولوجیة

.1.3. I8..............................................................................................................................................العائلتخصص

.2.3. I10.............................................................................................................................................النسیجتخصص

.3.3. I11......................................................للنباتاتالداخلیةالدقیقةالحیةالكائناتوكثافةتوزیععلىالمؤثرةالعوامل

.4. I12..............................................................................................................للنباتاتالداخلیةالدقیقةالحیةالكائناتدور

.1.4. I12.........................................................................................................................................النباتاتنموتعزیز

.2.4. I14...........................................................................للنباتاتالممرضةالدقیقةالحیةالكائناتضدالمقاومةتعزیز

.3.4. I15...........................................................................................الحشراتوالعاشبةالكائناتضدالمقاومةتعزیز

.5. I17...................................................................البیولوجيالنشاطذاتالطبیعیةللمركباتمصدرالدقیقةالحیةالكائنات

.1.5. I18....للمیكروباتالمضادالنشاطذاتالثانویةللمستقلباتمصدرللنباتاتالداخلیةالخیطیةالبكتیریاوالفطریات

.1.1.5. I19..................للبكتیریاالمضادةالثانویةللمستقلباتمصدرللنباتاتالداخلیةالخیطیةالبكتیریاوالفطریات

.2.1.5. I20.................للفطریاتالمضادةالثانویةللمستقلباتمصدرللنباتاتالداخلیةالخیطیةالبكتیریاوالفطریات

.2.5. I23...........................لألكسدةالمضادةالثانویةللمستقلباتمصدرللنباتاتالداخلیةالخیطیةالبكتیریاوالفطریات

IIالطـــــرقوالمـــــواد

.1. II25....................................................................................................................................................................المواد

.1.1. II25..............................................................................................................................................النباتیةالعینات

.2.1. II25...........................................................................................................................الفطریةوالبكتیریةاألنواع

X

.1 .3 II25............................................................................................................................واألجھزةالكیمیائیةالمواد

.2. II26....................................................................................................................................................................الطرق

.2 .1 . II26......................................................................................................................................النباتیةالعیناتجمع

.2.2. II26...............................................................................القمحلنباتالداخلیةالخیطیةالبكتیریاوالفطریاتعزل

.2 . 3. II29........................................العزالتطرفمنالممرضةالفطریاتوللبكتیریاالمضاداألوليالنشاطإختبار

.2 . 4. II30.......................................................................................................المعزولةالبكتیریاوالفطریاتتشخیص

.2 . 1.4. II30.............................................................................................................المعزولةالفطریاتتشخیص

.2 . 2.4. II31...................................................................................................المعزولةالخیطیةالبكتیریاتشخیص

.2 . 5. II33.....................................................................................................................الثانویةالمستقلباتإستخالص

.2 . 6. II34...........................................................................للمیكروباتالمضادةالخامةالمستخلصاتنشاطیةدراسة

.2 . 7. 1 . IIإختبار β-carotène.. ...................................................................................................................36

.2 . 8. II36...........................................................................................................................اإلنزیمیةالنشاطیةدراسة

.2 .1.8. II37.......................................................................................................الفطریةاإلنزیمیةالنشاطیةدراسة

.1.1.8.2. II37.......................................................................................................................................األمیالز

.2.1.8.2. II37.....................................................................................................................................البروتیاز

.3.1.8.2. II38........................…………………………………………………………………………اإلستیرازواللیباز

.4.1.8.2. II38.....................................................................................................................................السیلیالز

.2 .2.8. II38.......................................................................................................البكتیریةاإلنزیمیةالنشاطیةدراسة

.1.2.8.2. II39.......................................................................................................................................األمیالز

.2.2.8.2. II39......................................................................................................................................البروتیاز

.3.2.8.2. II39......................................................................................................................اإلستیرازواللیباز

.4.2.8.2. II39.....................................................................................................................................السیلیالز

.2 .9. II40......................................................القمحبذورنمووإنتاشعلىالداخلیةالبكتیریاوالفطریاتتأثیردراسة

.2 .1.9. II40...............................................................................المعزولةوالبكتیریابالفطریاتالقمحبذورمعالجة

.2 .2.9. II40...........................................القمحبذورنمووإنتاشعلىالداخلیةالخیطیةالبكتیریاوالفطریاتتأثیر

.2 .3.9. IIاألستیكوحمضأندولإنتاجإمكانیةإختبار…………………………..(Indole acetic acid (IAA)41

.2 .4.9. IIالفوسفاتإذابةإمكانیةإختبار........................................................ (Phosphate Solubilization)41

XI

.2 .5.9. IIاألمونیاإنتاج.......................................................................... (Ammonia Production (NH3))42

.2 .10. II42................................................................................................................................ اإلحصائیةالتحلیالت

IIIالنتائـج والمناقــشة

.1. III43……………...................................................................................................الخیطیةالبكتیریاوالفطریاتعزل

.2. III45………………………المعزولةالعزالتطرفمنالممرضةالفطریاتوللبكتیریاالمضاداألوليالنشاطإختبار

.3. III48..……………………………………………………………………المعزولةالخیطیةالبكتیریاوالفطریاتتشخیص

.4. III54……………………………………………………………………العزالتلمستخلصاتمیكروبیھالضدالنشاطیةدراسة

.5. III69………………………………………………علیھاالمتحصلالعزالتلمستخلصاتلألكسدةالمضادةالنشاطیةدراسة

.1.5. IIIإختبار…………………………………………………………………………………………………… β-carotene69

.6. III73.………………………………………………………………………المعزولةالعیناتلمخلفاإلنزیمیةالنشاطیةدراسة

.7. III79………………………………………………القمحبذورنمووإنتاشعلىالداخلیةالبكتیریاوالفطریاتتأثیردراسة

85..……………………………………………………………………………………………………………………………الخاتمـــة و اآلفـاق

87……………………………………………………………………………….…………………………………………المراجــــــــــع

103............................................................................................................................................................................الملحق

2011مقدمة

ةــــــــمقدم

2011مقدمة

1

قــدمةم

زيادةيفهوالذيالسكاينالعددمتطلباتلتلبيةذلكوالزيادةإىلماسةحاجةيفالغذائياإلنتاجإن

النباتيةلألمراضاملسببةالدقيقةاألحياءمنهامشاكلعدةالزراعيةاحملاصيلتواجهذاكمعموازاةمستمرة،

يفاملتبعةالطرقبنيمن. )Haggag, 2010(املستدامالغذائياإلنتاجواألمندداليتالفطرياتخصوصا

الفطرياتاحلشرات،مبيداتاألمسدة،استعمالعلىتعتمداليتالكيميائيةاملكافحةاألمراض،هذهمكافحة

ذلكعلىزيادةاإلنسانصحةوالبيئةعلىخطراتشكلماغالبااملوادهذه. الضارةاألعشابمبيداتو

.(Muhammad et al., 2010; Qin et al., 2011)الفعاليةحمدوديةوالعاليةالتكلفةاملنحصر،اإلستعمال

البكتريياعددزيادةوظهورمثلالبشريةدداليتالصحيةاملشاكلمنالعديدتوجدأخرىجهةمن

Streptococcus،Mycobacterium(األجناسأنواعبعضمثلاحليويةللمضاداتاملقاومة

اوالظهورحديثةاألمراضعددزيادة،)Staphylococcusو مرضاحلاد،الرئوياإللتهابمثلمسببا

املرضىمنهايعايناليتالصحيةاملشاكل،)الطيورإنفلوانزا(للحياةمهددةفريوساتاملكتسبة،املناعةفقدام

يفتتسببقداليتواإلنتهازيةالفطرياتببعضلإلصابةعرضةجتعلهمالذياألعضاءبزرعيقومونالذين

Candida spp. ،.Cryptococcus(مثلمناعيةمشاكل sppو.Aspergillus spp(Tejesvi et al., 2007 ;

Qin et) al., 2011(.،تسببهااليتاألمراضمناملفاصلإلتهاباتوالكبدتليفاألنسجة،موتالسرطان

.)Taechowisan et al., 2009(األخرىاألوكسيجينيةالتفاعالتأنواعخمتلفواحلرةاجلذور

تكونبيولوجيانشطةجديدةملركباتأخرىمصادرعنالبحثإىلبالباحثنيدفعتاملشاكلهذهكل

الدقيقةاألحياءعلىمنصبةاألحباثضلتمضتلسنوات. البيئةعلىضررأقلومسيةأقلوفعاليةأكثر

يفيتناقصبدأعددهاأنيبدواماعلىأنهإالّ جديدةمركباتعلىاحلصولأجلمنالرتبةيفتعيشاليت

هياملصادرهذهبنيمنواحد. الدقيقةاألحياءتسكنهاجديدةمواطنعلىالبحثاستلزممااألخريةاآلونة

2011مقدمة

2

أنميكنومدروسةغرينسبياالكائناتهذهالراقية،للنباتات الداخليةاألنسجةتسكناليتالدقيقةاألحياء

(Tejesvi etالصناعةوالطبالزراعة،يفاملفيداإلستعمالذاتبيولوجياالنشطةللمركباتمصدرتكون

al., 2007(.

بنيأوداخلتعيشاليتالدقيقةالكائناتهيEndophytes)(للنباتات الداخليةالدقيقةاألحياء

صحةيفهامدورتلعباألخريةهذهمرضية،أعراضيفهلاتتسببأندونمنالراقيةاحليةالنباتاتأنسجة

املمرضةالدقيقةالكائناتضداحلمايةواإلجهادظروفملختلفاملقاومةومنوهاتعزيزخاللمنعوائلها

اأثبتأخرىجهةمن.احلشراتو احيثبيولوجياالنشطةاجلديدةللمركباتهاممصدرأ علىقادرةأ

مضاداتاحليوية،املضاداتنشاطيةهلاتكونأنميكناليتالثانويةاملستقلباتمنواسعةجمموعةإنتاج

اليفواسعةاستعماالتوللسرطانمضاداتلألكسدة،مضاداتالطفيليات، Hasegawa et الزراعيا

al.,) 2006;Gao et al., 2010; Pimentel et al., 2010(.

إىلارتأينابيولوجياالنشطةللمركباتمصدرتكونجديدةعزالتعنالبحثلغرضوالسياقهذايفو

Triticum)الصلبالقمحلنباتالداخليةاخليطيةالبكتريياوالفطرياتدراسة durum Desf.) صنف حممد

:خاللمنذلكوهلاالبيولوجيةالنشاطاتبعضدراسةوبن بشري

انتقاءوالصلبالقمحأوراقوجذورمنالداخليةاخليطيةالبكتريياوالفطرياتعزل·

.أويلإختبارطريقعنميكروبيةضدنشاطيةهلااليتالعزالت

.األويلاإلختبارمنميكروبيةضدنشاطيةأظهرتاليتالعزالتعلىالتعرف·

.العزالتهلذهالثانويةاملستقلباتإستخالص·

.املستخلصاتهلذهميكروبيةالضدالنشاطيةدراسة·

.B-caroten/linoleic acidإختباربإتباعلألكسدةاملضادةالنشاطيةدراسة·

. خلويةاخلارجاإلنزمييةاألنواعلبعضالعزالتهذهإنتاجإمكانيةإختبار·

.الصلبالقمحنباتمنوعلىالعزالتهذهتأثريدراسة·

2011الدراسة النظریة

Iالفصل

النظريةالدراسة


3

I.1.تاتاللنبالداخليةالدقيقةالحيةالكائنات(Endophytes)

I.1.1.تاتاللنبالداخليةالدقيقةالحيةالكائناتتعريفإىلمنهإشارةيف1866سنةDe Baryهو(Endophytes)األندوفيتمصطلحأطلقمنأولإن

اليتالدقيقةالكائناتعناألخريةهذهلتمييزللنباتات الداخليةاألنسجةتسكناليتالدقيقةاحليةالكائنات

PhyteوداخلتعينEndoشقنيمنمكوناملصطلحهذا،(Epiphytes)النباتاتسطحعلىتعيش

الداخليةالفطرياتإكتشافمنذ.)Rodriguez, 1996(النباتتعيناليتوPhytoاليونانيةالكلمةمنمشتق

قدمواالباحثنيمنالعديد، )Tan et Zou, 2001(أملانيايف1904سنةLolium temulentumنباتيف

يفمباالكائناتكلليشملاستعملماكثريااألندوفيتمصطلحاألمربدايةففي.لألندوفيتخمتلفةتعاريف

)Carroll, 1986(لكن. التكافليةاجلذورفطرياتوالنباتيةاهلوائيةلألجزاءاملمرضةالدقيقةالكائناتذلك

اعلىاألندوفيتعرف تلكهيوعائلهامعاملنافعفيهاتتبادلحياةتعيشاليتالدقيقةاحليةالكائناتأ

بذلكمستثنيامرضيةأعراضيفتتسببوالاحليةالنباتاتألنسجةاهلوائياجلزءتسكناليتالفطريات

علىتكونأنميكناليتاملمرضةالفطرياتاستثىنكماللعائلمرضيةأعرضإحداثعلىالقادرةالفطريات

اعلىعّرفوهاحيثأوسعتعريفاإقرتحوا)Pertrini, 1991; Pertrini et, 1986(منكل. أوندوفيتشكل أ

تغزواأنميكنهااألحيانبعضيفاليتوالنباتاتأعضاءأنسجةتسكناليتالدقيقةاحليةالكائناتمجيع

الداخليةاملمرضةالكائناتذلكيفمبالعائلهاأضراريفتتسببأندونمنللنباتات الداخليالنسيج

موعةهذهإىلتنتميالكامنة الداخليةالدقيقةاحليةللكائناتتعريفهيفWilson (2005 ) أشار. ا

اعلىللنباتات ادورةكلأوجزءاتقضياليتالبكتريياأوالفطرياتهيأ النباتيةاألنسجةداخلحيا

Zhang et). مرضيةأعراضأييفتتسبباللكناحلية al., 2006)مشوليةأكثروأوسعتعريفاأعطوا

أييفتتسببأندونمناحليةللنباتات الداخليةاألنسجةتغزوااليتاملكروباتمجيعهيولألوندوفيت

إستعماالاألكثرومشوليةاألكثرهوالتعريفوهذاعائلها،علىالسلبيةاآلثارأوالفوريةاملرضيةاألعراضمن


4

اتتميزعائلهاواألندوفيتبنيالتفاعالتأنيعتقد. اآلنحلد هذهماحدإىلتكونقدوحمايدةغريبكو

معينةدرجةاألقلعلىدائماهناكيوجدإذالعائل،واألندوفيتبنيالتضادميزانحتتتنطويالتفاعالت

تكونالنباتمقاومةأنحنييفالفطرياتمثلالنباتغزوعلىالقادرةالدقيقةالكائناتهلذهاإلمراضيةمن

أنيعتقدكما. (Schulz et Boyle, 2005)املرضحدةوالداخليةالفطرياتكثافةتطورمناحلدطريقعن

هذهتطوإىليرجعالداخليةالفطرياتظهورأنحيثاملمرضة،الدقيقةبالكائناتعالقةهلااألندوفيت

,.White et al(إمراضيتهادرجةمناحلدوالكمونمنطويلةزمنيةفرتاتعرباملمرضةالفطرياتمناألخرية

1993(.

I.2.1.للنباتات الداخليةالدقيقةالحيةالكائناتدراسةعنتاريخيةلمحة

بنيالتفاعالتمنأنواععدةهناكوالبيئينظامنامنيتجزأالجزءاامليكروباتوالنباتاتبنيالتفاعل

إكتشاقأقدم. )Saffo, 2001; Wu et al., 2009(التكافلوالتعايشعالقةشيوعاأكثرهااألخريينهذين

Amyelon radiciansاملتحجرةالشجرةجذوريفكانامليكروباتوالنباتاتبنيالتكافليةالتعايشلعالقة

تكافليأصلذاتهياألندوفيتأننظروجهةمنفقطليسمهمهذاوالقدمية،احلياةحقبةإىلتعوداليت

(,Hyde et Soytong مبكرجدوقتيفظهرالنباتاتوالفطرياتارتباطأنإىلأيضابلالنباتاتمع

الوعائيةالنباتاتظهورإىلظهورهاتاريخيعوداألندوفيتبنيالتكافلعالقةأناألرجحعلىو. 2008)

)Strobel, 2003; Zhang et al., 2006(.

بذورمنVolطرفمن1898سنةإىلاملرضيةلألعراضمسببةالغريلألوندوفيتعزلأولتاريخيرجع

Lolium temulentum(Wilson, 1996)،طرفمنالدراساتمنبسلسلةبعدهاعززاإلكتشافهذا

مسببةغريوداخليةدقيقةحيةكائناتعدةبعزلذلكومماثلةنتائجإىلتوصلواالذينوباحثنيعدة

(,.Clay et Leuchtmann, 1989; Latch et alالعشبيةالنباتاتمنواسعةجمموعةمنمرضيةألعراض

(1985; Saha et al., 1987; Sampson, 1938.


5

سيماالصنوبريةاألشجارعلىمكثفةبأحباثمتيزتاألندوفيتاكتشافتلتاليتسنةاملائةغضونيف

تركزتكما. )Carroll et al., 1977; Carroll et Petrini, 1983; Sieber et al., 1991(املعتدلةاملناطقيف

; Rodriguez, 1996; Rodriguez et Samuels, 1990أعمالمثلالنخيلأشجارعلاألحباث Taylor et)

al., 1999( .بعنوانالداخليةالفطرياتموضوعيتناولكتاببصدورأيضامتيزتEndophytic fungi in

grasses and woody plantsطرفمن1996سنةRedlin وCarris .

الكايفباإلهتمامحتضملدراستهاأنإالّ للنباتات الداخليةاحليةللكائناتاملبكراإلكتشافمنالرغمعلى

الدقيقةاحليةالكائناتمعرفةيفالكبريةاملسامهةهلاكانأعمالعدةبرزتإذاألخرية،سنةالعشرينيفسوى

تتناولمنشوراتظهرتكما،)Arnold et al., 2000; Arnold, 2007(أعمالغرارعلىللنباتات الداخلية

النباتاتإصابةأمناطالعزل،طرقالعائل،اجتاهالتخصصالتعريف،مثلباألندوفيتاملتعلقةاملواضيعخمتلف

,.Ghimire et Hyde, 2004; Rodriguez et al(البيولوجيالتنوعواإلستيطان الدقيقة،الكائناتذه

200; Schulz et Boyle, 2005(.هذهأمهيةودورعلىالفرتةهذهيفاألحباثتركزتأخرىجهةمن

خاللمنهلاالعائلةالنباتاتمنوتعزيزيفدورهاإثباتبعدخاصةعائلهامستوىعلىالدقيقةالكائنات

(,.Azevedo et al., 2000; Ownley et alاحلشراتوللنباتات املمرضةالدقيقةاحليةالكائناتمقاومة

األحباثتركزتكما.(Dai et al., 2008; Nadeem et al., 2010)النباتيةالنموهرموناتإنتاجو2010)

(El-Shatoury etميكروبيةضدخمتلفة،بيولوجيةنشاطاتذاتجديدةثانويةمستقلباتعنالبحثعلى

al., 2006; He et al., 2009; Zhao et al., 2010; Zhao et al., 2011(،مضادةنشاطيةذاتمستقلبات

(Chaeprasert et al., 2010; Gangadevi et al., 2008; Igarashi et al., 2007; Suthep etللسرطان

al., 2004(،أعمالمثللإللتهابمضادةنشاطيةذاتمستقلبات)Deshmukh et al., 2009;


6

Thongchai et al., 2009; Weber et al., 2004(،لألكسدةمضادةنشاطيةذاتمستقلباتإىلإضافة

(Fernandes et al., 2009; Srinivasan et al., 2010; Taechowisan et Lumyong, 2003).

I.2.للنباتات الداخليةالدقيقةالحيةللكائناتالبيولوجيالتنوعI.1.2.الداخليةالدقيقةالحيةللكائناتالعائلةالنباتيةالمجموعات

موعات اعلىإليهاأشرياخليطيةالبكتريياوالفطرياتبينهامنالدقيقةاحليةللكائناتاملختلفةا أ

Lee et(عائلهامعبالتكافلتعيشوعدائيةغريتكوناألخريةهذهللنباتات داخليةدقيقةحيةكائنات

al., 2008; Saithong et al., 2010; Tian et al., 2004(.يفتنموااليتالنباتاتمنعزلتاألندوفيت

,Ebel(البحارأعماقواحلارةاملناطقالباردة،املناطقإستوائية،شبهاإلستوائية،املعتدلة،البيئاتخمتلف

2006; Larsen et al., 2005; Zhang et al., 2006( .دراسةأجلمناملختربةالنباتاتمجيعاآلنحلد

اعلىوجدتاألندوفيت ,Tan et Zou(الراقيةالنباتاتأنواعمجيعلدىتقريباوجودهايعتقدوهلاعائلأ

2001; Ulrich et al., 2008(.اعلىوجدتاآلنحلداملختربةالوعائيةالنباتاتأغلبأنهإذ علىحتتويأ

البحريةالطحالبمنأيضاعزلتاألندوفيت.)Hasegawa et al., 2006; Zhang et al., 2006(األندوفيت

)Fang et al., 2011(،األشنات)Arnold et al., 2009(البحريةاألعشابو)Alva et al., 2002( .

بالتايلواألندوفيتعائاليكونأنميكنهاألرضوجهعلىنبايتنوع300000حوايلأنهبالذكرجذير

حولاحلايليف القرندراساتحيث،)Qin et al., 2009b(البيولوجيللتنوعحقيقيمصدرتشكلفهي

مناألنواعمئاتإىلاألجناسعشراتمنعزلميكنإذوضوحاأكثرأصبحتلألندوفيتالبيولوجيالتنوع

املعزولالكبريالعددهذا.)Hasegawa et al., 2006; Qin et al., 2011; Tan et Zou, 2001(واحدةنبتة

التنوعيفكبريةأمهيةودورتلعباليتوالدقيقةاحليةالكائناتمنجديدةأنواععلىاحلصولفرصةمنيعزز

.)Clay, 1992(البيولوجي


7

I.2.2.للنباتات الداخليةالخيطيةالبكتيرياوللفطرياتالمشكلةالمجموعاتأهمأنحنييف،)Strobel et Daisy, 2003(عزالواألكثردراسةاألكثرهيالداخليةالفطرياتتعد

تنوعمتلكالفطريات. )Qin et al., 2009b(جيدامدروسةغرينسبياللنباتات الداخليةاخليطيةالبكترييا

أنميكنأنهعلى1991سنةHawkswoقدرحيثاجلديدةلألنواعجيدمصدروتشكلهائلبيولوجي

معوفطري،نوع100000حوايلسوىتشخيصيتمملأنهإالّ فطرينوعمليون1.5حوايلهناكيكون

مليون1حوايلهناكيكونأنميكنأنهقّدرحيثمستمرارتفاعيفللفطرياتالبيولوجيالتنوعتقديرذلك

.)Strobel et Daisy, 2003(لوحدهاللنباتات الداخليةالفطرياتمنفطرينوع

الالجنسيةأشكاهلاوascomycotaالزقيةالفطرياتشعبةإىلتنتمياملعزولةالداخليةالفطرياتأغلب

صفمنكلعلىتشملأنميكناليتو،)Guo et al., 2000; Saithong et al., 2010(األخرى

Pyrenomycetes ،Loculoascomycetes ،Discomycetes ،Hyphomycetesصفوcoelomycetes

)Gehlot et al., 2008; Tomita, 2003( .الشعبأنواعمنبعضتكونأنميكنأيضاالداخليةالفطريات

Oomycota)Arnold, 2007; Gehlot et al., 2008; Guo etوZygomycota ،Basidiomycotaالفطرية

al., 2001(.املنتشرةالعشبيةالنباتاتمنواسعةجمموعةتصيبأنميكنالداخليةالفطرياتأخرىجهةمن

بفطرياتالفطرياتهذهتعرف. )Schulz et Boyle, 2005(تكافليةحياةعوائلهامعتعيشوالعاملعرب

EpichloëوBalansiaمثلاألجناسأهمبعضتشملأنميكنوClavicipitaceousالعشبيةالنباتات

Claviceps)Moon etاجلنسكذلكوالتوايلعلىNeotyphodiumوEphelisالالجنسينيمثيالمهاو

al., 2007; Rodriguez et al., 2008(.


8

عموماأخرى،إىلمنطقةمنالغزارةوالتنوعحيثمنالداخليةاخليطيةالبكتريياوالفطرياتختتلف

اأظهرتاالستوائيةاملناطق للنباتات الداخليةاخليطيةالبكتريباوللفطرياتالبيولوجيالتنوعيفغناأكثرأ

Azevedo et(الباردةواملعتدلةباملناطقمقارنة al., 2000; Zabalgogeazcoa, 2008( .أنواعغالباتنتمي

،Acremoniumمثلالشائعةالفطريةاألجناسإىلاملعتدلةاملناطقمناملعزولةالداخليةالفطريات

Alternaria،Cladosporium،Coniothyrium،Epicoccum،Fusarium،Geniculosporium،

Phoma،PleosporaوPenicilium)Márquez et al., 2007; Schulz et Boyle, 2005( .أنحنييف

،Colletotrichum،Xylariaأجناسإىلتنتمياإلستوائيةاملناطقنباتاتمناملعزولةاألنواعأهم

Pestalotiopsis،Phomopsis،Phyllosticta)Cannon et Simmons, 2002; Kumar et Hyde,

2004; Suryanarayanan et al., 2003( .أجناسمنكلأنواعبعضبينماFusarium،Phoma

اعلىوجدتPhompsisو املعتدلةواإلستوائيةاملناطقنباتاتمنكلبنيمشرتكةتكونأنميكنأ

)Schulz et Boyle, 2005( .أنواععلىتركزتللنباتات الداخليةاخليطيةبالبكترييااملتعلقةالدراساتمعظم

اخليطيةالبكتريياأجناس.)Qin et al., 2011; Ulrich et al., 2008(البستانيةوالزراعيةاحملاصيلنباتات

اعلىوجدتللزرعالقابلةوللنباتات الداخلية أنواعبعضهيعزالاألكثروضيقةجموعةحتدأ

Micromonospora،Microbispora،Nocardia،Nocardioids،Actinomaduraجنسأنواعو

StreptomycesسيادةاألكثرهيAraújo et al., 2000; Hasegawa et al., 2006; Qin et al.,)

2009b(.

I.3.األندوفيتإيكولوجيةI.1.3.العائلتخصص

تخصصبنباتيةعوائلعدةأوواحدللنباتات بعائلالداخليةالدقيقةاحليةالكائناتعالقةصفوميكن

عالقة.(Cohen, 2006; Zhou et Hyde, 2001)العائلتفضيلأوالعائلإنتقاءالعائل،ترردالعائل،


9

منأخرىجمموعةأوواحدعائلعلىمنحصرالدقيقاحليالكائنفيهايكوناليتالعالقةهيالتخصص

تظهراليتولهوراثيةقرابةمتلكالاليتاألنواعبقيةعندالتظهرولكنالعائلهلذاوراثيةقرابةهلااليتاألنواع

السائدالظهورأوالتكرارفهيالعائلترددأوتكرارعالقةأما. )Huang et al., 2008(املوطننفسيف

يظهرأنميكنالكائنهذالكنالنباتيةاألنواعمنحمددةجمموعةأوواحدعائلعندالداخلياحليللكائن

. )Zhou et Hyde, 2001(خمتلفبرتددلكناملوطننفسيفتنموااليتاألخرىالعائلةالنباتاتبقيةلدى

عائلإىلمييلأنهإثباتمعبينهماراثيةوقرابةهلمانباتينينوعنيمععالقةيشكلالذيالدقيقاحليالكائن

مصطلح.)Cohen, 2004; Cohen, 2006(العائلإختيارأوإنتقاءتدعىالظاهرةفهذهاآلخرعلىمعني

لفطراملنحصرأوالسائدالظهورعلىللداللةالفطرياتعلماءطرفمنإستعماالاألكثرهوالعائلتفضيل

موعاتبنيالفروقاتعنللتعبرييستعملكماحمدد،عائلعلىما املعزولةوترددهاوللفطرياتاملكونةا

.Bettucci et al., 2004; Suryanarayanan et Kumaresan, 2000)(خمتلفةنباتيةعوائلمن

موعةمستوىعلىيكونأنميكنالعائلختصصأثبت أن علىتكونأنميكنكما) اجلنس(ا

;Cannon et Simmons, 2002)احمليطةالبيئيةبالظروفالتخصصهذاتأثرإمكانيةمعالنوعاملستوى

Cohen, 2004).العيشعلىالقدرةوالعائلالنباتمعالتأقلممننوعوجوديعينالتخصصهذاظهور

النباتيةاألمراضمسبباتمنعائلهامحايةيفاملسامهةدرجةإىليتطورالذيالتأقلمهذاأنسجته،داخل

Sekar(العائلختصصبالتايلوعائلهوالداخليالدقيقاحليالكائنبنيالتعايشمننوعخيلقالذيهذاو

et Kandavel, 2010(.

يصيبالذيNeotyphodiumفطرهوعائلهااجتاهبتخصصهااملعروفةالفطريةاألنواعأهمبنيمن

يففقط،نباتيتنينوعنيأونوععلىوجودهينحصرإذالعوائلمنضيقةجمموعةلهوالذيالعشبيةالنباتات


10

أوأجناسعدةتشملالعوائلمنواسعةجمموعةفلهاعامةتكونالشائعةاألخرىالفطرياتبعضأنحني

.(Zabalgogeazcoa, 2008)خمتلفةنباتيةعائالت

أنإىلاألحباثبعضإشارةمنبالرغمبدقةمفهومةغريالتفضيلهلذاالرئيسيةاألسبابوالطرقتبقى

موعاتبنياإلختالف الكيمائيةباإلختالفاتعالقةلهللنباتات الداخليةالدقيقةاحليةللكائناتاملشكلةا

األنزمييةالطرقسيمااإلخرتاقطرقوالتعرفآلياتتعدكما،(Paulus et al., 2006)النباتيةالعوائللدى

.Arnold, 2005; Tan et Zou, 2001)(العائلبتخصصعالقةهلاأيضااملكايناإلختالفو

I.2.3.النسيجتخصصاألوراق،السيقان،الثمار،(املختلفةالنباتاتأعضاءأنسجةمنالداخليةالدقيقةاحليةعزل الكائناتمت

. )Kumar et Hyde, 2004; Qin et al., 2011; Zhang et al., 2006()البذورواخلشباللحاء،األزهار،

عضونسيجعلىوجودهاينحصروحمددةمناطقيفعوائلهاالداخليةالدقيقةاحليةالكائناتهذهتصيب

العائلأنسجةخمتلفمنعزهلاميكنحيثمنتظمبشكلعوائلهااألخرىاألنواعبعضتصيبكما. حمدد

األوراق،منلكلخلويبنيالفراغيفبانتظامينتشراناللذانEpichloëوNeotyphodiumالفطرينمثل

احليةالكائناتجمموعاتيفاإلختالف. )Zabalgogeazcoa, 2008(عائلهابذوروالربعميةالسويقات

يدلالنباتلدىمعنيعضونسيجعلىبعضهاوجوداحنصاروالنباتاتأنسجةمناملعزولةالداخليةالدقيقة

موعاتهذهأنعلى .(Photita et al., 2001)النسيجختصصميزةمتلكا

هذهتقدمهااليتاألفضلياتإىلالعائلأنسجةخمتلفيفالدقيقةاحليةاملختلف للكائناتالتجمعيعزى

املتخصصالكائنقدرةمدىوالعائلأنسخةملختلفالغذائيةاملركباتيفاإلختالفما،لكائناألنسجة

أفضلبشكلينمواملتخصصالكائنأنوجدحيث. النسيجذلكيفحمددةمادةاستعمالوالعيشعلى

,.Arnold et al., 2003a; Liu et al(منهعزلهمتالذيالنسيجمستخلصاتعلىحتتوياليتاألوساطعلى

2010; Photita et al., 2001(.احلالةواألشعةنسبةالنسيج،عمرمثلأخرىعواملإىلباإلضافة


11

Bussaban et)الكائناتهذهختصصمدىيفمهمدوراتلعبالنباتألنسجةالكيميائيةوالفيزيولوجية

al., 2001; Naik et al., 2009; Photita et al., 2001).

I.3.3.للنباتات الداخليةالدقيقةالحيةالكائناتوكثافةتوزيععلىالمؤثرةالعوامل

للنباتات الوراثيالنمطمنهاعواملبعدةللنباتات الداخليةالدقيقةاحليةالكائناتكثافةوتوزيعيتأثر

Rosenblueth et(احمليطةالبيئيةالظروفواجلغرايفاملكانتباين،)الفصلية(للعائلالتنمويةاملرحلةالعائلة،

Martinez-Romero, 2006; Su et al., 2010( .الذيوالعواملأهمبنيمناجلغرايفاملكانإختالفيعد

أنواعوعددإختالفإىليؤديماهذاوالنباتاتحتتهاتعيشاليتالبيئيةالشروطإختالفأيضايعين

نفسلدىالنوعوالعدديفختتلفأنالكائناتهلذهميكنإذالنباتات،بنيالداخليةالدقيقةاحليةالكائنات

نوعيفالفرق. )Slippers et Wingfield, 2007; Zabalgogeazcoa, 2008(أخرىإىلمنطقةمنالعائل

تأثريعلىدليلأحسناملعتدلةواإلستوائيةاملناطقبنيللنباتات الداخليةالدقيقةاحليةالكائناتعددو

احليةبالكائناتغناأكثراإلستوائيةاملناطقنباتاتتظهرإذالكائنات،هذهكثافةوتنوععلىاملكاينالتباين

الرطوبة،هياإلختالفهلذاالرئيسةاألسباببنيمنلعلو،)Zabalgogeazcoa, 2008(الداخليةالدقيقة

Naik et al., 2009; Suryanarayanan et(الفصليةوالتساقط al., 1998; Suryanarayanan et al.,

ماهذاوالرطوبةوالتساقطنسبةبارتفاعكبريةعالقةهلاللنباتات املرتفعةاإلصابةأنوجدإذ. )2005

احلرارةتتميزاليتاإلستوائيةباملناطقمقارنةالتساقطقلةوبالفصليةتتميزاليتاملعتدلةاملناطقيفقلتهايفسر

األحياءذهلإلصابةعرضةأكثراملناطقهذهنباتاتجيعلماالكثيفالتساقطوالفصليةإنعدامالدافئة،

.)Suryanarayanan et al., 2005; Zamora et al., 2008(الدقيقة

اعلىجدتواجلافةالبيئاتذاتاملناطق الداخليةالدقيقةاحليةالكائناتكثافةوتنوعمنحتدأ

هلذهالبيئيةالظروفحبكموذلكإىلإضافةالتساقط،والرطوبةقلةوالفصليبالطابعلتميزهاالنباتاتلدى

افإناملناطق امعالتأقلمدفخاصةبنياتتطويرعلىتعملنباتا الشمعيةالطبقاتتشكيلمثلبيئا


12

اخلاصةالبنياتهذهكلاملتبخرة،املاءكميةمنالتقليلألجل(Stomata)الثغورعددمنالتقليلوالثخينة

نباتاتلدىالداخليةالدقيقةاحليةالكائناتكثافةوتنوعمناحلدوالتقليلأجلمنإضايفعاملتشكل

.)Suryanarayanan et al., 2005(اجلافةالبيئات

لدىعضوكلسنتقدممعتزيدالداخليةالدقيقةاحليةالكائناتكثافةوتنوعمنكلأخرىجهةمن

Hata et al., 1998; Persoh et(النباتات al., 2010; Sieber, 2007( .تتعرضالزمنمرورمعوحيث

بأعدادالنباتيةاألنسجةغزوإمكانيةإرتفاعبالتايل،الدقيقةاحليةالكائناتمنكثافةأكربلقاحإىلالنباتات

مقارنةمنهاأكربلعددملجأالنباتاتلدىاملسنةاألجزاءجيعلماهذاوالكائناتهذهمنأكربأنواعو

.)Arnold et al., 2003(سناباألصغر

I.4.للنباتات الداخليةالدقيقةالحيةالكائناتدور

I.1.4.النباتاتنموتعزيز

لألمسدة،املباشرغريأواملباشراإلستعمالعنالناجتةالبيئيةعلىاملخلفةاألضرارواألخطاردفعت

هلذهجديدةبدائلعنالبحثإىلالضارةاألعشابمبيداتوالفطريةاملبيداتاحلشرية،املبيدات

Muhammad et(الغابيةالزراعاتوالبستنةالزراعة،جماليفالنباتاتمنولتعزيزالكيميائيةاإلسرتاتيجيات

al., 2010; Qin et al., 2011( .

أنميكناليتاملميزاتمنمتلكهملاذلكوخاصباهتمامالداخليةالبكتريياوالفطرياتمنكلحتضى

أنميكناليتوالنباتيةاألنواعخمتلفمنوحتسنييفتساهمأنميكنهاحيثعوائلها،منوعلىبالفائدةتعود

إماوللنباتات املمرضةاحليةالكائناتضداملقاومةعواملإنتاجيفتتمثلاليتومباشرةغريبطريقةإماتتم

auxins،cytokinins(مثللنموهااملنظمةالنباتيةاهلرموناتإنتاجتشملاليتومباشرةبطريقة

توفريوالغذائيةالعناصرإمتصاصحتسنييفاملسامهةإىلباإلضافة.Sidrofireإنتاجأو)gibberllinsو


13

إنتاجعناملرتتباإلجهادمنالتخفيفأو) املعدنيةالعناصرمنغريهاوالفوسفاتالنيرتوجني،(منهابعض

aminocyclopropane-1- carboxylate deaminase (ACC))Compant et-1نشاطيةبواسطةاإليثيالن

al., 2005; Kannan et Sureendar, 2009; Nimoni et al., 2010; Sun et al., 2009(.

األوكسينات هيالدراساتعليهاتركزتاليتوالنباتاتمنوتعزيزيفدورهلااليتاهلرموناتأهمبنيمن

(auxins)اجليبريليناتو(gibberllins)،منويففيزيولوجيووظيفيدورهلااليتاألوكسينات بنيومن

الناشئة،اخلاليايفمتايزهاوإنقسامهاواخلالياإستطالةحتفيزعلىيعملالذي)IAA(اهلرمونهوالنبات

منووالنباتطرفمنلألغذيةأكرببامتصاصيسمحمماللجذوراجلانبيةالتفرعاتزيادةعلىيعملكما

اعلىفتظهراجليبريليناتأما. )Shrivastava et al., 2008; Soltani et al., 2010(لهجيد يفتشاركأ

تطورومنوتعزيزيفالتدخلهيهلاالرئيسيةامليزاتلكنتطورها،والنباتاتمنوجوانبمنجانبكل

. )Nadeem et al., 2010(الشيخوخةسنتأخريوالبذورنضجوالسويقات

النموهلورموناتمنتجةللنباتات الداخليةاخليطيةالبكتريياوالفطرياتأنالدراساتمنالعديدبينت

اAspergillusوPeniciliumفطريإىلاملنتميةالعزالتأن بعضأشري. النباتية للنباتات ،لنموحمفزةأ

وجد. )gibberllin)Muhammad et al., 2010; Nadeem et al., 2010هلورمونو يرجع ذلك النتاجها

من خالل Euphorbia pekinensisعائله منوزيادةعلىيعمل.Fusarium SPPالداخليأن الفطر

للهرموناملنتجةالداخليةاخليطيةالبكترييامنعدد.)IAA)Dai et al., 2008وgibberllinمنلكلإنتاجه

IAAمناملعزولة(winter rye)هذهبذورمعاملةللبادرات عندكثيفمنوواإلنتاشقدرةتعمل على زيادة

أمحاضمننوعني. (Merzaeva et Shirokikh, 2010)البكتريياهذهطرفمناملنتجاألوكسنيذااألخرية

-Streptomyces hygroscopicus TPاخليطيةالبكترييااملعزولة من)(BPteridic acidsوAالبرييديك

A045مناملعزولةPteridium aquilinumللهورمونمماثلتأثريهلماIAAطولزيادةعلىيعمالنإذ

. )Igarashi, 2004(العرضية اجلذورتشكلو


14

I.2.4.للنباتات الممرضةالدقيقةالحيةالكائناتضدالمقاومةتعزيزظهرتالدقيقةاحليةالكائناتباستعمالللنباتات املمرضةالدقيقةالكائناتضدالبيولوجيةاملكافحة

التكاليفبارتفاعقورنتماإذاأكربإقتصاديجدوىهلاأنأظهرتاليتوالكيمائيةللمكافحةكبديل

اإلنسانصحةعلىاخلطروالبيئةتلوثذلكعنفضالالكيميائيةللمكافحةاملنحصراإلستعمالو

)Rocha et al., 2009(.

أنسجةضمنتعيشاليتبينهامنالدقيقةاحليةالكائناتإستعمالعلىالبيولوجيةاملكافحةتعتمد

تشملآلياتبعدةللنباتات املمرضةالدقيقةالكائناتنشاطمناحلدعلىتعملالكائناتهذهالنباتات،

.)Zabalgogeazcoa, 2008(التطفلأواملنافسةالتضاد،

املركباتأواحلالةاإلنزمياتأواحليويةاملضاداتإنتاجالتضادطريقعنالبيولوجيةاملكافحةآليةتشمل

،acids،alcohols،alkyl pyrones،ammonia،esters(مثلالبيولوجيالنشاطذاتالطيارةالعضوية

hydrogen cyanide،keonesوlipids ()Ownley et al., 2010( .الفطرعنداحلالعليههومامثل

ضدنشاطيةلهأنتبنيوالذيالطيارةالعضويةاملركباتمنمزيجينتجالذيMuscodor albusالداخلي

حيتويأنهوجداملزيجهذاحتليلبعد. اإلنسانوللنباتات املمرضةالبكتريياوالفطرياتمنواسعةجمموعة

,lipids ()Strobelوacids،alcohols،esters،keones(الطيارةالعضويةاملركباتمنجمموعةعلى

اعلىإليهاأشرياخليطيةالبكتريياوالفطريةاألنواعمنالعديد.)2006 احليويةللمضاداتمنتجةأ

(El-Gendy et El-Bondkly, 2010; Wang et al., 2007).الفطريةاألنواعمنعددمستخلصات

Liu et(للنباتات املمرضةالفطرياتمنعددضدنشاطيةهلاأنأثبتللنباتات الداخليةاخليطيةالبكتريياو

al., 2010; Taechowisan et al., 2005(.أوالداخليةالدقيقةالكائناتببعضالنباتاتتلقيحيؤدي

مركباتإلنتاجالكائناتقدرة هذهعلىيؤكدممااألمراضاىل خفض حدةالتخمريةبرشاحتهامعاجلتها

بالفطريات القمحنباتتلقيحأدى.النباتلدىالدفاعآلياتحتفيزعلىأواملمرضةللفطرياتمضادة


15

ChaetomiumوPhomaالفطرطرفمناملسببةاإلمراضيةحدةخفضاىلبرشاحتهماأوPuccinia و

Pyrenophora.الفطر spp.)Dingle et McGee, 2003; Istifadah et McGee, 2006(.

خاللمناملمرضةالدقيقةالكائناتضدعوائلهامحايةيفالداخليةالدقيقةاحليةالكائناتتساهم

اإلصابةمنععلىتعملحيث. )Gao et al., 2010(الغذائيةاملصادرومعيشتهاموطنعلىمنافستها

ضروريةتكوناليتاملتاحةالغذائيةاملواداستنفاذولعوائلهاالسريعالغزوخاللمنذلكواملمرضةبالكائنات

الداخليالفطرلدىاحلالهومامثل،(Pal et Gardener, 2006)املمرضةالدقيقةالكائناتلنمو

الفطرمكافحةعلىيعملأنهماحدإىليعتقدالذيBeauveria bassiana 11-98القطنوللطماطم

Ownley et(املعيشةموطنعلىاملنافسةطريقعناألخرىالفطرياتبعضوRhizoctonia solanاملمرض

al., 2008(.

chitinasمنكلوchitinوglucanمنأساساتتكونللنباتات املمرضةللفطرياتاخللوياجلدار

الفطرياتهلذهاخللوياجلدارحتليلوهدمعلىتعملاليتالرئيسيةاإلنزمياتمنβ-1,3-glucanasو

خاللمناملمرضةالفطرياتهذهتثبيطوقتلعلىاملتطفلةالدقيقةاحليةالكائناتتعملحيثاملمرضة،

واخرتقهاعمليةيسهلممامستواهاعلىثغوربذلكمشكلةاخللويجلدارهااحملللةاإلنزمياتهلذهإنتاجها

Anitha et Rabeeth, 2010; Cao et al., 2009; Dababat et(لنموهاالالزمةالغذائيةاملركباتاستخالص

Sikora, 2007( .احملللةاإلنزمياتلبعضمنتجةأيضاللنباتات الداخليةاخليطيةالبكتريياوالفطرياتبعض

اإلنزمياتهذهبإنتاجعالقةلهالفطرياتهذهلنمواملثبطةنشاطيتهاواملمرضةللفطرياتاخللويللجدار

.)β-1,3-glucanas)Cao et al., 2009; Quecine et al., 2008وchitinasمثلاخللويةجلدرهااحملللة

I.3.4.الحشراتوالعاشبةالكائناتضدالمقاومةتعزيزعوائلهامحايةيفتساهمأنللنباتات الداخليةالدقيقةاحليةللكائناتميكنأنهإىلأحباثعدةأشارت

Clay et Schardl, 2002; Roberts et Andrae, 2004; Spiering(احلشراتكذاوالعاشبةاحليواناتضد


16

et al., 2005(.عوائلمنهاجتعلاليتوعوائلهامستوىعلىالسامةاملركباتبعضإنتاجخاللمنذلكو

العديد. )Azevedo et al., 2000(احلشراتوالعاشبةاحليواناتهذهطرفمنعليهاللتغذيمناسبةغري

العاشبةاحليواناتواحلشراتعلىللنباتات الداخليةالدقيقةاحليةالكائناتتأثريعلىأجريتاألحباثمن

اظهرتالنتائجأنمنالرغمعلىو عالقةهناكأنهإالحشرةإىلحشرةمنونبتةإىلنبتةمنختتلفأ

املصابةغريالنباتيةاألنواععلىالتغذيتفضلالعشبيةالنباتاتعلىتتغذياليتالكائناتأنإىلتشريقوية

عليهابالتغذيللحشراتتسمحامليكروباتذهاملصابةغريالنباتاتأنحيثالداخلية،بامليكروبات

ا،مواصلةو املصابة(Ryegrass)األعشابعلىتتغذياليتالصراصريأنواعبعضاملثالسبيلفعلىحيا

امواصلةميكنهابينماساعة48غضونيفمتوتالداخليةبامليكروبات غريأخرىنباتاتعلىتغذتإذاحيا

اليتاملواشيواألحصنةمثلالعاشبةاحليواناتبعض. )Ahmed et al., 1985(الداخليةبامليكروباتمصابة

اوجدتالداخليةبامليكروباتاملصابةFestuca arundinaceaالعشيبالنباتعلىتتغذى منتعاينأ

أينبعدهادراسةيف. )Tall fescue toxicosis)Roberts et Andrae, 2004مرضمنهااألمراضبعض

alkaloids،lysergic acid amides(السامةاملركباتبعضبسببيظهرأنهوجداملرضهذاشخص

العشيبالنباتهذابذوروأوراقيفوجدتalkaloidsمنعاليةنسبةذلكمعموازاةو) ergopeptinesو

. )Roberts et al., 2005(هلاالداخليةامليكروباتطرفمناملنتجةو

اللنباتات الداخليةالدقيقةاحليةللكائناتالرئيسيةامليزةإن املركباتإنتاجمنرفععلىتعملوحتّفزأ

مناحلشراتضداملقاومةأنلوحظحيثاحلشرات،طرفمناملسببةلألضرارعوائلهاتعرضبعدالسامة

طرفمنللغزوعوائلهاتعرضبعدوإذalkaloidsإنتاجإىلراجعالداخليةالدقيقةاحليةالكائناتطرف

Azevedo et(منهاترفعوحتّفزاإلنتاجيةهذهاحلشرات al., 2000( .احليةالكائناتالعموموجهعلىو

خمتلفةأنواعإنتاجعلىتعملاحلشراتوالعاشبةاحليواناتمنعوائلهامحايةيفاملسامهةعلىالقادرةالدقيقة


17

وalkaloids،indole diterpenes،lolitrems،Paxilline،peramine(مثلالسامةاملركباتمن

tetraenone steroids(مثلالعاشبةاحليواناتتسميموردععلىتعملاليتو)،واملاعزالغزالن،األبقار

.)Goggin, 2007(احلشراتخمتلفو) اخليول

I.5.البيولوجيالنشاطذاتالطبيعيةللمركباتمصدرالدقيقةالحيةالكائناتيكونأنميكنالنباتيةاألنواعهذهمنفردكلونبايتنوع300000حوايلالبيئيةمنظومتناعلىيوجد

منجديدةعزالتوأنواععلىاحلصولفرصةيرفعويعززماهذاوأكثرأوداخليدقيقحيلكائنعائال

منالعديد. )Strobel et al., 2004(البيئاتخمتلفيفتنموااليتالنباتيةاألنواعخمتلفمناملكروبات

واخليطيةالبكتريياضمنهامناملكروباتمنجديدةعزالتوأنواععلىاحلصولميكنأنهبينتاألحباث

مركباتعلىاحلصولإمكانيةبالتايليعيناجلديدةاألنواعهذهعلىاحلصولوللنباتات ،الداخليةالفطريات

املعزولةالدقيقةاحليةالكائناتأغلب. )Mohanta et al., 20110(أكربتكونبيولوجينشاطذاتجديدة

يرتفععددهابدأاليتواخليطيةالبكتريياأنواعمنعددإىلباإلضافةالفطرياتإىلتنتميالنباتاتخمتلفمن

عليهااملتحصلالثانويةاملستقلباتعددأخرىجهةمن. )Mohanta et al., 20110(األخريةالسنواتيف

. )Zhang et al., 2006(آخرداخليمكروبأيمنأكربالداخليةالفطرياتمن

مصدرتشكلأنميكنهاللنباتات الداخليةاخليطيةالبكتريياوالفطرياتأناألحباثمنالعديدبينت

Zhao et(ميكروبيةضدخمتلقة،بيولوجيةنشاطياتهلااليتاجلديدةالطبيعيةاملركباتملختلف al., 2010;

Zhao et al., 2011(،للسرطانمضادةنشاطيةذاتمستقلبات)Chaeprasert et al., 2010; Igarashi

et al., 2007b(،لإللتهاباتمضادةنشاطيةذاتمستقلبات)Deshmukh et al., 2009; Thongchai et

al., 2009(،لألكسدةمضادةنشاطيةذاتمستقلباتذلكإىلإضافة)Srinivasan et al., 2010;

Taechowisan et al., 2009(.خمتلفإىلالعلميةاملنشوراتوالتقاريرمنالعديدتطرقتأخرىجهةمن


18

موعات اخليطيةالبكتريياوالفطرياتمنمؤخرااملعزولةبيولوجياالنشطةالثانويةاملستقلباتإليهاتنتمياليتا

أهمواملستقلباتهذهأنواعبعضإىلأشار)Qin)2011حيث . خمتلفةنباتاتعدةمناملعزولةالداخلية

موعات بصورةيظهرإذخمتلفة،عوائلمناملعزولةاخليطيةالبكترييامنعليهااملتحصلإليهاتنتمياليتا

الثانويةاملستقلباتإنتاجعلىرئيسيةبصفةاملسؤولةهيStreptomycesجلنساملختلفةاألنواعأنواضحة

وعاتخمتلفإىلأشاروا(2009)و آخرونYuأما . بيولوجياالنشطة اجلديدةالثانويةللمستقلباتاملشكلةا

ومنالعموموجهوعلى. خمتلفةعوائلمناملعزولةالداخليةالفطرياتمنعليهااملتحصلوبيولوجياالنشطة

توفريعلىقادرةللنباتات الداخليةاخليطيةالبكتريياوالفطرياتأنيظهرأخرىوالتقاريرهذهخالل

اعلىوجدتاألحيانأغلبيفاليتوبيولوجياالنشطةالثانويةاملستقلباتمنواسعةجمموعات تنتميأ

،Alkaloids،Aliphatic compounds،Peptides،Phenols،Quinones،Steroids،Terpenoids(إىل

Macrolides ،Macrotetrolide،Coumarins ،Ansamycins ،Arylcoumarins، Anthraquinones

. Flavonoids((Qin et al., 2011; Yu et al., 2009)و

I.1.5.النشاطذاتالثانويةللمستقلباتمصدرللنباتات الداخليةالخيطيةالبكتيرياوالفطرياتللميكروباتالمضاد

اعلىتعّرفاحليويةاملضاداتنشاطيةهلاأوتسلكاليتالثانويةاملستقلبات الطبيعيةالعضويةاملوادأ

ألحياءمضادةنشاطيةهلااليتوالدقيقةاألحياءطرفمنتنتجاملركباتهذهاملنخفضة،اجلزيئيةاألوزانذات

Guo et(املنخفضةالرتاكيزعندأخرىدقيقة al., 2008(.الداخليةالدقيقةاحليةالكائناتأنيعتقدو

إنتاجخاللمنذلكواملمرضةالدقيقةاحليةالكائناتعلىللتغلبالفعالةاآللياتمنهلاللنباتات

الدراساتمنالعديداآلنحىتو.)Tan et Zou, 2001(ميكرويبالضدالنشاطذاتالثانويةاملستقلبات

املضادةاملركباتمنواسععددإنتاجعلىالقدرةهلاللنباتات الداخليةالدقيقةاحليةالكائناتأنبينت


19

،Alkaloids،Peptides،Phenols،Quinones،Steroids(أمههاأقسامعدةإىلتنمياليتوللميكروبات

TerpenoidsوFlavonoids()Yu et al., 2009(.

العددعلىللتغلبمهمبديليعدللميكروباتاملضادةالثانويةاملستقلباتمنجديدةمركباتإكتشاف

للمضاداتالقليلواحلايلالوجودلعلوالنبات،ولإلنساناملمرضةولألدويةاملقاومةللميكروباتاملتزايد

نسبيايعودللميكروباتاملضادةاجلديدةللعواملالقليلالعددوالبكترييةاألنواعخمتلفضدالفعالةاحليوية

الهذايفاإلستثمارياملردودقلةإىل مناملنتجةامليكروباتمضادات).Song, 2008; Yu et al., 2009(ا

أيضاميكنبلللبشرعالجيةكأدويةفقطاستعماهلاميكنالللنباتات الداخليةالدقيقةاألحياءطرف

Liu et(األغذيةهذهتنقلهاأنميكناليتاألمراضمراقبةوالسيطرةوالتلفمناألغذيةحفظيفاستعماهلا

al., 2008( .

I.1.1.5. للنباتات مصدر للمستقلبات الثانوية المضادة للبكتيرياالفطريات و البكتيريا الخيطية الداخليةامنالتقليلميكناألمراضهذهثلثمنأقلومشخصسريريمرض30000منأكثريوجد حد

أدتاليتومستمرةزيادةيفاملقاومةمتعددةالبكتريياعددأنكمامنه،الشفاءميكنذلكمنأقلعددو

عواملإىلماسةحاجةهناكبالتايلوالبكتريياة،األنواعهذهضدالتقليديةاملعاجلةفعاليةمناحلدإىل

.)Larsen et al., 2005; Strobel et Daisy, 2003(األمراضهذهملكافحةجديدةعالجية

Cyclo(Pro-Thr) (3)بينهامنللنباتاتالداخليةالفطرياتمنعليهااحلصولمتحيويةمضاداتعدة

بكتريية،ضدنشاطيةهلماالبيبتيديةاحليويةاملضاداتمنجديديننوعنيمهاوcyclo (Pro-Tyr) (4) و

Acrostichumمناملعزول.Penicilium spالداخليالفطرمنعليهمااحلصولمتاألخريينهذين

aureurm)Cui et al., 2008(.الفينوليةاألمحاضمنجمموعة(phenolic acids) الفطرمنالمتحصل علیھا

البكتريياضدبكترييةضدنشاطيةأظهرتSaurauia scaberrinaeمناملعزول.Phoma spالداخلي

Hoffman et(الغرامموجبة al., 2008(.3املركبنيمنكل-O-methylalaterninوaltersolanol A


20

الطبيةالنبتةمناملعزولAmpelomyces sp.الداخليالفطرطرفمنإنتاجهمامت) )5،6(1الشكل(

Urospermum picroidesالغرامموجبةللبكترييامضادةنشاطيةأظهرتاليتوStaphylococcus

aureus،S.epidermidisوEnterococcus faecalis)Aly et al., 2008(.البكتريياأخرىجهةمن

اأظهرتStreptomycesجنسخصوصااخليطية العزلةاحليوية،املضاداتمنخمتلفةأنواعإنتاجعلىقادرةأ

Streptomyces sp .األسرتاليةالنبتةمناملعزولةGrevillea pteridifoliaاعلىصفتو لنوعنيمنتجةأ

نشاطيةلهأنوجدkakadumycin Aحيث،echinomycinوkakadumycin Aاحليويةاملضاداتمن

Castillo et al., 2003(.)Castillo(الغرامموجبةللبكترييامضادة et al., 2006(املضاداتمننوعنيعزلوا

،Streptomyces NRRL 30562العزلةمنmunumbicins E-5وmunumbicins E-4البيبتيديةاحليوية

نشاطيةهلااملركباتهذهكلوmunumbicins A-Dاحليويةاملضاداتمنجمموعةتنتجأيضااألخريةهذه

.)Yu et al., 2009(الغرامسابلةوموجبةللبكترييامضادة

I.2.1.5. الفطريات و البكتيريا الخيطية الداخلية للنباتات مصدر للمستقلبات الثانوية المضادةللفطريات

إليهتؤديأنميكنملاذلكومتزايدصحيخطرايشكلأصبحلإلنساناملمرضةبالفطرياتاإلصابة

األعضاء،بزرعيقومونالذيناملرضىعندسيمااملناعياجلهازإضعافإىلتؤديكماخطريةأمراضمن

.)Strobel, 2002(األمراضهذهمنحتدجديدةحيويةمضاداتإىلماسةحاجةهناكبالتايلو

Chaetoglobosins CوChaetoglobosins Aاأللكالويداتإىلتنتمياحليويةاملضاداتمننوعني

MucorللفطرمضادةنشاطيةهلماChaetomium globosumالداخليالفطرمن))2 ،1(: 1الشكل(

miehei(Qin et al., 2009a).احليويةاملضاداتمننوعنيpestalachloride Aوpestalachloride B

منجمموعةضدعاليةنشاطيةهلماأنتبنيالذيوPestalotiopsis adustaالفطرمن)))8 ،7(:1الشكل(

Fusarium culmorum،Giberella(للنباتاتاملمرضةالفطريات zeaeوVercillium aiboatrum()Li


21

et al., 2008( .مثل املركباناألليفاتيةاملركباتإىلتنتمياحليويةاملضاداتبعضCytosporone B

هلااملركباتهذه،Phompsis sp.الداخليالفطرمنعزهلمامت))9،10(:1الشكل(Cytosporone Cو

FusariumوCandida albicansالفطرضدنشاطية oxysporium)Li et al., 2008( .أخرىجهةمن

منهاStreptomycesجنسخصوصااخليطيةالبكترييامنعزهلامتللفطرياتاملضادةاملركباتمنالعديد

لهالذيوStreptomyces sp. TP-A0595العزلةمنعزلهمتالذيprenylindole-6البسيطاملركب

آخرينمركبان. Fusarium oxysporium (Igarashi, 2004)للنباتات املمرضللفطرمضادةنشاطية

املعزولةStreptomyces sp. TP-A0456العزلةمنعزهلمامتcedarmycins Bوcedarmycins Aجديدان

(MIC)للتثبيطأدىنبرتكيزCandida glabarataالفطرضدنشاطيةشهدcedarmycins Aاألرز،من

AlpiniaجذورمناملعزولةStreptomyces sp. Tc022الداخليةالعزلة.)Igarashi, 2004(مل/مكغ0.4

galangaالفطربقوةتثبطCollectotrichum musaeوCandida albicansمنتجةالعزلةهذهأنتبنيو

العزلةمنsaadamycinجديدحيويمضادعزلمتمؤخرا. actinomycin Dاحليويللمضاد

Streptomyces sp. Hedaya48بعضواجللديةاملمرضةالفطرياتضدعاليةجدنشاطيةأظهرالذيو

.)El-Gendy et El-Bondkly, 2010(لإلنساناملمرضةاألخرىالفطريات


22

.ميكرويبالضدالنشاطذاتللنبتاتالداخليةالفطرياتمناملعزولةالطبيعيةاملركباتبعضبنية:01الشكل


23

I.2.5.لألكسدةالمضادةالثانويةللمستقلباتمصدرللنباتات الداخليةالخيطيةالبكتيرياوالفطرياتاكونيفلألكسدةاملضادةاملركباتأمهيةتكمن تتسبباليتاألضرارضدفعالةتكونأنعلىقادرةأ

يفتساهماليتواألوكسجنيمناملشتقةاحلرةاجلذورو(ROSS)األوكسيجينيةالتفاعالتأنواعخمتلففيها

التحللوالسرطان،(DNA)النووياحلمضتصيباليتاألضرارمثلاألمراض،منخمتلفةجمموعةوجود

.)Huang et al., 2007; Seifried et al., 2007(اخللوي

ذلكمعالفواكه،واخلضرواتمثلالنباتاتلدىشائعةلألكسدةاملضادةالنشاطيةذاتاملركباتتعد

اعلىإليهاأشريللنباتات الداخليةالدقيقةاحليةالكائنات النشاطيةذاتللمركباتمصدرتكونأنميكنأ

هذهعالقةوداخليةفطرياتلعدةلألكسدةاملضادةالنشاطيةقدرHuang (2007). لألكسدةاملضادة

فعاليةواحملتوىهذاكميةبنيكبريةعالقةوجودإىلأشارحيثللفينوالتاإلمجايلباحملتوىالنشاطية

منعليهاحلصولمتGraphislactone Aالفينويلاملستقلب. الفطرياتهذهعندلألكسدةاملضادةالنشاطية

Cephalosporiumالفطريةالعزلة sp. IFB-E001النبتةمناملعزولةTrachelospermum jasminoides

Song et((BHT)و)(ascorbic acidاملستعملةالشواهدمنأعلىلألكسدةمضادةنشاطيةلهأنأثبت

al., 2005( .الداخليالفطرمنعليهمااحلصولمتلألكسدةاملضادةاملركباتمنعنينوPestalotiopsis

microsporaمناملعزولTerminalia morobensisمهاPestacinالطبيعة ذو

(1,3-Dihydroisopestacin)وisopestacinكل،)2الشكل(الفالفونويداتاهليكليةبنيتهيفيشبهالذي

Harper et al., 2003; Strobel(لألكسدةمضادةوميكروبيةضدنشاطيةهلماأنأثبتاملركبنيهذينمن

et al., 2002( .البكترييةالعزلةStreptomyces sp. Tc052جذورمناملعزولةAlpinia galangalجدتو

اعلى ،kaempferol (1)هيلألكسدةمضادةنشاطيةهلافالفونويديةمركباتألربعةمنتجةأ

isoscutellarin (2)،umbelliferone أظهرا(2)و(1)املركبمنكل. )2الشكل(cichoriin (4) و(3)

لوحظكمامتوسطة،إزاحيةقدرةأظهرا(2)و(1)املركبنيمنكلحنييفDPPHجلذرعاليةإزاحيةقدرة


24

موعةوجودبنيعالقةوجود DPPHجذرإزاحةعلىالعاليةالقدرةو(2)و(1)املركبنييفالفينوليةا

)Taechowisan et al., 2009(.

الداخليةاخليطيةالبكتريياوالفطرياتبعضمناملعزولةلألكسدةاملضادةاملركباتبعضبنية:20الشكل.النباتات

2011المواد و الطرق

II فصلال

المـــــواد و الطـــــرق


25

II.1.المواد

II.1.1.النباتيةالعينات

Triticum)الصلبالقمحجذور لنباتوأوراقالنباتية منالعيناتعلىاحلصولمت durum Desf.)

برجواليةباليشري شرقالنجيليةالزراعيةاألراضيأحدمنبشريبنحممداجلزائرياحملليالصنفإىلاملنتمية

متالصنفنفسإىلاملنتميةالقمحبذورعينات. الزرععمليةمنأشهر3بعد2010شتاءيفبوعريريج

.املزارعنفسمنعليهااحلصول

II.2.1.الفطريةوالبكتيريةاألنواع

Stenotrophomonas:هيوالغرامسالبةأنواع9منهاممرضابكرييانوعا12الدراسةهذهيفاستعمل

maltophilia،Citrobacter freundii ،Salmonella typhimurium ،Escherichia coli ،Serratia

marcescens،Enterobacter agglomerans،Pseudomonas aeruginosa ،.Pseudomonas sp

،Klebsiella pneumoniae،هيوالغرامموجبةبكترييةأنواعثالثو :Bacillus sp . ،Staphylococcus

aureus وEnterococcus faecalis .مستوىعلىعليهاالتعرفواملرضىمنسريرياعزهلامتاألخريةهذه

Candida albicansاخلمريةإىلباإلضافة،سطيفلواليةاجلامعيباملستشفىوالطفيلياتالبكتريياعلمخمرب

جامعةالدقيقةاألحياءمبخربعليةالتعرفوعزلهمتأوهلماللنباتات ممرضنيفطريناستعمالمتكما

العلمياملعهدمنعليةاحلصولمتالثاينأما.Phytophtora infestans spوهوبسطيفعباسفرحات

.Fusarium oxysporium f.sp .albidinis (FOA)هو) INRA(الزراعيةللبحوث

II.1.4.واألجهزةالكيميائيةالمواد

SIGMA ،Biokar(شركات مصنعة خمتلفة منالكيميائيةاملركباتمن األوساط و العديداستعملت

diagnostics ،Institut pasteur production ،MERCK ،Panreac ،Prolabo وCheminova.(


26

II.2.الطرق

II.2.1 .النباتيةالعيناتجمع

عناجلذورفصلمتأينمن نفس املنطقة،خمتلفةمناطقمخسةمنعشوائياوحبذرالقمحنباتاقتالعمت

األخريةهذهوضعت. املرضيةيراعى يف أخذ العينات خلوها من االعراضمنها،لكلعيناتأخذواألوراق

عزل الكائنات البكرتيا يتموم4ºالعينات بدرجة حرارةحتضن. معقمةأكياسيفبعضهاعنمنفصلة

,.Larran et al., 2007; Verma et al(اجلمععمليةبعدسا24تتعدىالو الفطريات منها خالل مدة

2009; Zin et al., 2007(.

II.2.2.القمحلنباتالداخليةالخيطيةالبكتيرياوالفطرياتعزل

تعرضمثا،العالقةالبقايانزعدفاحلنفيةماءحتتاملستمرالغسللعمليةالنباتيةالعيناتتعرض

حيثالسطح،علىتعيشاليتاحليةالكائناتعلىالقضاءدفاملتعاقبالثالثيالسطحتعقيملعملية

%2(الصوديومهيبوكلوريتواحدة،دقيقةملدة%96اإليثانوليفتسلسلياتغمروصغريةأجزاءإىلتقطع

بعدومرتنياملعقماملقطرباملاءتغسلأخرياثانية،30 ملدة% 96إيثانوليفمثدقائق3ملدة) ح/حالكلورمن

الورقعلىجتفلترتك) ملمx5ملم5(حوايلصغريةقطعإىلومعقمةحادةبأداةالعيناتتقطعاملرحلةهذه

وسطاحلاويةبرتيأطباقعلىمنهالكلمكرراتخبمسةوعينةكلمنقطعمخسةتزرع. املعقمالرتشيح

Starchالوسطوchloramphénicolمن)ل/مغ250(إليهمضافPotato Sucrose Agar (PSA)الزرع

Casein Agar (SCA)مجيعحتضن. التوايلعلىالداخليةاخليطيةالبكتريياوالفطرياتمنكلعزلدف

الطرفمنمنجزءاقتطاعمتاحلضنعمليةبعدويوميااألطباقتراقب، م28ºحرارةدرجةيفاألطباق

,.Larran et al., 2007; Zin et al(املناسب من أجل تنقيتهاالعزلوسطعلىزرعهاأعيدوالنامي للعزالت

.)03الشكل()2007


27

Naik et(:لـوفقاطريقتنيعلىالدراسةهذهيفالسطحتعقيمعمليةفعاليةمنللتحققباالعتمادمت

al., 2009; Verma et al., 2009( .يفعليةاملتحصلاملعقماملقطراملاءمنمل0.5األوىلالطريقةيفأخذ

القطعبعضأخذفيتمالثانيةالطريقةأما يف ، SCAوPSAأطباقمنكلعلىنشرعملية الغسل وآخر

أيغياب،يومياتراقبوم28ºحرارةدرجةيفاألطباقحتضناملذكورة،العزلأوساطعلىو متسحاملعقمة

معدالتواالستيطانمعدالتحسابمتكما.العيناتسطحتعقيمطريقةفعاليةعلىيدلميكرويبمنو

: التاليةالعالقاتعلىباالعتماد)Yuan et al., 2010(حسبالعزل

Total number of samples yielding ≥ isolateColonization rate =

Total number of samples in that trial

Total number of isolates yielding in a given trialIsolation rate =

Total number of samples in that trial


28

)أوراق،جذور(النباتيةالعيناتمجع

احلنفيةمباءالغسل

)ح/حالكلورمن% 2(الصوديومهيبوكلوريت

دقيقة1مدةالغمر

العالقةالبقايامنالتخلص

% 96اإليثانول

املتعاقبالثالثيالسطحتعقيمعملية

دقائق3مدةالغمر

ثانية30مدةالغمر

اإليثانولبقايامنالتخلص

معقمةحادةبآداةالعيناتقص

املعقماملقطرباملاءالغسل املعقماملقطرباملاءالغسل

التجفيف

املناسبةاألوساطعلىالزرع

% 96اإليثانول



النقيةالعزالت

منتاليتاخليطيةالبكتريياوالفطرياتتنقية

م28ºحرارةدرجتيفاألطباقحضن

املتكررالزرع

تعقيم السطح، عزل و تنقية الفطريات و البكترييا خمطط يوضح : 03الشكل)Larran et al., 2007; Zin et al., 2007(حسباخليطية الداخلية


29

,.Ghadin et al., 2008; Paul et al(لـطريقةوفقامتعليهااملتحصلالبكترييةوالفطريةالعزالتحفض

وPotato Dextrose Agar (PDA) املعقمةالزرعأوساطمنكلعلىاألخريةهذهتنميةمتحيث. )2007

)(NANutrient Agarا،منللتأكدأخريةكمرحلةالتوايلعلى يفاألوساطنفسعلىتزرعبعدهانقاو

للحفظبالنسبةأما. املدىقصريللحفظبالنسبةهذا، م4ºحرارة درجةيفحتفظمنوهاوبعداالختبارأنابيب

الغليسريولمن% 15بهمعقممائيحملولباستعمالبوغيةمعلقاتشكليفحفضهافتماملدىطويل

.منخفضةجدحرارةدرجةيفلتحفظ

II.2 .3.العزالتطرفمنالممرضةالفطرياتوللبكتيرياالمضاداألوليالنشاطإختبار

التعرفليتمتنتقىاألخريةهذهميكرويب،ضدنشاطمتلكاليتالعزالتإظهارإىلاالختبارهذايهدف

اختبارمت. العزالتهذهعلىاختبارهااملرادالبيولوجيةالنشاطاتباقييفعليهاالعملمواصلةوعليها

أخرىأنواع3والغرامسالبةممرضةبكترييةأنواع4علىاملعزولةاخليطيةللبكتريياميكرويبالضدالنشاط

البكترييازرعتالعمودي،اخلططريقةعلىاالختبارهذايفاالعتمادمتحيث. الذكرسالفةالغرامموجبة

أربعةملدةاحلضنمثGN طبقعلعموديخطبشكلمعقمةإبرةبواسطةالبوغياملعلقمنإنطالقااخليطية

بواسطةوNutrient Broth (NB) علىاملنماةوسا24بعمرالفتيةالبكترييةاملزارعمنوانطالقابعدهاأيام،

ساعة،24ملدةم30ºحرارةدرجةيفاحلضنمثاخليطيةالبكتريياعلىعموديخطبشكلتزرعمعقمةإبرة

. )Pandey et al., 2004() ملم(باملليمرتعليهااملعربوالتثبيطمسافةحسابمتاحلضنعمليةبعد

سالفةللنباتاتاملمرضةالفطرياتعلىاملعزولةاخليطيةوالبكتريياالفطرياتمنكلإختبارحالةيفأما

Nuangmek et(املزدوجةاملزارعطريقةعلىاالعتمادفتمالذكر al., 2008; Prapagdee et al., 2008(.

متفطريةالضدالنشاطيةأيام،7إىل5منملدةPDAأطباقعلىاملمرضةواملعزولةالفطرياتمنكلمنيت

طبقجهيتإحدىعلىالداخليللفطرياتالناميةاهليفامنمنزوعملم4بقطرPDA قرصبزرعإظهارها

PDAمنقرصاملقابلةاألخرىاجلهةعلىو PDAنشاطيتهااخليطيةالبكتريياحالةيفبينمااملخترب،للفطر


30

PDA أطباقحوافمنبالقربل20µصبمتحيثسابقا،احملضرالبوغياملعلقباستعمالمتفطريةالضد

بثالثوالعزالتمجيعمعالعمليةأجريت. الطبقمركزيفيلقحاملختربالفطرمنملم4بقطرقرصمث

درجةيفاألطباقكلحضنت.كشاهدلوحدهاملخترببالفطرPDA أطباقتلقيحمعجتربةلكلمكررات

الشاهدمنكليفاملختربةالفطرياتقطرنصفقياسمتاحلضنمنيومآخريفأيام،7ملدةم30ºحرارة

:التاليةالعالقةباستعمالحسبتالتثبيطنسبةواملزدوجةاملزارعو

. هو نصف قطر الفطر املخترب يف الطبق الشاهدB: حيث

Aاملزدوجةاملزرعةطبقيفاملختربالفطرقطرنصفهو.

II.2 .4.المعزولةالبكتيرياوالفطرياتتشخيص

II.2 .1.4.تشخيص الفطريات المعزولة

زرعأوساطباستعمالاملورفولوجيةاخلصائصعلىباالعتماداملعزولةالفطريةاألجناسعلىالتعرفمت

هرباستعمالامليكروسكوبيةاخلصائصوczapek yeast agar (CYA)وPDA ،MEAخمتلفة ا

(Pitt J. I. and Hockingمنلكلالتشخيصمبفاتيحالفطريةاالجناسحتديديفاإلستعانةمتالضوئي،إذ

1985 ; Botton et al., 1990 ; Champion., 1997(التاليةالصفاتحتديدخاللمنذلكو:

.معتدلأوبطيء،سريع،: النمومعدل-

.متذبذبأوللونمنتظمتوزع: اللونيفاحلاصلةالتغرياتواملستعمراتلون-

.املستعمرةخلفيةلون-

.الزرعلوسطامللونةالصباغإفراز-

.الوسطسطحعلىمرتفعةأومسطحةملساء،أوحبيبيةقطنية،أوقطيفيه: املستعمرةسطحبنية-

X 100A - BInhibition percentage (%) = A


31

.املسليومسطحعلى)exsuda(مائيةقطراتوجود-

.مقسمةغريأومقسمةاللون،: اهليفاتخصائص-

،fruiting bodies :(sporonia ،perithecia ،pycnidia،sporodochia(الثمريةاألجسامإنتاج-

corenia.

.الثمريةاألجسامشكلوحجمولون-

II.2 .2.4 .تشخيص البكتيريا الخيطية المعزولة

(;Breed et al 1957التشخيصمبفاتيحباالستعانةاجلنسمستوىعلىاخليطيةالبكتريياعلىالتعرفمت

(Holt et al, 1924البيوكيميائيةوبعض اخلصائصواملزرعةاملورفولوجيةاخلصائصعلىباالعتمادذلكو

اخلصائصإىلباإلضافةInternational Streptomyces Project (ISP): لـوفقاأوساطعدةباستعمال

Muliani, 2008; Shirling et Gottlied, 1966; Silva et(امليكروسكوبية al., 2009; Verma et al.,

: التاليةالصفاتحتديدمتحيث.)2009

اواألبواغتشكيلال،أممقسماملسليوممادةلوناهلوائي،املسليوملونووجود- الزرعوسطعلىلو

Inorganic salts-starch agar (ISP 4)الوسطوYeast Extract Malt Extract (IPS2)منيوم21بعد

.م27ºحرارةدرجةيفاحلضن

.حلزونيةأولولبيةخيط،شكليفسالسلقصرية،أوطويلة: البوغيةالسالسلترتيبومورفولوجية-

.غباريةأوحبيبيةجيالتينية،: املستعمرةسطحبنية-

درجةيفاحلضنمنيوم14بعدGlycérol-asparagine agar (IPS5) الوسطعلىمتاملنتشرةالصباغإنتاج-

.م27ºحرارة


32

احلضنمنيامأ4 بعدTyrosine agar (IPS7) الوسطعلىمت)سوداءإىلداكنةبنية(امليالننيصبغةإنتاج-

.م27ºحرارةدرجةيف

هرتفحصالتلوينمراحلبعدومثبتةبكترييةمسحةبتحضريالكالسيكيةللطريقوفقامتغرامتلوين- با

.)100×(تكبريحتتالضوئي

-acid-fastتلوينبواسطةمتالكحوالتوباألمحاضالتلوينمقاومةأو Ziehl-Neelsen Stainحسب

(Larpent and Larpent-Gourgaud, 1985)يفاألمحرباللونتتلونواليتامليكوبكتريياجنسلتمييزذلكو

حسبمتModified Ziehl-neelsen Stainتلوين.األزرقباللونتتلوناألخرياألجناسبقيةحني

)Gorden et Smith, 1954(مثلجزئياالكحوالتولألمحاضمقاومةتكوناليتاألجناسلتحديدذلكو

Nocardiaالورديباللونتتلوناليتو.

2H2O2 → O2: التايلللتفاعلوفقامركبنيإىلاألوكسيجييناملاءحتللحيفزالكتاالزإنزمي- + 2H2O.

منقطرةإضافةمثمعقمةزجاجيةصفيحةعلىالبكترييةاملستعمرمنجزءبوضعمتاإلنزميهذاوجودإختبار

وجودواألوكسيجييناملاءحتللعلىدليلغازيةفقاعاتظهوردورانية،حبركاتاخللطواألوكسجييناملاء

.الكتاالزإنزمي

أنابيبعلىاملوزعMeat Liver Agarالوسطباستعمال(Guiraud ; 1998)حسبمتالتنفسمنطمعرفة-

ماصةبواسطةالزرعمثم45ºحرارةدرجةحىتليربديرتكمثدقيقة30ملدةمائيمحاميفالوسطجيددإختبار،

بعد. للوسطاملتجانسالزرعدفحلزونيةحركاتبواسطةوخترجالوسطعمقإىلتدخلاليتباستور

.يوم21ملدةم45ºحرارةدرجةيفاألنابيبحتضنالوسطتصلب


33

عنالزرعمتحيث،Mannitol mobilityالوسطباستعمال(Guiraud ; 1998)حسبمتالبكتريياحركة-

عندالبكتريياحركةعنيعرب،م30ºحرارةدرجةيفاحلضنمنأيام7بعدوللوسطالعموديالثقبطريق

. العموديةالزرعمنطقةمنإنطالقاالوسطعلىمنوهاإنتشار

II.2 .5.الثانويةالمستقلباتإستخالص

والبكترييةالفطريةللعزالتبالنسبةميكرويبالضدالبيولوجيالنشاطذاتالثانويةاملستقلباتعزلدف

,.Arasu et al., 2009; Kwon et al(منكلطريقةعلىاالعتمادمتأويلمكرويبضدنشاطأظهرتاليت

2007; Zin et al., 2007( .املعقمةاألوساطمنمل100امل250بسعةحواجلحتضريمتحيثPDBو

NBالتوايلعلىاملعزولةاخليطيةالبكتريياوالفطريةالعزالتمنلكلالثانويةاملستقلباتاستخالصدف .

الناميةاهليفاعلىاحلاويةاآلجار منأقراص4بعدهاأيام،5ملدةPDAالوسطعلىالفطرياتمنيت

SCAالصلبالوسطعلىأوالفتنمىاخليطيةالبكتريياأما،PDBالسائلالوسطعلىتزرعالفطريللمسليوم

3ملدةPDB السائلالوسطمل15علىتزرعالبكترييةاملستعمراتعلىاحلاوياآلجار منأقراص4بعدها

متتالتجربةمراحل. NBالسائلالوسطمنمل100إىلالثالثاليومايةيفاحلجمهذاإضافةيتمأيام،

حتتم27ºحرارةدرجةيفحضنهامتاحلواجلكل.عينةلكلمبكررينوالعيناتكلمعمعقمةشروطيف

:التاليةللمراحلوفقااالستخالصعمليةمتتاحلضنفرتةإنتهاءبعد. يوم21ملدة)دقيقة/دورة150(الرج

حيثالرشاحةعناملسليومعزلدفالقطينالشاشمنطبقتنيعربحدةعلىكلعينةكلأوساطمترير-

.نضيفبيشريفاألخريةهذهاستقباليتم

منالتخلصدفدقيقة15ملدة)دقيقة/دورة8000(مركزيلطردتعرضعينةلكلعليهااحملصلالرشاحة-

.األبواغواملسليومبقايا

يسرتجعالثاينواألولاملكررمنلكلاملركزيالطردعمليةبعدعليهاملتحصلالرشاحةمنالعلوياجلزء-

ساعاتلعدةترتكمثجيداالعيناتترجالتوايل،علىالكلوروفورموأسيتاتاإليثيلمناحلجمبنفسليمزح


34

تسرتجعالعضويةالطبقةعنالعضويةالطبقةانفصالبعد. املائيةالطبقةعنالعضويةالطبقةانفصالدف

.الطريقةبنفساستخالصهافيعاداملائيةالطبقةأمااألخريةهذه

درجةحتت)Rotavapor(التبخريجبهازتركيزهاليتمالعينةنفسمنمذيبلكلالعضويةالطبقاتمتزج-

يفمل/مغ20برتكيزيذابخاممستخلصعنعبارةناتجعلىالنهايةيفحنصل، م45ºحرارة

. استعمالهغايةإىلم4ºحرارةدرجةيفليحفظ)9: 1(بنسبةماء:dimethylsulfoxide (DMSO)املزيج

.االستخالصمراحليلخص)04الشكل(

II.2 .6.للميكروباتالمضادةالخامةالمستخلصاتنشاطيةدراسة

طريقةعلىباالعتمادعليهااملتحصلاخلامةللمستخلصاتميكروبيةالضدالنشاطيةدراسةمتت

Baras et(: لـوفقااألقراصباستعمالالصلبالوسطعلىاإلنتشار al., 2006(.البوغيةاملعلقاتحضرت

مثالتبوغعمليةتتمحىتيوم15إىل10ملدةPDAالصلبالوسطعلىبتنميتهااملختربةالفطريةللعينات

بعدهالتسرتجعمعقمةمبلعقةبلطفاألبواغتكشطمت،مل10املعقمالقطراملاءمنبـحجماألطباقتغطى

األنواعباقيوCandida albicansاخلمريةأمامل،/بوغة410عندكثافتهاتثبتومعقمةإختبارأنابيبيف

مل/خلية810، 610اكثافتهاوحتدد،NBوPDB السائلةاألوساطعلىساعة18ملدةفتنمىاملختربةالبكتريية

علىNB وPDA الصلبةاألوساطعلىالبكترييةوالفطريةاملعلقاتمنل100µيصب . الرتتيبعلى

سابقاواملعقمةاحملضرة)1رقمومتان(ورقيةأقراصتوضع. لتجفترتكومعقمزجاجيبناشرتنشرمثالرتتيب

علىكل)مل/مغ1(برتكيزاملذيبنيمنلكلاخلاماملستخلصمنل25µبـحجمتبللمثاآلجار سطحعلى

املستخلصاتإلذابةاملستعملاملزيجسالبكشاهداستعملوعينةكلمعمراتثالثالعمليةتكرر،حدة

يفاألطباقكلحضنتمعقمة،شروطيفمتتالتجربةمراحلكل، )9: 1(بنسبةماء:(DMSO)اخلامة

.التثبيطقطرمعدلقياسطريقعنقدرتالبكترييةوفطريةالضدالنشاطية. م37ºحرارةدرجة


35

م27ºيوم يف درجة حرارة 21احلضن ملدة

/دورة8000(طرد مركزي

حسب طريقةالعينات الفطرية و البكتريية من املستقلبات الثانويةخمطط يوضح استخالص : 04الشكل)Arasu et al., 2009; Kwon et al., 2007; Zin et al., 2007(

االستخالص بالكلوروفورم أسيتاتثيليستخالص باإلاإل

االستخالص بالكلوروفورم أسيتاتثيليستخالص باإلاإل

على الرتتيب BNو PDBزرع الفطريات والبكترييا على أوساط

املسليوم

رشاحةال

الراسب

املائيجلزءا

عضويجزءاملائياجلزء

عضويجزء

عضويجزء

املائياجلزء

املائياجلزء

املائياجلزء عضويجزء

ائي عضويجزءائي عضويجزء

املستخلصات اخلامةم45ºتبخري يف درجة حرارة

ترشيح عرب طبقتني من الشاش القطين


36

II.2 .7.لألكسدةالمضادةالنشاطيةدراسة

II.2 .7.. 1إختبارβ-carotène

يعرب هذا االختبار عن القدرة املضادة لألكسدة بقياس تثبيط املركبات العضوية الدهنية

واليت تظهر خالل )conjugated hydroperoxi dediene(و اهليدروبريوكسيدات اليت متلك روابط ثنائية

.)Dapkevicius et al., 1998(أكسدة محض اللينولييك

من محض اللينولييك ل25µمل من الكلوروفورم، يضاف له 1تذوب يف β-carotèneمغ من 0.5نأخذ

م، ونضيف 40ºخيلط هذا املزيج مث يبخر الكلوروفورم كليا يف جهاز التبخري يف 40tweenغ من 200و

مل من اخلليط السابق يف أنبوبة إختبار ونضيف له 2.5نضع . مل من املاء املقطر املشبع باألكسجني100

مل،/غمل2مكرولرت من املستخلصات املتحصل عليها يف عملية االستخالص و احملضرة برتكيز ثابت 350

كشاهد موجب واملاء وامليثانول كشواهد سالبة حيضن املزيج يف BHTتكرر العملية مع الشواهد واملتمثلة يف

سا، 0وذلك يف أزمنة متتالية . نانومرت490درجة حرارة الغرفة بعيدا عن الضوء، بعدها تقاس االمتصاصية يف

لتثبيطية للمستخلصات املضادة لألكسدة ويتم حساب النسبة ا. سا48سا، 24سا، 6سا، 4سا، 3سا، 2سا، 1

(RAA)حسب املعادلة التالية:

RAA% =Aالعينة/ABHT× 100

Aامتصاصية العينة، : Aالعينة:حيث BHT : امتصاصيةBHT.

II.2 .8.اإلنزيميةالنشاطيةدراسة

أنميكنالذيواملستعملللوسطوفقاتتعدداخلليةخارجاملفرزةلإلنزمياتاإلنزمييةالنشاطيةدراسةطرق

األكثرالصلبةاآلجار أوساطباستعمالاألنزمييةالنشاطيةعنالكشفيعدوسائال،أوصلبايكون

البكتريياوالفطرياتلديخلويةاخلارجاإلنزمياتملختلفالسريعوالتقديربالكشفتسمححيثاستعماال

)El-kady et al., 1984; Taskin et al., 2008(.


37

احيثمنالعيناتدراسةمت ، Amylase ،Dextrinase ،Protéase(إنزميمنكلإفرازعلىقدر

Lipase ،Esterase ،Cellulase(تلقحبعدها، القاعديةاألوساطيفإنزميكلتفاعلمادةبإذابةذلكو

الوسطعلىمنيتقدتكوناليتوللفطرياتالناميةاهليفاعلىاحلاوية)ملم5(اآلجاربأقراص

املعلقمنإنطالقافتزرعاخليطيةالبكتريياأما،glucose yeast extract peptone (GYP) agarالصلب

علىالبكتريياوالفطرياتمنلكلأيام7إىل5ملدةتنموبعدهالترتك،)مل/بوغة610(سابقااحملضرالبوغي

منكلحسابمتواألطباقإىلإنزميينشاطكلكواشفتضافبعدهام،30ºحرارةدرجةيفالرتتيب

قدرتاإلنزميياإلنتاجنسبةوخمتربةمادةكلعلىعزلةلكلاإلنزمييةالنشاطيةلتقديراملستعمرةواهلالةقطر

:التاليةالعالقةحسب)Taskin et al., 2008(لطريقةوفقا

قطر املستعمرةمعدل /قطر اهلالةمعدل = نسبة اإلنتاج اإلنزميي

II.2.1.8.الفطريةاإلنزيميةالنشاطيةدراسة

II.1.1.8.2.األميالز

glucoseالوسطعلى)ملم5(الفطريةاآلجار أقراصبزرعالفطرياتلدياألميالزإنزمينشاطيةاختربت

yeast extract peptone (GYP) agarللذوبانالقابلالنشاءمن% 2إليهمضاف)Soluble Starch(أو

%2وiodine%1(مناملتكونIKI) (الكاشفمبحلولاألطباقغمرتاحلضنمدةبعد، الدكسرتين

potassium iodine( ،باقيأمااألميالزإنزميلنشاطيةموجةنتيجةتعتربالفطريةباملستعمرةاحمليطةاهلالة

.)Maria et al., 2005(أزرقبلونفيظهرالوسط

II.2.1.8.2.البروتياز

: جيالتني(اجليالتنيمن0.4%إليهمضافGYP الوسطباستعمالمتتالربوتيازإنزمينشاطية

األطباقتغمراحلضنعمليةبعداملعقم،GYPالوسطإىليضافمثلوحدهيعقموالذي)مل100/غ8

تظهراحملللاجليالتنيمنطقةحيثاجليالتني،معيرتسبالذيAmmonium sulfateاملشبعاملائيباحمللول


38

احملللةغرياملنطقةأماالربوتيازإنزمينشاطوجودعلىداللةالفطريةاملستعمرةحولشفافةهالةبشكل

ammonium sulfate.(Maria et al., 2005)حملولمعهافيرتسب

II.3.1.8.2.اإلستيرازوالليباز

TweenإليهمضافPeptone Agarالوسطعلىالعزالتتنميةطريقعنالليبازإنزمينشاطيةحددت

لكلمل1بنسبةيضافحيثPeptone Agarالوسطعنمبعزليعقموالذيالكربونوحيدكمصدر20

املستعمرةحولهالةبظهورالليبازإلنزمياملوجبةالنشاطيةعنيعرباحلضنعمليةبعدالوسط،منمل100

Maria et(بلوريةترسباتبشكلالفطرية al., 2005(.يفاملتبعةالطريقةنفساعتمدتلإلستريازبالنسبة

وTween 80 إليةمضافالوسطنفساستعملحيثاإلسترياز،نشاطيةلتحديدالليبازنشاطيةحتديد

ترسباتبشكلهالةظهوراملستعمل،الوسطمنمل100لكلمل1بنسبةيضافولوحدهيعقمالذي

.)Carrim et al., 2006(اإلستريازنشاطيةوجودعلىيدلالفطريةاملستعمرةحول

II.4.1.8.2.السيليالز

;Abdel-raheem et Shearer, 2002(حسبمتالفطرياتلدىالسيليالزإنزمينشاطيةإختبار

Pointing, 1999( .القاعديالوسطعلىالفطرياتزرعتCellulolysis basal medium (CBM)مضاف

درجةيفأمي5ملدةحضنتمثCarboxymethyl Cellulose) (CMCالسيليلوزمن) حجم/وزن(% 2إلية

بعدهادقيقة15ملدة) حجم/وزن(% 2الكونغوألمحراملائيباحمللولاألطباقغمرتبعدهام،25ºحرارة

وجوددقيقة،15ملدةNacl (1M)الصوديومكلوريدمبحلولجديدمنتغمرواملقطرباملاءاألطباقغسلت

.السيليالزإنزمينشطوجودعلىيدلالفطريةاملستعمرةحولاملصفرةاهلالة

II.2.2.8.البكتيريةاإلنزيميةالنشاطيةدراسة

الليبازمنكلأما)Faucher et al., 1995(حسبمتتالربوتيازولألميالزاإلنزمييةالنشاطيةمنكل

.)Carrim et al., 2006; Sousa et al., 2008(حسبفتماإلستريازو


39

II.1.2.8.2.األميالز

القابلالنشاءمن ) حجم/وزن(% 1علىحيتوي)(YMAالوسطعلىاخليطيةالبكتريياأجناسزرعمت

7مدةم30ºحرارةدرجةيفاألطباقحضنتمل،/بوغة610البوغياملعلقمنإنطالقاخطبشكلللذوبان

حولالشفافةاهلالةظهور،I2من%1وKIمن%2مناملتكونالليقولمبحلولمعاملتهابعدهاليتمأيام

.األميالزإنزمينشاطيةعلىيدلاملستعمرة

II.2.2.8.2.البروتياز

% 5علىحيتوي)(YMAالوسطإستعمالمتاملعزولةاخليطيةالبكترييالديالربوتيازأنزمينشاطيةلدراسة

زرعمتحيثلوحدة،املعقمو)Skimed Milk(الدهونمنزوعاجلافاحلليبمسحوقمن) حجم/وزن(

األطباقمعاملةاألخرييفليتمأيام7ملدةم30ºحرارةدرجةيفاحلضنمثسابقاوصفكماالبوغياملعلق

وجودعلىيدلالبكترييةاملستعمرةحولالشفافةاهلالةظهورل،/مول0.1برتكيزHClالكلورمحضمبحلول

.الربوتيازإنزمينشاطية

II.3.2.8.2.اإلستيرازوالليباز

Tween 80وTween 20 من) ح/ح(% 1إضافةمتاإلستريازوالليبازإنزمييمنكلنشاطيةإلختبار

قبللوحدمهاتعقيمهمامتTween 80وTween 20منكل،Peptone Agarالوسطإىلالرتتيبعلى

حرارةدرجةيفحضنتمثاحملضرةاألوساطعلىاخليطيةللبكتريياالبوغياملعلقزرعالوسط،إىلإضافتهما

30ºعلىدليلالبلوريةالرتسباتذاتاهلالةوجودواألطباقمعاينةمتاحلضنمدةايةبعدأيام،7ملدةم

.اإلستريازوالليبازإنزميينشاطيةوجود

II.4.2.8.2.السيليالز

الوسطإستعمالمتحيث.)Arunachalam et al., 2010(حسبالسيليالزإنزمينشاطيةإختبارمت

Cellulose Agarحجم/وزن(% 1علىحيتوي (السيليلوزمنCMC)(،حتضنالوسطعلىالبكترييازرعبعد


40

احلضنمنساعةنصفبعد. %0.1برتكيزالكونغوأمحراألطباقيفيصبم30ºحرارةدرجةيفأيام7ملدة

اهلالةوجود،Nacl (0.5M) الصوديومكلوريدهلاأضيفمثاألطباقوغسلتالكونغوأمحرمنالتخلصمت

.السيليالزإنزمينشاطوجودعلىدليلاملستعمرةحولالشفافة

II.2.9.القمحبذورنمووإنتاشعلىالداخليةالبكتيرياوالفطرياتتأثيردراسة

II.2.1.9.المعزولةوالبكتيريابالفطرياتالقمحبذورمعالجة

متبشريبنحممداحملليالصنفقمحبذورومنوإنتاشعلىالدقيقةاألحياءهذهتأثردراسةدف

املعلقاتحتضريمتالتجربةمراحلأوليفحيث.)Mukhtar, 2008(طرفمناملتبعةالطريقةعلىاالعتماد

بعدهااجليد،التبوغدرجةحىتم30ºحرارةدرجةيفMEA الوسطعلىمنهاكلبتنميةالبكترييةوالفطرية

أنابيبيفتسرتجعاألبواغهذهأينمعقمةملعقةبواسطةبلطفاألبواغوتكشطاملعقماملقطرباملاءتغمر

كملزجيستعملالذيالنشاءمن) حجم/وزن(% 2هلاويضافمل/بوغة810عندتركيزهاويثبتإختبار

أيدونمنسليمةبذورإختيارفتمالبذورخيصفيما. البذورسطحعلىاألبواغتثبيتعمليةلتسهيل

هيبوكلوريتحملوليفدقيقة15ملدةبغمرهاالسطحتعقيملعمليةتعرضهامتاألخريةهذهشقوقأوصدوع

حدةعلىكلاحملضرةاملعلقاتيفالبذورغمرت. املعقماملقطرباملاءمراتثالثةتغسلمث% 1الصوديوم

املقطراملاءيفمغمورةالثاينوالنشاءمعلقيفمغمورةبذوراألولشاهديناستعملكمادقيقة2-1مدة

الرتشيحورقمنطبقتنيابرتيأطباقعلىحبات10مبعدلتزرعبعدهالتجفالعيناتترتكاملعقم،

حرارةدرجةيفاألطباقحضنتمثمعاملةلكلمكررات3اإلعتباربعنيأخذمعباملاءاملشبعواملعقموامتان

25ºاملنتشةالبذورعدديوميايراقبأينأيام8ملدةالظالميفم.

II.2.2.9.القمحبذورنمووإنتاشعلىالداخليةالخيطيةالبكتيرياوالفطرياتتأثير

.التالةللعالقةوفقا(Mukhtar, 2008)حسباإلنتاشنسبةحسابمتاحلضنمرحلةآخريف

Germination


41

السوقياتطولمعدالتحسابوالناجتةواجلذورالسوقياتمنلكلالرطبالوزنحسابمتكما

للعالقةوفقاVigor Index (VI) (Taskin et al., 2008) البادرات منوقوةمؤشرحسابدفاجلذورو

:التالية

VI = (PL + RL) × GPحيث:

VI :Vigor Indexالبادراتمنومؤشر.

PL : Plumule Lengthالناشئةالسوقياتطول.

RL :Roots Lengthاجلذورطول.

GP :Germination Percentageاإلنتاشنسبة.

II.2.3.9.األستيكحمضأندولإنتاجإمكانيةإختبار(Indole acetic acid (IAA))

الشاهدإىلبالنسبةمقارنةالقمحنباتمنوعلتأثريهاخيصفيماإجيابيةنتيجةشهدتاليتالعزالت

Khamna et(حسبIAAللهرمونإنتاجهاإمكانيةحيثمناختربت al., 2010( .علىالعزالتمنيت

السائلالوسطمل5علىإنفرادعلىتزرععينةكلمنملم8بقطرقرصبعدهاYMA الصلبالوسط

Yeast Malt Extract Broth (YMB)إليهمضافL-tryptophanيفحتضناملزارعهذهمل،/مغ2برتكيز

دقيقة،/دورة8000املركزيالطردبعمليةالرشاحاتعناملسليومفصلبعدهاأيام7ملدةم30ºحرارةدرجة

Salkowskiكاشفمنملم2مععينةلكلالرشاحةمنمل1مزجمتIAAوجودمنالكشفلغرضو

دقيقة30- 25بعدالوردياللونظهور،H2SO4منمل30وFeCl3 (0.5M)حملولمل15مناملتكون

.الرشاحةيفIAAوجودعلىدليل

II.2.4.9.الفوسفاتإذابةإمكانيةإختبار)Phosphate Solubilization(

طريقةعلىباالعتمادالبكترييةالعزالتطرفمنللذوبانقابلالغريالفوسفاتإذابةإمكانيةإختبارمت

)Soltani et al., 2010( .علىاحلاويةبرتيأطباقمركزسطحعلىالبكتريياوالفطرياتمنكلزرعت


42

الشفافةاملنطقةأيام،8مدةم30ºحرارةدرجةفياحلضنمثPikovskaya (PKV) املعقمالصلبالوسط

.أبيضبلونيبقىالوسطباقيحنييفالفوسفاتإذابةعلىدليلاملستعمراتحول

II.2.5.9.األمونياإنتاج)Ammonia Production (NH3)(

Ahmad et(طريقةحسبمتالعزالتلدىاألمونياإنتاج al., 2008(.أنابيبيفالعزالتمنيتإذ

كاشفمنمل0.5 إضافةيتمبعدها، م30ºحرارةدرجةيفساعة48مدةالبيبتويناملاءعلىحتتوياختبار

Nesslerاألصفراللونإىلالسائلللوسطالبيناللونبتحولعليةيستدلاألمونياوجودإختبار،أنبوبةلكل.

II.2.10.اإلحصائيةالتحليالت

إحصائياالنتائجحللت،(SD)املعيارياالحنراف±(M)احلسايبباملتوسطعليهااحملصلعن القيميعرب

-StudentباختباراملتبوعSAS/STAT® 9.2باستعمال(two-way ANOVA)اختبارطريقعن

Newman-keuls multip-rang testالعزالتمستخلصاتبنيالتثبيطمناطقمتوسطاتملقارنة.

(one-way ANOVA)باختباراملتبوعStudent-Newman-keuls multip-rang testبنيللمقارنة :

üلألكسدةاملضادةللنشاطيةبالنسبةالشواهدواملستخلصات.

üالعزالتطرفمناإلنزمييةالنشاطيةعنالناجتةهاالتبنيللمقارنة.

üاملعاملةللبذوربالنسبة) اإلنتاشنسبةوالسويقاتواجلذورمنكلوزنوطول(بنيللمقارنة

.الشواهدوبالعزالت

.(P < 0.05)التحديدمعاملأنأي%5الداللةعندمعىنذوإحصائياالفرقاعتربحيث

2011النتائج و المناقشة

III فصل ال

النتائـج والمناقــشة


43

III.1.الخيطيةالبكتيرياوالفطرياتعزل

تعقيمعمليةالزرع داللة على فعاليةأوساطعلىللبكتريياالوللفطرياتمنوحالةأيتسجيليتممل

املراحلاعتبارميكنالنتائجهذهخاللمن. املراقبةواحلضنبعدواملذكورتنيبالطريقتنيمتتأنبعدالسطح

مناملنتجةاألبواغكذاو)(Epiphytesالسطحيةامليكروباتمنللتخلصكافيةالتعقيمعمليةيفاملتبعة

دقيقةحيةكائناتاعتبارهاميكنعليهااملتحصلالعزالتوأنالسطحيةاخليطيةالبكتريياوالفطرياتطرف

.)Coombs et Franco, 2003a(القمحلنبات)Endophytes(داخلية

18وبكترييةعزلة23منهاعزلة43علىاجلذورواألوراقبنيمقسمةقطعة100إمجايلمناحلصولمت

.)1اجلدول(فطرية

.*القمحنباتأوراقوجذورعيناتيفاإلستيطانمعدلوالعزلمعدلالعزالت وعدد:01الجدولOrgans of Wheat plant

EndophytesRootsLeaves

Colonizationrate (%)

Isolationrate

Numberof

isolates

Colonizationrate (%)

Isolationrate

Numberof

isolates

320.4812240.328Endophyticfungi

480.6416200.287Endophyticactinomycetes

.اجلذورمنقطع5واألوراقمنقطع5أخذتنبتةكلمننبتاتمخسة*

كانتالعزلواإلستيطان و معدالتاملعزولةالبكترييةوالفطريةالعزالتكل من عددأنالنتائجتظهر

%48إستيطان مبعدلاجلذورمنبكترييةعزلة16علىاحلصولمتحيثاألوراق،معمقارنةاجلذوريفأكرب

و % 20وعزلإستيطان مبعدلبكترييةعزالت7علاحلصولفتممن األوراقأما0.64عزلمعدلو

و%32وعزلإستيطان مبعدلاجلذورمنفطرا12علىاحلصولمتأخريجهةمن. الرتتيبعلى0.28

.0.32عزلمعدلو%24إستيطان مبعدلعزالت8عزلفتماألوراقأماالرتتيب،عل0.48


44

النتائج.اخليطيةالبكتريياوأكدت هذه الدراسة احتواء نبات القمح على العديد من الفطريات

احملاصيلنباتاتخمتلفمناخليطيةالبكتريياوالفطرياتعزلمتإذأحباثعدةمعتتوافقعليهااملتحصل

Naik et al., 2009; Tian et(األرزمثلالزراعية al., 2004(الصويافولو)Pimentel et al., 2006(

,Coombs et Franco, 2003a; Coombs et Franco(سيقان نبات القمحوأوراقوجذوروبذورو

2003b; Larran et al., 2007; Sieber et al., 1988(.

اجلذوريفأكربكانتحيثخمتلفةكانتعليهااملتحصلالعزلواإلستيطان ومعدالتالعزالتعدد

العزلأوساطواملدروسالنبايتبالنوعتتأثراملعايريهذهفإن) Gong)2009حسبوالذيباألوراقمقارنة

نباتسيقانوأوراقوجذوريفأحباثعدةاالختالفهذاأشارت إىل. املستعملةالقطععددكذاو

Naik et al., 2009; Tian(األرزأوراقوجذور،)Larran et al., 2007; Sieber et al., 1988(القمح

et al., 2004(.الطبيةالنباتات منأنواععدةأزهاروسيقانوأوراقوجذورو كذا)Gong et al.,

2009; Lv et al., 2010( .التخصصأوالتفضيلمننوعاألجناسبعضإبداءإىليعزى هذا اإلختالف

حمددة يف تلك مادةالنمو علىإستهالك وعلىاألجناسهذهما بسبب قدرةنبايتعضونسيجاجتاه

Huang et(األنسجة al., 2008; Photita et al., 2001(،الفيزيولوجيةالشروطمعالتأقلمبالتايلو

الطبيعةإىليعزىقدأخرىجهةمن. )Larran et al., 2007(املعطىالعضونسيجداخلاإليكولوجيةو

فحسباخرتاقها،علىالدقيقةاألحياءهذهوقدرةالنباتلنسيجاخلارجيةللطبقاتاملكونةالكيميائية

Petrini)1992(اإلخرتاقعلىيعتمدالدقيقةاألحياءهذهطرفمنللعائلالداخليةاألنسجةإستيطان فإن

اإلنزميياهلدمأوميكانيكيطريقعنيكونأنميكنو الذيللنباتات الواقيةالقشرةلطبقاتالناجح

اعالقةلهيكونأنميكناجلذوريفأكرببنسبةاخليطيةالبكتريياتواجدأنكما. الطبقاتهذهملركبات بكو


45

الفرعيةاجلذوروشقوقنتوءاتعربالعائلجذورعدوىعمليةيسهلمماالرتبةفلورامنكبريقسممتثل

.(Coombs et Franco, 2003b; Hasegawa et al., 2006)اجلذريةالعقيداتكذاو

III.2.العزالتطرفمنالممرضةالفطرياتوللبكتيرياالمضاداألوليالنشاطإختبار

المعزولة

املتحصلاإلمجاليةالعزالتبنيمنمكرويبالضدالنشاطذاتالعزالتانتقاءإىلاإلختبارهذايهدف

.)2اجلدول(املزدوجةاملزارعطريقعنمتالذيوعليها

.املزدوجةاملزارعبطريقةاخليطيةالبكترييابواسطةاملمرضةالبكترييةاألنواعمنوتثبيطمناطق:20الجدولInhibition Zones (mm)

Pathogenic Bacteria Actinomycetes Isolates

Isolate 17BIsolate 3BIsolate 16N14154Bacillus sp.766Staphylococcus aureus

13137Enterococcus faecalis688Salmonella typhimurium

152322Escherichia coli12714Pseudomonas aeruginosa0078klebsiella pneumoniae

.املمرضةالبكتريياواملعزولةاخليطيةالبكترييابنيالنموتثبيطمسافةمتثل :Inhibition Zones (mm)

هلاعزالت3علىاحلصولمتخيطيةبكترييةعزلة23بنيمنأنهعلىعليهااملتحصلالنتائجتشري

نشاطيةشهدت16Nالعزلةحيثاملستعملة،البكترييةاألنواعمنواسعةجمموعةعلىبكترييضدنشاط

علىكانأكربهاملم22إىل4منالتثبيطمناطقتراوحتوالبكترييةاألنواعمجيععلىمكروبيهضد

البكتريياعلىأكربهاملم23إىل7بنيتثبيطمناطقفسجلت3BالعزلةأماEscherichia coliالبكترييا

Escherichia coli،17العزلةبينماأيضاBالبكتريياوكانتملم15إىل6منفسجلتEscherichia coli

klebsiellaعلىتثبيطينشاطأيتسجلملحنييفملم15تثبيطيةمبنطقةحساسيةاألكثرهي

pneumoniae.

.)03اجلدول(يفالتثبيطبنسبموضحةاملعزولةالفطرياتوللبكترييافطريالضدالنشاطإختبارنتائج


46

.املزدوجةاملزارعبطريقةاملعزولةالفطريات و البكترييا الداخليةبواسطةالفطرياتمنوتثبيطنسبة:03الجدولInhibition percentage (%)

Isolates Fusarium oxysporium F.sp .albidinisPhytophtora infestans spp.11,118,11C3B44,445,41C4B63,8921,622416,6745,953952,7829,733816,675,4217N58,330,00C1B45,0042,9616N43,3351,853B7,5054,0717B

:Inhibition percentage (%)الشاهدالطبقيفالفطرنفسقطر\املزدوجةاملزرعةيفاملختربالفطرقطرنسبةمتثل.

عزالت3وفطريةعزالت7بينهامنعزلة43بنيمنفطريةضدنشاطيةهلاعزالت10تسجيلمت

الفطرينمنكلعلىخمتلفةتثبيطنسبشهدتاألخريةهذهالعزالت،إمجايلمن%23بنسبةأيبكتريية

%54.07إىل%5.42بني. .Phytophtora infestans sppالفطرعلىالتثبيطنسبتراوحتأيناملمرضني

16Nالعزالتتليها17Nو3Bالبكترييةالعزالتمنكللدى%50تفوقتثبيطنسبسّجلتحيث

Fusarium oxysporium F.spالفطرعلىاملسجلةالتثبيطنسبحنييف. %40منبأكرب39و

.albidinis17العزلةطرفمنتثبيطنسبةكأقل%7بنيفرتاوحتBتثبيطيةنسبةكأعلى%63.89إىل

.24العزلةطرفمن

بنيوثيقةعالقةوجودإىليوحيالسليمةالنباتات أنسجةداخلاخليطيةالبكتريياوالفطرياتوجودإن

منومحايتةالنباتلنمواملنظمةاملستقلباتإنتاجيفأمهيتهاتكمنإذعائلها،أنسجةوالدقيقةاألحياءهذه

أخرىجهةومن،)Araújo et al., 2000; Inderiati et Muliani, 2008(املمرضةالدقيقةاحليةالكائنات

اعلىللنباتات الداخليةالبكتريياوالفطرياتأنجدامعروف النشطةالثانويةللمستقلباتمصدرأ

Gong et al., 2009; Inderiati et Muliani, 2008; Kwon(الصيدالنيةوالزراعيةاألمهيةذاتوبيولوجيا


47

et al., 2007 (للنباتات املمرضةالفطرياتضدبيولوجيةمقاومةعواملوميكروبيهالضدنشاطيتهاو

)Ghadin et al., 2008; Nedialkova et Naidenova, 2005; Quecine et al., 2008(.

ضدنشاطيةمتلكاملعزولةالبكترييةوالفطريةالعزالتمنعددفإنعليهااملتحصلالنتائجخاللمن

املزارعبطريقةسابقةدراساتعدةيفإثباتهمتماوهذاواحدممرضفطرأوبكتريياعلىاألقلعلىميكروبيه

متلكالطبيةالنباتاتبعضمناملعزولةاخليطيةالبكتريياوالفطرياتبعضمنكلأنوجدحيث. املزدوجة

النتائجيوافقما)Ghadin et al., 2008; Jalgaonwala et al., 2010(بكترييةوفطريةضدنشاطية

ضدنشاطيةهلااألرزمناملعزولةاخليطيةوالبكتريياالفطرياتبعضمنكل.)3و2اجلدول(عليهااملتحصل

Naik et(للنباتات املمرضةالفطرياتضدفطرية al., 2009; Tian et al., 2004( .بعضأنحنييف

Taraxacum coreanumنبتةجذوروأوراقمناملعزولةالفطريات Nakaiو جدت الطيباالستعمالذات

ا متلك منأيضااملعزولةاخليطيةالبكتريياعزالتمن%52أما. )Paul et al., 2006(فطرية ضدنشاطيةأ

بينهامنخمتربةممرضةبكتريياعلىاألقلعلىبكترييةضدنشاطيةمتلكالطبيةاملاطرةالغاباتنبتاتبعض

النتائجيوافقماوهذا)Qin et al., 2009b(عليها تثبيطينشاطهلااليتالبكترييامنواسعجمالهلاعزلتني

الفطرياتكانتملاو. )2اجلدول(17Bو16N،3Bالثالثاخليطيةالبكترييةعليها عند العزالتاملتحصل

Naik et al., 2009; Paul(املضاد للميكروباتالبيولوجيالنشاطذاتاملركباتوللمستقلباتمصدرمتثل

et al., 2007(.علىاملعزولةالداخليةالفطرياتوالبكتريياطرفمناملثبط للنموالنشاطوجوديعزي

ذاتملركباتالعزالتهذهإنتاجإمكانيةإىلاملزدوجةاملزارعبواسطةاملختربةاملمرضةالبكتريياوالفطريات

.)Naik et al., 2009(الزرعأوساطيفاملمرضةالكائناتلنمومثبطبيولوجينشاط


48

III.3.المعزولةالخيطيةالبكتيرياوالفطرياتتشخيص

النتائجعلىاحلصولمتالنشطةالفطرياتمنلكلامليكروسكوبيةواملورفولوجيةاخلصائصدراسةبعد

.)5الشكلو 4اجلدول(التالية

سبعةملدةخمتلفةأوساطعلىاحلضنبعدالفطريةللعزالتوامليكروسكوبيةاملورفولوجيةاخلصائص:40الجدول.م26ºحرارةدرجةيفأيام

الخصائصامليكروسكوبيةاخلصائصللمستعمرةاملورفولوجيةاخلصائصالعزالت

(17N)

يفأبيضلونذاتقطنية،سريع،منو-تكونالرمادي،اللونإىليتحولمثالبداية

.MEAالوسطعلىكثافةأقل

مثريةأجسامإنتاجمقسمة،اهليفا-Perithiciaاحلجمكبريةيوم،11بعد

سوداءمسيكةيفاتحماطةوسوداءدائريةاحلاويةبوغيةأكياسمنهاحتررفتحةا

إىلبنيةالشكلدائريةكيسيةأبواغعلى.اللونزيتية

(C3B)

منكلعلىملم50إىل40منسريعمنو-MEAوCYA .ذاترماديةبنيةإىلبيضاءعلىزيتيةخضراء. صوفيةفاحتة،حوافPDAصوفيةو.

حاملذاتاللون،بنيةمقسمةاهليفا-بنيةلكونيديامشكلةبين،مقسمكونيدي

وطوليامقسمةوالشكلإجياصيةاللون.منفردةأوسالسلشكليفعرضيا

(38)

كلعلىملم50إىل35منسريعمنو-سطحيةجمعدةبيضاء. MEA CYAمن

املركزسوداء. األطرافشعاعيهCYAعلىالوسطعلىغباريةمسطحةواحلوافبيضاء

MEA.

منهاينشأشفافةإىلبنيةمقسمةاهليفا-ينتهيومتفرعغريطويلأبواغحامل

منبصفكلياحماطكرويبانتفاخMutulaeعليهاحتملاليتPhialides

سالسلبدورهاحتملاليتوالشكلقارورية.الشكلدائريةاللونسوداءالكونيديامن


49

(24)

منكلعلىملم44إىل34منسريعمنو-CYAوMEA .رماديةواملركزبيضاء

علىمسطحةخممليةاحلواف،علىمزرقةCYA.حوافمعاملركزيفبنيةبرتقالية

.MEAعلىمسطحةغباريةمزرقة،خضراء

إىلفاتحأخضرلونذاتمقسمةاهليفا-وجودمتفرع،غريالكونيدياشفافة،حامل

قاروريةPhialidesوMutulaeمنكلمنالطولمتوسطةسالسلحتملالشكل

الشكلدائريةوحيدةالكونيديا. الكونيديا.فاحتةخضراءإىلشفافة

(39)

منكلعلى32إىل18منمعتدلمنو-CYAوMEA .كثيفةمزرقة،بيضاء،

بيضاء.CYAالوسطعلىمسطحةوخمملية.MEAالوسطعلىمسطحةخممليةمسمرة

الكونيدياحاملشفافة،مقسمةاهليفا-،Mutulaeمنكلوجودمتفرع،غري

Phialidesسالسلحتملالشكلقاروريةوحيدةالكونيديا. الكونيديامنطويلة.فاحتةخضراءإىلشفافةالشكلدائرية

(C4B)

منكلعلى25و28بنيمتوسطالنمو-CYAوMEA.إيلاملركزيففاحتةبنيةمسراء. CYAعلىاحلوافعلىبيضاء

غبارية. أبيضمسليومآثاروجودمعخمضرة.الوسطنيمنكلعلىكثيفةوجمعدة

الكوندياحلاملزيتية،بنيةمقسمةاهليفا-. االلتواءوالتفرعقليلمقسمقائم

ساللشكليفإنتاجهايتمالكونيدياواضحة،اختناقاتاطرفيةمتفرعة

بيضاويةمنفردةخالياإىلالكونيدياتنفصل.اللونزيتيةبنيةوالشكل

(C1B)

ىفمنغرسةناعمة،مسطحة،سريع،منو-.اللونزيتيةإىلرماديةاآلجار ،

اجلسمإنتاجخمضرة،مسراءمقسمةاهليفا-دائريةاحلجمكبريةPycnidiaالثمريالكونيدياعربهاتطرحفتحةاسوداءللكالميدوسبورمشكلةالشكل،أسطوانية

أوسلسلةشكليفPDAالوسطعلى.الشكلمنتظمةغريفردية


50

Alte

rnar

ia sp

..

امليسليوم مقسم الرتتيبعلىCYAو MEAاملستعمرة علىA،Bيف شكل سلسلةأوكونيديا منفردة

Aspe

rgill

us sp

..

A،Bاملستعمرة علىMEA وCYAالرتتيبعلى الكونيديوفور وحيدة اخلليةكونيديا

Peni

ciliu

m sp

. 1


Peni

ciliu

m sp

. 2

A،Bاملستعمرة علىMEA وCYAالرتتيبعلى الكونيديوفور كونيدياسالسل طويلة من ال

Cla

dosp

oriu

m sp

.


Phom

a sp

..

MEAاملستعمرة على Pycnidiaجسم مثري بيكنيديا الكالميدوسبورتشكيل

.املورفولوجية وامليكروسكوبية للعزالت الفطريةاخلصائص :50الشكل

BA

A B

BA

BA

BA


51

احلصولمتاخليطيةالبكترييالعزالتالبيوكيميائيةوامليكروسكوبيةواملزرعيةاخلصائصعلىباالعتماد

). 6و5اجلدول(التاليةالنتائجعلى

.النشطةالبكترييا اخليطيةلعزالتاملورفولوجياملظهر:05الجدول

العزالتاألوساط

ISP2ISP4املسليوممادةهوائيمسليوممظهراملستعمرةاملسليوممادةهوائيمسليوماملستعمرةمظهر

16Nفاتحبينأبيضغباريةفاتحأصفرأبيضغبارية3Bداكنبينأبيضغباريةأمسررماديغبارية17Bخمضربينخمضررماديغباريةفاتحبينخمضررماديغبارية

International Streptomyces Project :ISP.

.اخليطية النشطةالبكترييالعزالتالبيوكيميائيةوامليكروسكوبيةاخلصائص:06الجدول

العزالتالخصائص16N3B17B

مقسمغريمقسمغريمقسمغريالمسليوممادة

طويلةلولبيةالطولمتوسطةحلزونيةالطولمتوسطةحلزونيةاألبواغسالسلطبيعة

-+-المنتشرةالصباغإنتاج

---الميالنويدصبغةإنتاج

+++غرامتلوين

+++الكتاالز

ZH---MZH---

ساكنةساكنةساكنةالحركة

هوائيةهوائيةهوائيةالتنفسنمطZiehl-Neelson stain :ZH،MZH:) . Modified Ziehl-neelsen stain -(موجبإختبار(+)سالب،إختبار.


52

احلضنمنأيام3إىل2بعدتظهرالثالثةالعزالتكلأنوجدناعليهااملتحصلالنتائجخاللمن

أورماديأبيض،( خمتلفةألوانذاتغباريةدائريةمستعمراتتعطياحلضنمنيوم14بعدمشعية،وتكون

ااملسليوممادةتأخذاحلضنمنيوم21وبعد. اهلوائياملسليومتشكيلمع) خمضررمادي أمسر،( النهائيلو

بدرجةلكن3Bالعزلةعندإالتسجلفلماملنتشرةللصباغبالنسبة). خمضربينأوفاتحأصفرفاتح،بينبين،

هريةاملعاينة. هلامنتجةغريالعزالتكلفكانتامليالنويدصبغةأماقليلة، هرللعزالتا أنبّني الضوئيبا

العزلةلدىأقلبدرجةلكنالتفرعغزيركالمهاوهوائيمسليوموجمزأغريمسليوممادةهلاالعزالتكل

17B3العزلةلديالطولمتوسطةوحلزونيةتكونلألبواغحاملةسالسلوجودمعB16وNالعزلةأما

17Bتلوينسالبةوالكتاالزوغرامتلوينموجبةالعزالتكلأخرىجهةمن. طويلةلولبيةفكانتZiehl-

Neelson StainوModified Ziehl-neelsen Stainمتحركةغريهوائيةو.

ضدنشاطأظهرتاليتالفطريةالعزالتمنلكلامليكروسكوبيةواملورفولوجيةاخلصائصمنكلدراسة

(; Pitt J. I. and Hocking A. D. 1995التشخيصمفاتيحإىلعليهااحملصلالنتائجمقارنةوأويلمكرويب

Botton B et al, 1990 ; Champion R, 1997( منهامخسةاملشخصةفطرياتالسبعجمملمنأنهتبّني

Aspergillus sp.،(C3B)Alterernaria sp.،Penicilium(38)هيhyphomycetesإىلتنتمي

sp.1(24)،Penicilium sp.2(39)و(C4B)Cladosporium sp.إىلينتميواحدفطروAscomycetes

Chaetomium(17N)هو sp.إىلينتميواحدفطروCoelomycetesهو(C1B)Phoma sp..

ا،والأممقسمةاملسليوممادة( امليكروسكوبيةواملظهريةواملورفولوجيةاخلصائصدراسة وجودلو

الكتاالزوغرامتلوينإىلإضافة) األصبغةإنتاجواألبواغسالسلمورفولوجيةولونه،اهلوائياملسليوم

اخليطيةالبكتريياأجناسعلىللتعرفاإلنتشارواسعةخصائصهيالكحوالتواألمحاضمقاومةو

)Taddei et al., 2006( .اخلصائصمنإنطالقااخليطيةالبكتريياأجناسعلىالتعرفمنمتكنواباحثنيفعدة


53

هربسيطةمبالحظةاملورفولوجية خيصفيمااحلالهوكذلك،)Zaitlin et al., 2003(الضوئيبا

Balagurunathanاألبواغسالسلمالحظةخاللمنعليهاالتعرفإىلتوصلواالذين)1996(و آخرون

هر .الضوئيبا

يفمغمسةالشكلدائريةمبستعمرةتتميزالعزالتكانتامليكروسكويبواملورفولوجياملظهرخاللفمن

باختالفختتلفألوانذاتمتفرع،هوائيمسليومومقسمغريمتفرعمسليوممادةهلاغبارية،اآلجار و

جنسخصائصمنهيهذه الصفات . لولبيةأوحلزونيةطويلةأبواغلسالسلمشكلةوالزرعوسط

Streptomyces)Arifuzzaman etالسرتبتومايس al., 2010; Myadoh et al., 2002; Saurav et

Kannabiran, 2010( .موجبةومتحركةغريوهوائيةالغرام،موجبةالعزالتكلكانتأخرىجهةمن

Streptomycesجنسخصائصمنأيضاتعدامليزاتهذهالكحوالت،ولألمحاضمقاومةغريوالكتاالز

Dharmaraj et) Dhevendaran, 2010; Lee et al., 2005; Saurav et Kannabiran, 2010( .إىلإضافة

Arasu et(امليالنويدأصبغةوامللونةلألصبغةمنتجغريأومنتجيكونأناجلنسهذاأنواعلبعضميكنذلك

al., 2009; Dharmaraj et Dhevendaran, 2010; Li, 1997; Vijayakuman et al., 2010(هذاعلىو

اعلىالثالثالعزالتاعتيارمتاألساس .spStreptomyces.جنسإىلتنتميأ

النباتاتمنالعديدمنالعزلشائعةهي أجناس داخليةعليهاالبكتريية املتحصلوالفطريةاألجناس

)Márquez et al., 2007; Schulz et Boyle, 2005(،كل من أجناسعزلمتإذAspergillus،

Alterernaria ،Penicilium،Cladosporium،ChaetomiumوPhomaاللنيالقمحمنTriticum

aestivum Lطرفمن)Arifuzzaman et al., 2010; Larran et al., 2002; Larran et al., 2007( .فول

Glycine max(الصويا L. Merril()Pimentel et al., 2006( .مناملعزولاخليطيةللبكتريياجنسأهم

متحنييف.)Streptomyces)Conn et Franco, 2004; Coombs et Franco, 2003aهواللنيالقمح


54

Oryza sativaاألرزمنالبكترييةوالفطريةاألجناسهذهمنكلعزل L. )Naik et al., 2009; Tian et

(al., 2004.

يستمدقدالعائلبأنيوحيالقمحلنباتالسليمةاألنسجةمناخليطيةالبكتريياوالفطرياتهذهعزل

ذاتالثانويةاملستقلباتبإنتاجخاصةاألمريتعلقويأويها،اليتالبكتريياوالفطرياتمنالفوائدبعض

,Coombs et Franco(النباتمنوتعزيزيفدورهلااليتاملستقلباتوالفطريوبكترييالضدالنشاط

2003a(.

III.4.العزالتلمستخلصاتميكروبيهالضدالنشاطيةدراسة

أقراصطريقة(الكلوروفورموأسيتاتاإليثيلمستخلصاتمنلكلمكروبيهالضدالنشاطيةإختباربعد

أنسجلناأويلمكرويبضدنشاطأظهرتاليتالبكترييةوالفطريةللعزالت)اآلجار سطحعلىاالنتشار

اختلفتإذأكثرأوواحدممرضحيكائنعلىاألقلعلىمكروبيهضدنشاطيةهلااملستخلصاتكل

أوالفطريةالداخليةالعزالت( املستخلصمصدرواملمرضالدقيقاحليالكائنباختالفالتثبيطمناطق

مناطقتراوحتحيث. الثانويةاملستقلباتاستخالصيفاملستعملاملذيبنوعكذاو) املعزولةالبكتريية

على) ملم24.5- 25(أسيتاتاإليثيلمستخلصاتمنسجلتتثبيطمنطقةأكربملم،25إىل7منالتثبيط

Escherichia coliطرفمنPenicilium sp. SerratiaتليهاالتوايلعلىStreptomyces sp.1و1

marcescens)17طرفمن)ملمStreptomyces sp.1،اخلمريةعلىعاليةتثبيطمنطقةتسجيلمتكما

Candida albicans)25طرفمن)ملمStreptomyces sp.2.طرفمنتثبيطيةنشاطيةأكربحنييف

) ملمSalmonella typhmurium)23-20و.Bacillus spالبكتريياعلىكانتالكلوروفورممستخلصات

مستخلصاتمنلكلميكروبيهالضدالنشاطيةنتائج. Chaetomium sp.الفطرطرفمنالرتتيبعلى

.)8الشكل(و)3امللحق16الشكل(،)7و6الشكل(يفموضحةالكلوروفورموأسيتاتاإليثيل


55

الفطرياتوالبكتريياعلىأسيتات للفطريات و البكترييا الداخليةاإليثيلمستخلصاتتأثرينتائج:06الشكل.املمرضة


56

والبكتريياللفطريات و البكترييا الداخلية علىأسيتاتاإليثيلمستخلصاتتأثرينتائج):تابع(06الشكل. املمرضةالفطريات

Bcillus sp.،Staphylococcus aureus، Enterococcus faecalis،Salmonella typhimurium،Escherichia coli،Serratia marcescens،Enterobacter agglomerans،Pseudomonas aeruginosa،

klebsiella pneumoniae،Stenotrophomonas maltophilia،Citrobacter freundii،pseudomonas sp.،Candida albicans، Fusarium oxysporium F.sp .albidinis،Phytophtora infestans spp. قيم. .

.(M±SD)املعيارياإلحنراف±مكرراتلثالثاحلسايبباملتوسطممثلةاألعمدة


57

الفطرياتوالبكتريياللفطريات و البكترييا الداخلية علىالكلوروفورممستخلصاتتأثرينتائج:07الشكل.املمرضة


58

والبكتريياللفطريات و البكترييا الداخلية علىالكلوروفورممستخلصاتتأثرينتائج):تابع(07الشكل. املمرضةالفطريات

Bcillus sp.،Staphylococcus aureus، Enterococcus faecalis،Salmonella typhimurium،Escherichia coli،Serratia marcescens،Enterobacter agglomerans،Pseudomonas aeruginosa،klebsiella

pneumoniae،Stenotrophomonas maltophilia،Citrobacter freundii،pseudomonas sp..،Candida albicans،Fusarium oxysporium F.sp .albidinis،Phytophtora infestans spp. .لثالثاحلسايبباملتوسطممثلةاألعمدةقيم

.(M±SD)املعيارياإلحنراف±مكررات


59

للفطريات و البكترييا الداخلية )B(الكلوروفورمو)A(أسيتاتاإليثيلمستخلصاتتأثرينتائج:08الشكل

.املمرضةالبكترييةاألنواعبعضعلىP. aeruginosa)Pseudomonas aerugenosa(،S. maltophilia)Stenotrophomonas maltophilia(،

S typhimurium)Salmonella typhimirium(.

.

.


60

بإجراءقمناحساسيةأكثراملمرضةالكائناتأيوالواسعالنشاطذاتاملستخلصاتأيمعرفةدف

.الكلوروفورموأسيتاتاإليثيلملستخلصاتالتثبيطمناطقتغريحتليل

الفطريةالعزالتملختلفأسيتاتاإليثيلملستخلصاتالنموتثبيطمناطقتغريحتليلإجراءبعد

بنيمعنويفرقوجودسجلنااملمرضةالفطرياتوالبكترييامنوعلىتأثريهافعاليةمدىوالبكترييةو

موعةنفسمنوعلىتأثريهامدىيف(P<0.05)عنداملستخلصات غرامأوسالبةغرامبكترييا(املمرضةا

كلعلىتأثريهامدىيفبينهافيمامعنويفرقوجودأخرىجهةمنوجهة،من)فطرياتأوموجبة

موعات ).07اجلدول(يفموضحةالتثبيطمناطقمتوسطاتمقارنة. معااملمرضةا

للفطريات و البكترييا الداخلية أسيتاتاإليثيلملستخلصاتالتثبيطمناطقمتوسطاتمقارنة:07الجدول.املختربةالبكتريياوالفطرياتعلىتأثريهاو

Ethyl acetateextacts

Inhibition Zones (mm) (mean)Test micro-organisms

G- Bacteria G+ Bacteria Fungi AllAlternaria sp. 8.704 a 11.778a 11.889 cb 9.956 ab

Cladosporium sp. 9.075 a 10.556a 8.333 c 9.223 cab

Penicilium sp. 1 10.741 a 13.111a 18.667 a 12.800 a

Penicilium sp. 2 9.223 a 11.889a 16.00 ab 11.112 ab

Aspergillus sp. 10.241 a 11.556a 15.333 ab 11.523 ab

Chaetomium sp. 7.408 a 11.111a 11.667 cb 9.000 cb

Phoma sp. 9.593 a 4.333b 9.667 c 8.556 cb

Streptomyces sp.1 7.611a 4.000b 15.667 ab 8.500 cb

Streptomyces sp.2 4.000 b 0.000c 18.000 a 6.000 c

Streptomyces sp.3 8.481 a 5.333b 10.444 cb 8.244 c

(mean):البكترييةاالنواعجمموعةعلىعزلةلكلالتثبيطمناطقمتوسطG-،G+املختربةالفطريةأو.All: G-وG+وFungi.

.)P<0.05(عندمعنويفرقيوجدالمشرتكةحبروفمتبوعةاجلدولمنقيمةكل

حيثالغرامسالبةالبكتريياعلىالتأثرينفستقريباهلاأسيتاتاإليثيلمستخلصاتكلأنالنتائجتبني

.Penicilium spطرفمنتثبيطفعاليةأكربسّجلت ) ملم10.241وملم10.741(تثبيطمبتوسطو1

.Penicilium spمنكلأنحنييف. الرتتيبعلى .Penicilium spو1 البكتريياعلىفعاليةاألكثرهي2


61

هلااليتالعزالتعددأخرىجهةمن. الرتتيبعلى) ملم11.889و ملم13.111(تثبيطمبتوسطالغرامموجبة

.Penicilium spمنكلتسجيلمتفقدأكربكانالفطرياتعلىكبريتأثري Streptomyces sp.1و1

AspergillusوStreptomyces sp.2منكليليهما) ملم18(إىلوصلإذعندمهاالتثبيطمتوسطكان

sp.منكلأنوجدأخرىجهةمن،)ملم15(منأكربتثبيطمبتوسطPenicilium sp. 1

.Streptomyces spو البكترييامنكلعلىأوسعتثبيطيجمالكان هلااليتهيAspergillus sp.و2

عزالتأنلوحظبينما) ملم11(اإلمجايلتثبيطهامتوسطفاقإذالفطرياتوالغرامموجبةوسالبة

Streptomycesالغرامموجبةوسالبةالبكترييامنكلأما علىالفطرياتعلىأكثرنشطةكانتالثالث

. أقلكانت

تثبيطمتوسطاتمبقارنةقمناأسيتاتاإليثيلملستخلصاتحساسيةاألكثراملمرضةاألنواعمعرفةلغرض

). 8اجلدول(املستخلصاتذهتأثرهامدىوالنمو

وحساسيةتأثرمدىيف(P<0.05)عندمعنويفرقيوجدأنهعليهااملتحصلالنتائجحتليلمنتبّني

حساسيةاألكثرهيEscherichia coliالغرامسالبةالبكترييايف جمموعة.باملستخلصاتاملختربةاألنواع

كانتاCitrobacter freundiiوPseudomonas aeruginosaبينما) ملم19.093(إمجايلتثبيطمبتوسط

موعةيفأما. مقاومةأكثر تأثرااألكثرهيBacillus sp.البكتريياأنسّجلالغرامموجبةا

بنياملقارنة). ملم18.067(حساسيةاألكثرهيCandida albicansفكانتأما الفطريات). ملم10.0667(

موعات موعتنيأندلت) الفطرياتوالغرامموجبةوالغرامسالبةبكترييا( املمرضةا أقل البكترييتنيا

).ملم13.5667(اإلمجايلاليت كان متوسط تثبيطهابالفطرياتحساسية مقارنة


62

اإليثيلمبستخلصاتتأثرهاواملختربةالبكتريياوالفطرياتمنوتثبيطمناطقمتوسطاتمقارنة:08الجدول.املعزولةللعيناتأسيتات

Inhibition Zones (mm) (mean)Test microorganisms AllFungiG+ BacteriaG- Bacteria

8.5079 b

9.093 cSalmonella typhimurium19.204 aEscherichia coli12.444 bSerratia marcescens6.407 cEnterobacter agglomeran1.981 dPseudomonas aeruginosa9.444 cklebsiella pneumoniae6.593 cStenotrophomonas maltophilia2.114 dCitrobacter freundii8.706 cpseudomonas sp.

8.3667 b10.0667 aBacillus sp.6.7667 bStaphylococcus aureus8.2667 abEnterococcus faecalis

13.5667 a18.067 aCandida albicans10.600 bFusarium oxysporium F.sp .albidinis12.033 bPhytophtora infestans spp.

(mean):املعزولةالعزالتمستخلصاتمجيعبواسطةخمتربةبكتريياأوفطرينوعكلتثبطمناطقمتوسط.:All G-وG+وFungi.عندمعنويفرقيوجدالمشرتكةحبروفمتبوعةاجلدولمنقيمةكل)P<0.05(.

عندبينهافيمامعنويفرقبوجودالكلوروفورمملستخلصاتالتثبيطمناطقمتوسطاتمقارنةمتيزت

(P<0.05)الغرام،موجبةالبكتريياعلىالطريقةبنفستؤثربينماالفطرياتوالغرامسالبةالبكتريياعلى

موعاتكلعلىتأثريهامدىيفبينهافيمامعنويفرقوجودأخرىجهةمنو اجلدول(معااملمرضةا

9.(

منكلعلىللنموتثبيطيتأثريهلااليتالكلوروفورممستخلصاتأنعلىعليهااملتحصلالنتائجتشري

بفعاليةوStreptomycesجلنسالثالثةالعزالتمستخلصاتهيالفطرياتوالغرامموجبةوسالبةالبكترييا

.Streptomyces spالعزلةطرفمنأكرب ) ملم12.556(إمجايلتثبيطمبتوسطالغرامسالبةالبكتريياعلى2

علىStreptomyces sp.1و) ملم14.333(الفطرياتوالغرامموجبةالبكتريياعلىStreptomyces sp.1و


63

البكترييامنكلعلىمتوسطتأثريهاكاناليتStreptomyces sp.3العزلةتليها) ملم14.000(الفطريات

افكانتالعزالتبقيةبينماملم10منأكربإمجايلتثبيطمبتوسطالغرامموجبةوسالبة أقلمستخلصا

.حدة

البكتريياوالفطرياتعلىتأثريهاوالكلوروفورمملستخلصاتالتثبيطمناطقمتوسطاتمقارنة:90الجدول.املختربة

Chloroformextacts

Inhibition Zones (mm) (mean)Test micro-organisms

G- Bacteria G+ Bacteria Fungi AllAlternaria sp. 6.926 b 8.000 a 5.000 cd 6.756 c

Cladosporium sp. 6.407 b 9.889 a 3.500 d 6.522 c

Penicilium sp. 1 10.778 a 10.833 a 8.333 cb 10.300 ab

Penicilium sp. 2 7.500 b 11.833 a 8.000 bcd 8.467 bc

Aspergillus sp. 5.556 b 8.000 a 8.000 bcd 6.533 c

Chaetomium sp. 4.667 b 9.667 a 5.833 cd 5.900 c

Phoma sp. 7.444 b 8.333 a 4.667 cd 7.067 c

Streptomyces sp.1 11.537 a 14.333 a 12.500 a 12.289 a

Streptomyces sp.2 12.556 a 10.500 a 14.000 a 12.433 a

Streptomyces sp.3 11.056 a 12.333 a 10.333 ab 11.167 ab

(mean):موعةأنواعمجيععلىعزلةلكلالتثبيطمناطقمتوسط .املختربةالواحدةالفطريةأو+G-،GالبكترييةاAll:G -وG+وFungi.

).P<0.05(عندمعنويفرقيوجدالمشرتكةحبروفمتبوعةاجلدولمنقيمةكل

موعاتواملمرضةلألنواعالنتائجحتليلودراسةمنتبّني أوموجبةغرامأوسالبةغرامبكترييا(ا

التأّثرمدىيف(P<0.05)عندمعنويفرقوجودأنهالكلوروفورمملستخلصاتحساسيةأكثر)فطريات

يوجدوالالدرجةبنفستتأثرالفطريةاألنواعأنحنييفالغرامسالبةوموجبةالبكتريياأنواعبنيواحلساسية

). 10اجلدول(بينهامعنويفرق

Pseudomonasهيحساسيةاألكثرالبكترييةاألنواعأنالغرامسالبةالبكتريياجمموعةيفسجلحيث

aeruginosaوSalmonella typhimiriumيفالتوايل،على) ملم12.583و14.222(إمجايلتثبيطمبتوسط

منكلفكانتالغرامموجبةالبكتريياجمموعةأمامقاومة،أكثركانتاألخرىاألنواعحني أن بقية


64

Bacillus sp.وStaphylococcus aureusأماالتوايل،على) ملم12.567و13.900(حساسيةاألكثرهي

8.7500( التثبيطمتوسطيتعد إمجايلملإذالكلوروفورمملستخلصاتحساسيةأقلكلهافكانتالفطريات

وعاتبنياملقارنةبينت). ملم مبتوسطحساسيةاألكثرهيعامةبصفةالغرامموجبةالبكتريياأنالثالثا

التثبيطمتوسطيتجاوزملإذالدرجةبنفستتأثرالفطرياتوالغرامسالبةبينما) ملم10.3722(عامتثبيط

).ملم8(

مبستخلصاتتأثرهاواملختربةالبكتريياوالفطرياتمنوتثبيطمناطقمتوسطاتمقارنة:10الجدول. املعزولةللعيناتالكلوروفورم

Inhibition Zones (mm) (mean)Test microorganisms AllFungiG+ BacteriaG- Bacteria8.4426 b12.583 aSalmonella typhimurium

5.778 cdEscherichia coli9.500 bSerratia marcescens6.000 cdEnterobacter agglomeran14.222 aPseudomonas aeruginosa6.741 cklebsiella pneumoniae3.852 dStenotrophomonas maltophilia3.611 dCitrobacter freundii9.556 bpseudomonas sp.

10.3722a

13.900 aBacillus sp.12.567 aStaphylococcus aureus4.650 bEnterococcus faecalis

8.0167 b8.7500 aCandida albicans8.5000 aFusarium oxysporiumF.sp .albidinis6.8000 aPhytophtora infestans spp.

(mean):املعزولةالعزالتمستخلصاتمجيعبواسطةخمتربةبكتريياأوفطرينوعكلتثبطمناطقمتوسط .All:G -وG+وFungi.

.(P<0.05)عندمعنويفرقيوجدالمشرتكةحبروفمتبوعةاجلدولمنقيمةكل

مدىواملعزولةللعيناتالكلوروفورموأسيتاتاإليثيلملستخلصاتالتثبيطمناطقمتوسطاتبنيمقارنة

علىتأثريهايف)P<0.05(بينها عندمعنويفرقعدم وجودعلىممرضة دلتجمموعةكلعلىتأثريها

موعة البكتريياجمموعةبنيمعنويفرقوجودعلىدلتبينما،)ملم8(حدوديفتثبيطمبتوسطالغرامسالبةا


65

الغرامموجبةالبكتريياعلىأكربتأثريهلاالكلوروفورممستخلصاتأنوجدإذالفطريات،والغرامموجبة

)10.3722lموعةنفسعلىأسيتاتاإليثيلمبستخلصاتمقارنة) ملم فيماذلكعكسو)ملم8.3667(ا

معمقارنة)ملم13.5667(تأثريااألكثرهيأسيتاتاإليثيلمستخلصاتكانتالفطرياتخيص

.)11اجلدول (الكلوروفورم مستخلصات

علىتأثريهاوالكلوروفورموأسيتاتاإليثيلملستخلصاتالتثبيطمناطقمتوسطاتمقارنة:11الجدول.املختربةالبكتريياوالفطريات

Zones Inhibition (mm) (mean)Extracts FungiG+ BacteriaG- Bacteria

13.5667 a8.3667 b8.5079 aEthyl acetate extacts

8.0167 b10.3722 a8.4426 aChlorform extacts

:(mean)موعةأنواعمجيععلىالعيناتجلميعالتثبيطمناطقمتوسط .املختربةالواحدةالفطريةأو+G-،Gالبكترييةا.)P<0.05(عندمعنويفرقيوجدالمشرتكةحبروفمتبوعةاجلدولمنقيمةكل

تعيش الكائنات احلية الدقيقة الداخلية أنسجة النباتات السليمة من دون أن تتسبب يف أعراض مرضية

)Madki et al., 2010( وهي قادرة علي ختليق العديد من املركبات الكيميائية داخل أنسجة هذه النباتات ،

Gayathri et(ذات نشاط بيولوجي اليت ميكن أن تساهم يف الدفاع ضد الكائنات املمرضة للنباتات al.,

خمتلقة ضد من جهة أخرى متثل مصدر هام للمستقلبات الثانوية اجلديدة اليت متلك نشاطات بيولوجية.)2010

. )Devaraju et Satish, 2011(بكتريية ، ضد فطرية ، ضد فريوسية أو ضد عوامل السرطان

ضدنشاطيةمتلكاملعزولةالداخليةالبكترييةوالفطريةالعزالتمستخلصاتأنوجدالدراسةهذهيف

الكائنواملستخلصمصدرعلىيعتمدالتأثريمدىحيثواحد،ممرضحيكائنعلاألقلعلىميكروبيه

ميكروبيهضدنشاطيةمتلكالداخليةالفطرياتأنواعبعضأنأحباثعدةبينت. املستعملاملمرض

)Devaraju et Satish, 2011; Fernandes et al., 2009; Sutjaritvorakul et al., 2010(،أثبتمثلما


66

StreptomycesGhadinجنسخصوصااخليطيةالداخليةالبكترييالدىذلك et al., 2008; Verma et)

(al., 2009; Zhao et al., 2011)،ثانويةمستقلباتعلىاملستخلصاتهذهاحتواءإىلتعزيالنشاطيةهذه

.املمرضةالدقيقةاألحياءضدبيولوجينشاطذات

.Penicilium spوجد أن العزالتاملختربةالعزالتبنيمنأنهإىلالوصولمتالنتائجحتليلخاللمن 1

.Penicilium spو تثبيطنشاطةمتلكStreptomycesجلنسالثالثالعزالتوAspergillus sp.و2

وAlternaria sp .منكلبينما.معااملمرضةالفطرياتوالبكترييامنكلعلىالنطاقواسعة

Cladosporium sp.وChaetomium sp .و.Phoma sp9و7اجلدول(أقلنشاطيتهافكانت(.

ذاتالثانويةللمستقلباتالواسعبإنتاجهمامعروفنيAspergillusوPeniciliumاجلنسنيمنكل

;Devi et al., 2009(الفطريوالبكترييضدالنشاطذاتاملركباتذلكيفمبااملختلفالبيولوجيالنشاط

Maria et al., 2005; Nakashima et al., 2008(،هاممصدرأيضااخليطيةالبكتريياتعتربأخرىجهةمن

احليويةاملضاداتبإنتاجاملتميزStreptomycesجنسخصوصابيولوجياالنشطةالثانويةللمستقلبات

)Remya et Vijayakumar, 2008(،ااألخريةوهذه إصاباتملعاجلةفقطموجهةليستاحليويةمضادا

اليفحىتتستعملفقط لكناملمرضةاحليوانواإلنسان .الزراعيا

لعدةالداخليةاألنسجةمناألجناسهذهمنكلعزلمتإذأخرىأحباثعدةمعالنتائجهذهتتوافق

اأثبتتكماخمتلفةنباتات بينت العديد من . فطريوبكترييضدنشاطهلاحيويةمركباتإنتاجعلىقدر

فطريضدنشاطالداخلية هلاPenicilium sp.و Aspergilus sp.كل من األجناس الفطريةاألحباث أن

عدد من العزالت الداخلية من أيضاو،)Madki et al., 2010; Maria et al., 2005(بكترييو

Ding et al., 2010; Zhang et(فطري معا وبكترييضدنشاطو جدت أن هلا.Penicilium spجنس

al., 2009( .جبنسيتعلقفيمااألمرهوكذلكStreptomycesأنميكناألخريهذاأنبينتإثباتاتفعدة


67

النطاقواسعمكرويبضدنشاطذاتعزلتنيعلىحيث مت احلصولفطرية،وبكترييةضدنشاطيةلهتكون

Streptomycesالعزلةهي sp. RM17وStreptomyces sp. RM42)Remya et Vijayakumar, 2008( .

مكرويبضدنشاطهلاعزالت3منهامكروبيهضدنشاطيةهلاStreptomyces spp.منعزالتعدةبينما

ES15،ES19العزالتهياملمرضةالفطرياتواخلمائروالغرامسالبةوموجبةالبكترييامنكلعلى

اأساسعلىأيضاوصفتالعزالتباقيأخرىجهةمن.)ES7)Rabah et al., 2007العزلةو كائناتأ

,.Cladosporium)Madki et alمثلميكرويبضدنشاطامتالكإمكانيةأثبتكمانباتاتلعدةداخلية

(2010; Wang et al., 2007)،Alternaria(Fernandes et al., 2009; Zhang et al., 2009)،Phoma

)Hoffman et al., 2008(وChaetomium(Gao et al., 2005).املتحصلالعزالتمستخلصاتأثبتت

.Penicilium spالعزالتخاصةاملختربةاملمرضةالكائناتضدنشاطيتهاعليها .Aspergillus spو2

هذهإنتاجعلىيدلواسعةميكروبيهضدنشاطيةشهدتاليتStreptomycesجلنسالثالثالعزالتو

.املختربةاملمرضةاحليةالكائناتضدبيولوجينشاطذاتملركباتالعزالت

الثانويةاملستقلباتاستخالصيفاملستعملاملذيببنوعللمستخلصاتميكروبيهالضدالنشاطيةتتعلق

البكتريياوالفطرياتعلىأكربفعاليةهلاأسيتاتاإليثيلمستخلصاتأنوجدإذاملخترب،املمرضالكائنو

Candidaمنكلعلى)ملم25(للنشاطيةقيمةأكربتسجيلمع)11اجلدول(الغرامسالبة alibicansمن

PeniciliumالعزلةمستخلصطرفمنEscherichia coliوStreptomyces sp.2العزلةمستخلصطرف

sp.1)اجلدول(الغرامموجبةالبكتريياعلىأكربنشاطيتهافكانتالكلوروفورممستخلصاتبينما. )6الشكل

Chaetomiumالعزلةطرفمن.Bacillus spالبكتريياعلى)ملم23(للتثبيطقيمةأكربتسجيلمع)11

sp.)العضوينياملذيبنيمنكلبواسطةاملستخلصةالنشطةاجلزيئاتاختالفإىلهذايرجع. )7الشكل

منهوإذاملستعمل،العضوياملذيبيفالذوبانولالستخالصقابليتهامدىعلىتعتمداليتواملستعملني

األرجحعلىو. )Ogundare et al., 2006(خمتلفةمركباتتستخلصاملختلفةاملذيبات العضويةأناملعروف


68

بينمااملذيبذاالستخالصهاهلاتسمحاليتالقطبيةهلاأسيتاتاإليثيلبواسطةاملستخلصةاملركباتأن

إذدراساتعدةيفإثباتهمتماو هذا. قطبيةأقلفهيالكلوروفورمبواسطةاملستخلصةالنشطةاملركبات

وجديف عدة مثلمااالستخالصعمليةيفاملستعملاملذيبباختالفميكروبيهالضدالنشاطيةفعاليةختتلف

,Chloroform)Nithyanand et Pandianوn-butanolوEthyl acetateمنكلباستعمالأحباث

Ethyl acetate(Parthasarathi etوMethanolوChloroform، و باستعمال)2009 al., 2010)

(Ethyl acetateAlcholRemya etوMethanolوChloroformمنكلكذلك باستعمالو

(ijayakumar, 2008.

موعاتخمتلفعلىاإلمجاليةالتثبيطمناطقمتوسطاتمقارنةمنوأخرىجهةمن أنوجداملختربةا

مبجموعةمقارنةالغرامموجبةالبكتريياوالفطرياتعلىكانللمستخلصاتإمجايلتثبيطمتوسطأكرب

،klebsiella pneumoniae(الغرامسالبةالبكترييامنعددأنكونذلكيعود. )11اجلدول(الغرامسالبة

Stenotrophomonas maltophilia،Citrobacter freundii،pseudomonas sp.،Enterobacter

agglomeran(يفوالعزالتبعضمستخلصاتاجتاهمنعدمةإىلاملنخفضةحبساسيتهاالعموميفمتيزت

عدةيفمثبتهومثلما) 10و8اجلدول(الكلوروفورموأسيتاتاإليثيلمستخلصاتاحلالتنيمنكل

حساسيةأكثرالفطرياتوالغرامموجبةالبكتريياالعموميف.(Sutjaritvorakul et al., 2011)مثلدراسات

البكتريياضدنشطةمنها%)66(احليويةاملضاداتجمموعةمنكبريقسمأنهإذالغرام،سالبةالبكترييامن

يفالسببيكونأنميكنو. )Gayathri et al., 2010(الغرامسالبةالبكتريياضد)%30(والغرامموجبة

احلاملذو الطبيعة السكريةالغشاءوجوداخللوي،للجدارالرتكييباإلختالفإىلاحلساسيةشدةاختالف

للنفاذيةقابلةغريالدهونيفللذوبانالقابلةاملوادجيعلالغرامسالبةالبكترييالدىالليبوبوليسكاريدموعات

منطبقةعلىحيتوياخللويجدارهاكوناحليويةللمضاداتعرضةأكثرتكونالغرامموجبةالبكترييابينما


69

Ogundare etالنشطةاملركباتنفاذيةضدفعالحاجزيشكلالالذيوالبيبتيدوجليكان al., 2006;)

(Pandey et al., 2004.

الفطرياتعزالتملستخلصاتميكروبيهالضدالنشاطيةحولهذهدراستنايفعليهااملتحصلالنتائجإن

يفمهممصدرتكونأنميكنالدقيقةاألحياءهذهأنهعلىتثبتالقمحلنباتالداخليةاخليطيةالبكتريياو

. الزراعيةوالصيدالنيةاألمهيةذاتبيولوجياالنشطةالثانويةاملستقلباتإنتاج

III.5.عليهاالمتحصلالعزالتلمستخلصاتلألكسدةالمضادةالنشاطيةدراسة

III.1.5.إختبارβ-carotene

أو/ والليبيداتأكسدةتثبيطلقياساللينولييكمحض/β-caroteneاختبارالطريقةهذهيفيستعمل

يفواملتمثلةاألكسدةنواتجتقوماألكسدةلعمليةاللينولييكمحضتعرضبعد. احلرةاجلذورإزاحة

جزيئاتمبهامجةالطيارةو املركباتConjugated dienesاملزدوجةالضمونواتجالليبيديةاهليدروبريوكسيدات

β-caroteneلونبزوالمرفوقنانومرت490موجةطولعنداالمتصاصيةيفاخنفاضيسببممااملشبعة،غري

مينعمماالنظامهذاخاللاملتشكلةاحلرةاجلذوربتعديللألكسدةاملضادةاملركباتتقوم. β-caroteneمركب

.)β-carotene)Jayapakasha et al., 2001لونوزوالاألكسدةحدوث

اآلخرالبعضحنييفاللينولييكمحضأكسدةتثبيطعلىتعملالعيناتمستخلصاتبعضأنلوحظ

.Penicilium spالعزلتنيمستخلصاتمنكلأنسجلناحيثنشط،غري هلا.Aspergillus spو2

إىل3,183±78,961%)(منالتثبيطنسبتراوحتواللينولييكمحضألكسدةمضادةنشاطية

اعلىاعتربتاليتBHTمبادةمقارنةعاليةنسبهيوالتوايلعلى)73,977±1,102%( أكسدةتثبطأ

Penicilium sp. 1و.Alternaria spو. Phoma spالعزالتبينما. %100بنسبةاللينولييكمحض

7,569c±64,218%)(،4,486±65,740%)( تثبيطبنسبمانوعاأقلنشاطيتهافكانت

.Chaetomium spو.Cladosporium spالعزالتباقيبينما. الرتتيبعلى1,734±63,012%)(و


70

منأقلاللينولييكمحضألكسدةاملثبطةنشاطيتهافكانت.Streptomyces spجلنسالثالثةالعزالتو

.)17جلدول، ا3امللحق(و)12جلدولا(و) 9الشكل(.50%

املضادةالنشاطيةذاتجديدةمركباتعلىالبحثلغرضدراستهامتالثماروالنباتاتمنالعديد

اأثبتتاليتالفالفونويديةوالفينوليةاملركباتخصوصالألكسدة احلرةاجلذورإزاحةولألكسدةاملضادةقدر

)Srinivasan et al., 2010( .ترجعلألكسدةاملضادةالنشاطيةأنبينتالدراساتمعظمأخريجهةمن

املضادةالنشاطيةإمجايلوالفينوالتإمجايلبنيواضحإرتباطوجدإذالفينوليةاملركباتإىلاألوىلبالدرجة

.)Huang et al., 2007b(لألكسدة

β-carotene/Linoleicإختباربواسطةأسيتاتاإليثيلملستخلصاتلألكسدةاملضادةالنشاطية:12الجدولacid

Inhibition percentage(mean±SD)Ethyl acetate extractsSamples

64,218±7,569cAlternaria sp.C3B41,868±12,107deCladosporium sp.C4B63,012±1,734cPenicilium sp. 12478,961±3,183bPenicilium sp. 23973,977±1,102bcAspergillus sp.3832,949±2,954eChaetomium sp.17N65,740±4,486cPhoma sp.C1B45,698±1,345deStreptomyces sp.116N32,739±4,728eStreptomyces sp.23B50,577±2,597dStreptomyces sp.317B100,000±2,183aBHT

0,630±0,157fH2010,651±0,551fMethanol

. (P<0.05)عندبينهامعنويفرقيوجدالمشرتكةحبروفاملتبوعةالقيمكل

.(M±SD)املعيارياإلحنراف±إختباراتلثالثاحلسايبالوسيطمتثلقيمةكل


71

.ملختلف العزالتأسيتاتاإليثيل كسدة ملستخلصات النشاطية املضادة لأل:09الشكل (A)بواسطة إختبارملختلف العزالت أسيتاتاإليثيل كسدة ملستخلصات النشاطية املضادة لأل β-carotene/Linoleic

acidمقارنة مع الشواهد) BHTوH2OوMethanol( ساعة48خالل (B)بواسطة إختبارملختلف العزالتأسيتاتاإليثيل كسدة ملستخلصات النشاطية املضادة لألβ- carotene/Linoleic

acidالشواهدمعفيما بينها و مقارنة)BHT و H2OوMethanol(كل نقطة من املنحىن متثل الوسيط .ساعة24بعد

.(M±SD)اإلحنراف املعياري±احلسايب لثالث مكررات.(P<0.05)كل قيمة من املنحىن متبوعة حبروف مشرتكة ال يوجد فرق معنوي بينها عند


72

عددلكن،)Arora et Chndra, 2010(للفطرياتالثانويةاملستقلباتأهممنالفينوالتعديدتعد

وجدناعليهااحملصلالنتائجيفوللنباتات ،الداخليةالدقيقةاحليةالكائناتعلىمتتاألحباثمنقليل

إذالدراساتبعضيفإثباتهمتماهذاولألكسدةمضادةنشاطيةهلاالفطريةالعزالتمستخلصاتبعض

إىلخمتلفةنباتاتمناملعزولةالداخليةالفطرياتلبعضلألكسدةاملضادةالنشاطيةاحلاالتمعظميفأرجع

النباتية مثل ما أثبت يف املستخلصاتاملستخلصات،و الفالفونويدات يفللفينوالتالعاليةالنسبة

)Abderrahmane et al., 2010; Sedik et al., 2010(.229وجدوالطبيةالنباتاتبعضعزلت منفطر

لألكسدةاملضادةالنشاطيةإمجايلبنيوثيقإرتباطوجدكمالألكسدةمضادةنشاطيةمتلكمنها29أن

Huang et(املستخلصات يفالفينوليةاملركباتإمجايلو al., 2007b( .من الفطريات كلوجدتبينما

PhomaوCladosporiumوChaetomiumعندأكربكانتولألكسدةمضادةنشاطيةهلا

Chaetomiumالنشطةاألخرىبالعزالتمقارنةالفينوالتإمجايليفأكربنسبةيرافقه)Huang et al.,

2007a(.مستخلصأنأيضاوجدAlternaria alternataنبتةمناملعزولةCoffea arabica L.نشاطيةهلا

مستخلصيفالفينوالتإمجايلإرتفاعإىلذلكأرجعوالقمحمبستخلصمقارنةأعلىلألكسدةمضادة

Alternaria alternataالقمح مبستخلصمقارنة)Fernandes et al., 2009(.منعزلتني

Ginkgo bilobaمناملعزولةSX10وST22هي العزلةAspergilusاجلنس Lمضادةنشاطيةهلما

األخريةهذهSX10العزلةلدىأكربوكالمهاالفالفونويداتمنأكربللفينوالتإمجاليةكميةمعلألكسدة

مضادةنشاطيةشهدتاليتأسيتاتاإليثيلفمستخلصات. )Qui et al., 2010(أكربنشاطيةذات

املذيباتأنوخصوصافينولية،مركباتعلىاحتوائهاإىليعزىقدβ-caroteneالليبيدات بطريقةألكسدة

أسيتاتاإليثيلعنداحلالعليههومامثلالفينوليةاملركباتالستخالصتستعملقطبيةاألكثرالعضوية

األوزانذاتالفينولعديداتواملنخفضةاجلزيئيةاألوزانذاتالفينوليةاملركباتالستخالصيستعملالذي

.)Abdelwahab et al., 2011(العاليةاجلزيئية

III.6.المعزولةالعيناتلمخلفاإلنزيميةالنشاطيةدراسة

إنزميكلتفاعلمادةعلىحتتويواليتالصلبةاألوساطعلىالزرعطريقعنمتاإلنزمييةالنشاطيةإختبار

قطر/اهلالةقطر= اإلنزميياإلنتاجنسبة(اإلنزمييةالنشاطيةقوةعنيعربالذياإلنزميياملؤشرحسابوبعد

يوجدأنهتبنيخمتربإنزميكلعلىالعزالتخمتلفبنياإلنزمييةاملؤشراتمتوسطاتمقارنةو)سم(املستعمرة


73

حنييفاألخرىبالعزالتمقارنةاإلنزمياتخمتلفإنتاجيفالعزالتبعضبني(P<0.05)عندمعنويفرق

.)18جلدول، ا3امللحق(و)10الشكل(و)13اجلدول(كبريتبد اختالفملاآلخرالبعض

.املعزولةالبكتريياوالفطرياتملختلفاإلنزمييةللنشاطيةاإلنزميياملؤشرمتوسطاتمقارنة:13الجدولIsolated

microorganismsEnzymatic Index (EI)*(mean)

Esterase(T80)

Lipase(T20)

Cellulase(CMC)

Amylase(Strach)

Amylase(Dextrine)

Protease(Casein)

Protease(Gelatin)

Alternaria sp. 0,0 0,0 1.5b 1,1d 1.1d nf 1,2d

Cladosporium sp. 1,1d 0,0 0,0 1,5d 1,5d nf 1,2d

Penicilium sp.1 0,0 1,2d 0,0 1,9d 1,6d nf 2,1a

Penicilium sp.2 1,2d 1,2d 0,0 1,7d 1,3d nf 1,5b

Aspergillus sp. 0,0 0,0 0,0 1.6d 1,4d nf 1,5b

Chaetomium sp. 1,7c 0,0 1.0c 1,5d 1,5d nf 1,4c

Phoma sp. 1,1d 0,0 0,0 1,9d 1,6d nf 0,0Streptomyces sp.1 2,3a 3,8a 2.0a 6,1a 4,0b 2,1b nfStreptomyces sp.2 2,1b 2,9b 1.9a 5,2b 4,8a 2,9ab nfStreptomyces sp.3 1,7c 2,2c 0,0 4,3c 3,2c 4,6a nf

EI)*(:املستعمرةقطر/اهلالةقطر= اإلنزميياإلنتاجنسبةميثلالذياإلنزميياملؤشر)سم(،nfاملتوسطات. جيرملاإلختبار.(P<0.05)عندبينهامعنويفرقيوجدالاحلرفبنفساملرفوقة

.(M±SD)املعيارياإلحنراف±مكرراتلثالثاحلسايبالوسيطمتثلاملنحىنمننقطةكل

بنيكبريتشابهتسجيلمعإنتاجهماعلىقادرةالعزالتكلكانتالدكسرتينازواألميالزإنزمينشاطية

أكرب،بنشاطيةفتميزت.Streptomyces spجلنسالثالثالعزالتبينمااألخريينهذينإنتاجيفالفطريات

للذوبانالقابلالنشاءإستعمالعند)Streptomyces sp.1)6.1عنداإلنزمييللمؤشرقيمةأكربسجلناإذ

نشاطية.Streptomyces sp.2العزلةعند)5.8(لهقيمةأكربإىلاملؤشر اإلنزمييالدكسرتينباستعمالأما

إنتاجعلىقادرةالعزالتمن%85وجدناحيثالفطرياتعلىاختبارهامتاجليالتنيباستعمالالربوتيازإنزمي

العزالتأما،.Penicilium spالعزلةطرفمن)2.1(اإلنزمييللمؤشرقيمةأكربتسجيلمعاجليالتيناز

كلكانتحيثالكازينيباستعمالاختبارهامتالربوتيازنشاطية. Streptomyces spجلنسالثالثة

الليبازإنزميينشاطيةأما. )Streptomyces sp.3)4.6العزلةلدىأكربإنزمييمبؤشرونشطةالثالثةالعزالت


74

Streptomycesالعزلةلدىأكرببنشاطيةالليبازإنزميمتلكالعزالتمن%50أنتسجيلفتماإلستريازو

sp.1)3.8 (العزلةلدىأكرببنشاطيةواإلستريازإنزميمتلكالعزالتمن%70وStreptomyces sp.1

العزالتمن%40فقطتسجيلمتإذأقلالنشطةالعزالتعددفكانالسيليالزنشاطيةإختباريفأما.)2.3(

األكثرStreptomyces sp.2وStreptomyces sp.1العزلتانكانتوالسيليالزإنزمينشاطيةهلااملختربة

.التوايلعلى)91.(و)2.0(اإلنزمييمؤشرمهاكانونشاطا

واملتعلقةاملباشرةالنوعيةاإلنزمييةالنشاطيةمعرفةإىلاهلادفةالطرقبنيمناآلجار سطحعلالزرعطريقة

وسيلةهواألخريهذااإلنزميي،باملؤشرعنهااملعربواملستعمرةوقطراإلنزميياهلدمهالةقطربنيبالنسبة

,.Alves et al(الدقيقةاحليةالكائناتمنأكربلعدداإلنزمييةالنشاطيةبنياملقارنةوإلختبارسهلةوسريعة

2002; Carrim et al., 2006( .وحسب)Choi et al., 2005(فإن1منأكرباإلنزميياملؤشركانإذا

حيثعليهااملتحصلالنتائجويتماشىماهذاواملختربخلوياخلارجلإلنزميمنتجةتعداملختربةالكائنات

لهمنتجةاعتبارهاميكناليتو1منأكرباإلنزمييمؤشرهاكانماإنزمياجتاهنشاطيةأبدتاليتالعزالتكل

).13اجلدول(

اأظهرتالعزالتكل ةالنتائجهذهاألميالزإنزميإفرازعلىقدر ,.Adaskaveg et al(وجدهملامشا

Choiكذلك والنشاءتستعملالنخيلجلذورالداخليةالفطريةالعزالتكلأنوجدحيث)1991

إستعمالميكنهاBrucea javanicaمناملعزولةالفطريةالعزالتكلأنوجدواالذين)2005(آخرونو

هلذهاألولاملستهلكاألرجحعلىتعدوالعائلأنسجةداخلتعيشالدقيقةاحليةالكائناتهذه. النشاء

داخلغذاءكمصدرخمزنعضويمركبأهمالنشاءو.)Choi et al., 2005(النباتموتبعداألنسجة

النباتاتأنسجةداخلاهلضمسهلغذائيمصدريعترباألخريهذا،)Sousa et al., 2008(النباتاتأنسجة

غريهاقبلقبلهامنيستهلكالذيوالداخليةالدقيقةاحليةللكائناتمتاحيصبحالنشاءالنباتموتعندو


75

أثناءدكسرتينوCO2وعضويةأمحاضإىلحيللالذيوامليتالنباتتغزواقداليتالدقيقةالكائناتمن

.التحليلعملية

األخرالبعضواإلستريازبعضهاوالليبازبعضهاوالربوتيازإنزمياجتاهنشاطيتهاالعزالتكلأظهرت

فطرياتعزلواالذين)2005(و آخرونMaria وجده مامعيتوافقماهذاالثالثة،اإلنزمياتاجتاهنشاطيةهلا

الذيوالربوتيازوالليبازإنزمييمنلكلنشاطيةهلا.Aspergillus spوAlternaria sp.بينهامنداخلية

البكتريياعزالتكلأنكما وجد. للطاقةكمصدرالليبيداتإستعمالإمكانيةإىلالليبازإنزمينشاطيةأرجع

منوتعزيزيفدورهلايكونأنميكناإلنزمياتهذهأناعتقدالليبازواألميالزإنزميينشاطيةهلااخليطية

.)Sousa et al., 2008(النباتيةاألمراضمكافحةكذلكوالنبات

Choiإليه توصلماوهذاالسيليالزإنزمينشاطيةمتلكالعزالتمن%40أنوجدهذهدراستنايف

Phoma sp.بينهامنالسيليالزإنزميإفرازعلىقادرةداخليةفطريةعزالتعدةعزلواالذين)2005(

Maria et(من طرف.Alternaria spالسيليالزإنزمياجتاهالنشطةالعزالتبنيمنبينما وجدكذلكو

al., 2005( .علىالقادرةللنباتات الداخليةالدقيقةاحليةالكائنات. هذه الدراسةيفعليهاحلصولمتماهذا

%40حوايلتشكلاألخريةهذهتشكلحيثاهلميسيلسلوزهدمعلىقادرةتكونماغالباالسيليلوزهدم

اجللوكوزمثلالبسيطةالغذاءمصادرنفاذبعدوالكائناتهذهللنباتات،احليويةالكتلةمنالتوايلعلى%20و

األولاملنافسالسيليالزإلنزمياملنتجةالكائناتهذهتعتربواخللوياجلدارمركباتاستغالليفتبدأالنشاءو

Choi et(امليتةالنباتاتأنسجةعلى al., 2005(.يعتربكماPointing)1999(الداخليةالكائناتأن

العضويةاملوادحتليليفهامادوراتلعبأنميكنومنهاملعيشةرميةتكونماغالباالسيليالزإلنزمياملنتجة

)Sousa et al., 2008(.املمرضةالكائناتضدبيولوجيةمقاومةكعواملدورتلعبأنميكنأخرىجهةمن

;Phythium)Gao et al., 2010وPhytophtoraمثلالسيليلوزخالياهاجدريفمتلكاليتللنباتات

Sousa et al., 2008(.


76

الربوتيازمثلاإلنزمياتملختلفالكبرياإلنتاجخاصةالثانويةللمستقلباتبإنتاجهااخليطيةالبكتريياتتميز

أغلبيفلوحظإذنتائجنايفعليةاحلصولمتمثلما)Bhasin et al., 2010(السيليالزواألميالزوالليباز

).13اجلدول(اإلنزمياتملختلفأكرببإنتاجمتيزت.Streptommyces spجلنسالثالثةالعزالتأناحلاالت

ميكناألخريةهذهبالتايلاحلية،الكائناتمجيعلدىاإلستقالبعملياتيفمهمةاإلنزمياتتعد

الكائناتمناملعزولةاإلنزمياتتعدلكن،الدقيقةاحليةالكائناتواحليواناتوالنباتاتمنعليهااحلصول

االصناعياملستوىعلىسيماأمهيةأكثرالدقيقةاحلية إذاحلرجة،PHواحلرارةدرجاتيفاستقراراأكثركو

االتيفإستعماهلاميكن البكتيناز،السيليالز،الربوتياز،(األغذيةو) السيليالزالليباز،األميالز،(النسيجيةا

) كزيالنازريدكتاز،أوكسيدوالليباز،(الورقيةو) الليبازالربوتباز،(الصناعات اجللديةو) ريدكتازأوكسيدو

. )Maria et al., 2005; Sousa et al., 2008()ريدكتازأوكسيدوالليباز،السيليالز،الربوتياز،(املنظفاتو

ذاتجديدةلعزالتمصدرالداخليةالدقيقةاحليةالكائناتاعتبارميكنعليهااملتحصلالنتائجخاللمن

النسيجيةوالصيدالنيةوالورقيةوالغذائيةالصناعاتمثلصناعاتعدةيفالبيوتيكنولوجيةاألمهية

. اجللديةو


77

.املعزولةالبكتريياوالفطرياتملختلفاإلنزمييةللنشاطيةاإلنزميياملؤشرمتوسطاتمقارنة:10الشكل


78

. املعزولةالبكتريياوالفطرياتملختلفاإلنزمييةللنشاطيةاإلنزميياملؤشرمتوسطاتمقارنة:)تابع(10الشكل) :(EIاملستعمرةقطر/اهلالةقطر= اإلنزميياإلنتاجنسبةميثلوالذياإلنزميياملؤشر)سم(،nfجيرىملاإلختبار .

.(P<0.05)عندبنهامعنويفرقيوجدالاحلرفبنفساملرفوقةاملتوسطات.(M±SD)املعيارياإلحنراف±مكرراتلثالثاحلسايبالوسيطمتثلاملنحىنمننقطةكل


79

III.7.القمحبذورنمووإنتاشعلىالداخليةالبكتيرياوالفطرياتتأثيردراسة

ذلكوالصلبالقمحمنوعلىاملعزولةالداخليةالبكترييةوالفطريةالعزالتخمتلفتأثريمقارنةمن

إجيايبتأثريهلايكنملالعزالتمعظمأنهتبنيالسويقاتوزنوطولعلىوالبذورإنتاشعلىباالعتماد

فرقوجودأظهرتااليتStreptomyces sp.1،Streptomyces sp.2العزلتنيعدىماالقمحنباتمنوعلى

.)11الشكل(،)14اجلدول(. )Control 1،Control 2(بالشاهدمقارنة(P<0.05)عندمعنوي

.الصلبالقمحنباتمنوعلىاملعزولةالبكتريياوالفطرياتتأثريمقارنة:14الجدول

VigourIndex

Shootfresh

weight(mg)

Rootfresh

weight(mg)

Shootlength(cm)

Rootlength(cm)

Germination(%)Treatment

470,97cd17,50dc18,50b3,42b4,01bc63,33cControl 1446,97cd19,50c17,00b3,41b4,01bc60,00cControl 21323,00a57,50a25,50a5,96a8,58a90,00aStreptomyces sp.1995,67b43,33b27,50a6,52a8,42a70,67bcStreptomyces sp.2488,73cd20,67c19,00b3,40b4,23b64,00cAlternaria sp.439,23cd19,17c17,50b3,37b3,83bc61,00cCladosporium sp.465,01cd20,00c18,00b3,80b4,00bc45,00cPenicilium sp. 1389,60cd18,00dc16,00b3,23b3,50bc58,00cPenicilium sp. 2440,17cd19,33c17,00b3,40b3,93bc60,00cAspergillus sp.468,67cd18,17dc18,00b3,50b4,07bc62,00cChaetomium sp.465,61cd18,63dc17,50b3,47b3,97bc62,67cPhoma sp.552,23c18,00dc19,00b3,73b4,77b65,00cStreptomyces sp.3

Control 1)معقممقطرماء(،Control 2)نشاء+ معقممقطرماء(..(P<0.05)عندبنهامعنويفرقيوجدالاحلرفبنفساملرفوقةالقيم

.(M±SD)املعياري اإلحنراف±مكرراتلثالثاحلسايبالوسيطمتثلاملنحىنمننقطةكل

إجيايبتأثريهلماكانStreptomyces sp.2وStreptomyces sp.1العزلتنيمنكلأنالنتائجتبني

اوجدتاألخريةهذهحيث،بالشاهدمقارنةالقمحنباتمنوعلى منلكلاحليويةالكتلةرفععلىتعملأ

vigour)البادراتمنوقوةمؤشرمنترفعأخرىجهةمنالناشئة،اجلذوروالسويقات index)يعربالذيو

الناشئة،اجلذوروالسويقاتطولواإلنتاشنسبةمنكلعلىإجياباتأثريهاخاللمناجليدالنموعلى

عنداملسجلذلكمنأكربكانStreptomyces sp.1العزلةلدىاملسجلالبادراتمنوقوةمؤشر


80

Streptomyces sp.2)1323,00،995,67(2و1الشاهدينمنأكرباألخريينهذينوالتوايلعلى

).14اجلدول(الشواهدمنجداقريبةالنتائجفكانتالعزالتباقيأما..التوايلعلى446,97)، 470,97(

محضإلندولمنتجةمنهماكالأنStreptomyces sp.2وStreptomyces sp.1العزلتنيوجدت

فكانتللذوبانالقابلغريالفوسفاتحتليلبينما،(NH3)األمونياوindole acetic acid (IAA)األستيك

.)15اجلدول(سلبيةالنتيجة

طرفمنللذوبانالقابلغريالفوسفاتحتليلواألستيكمحضأندولوNH3إنتاجإختبار:15الجدول

.Streptomyces sp.2وStreptomyces sp.1العزلتني

Phosphate

solubilization

Indole acetic acid

(IAA) production

NH3 productionTest isolates

-++Streptomyces sp 1

-++Streptomyces sp.2

.إجيايبتفاعل+سليب،تفاعل-

منوحتفزأنميكنحيثلنمو هذه األخريةبتعزيزهامعروفةللنباتاتالداخليةاخليطيةالبكتريياتعد

املمرضةالفطرياتضدالبيولوجيالنشاطذاتاملستقلباتبعضإنتاجمثلمباشرةغريبطريقةالنباتات

,auxins, gibberellins, cytokinins(لنموهااملعدلةاهلرموناتإنتاجمثلمباشرةبطريقةأوللنباتات

ethylene and abscisic acid (الغذائيةاحلالةحتسنيالنمو،مراحلخمتلفيفالنباتمنوحتفزاليتو

,.Qin et al(الفوسفاتوالنيرتوجنيخصوصااألغذيةامتصاصعمليةتسهيلوالتزويدخاللمنللنباتات

هذهدراستنايفوجد. )Khamna et al., 2010(الرتبةمناملعزولةالبكترييالبعضاحلالهووكذلك.)2011

منالقمحنباتمنوحتفيزعلىتعملStreptomyces sp.2وStreptomyces sp.1العزلتنيمنكلأن

إنتاجعلىقادرةاألخريةهذهأنمالحظةمعاإلنتاشنسبةو اجلذوز واألوراقطولووزنيفالزيادةخالل

طرفمناألمونياوIAAإنتاج. األمونياوIndole Acetic Acid (IAA)أستيكأسيدإندول


81

Streptomycesالنباتاتاألنسجةداخلمنأوالرتبةمناملعزولةسواءدراساتعدةيفأثبت)Khamna et

al., 2010; Nimnoi et al., 2010; Oliveira et al., 2010( .يفدوراتلعبأنميكنالبكتريياهذهبالتايلو

العواملبنيمنأنباعتبارIAAالعزالتهذهإنتاجإمكانيةإىلالدورهذايعزىوقدالقمحنباتمنوتعزيز

تعتربإذ.)Khamna et al., 2009; Oliveira et al., 2010(األخريهذاإنتاجاجليدالنموعلىاملسؤولة

دورهلااليتاألوكسينات بنيومنالنبات،لدىاملعدلةاهلرموناتأهمبنيمن(auxins)األوكسينات

اخلاليايفمتايزهاوإنقسامهااخلاليا،إستطالةحتفيزعلىيعملهرمونهوالذيIAAفيزيولوجيووظيفي

أكرببامتصاصيسمحمماللجذوراجلانبيةالتفرعاتزيادةعلىيعملكما،)Soltani et al., 2010(الناشئة

)Shrivastava et al., 2008( .)Merzaeva et Shirokikh, 2010(جيدمنووالنباتطرفمنلألغذية

هذهبذورمعاملةوعند(winter rye)منIAAللهرموناملنتجةالداخليةاخليطيةالبكترييامنعددعزلوا

كما. للبادراتكثيفمنوواإلنتاشيف قدرةزيادةوجدالبكتريياهذهطرفمناملنتجاألوكسنيذااألخرية

Streptosporangiumو Micromonospora ،Nocardia ،Actinomaduarاخليطيةالبكتريياأجناسأن

اعلىذكرتIAAللهرموناملنتجة جهةمن.الطماطمواخليارالذرى،منلكلاجلافالوزنمنترفعأ

النباتمنوتعزيزعلىأيضاتعملIAAللهرموناملنتجةالرتبةمناملعزولةالبكترييابينتإثباتاتعدةأخري

)Nimnoi et al., 2010(،(Nimnoi et Pongsilp, 2009)املنتجةاملعزولةالبكترييةالعزالتأنوجدوا

Brassica وRaphanus sativusنباتعنداهلوائيةالبادراتواجلذورمنوتعزيزعلىتعملIAAللهرمون

oleraceaبينما. الشاهدمنمرات5منبأكثر)Khamna et al., 2010(و)El-Tarabily, 2008(وجدوا

منالرفعخاللمنالطماطموالذريمنوتعزيزعلىتعملIAAللهرموناملنتجةStreptomycesعزالتأن

مناخليطيةالبكتريياتعززأخرىجهةمن. اهلوائيةالبادراتواجلذورطولووزنزيادةوالبذورإنتاشقدرة

و هذا األخري عنصر مهم يف تغذية )Qin et al., 2011(النرتوجنيبينهامنالغذاءمبصادربتزويدهالنباتمنو


82

النبات و منوه غالبا ما يتم توفريه من طرف البكترييا للنباتات يف شكل أمونيامن خالل تثيت اآلزوت اجلوي

(Roy et al., 2010)،حسبحيث(Hasegawa et al., 2006; Janso et Carter, 2010)ميكن

.اجلويالنيرتوجنيتثبيتللنباتات الداخليةاخليطيةالبكترييابينهامنللنباتات الداخليةللكائنات

القمحنباتمنوتعززخمربياالقمحلنباتالداخليةاخليطيةالبكتريياأنالقولميكنالدراسةهذهمن

مناملزيدتتطلباليتوالقمحنباتلنمواملعززةالغذائيةالعناصرواهلرموناتلبعضمصدراعتبارهاميكنو

اليفإستعماهلاإمكانيةو الدراسة امليدانية و . الزراعيا


83

.القمحنباتمنوعلىالداخليةالبكتريياوالفطرياتتأثريمقارنة:11الشكل)A(:السويقاتوللجذورالرطبالوزنعلىالتأثري .)B(:السويقاتواجلذورطولعلىالتأثري. Control 1)معقممقطرماء(،Control 2)نشاء+ معقممقطرماء.(

احلسايبالوسيطمتثلاملنحىنمننقطةكل،(P<0.05)عندبنهامعنويفرقيوجدالاحلرفبنفساملرفوقةاملتوسطات.(M±SD)املعياري اإلحنراف±مكرراتلثالث


84

. القمحنباتمنوعلىالداخليةالبكتريياوالفطرياتتأثريمقارنة):تابع(11الشكل(C):البادراتمنوقوةعلىالتأثري .D)(:البذورإنتاشعلىالتأثري.Control 1)معقممقطرماء(،Control 2)نشاء+ معقممقطرماء.(

احلسايبالوسيطمتثلاملنحىنمننقطةكل،(P<0.05)عندبنهامعنويفرقيوجدالاحلرفبنفساملرفوقةاملتوسطات.(M±SD)املعياري اإلحنراف±مكرراتلثالث

2011الخاتمة و اآلفاق

خاتمة و اآلفــاقال


85

الخاتمــة و اآلفاق

يفوعائلهامنأغذيتهاعلىتتحصلماغلباللنباتات الداخليةاألنسجةتستوطناليتالدقيقةاألحياء

أنكمابيولوجيا،النشطةاملستقلباتإنتاجخاللمنعائلهاصحةتعزيزعلىاألحياءهذهتعملذلكمقابل

املكافحةالنباتية،اهلرموناتإنتاجالنيرتوجني،تثبنيخاللمنيتمأنميكنعائلهالنمواألخريةهذهتعزيز

.)Hasegawa et al., 2006(املغذياتعلىاملنافسةوللنباتات املمرضةالكائناتضدالبيولوجية

اعلىصفتوللنباتات الداخليةالفطرياتواخليطيةالبكترييامنكل منواسعةموعةمصدرأ

املستقلباتهلذهالبيولوجيةالنشاطاتخمتلفالزراعية،والطبيةالصناعية،األمهيةذاتالثانويةاملستقلبات

;Qin et al., 2011(حشريةمضاداتوسرطانيةفريوسية،فطرية،بكتريية،مضاداتتكونأنميكن

Tejesvi et al., 2007( .الدقيقةاألحياءطرفمناملنتجةاجلديدةاملركباتعنالبحثجعلماهذا

لبعضاملقاومةالبكتريياكظهوراإلنسانيةعندالصحيةاملشاكلبعضحللواعدةآفاقحيملللباتاتالداخلية

Yu et(البيئةعلىخطراأقلومسيةأقلأكرب،فعاليةذاتتكوناملركباتهذهاإلستعمال،شائعةاألدوية

al., 2009( .

الفطرياتواخليطيةللبكترييااألنشطة البيولوجيةبعضدراسةخاللمنعليهااملتحصلالنتائجتشري

Triticum)الصلبالقمحلنباتالداخلية durum Desf.)تشكلأنميكنالكائناتهذهأنواعبعضأنإىل

العزالتبعضأنحيثالزراعية،والصناعيةالطبية،األمهيةذاتبيولوجياالنشطةالثانويةللمستقلباتمصدر

املمرضةالفطرياتوالبكترييةاألنواعبعضضدالطيفواسعةميكروبيةضدلنشاطيةبامتالكهامتيزت

مالألكسدةمضادةنشاطيةبامتالكهامتيزتالعزالتهذهمستخلصاتبعضأنكمااإلنسانوللنباتات

امناليتاملصادرهذهمنبيولوجياالنشطةالثانويةاملستقلباتعلىالبحثيشجع بعضحتلأنشأ

بعضوالدقيقةاحليةالكائناتببعضاإلصابةعنالناجتةاألمراضمثلاإلنسانيةلدىالصحيةاملشاكل


86

املكافحةيفإستعماهلاميكنذلكإىلباإلضافةاحلرة،للجذورالتأكسديةالتفاعالتعنالناجتةاألمراض

.الفطرياتخصوصاللنباتات املمرضةالدقيقةاألحياءضدالبيولوجية

اأثبتتاخليطيةالبكتريياخصوصاالعزالتهذهأنواعبعضآخرصعيدعلى بعضإنتاجعلىمقدر

.الصناعياملستويعلىأمهيةهلاتكونأنميكناليتواإلنزمياتأنواع

اعلىجدتوأيضاالعزالتبعضأخريجهةمن الصلبالقمحنباتمنوتعزيزعلىتعملأ

(Triticum durum Desf.) مثلالنباتيةاهلرموناتبعضإنتاجخاللمنحممد بن بشريصنفIAAتوفريو

. الغذائيةالزراعيةاإلستعماالتلغرضخصوصاأكربأمهيتهاجيعلماالنيرتوجنيمثلالغذائيةاملصادربعض

: تشملمتعنودقةأكثرمشولية،أكثرلدراسةأوليةمرحلةإالّ هيماالدراسةهذهكآفاق،

حتليلعلىتعتمداليتاحلديثةاجلزيئيةالطرقباستعمالبيولوجياالنشطةالعزالتعلىالتعرف·

.rDNAالنوويللحمضITSو18Sالوحدةلتحتاآلزوتيةالقواعدتتابع

طرفمنبيولوجياالنشطةللمركباتأكربإنتاجتعطياليتالفيزيولوجيةواملزرعيةالشروطإجياد·

.العزالتهذه

.النشطةللمركباتاجلزيئيةالبنيةعلىالتعرفوتنقيةعزل،·

ظروفحتتالقمحلنباتالزراعياملردودومنوعلىالعزالتتأثريمدىملعرفةميدانيةدراسة·

. PHواجلفافمثلخمتلفةإجهاد

منالنباتيةاهلرموناتمنأكربكمياتإلنتاجاملناسبةالفيزيولوجيةواملزرعيةالشروطإجياد·

.العزالتهذهطرف

.اإلنزمياتملختلفإنتاجهاحيثمنالعزالتهلذهكميةدراسة·

2011المراجع

المراجــــــــــع

2011المراجع

87

المراجــــــــــع

1- Arnold A. E. Understanding the diversity of foliar endophytic fungi:progress, challenges, andfrontiers. Fungal Biology Reviews 2007; 21: 51-66.

2- Abdel-raheem A. and Shearer C. A. Extracellular enzyme production by freshwaterascomycetes. Fungal Diversity 2002; 11: 1-19

3- Abdelwahab S. I., Mohan S., Mohamed E. M., Al-Mekhlafi N., Mariod A. A., Abdul A. B.,Abdulla M. A. and Alkharfy K. M. Antiapoptotic and Antioxidant Properties of Orthosiphonstamineus Benth (Cat's Whiskers): Intervention in the Bcl-2-Mediated Apoptotic Pathway. EvidBased Complement Alternat Med 2011; 2011: 156765.

4- Abderrahmane B., Sabah B., Farida B., Seddik K., Noureddine C., Daoud H., Lekhmici A.

and Mosaad Attia A.-W. Antioxidant and radical scavenging properties of Carthamus caeruleus L

extracts grow wild in Algeria flora. Comunicata Scientiae 2010; 1: 128-136.

5- Adaskaveg J. E., Blanchetter A. and Gilbertson R. L. Decay of date palm wood by white-rotand brown-rot fungi. Canadian Journal of Botany 1991; 69: 615-629.

6- Ahmad F., Ahmad I. and Khan M. S. Screening of free-living rhizospheric bacteria for theirmultiple plant growth promoting activities. Microbiological Research 2008; 163: 173-181.

7-Ahmed S., Govindarajan J. M., Funk C. R. and Johnson-Cicalese J. M. Fatality of housecrickets on perennial ryegrasses infected with a fungal endophyte. Entom exper et appl 1985; 39:183-190.

8- Alva P., Mckenzie E. H. C., Pointing S. B., Pena-Muralla R. and Hyde K. D. Do sea grassesharbour endophytes? Fungal Diversity 2002; 7: 167-178.

9- Alves M. H., Campos-Takaki G. M., Proto A. L. F. and Milanez A. I. Screening of mucorspp. for the production of amylase, lipase, polygalacturonase and protease. Brazilian Journal ofMicrobiology 2002; 33: 325-330.

10- Aly A. H., Edrada-Ebel R., Wray V., Muller W. E., Kozytska S., Hentschel U., Proksch P.and Ebel R. Bioactive metabolites from the endophytic fungus Ampelomyces sp. isolated from themedicinal plant Urospermum picroides. Phytochemistry 2008; 69: 1716-1725.

11- Anitha A. and Rabeeth M. Degradation of fungal cell walls of phytopathogenic fungi by lyticenzyme of Streptomyces griseus. African Journal of Plant Science 2010; 4: 061-066.

12- Arasu M. V., Duraipandiyan Y., Agastian P. and Ignacimuthu S. In vitro antimicrobialactivity of Streptomyces spp. ERI-3 isolated from Western Ghats rock soil (India). Journal deMycologie Médicale 2009; 19: 22-28.

13- Araújo G. M. d., Silva A. C. d. and Azevedo J. L. Isolation of endophytic actinomycetesfrom roots and leaves of maize (Zea mays L.). Brazilian Archives of Biology and Technology 2000;43: 447-451.

14- Arifuzzaman M., Khatun M. R. and Rahma H. Isolation and screening of actinomycetesfrom Sundarbans soil for antibacterial activity. African Journal of Biotechnology 2010; 9: 4615-5619.

2011المراجع

88

15- Arnold A. E. Diversity and Ecology of Fungal Endophytesin Tropical Forests. In:Deshmokh, S.K. and Rai, M.K. (eds) Biodiversity of Fungi, their rol in Human Life. SiencePublishers, Enfields, New Hampshire, USA 2005; pp. 49-68

16- Arnold A. E., Maynard Z., Gilbert G. S. and Coley P. D. Are tropical fungal endophyteshyperdiverse? Ecology Letters 2000; 3: 267-274.

17- Arnold A. E., Mejýa L. C., Kyllo D., Rojas E. I., Maynard Z., Robbins N. and Herre E. A.Fungal endophytes limit pathogen damage in a tropical tree. PNAS 2003; 100: 15649-15654.

18- Arnold A. E., Miadlikowska J., Higgins K. L., Sarvate S. D., Gugger P., Way A.,Hofstetter V., Kauff F. and Lutzoni F. A phylogenetic estimation of trophic transition networksfor ascomycetous fungi: are lichens cradles of symbiotrophic fungal diversification? Syst Biol2009; 58: 283-297.

19- Arora D. S. and Chndra P. Assay of antioxidant potential of two aspergillus isolates bydifferent methods under various physio-chemical conditions. Brazilian Journal of Microbiology2010; 41: 765-777.

20- Arunachalam R., Wesely E. G., George J. and Annadurai G. Novel approaches foridentification of streptomyces noboritoensis TBG-V20 with cellulase production. Current Researchin Bacteriology 2010; 3: 15-26.

21- Azevedo J. L., Maccheroni W. J., Pereira J. O. and Welington L. A. l. Endophyticmicroorganisms: a review on insect control and recent advances on tropical plants. EJB ElectronicJournal of Biotechnology 2000; 3: 40-65.

22- Balagurunathan R., Xu L. and Jiang C. Diversity of soil actinomycetes from south india andsouth china. Actinomycetes 1996; 4: 89-94.

23- Baras O., Gulluce M., Sahin F., Ozer H., Kilic H., Ozkan H., Sokmen M. and Ozbek T.Biological activities of the essential oil and methanol extract of achillea biebersteinii Afan.(Asteraceae). Turk J Biol 2006; 30: 64-73.

24- Bettucci L., Semito S., Alonso R. and upo S. Endophytic fungi of twigs and leaves of threenative species of Myrtaceae in Uruguay. Sydowia 2004; 58: 8-23.

25- Bhasin S., Cameotra S. S. and Modi H. A. Actinomycetal diversity of western region ofmadhya pradesh. Journal of Advances in Developmental Research 2010; 1: 132-138.

26- Botton B. Breton A., Fevre M., Guy P.H., Iarpent J.P., Sanglier J.J., Vayssier V. andVeau,P. Moisissures utiles et nuisibles.Importance Industrielle.Masson 1990. pp. 20-191.

27- Breed R.S.; Murray E.G.D. and Smith N.R. Bergey's Manual of determinativebacteriology. 7 th ed. Williams & Wilkins, Baltiùore 1957; pp. 694-826.

28- Bussaban B., Lumyong S., Lumyong P., Mckenzie E. H. C. and Hyde K. D. Endophyticfungi from Amomum siamense. Can J Microbiol 2001; 47: 943-948 .

29- Cannon P. F. and Simmons C. M. Diversity and host preference of leaf endophytic fungi inthe Iwokrama Forest Reserve, Guyana. Mycologia 2002; 94: 210-220.

30- Cao R., Liu X., Gao K., Mendgen K., Kang Z., Gao J., Dai Y. and Wang X.Mycoparasitism of endophytic fungi isolated from reed on soilborne phytopathogenic fungi andproduction of cell wall-degrading enzymes in vitro. Curr Microbiol 2009; 59: 584-592.

2011المراجع

89

31- Carrim A. J. I., arbosa E. C. and Gonçalves J. D. Enzymatic activity of endophytic bacterialisolates of Jacaranda decurrens Cham. (Carobinha-do-campo). Brazilian Archives of Biology andTechnology 2006; 49: 353-395.

32- Carroll F. E., MUller E. and Sutton B. C. Preliminary studies on the incidence of needleendophytes in some European conifers. Sydowia 1977; 29: 87-103.

33- Carroll G. C. The biology efo endophytism in plants with particular reference to woodyperenials. In: microbiology pf phylospher. Fokkinna N.J. Van Den Heuvel J. (eds). CambridgeUniversity press, Cambredge 1986; pp. 205-222.

34- Carroll G. S. and Petrini O. Patterns of substrate utilization of fungal endophytes fromconiferous foliage. Mycologia 1983; 75: 53-63.

35- Castillo U. F., Strobel G. A., Mullenberg K., Condron M. M., Teplow D. B., Folgiano V.,Gallo M., Ferracane R., Mannina L., Viel S., Codde M., Robison R., Porter H. and Jensen J.Munumbicins E-4 and E-5: novel broad-spectrum antibiotics from Streptomyces NRRL 3052.FEMS Microbiol Lett 2006; 255: 296-300.

36- Castillo U., Harper J. K., Strobel G. A., Sears J., Alesi K., Ford E., Lin J., Hunter M.,Maranta M., Ge H., Yaver D., Jensen J. B., Porter H., Robison R., Millar D., Hess W. M.,Condron M. and Teplow D. Kakadumycins, novel antibiotics from Streptomyces sp NRRL30566, an endophyte of Grevillea pteridifolia. FEMS Microbiol Lett 2003; 224: 183-190.

37- Chaeprasert S., Piapukiew J., Whalley A. J. S. and Sihanonth A. Endophytic fungi frommangrove plant species of Thailand: their antimicrobial and anticancer potentials. Botanica Marina2010; 53: 555-564.

38- Champion R. Identifier les champignons transmis par les semences. INRA edition 1997. P. 401

39- Choi Y. W., Hodgkiss I. J. and Hyde K. D. Enzyme production by endophytes of Bruceajavanica. Journal of Agricultural Technology 2005; 1: 55-66.

40- Clay K. and Leuchtmann A. Infection of woodland grasses by fungal endophytes. Mycologia1989; 81: 805-811.

41- Clay K. and Schardl C. Evolutionary origins and ecological consequences of endophytesymbiosis with grasses. Am Nat 2002; 160 Suppl 4: S99-S127.

42- Clay K. Fungal endophytes of plants: biological and chemical diversity. Nat Toxins 1992; 1:147-149.

43- Cohen S. D. Endophytic-host selectivity of Discula umbrinella on Quercus alba and Quercusrubra characterized by infection, pathogenicity and mycelial compatibility. European Journal ofplant Plant Pathology 2004; 110: 713-721.

44- Cohen S. D. Host selectivity and genetic variation of Discula umbrinella isolated from twooak spacies: Analyses of intergenic spacer region sequences of ribosomal DNA . MicrobialEcology 2006; 52: 463-469.

45- Compant S., Duffy B., Nowak J., Clement C. and Barka E. A. Use of plant growth-promoting bacteria for biocontrol of plant diseases: principles, mechanisms of action, and futureprospects. Appl Environ Microbiol 2005; 71: 4951-4959.

46- Conn V. M. and Franco C. M. Analysis of the endophytic actinobacterial population in theroots of wheat (Triticum aestivum L.) by terminal restriction fragment length polymorphism andsequencing of 16S rRNA clones. Appl Environ Microbiol 2004; 70: 1787-1794.

2011المراجع

90

47- Coombs J. T. and Franco C. M. Isolation and Identification of Actinobacteria from Surface-Sterilized Wheat Roots. Applied And Environmental Microbiology 2003a; 69: 5603-5608.

48- Coombs J. T. and Franco C. M. Visualization of an endophytic Streptomyces species inwheat seed. Appl Environ Microbiol 2003b; 69: 4260-4262.

49- Cui H. B., Mei W. L., Miao C. D., Lin H. P., Hong K. and Dai H. F. Antibacterialconstituents from the endophytic fungus Penicillium sp.0935030 of mangrove plant Acrostichumaureurm . Chemical Journal of Chinese Univer- sities 2008; 33: 407-410.

50- Dababat A. A. F. A. and Sikora R. A. Use of Trichoderma harzianum and Trichodermaviride for the biological control of Meloidogyne incognita on tomato. Jordan Journal ofAgricultural Sciences 2007; 3: 297-309.

51- Dai C. C., Yu B. Y. and Li X. Screening of endophytic fungi that promote the growth ofEuphorbia pekinensis. African Journal of Biotechnology 2008; 7: 3505-3510.

52- Dapkevicius A., Venskutonis R., Van Beek T. A. and Linssen P. H. Antioxidant activity ofextracts obtained by different isolation procedures from some aromatic herbs grown in Lithuania. JSci Food Agr 1998; 77: 140-146.

53- Deshmukh S. K., Mishra P. D., Kulkarni-Almeida A., Verekar S., Sahoo M. R.,Periyasamy G., Goswami H., Khanna A., Balakrishnan A. and Vishwakarma R. Anti-inflammatory and anticancer activity of ergoflavin isolated from an endophytic fungus. ChemBiodivers 2009; 6: 784-789.

54- Devaraju R. and Satish S. Endophytic mycoflora of Mirabilis jalapa L. and studies onantimicrobial activity of its endophytic Fusarium sp. Asian j exp biol sci 2011; 2: 75-79.

55- Devi P., D'Souza L., Kamat T., Rodriguez C. and Naik C. G. Batch culture fermentation ofPenicilium chrysogenum and a report on the isolation, purification,identification and antibioticactivity of citrinin. Indian Journal of Biotechnology 2009; 38: 38-44.

56- Dharmaraj S. and Dhevendaran K. Evaluation of Streptomyces as a probiotic feed for thegrowth of ornamental fish Xiphophorus helleri. Food Technol Biotechnol 2010; 48: 497-504.

57- Ding T., Jiang T., Zhou J., Xu L. and Gao Z. M. Evaluation of antimicrobial activity ofendophytic fungi from Camptotheca acuminata (Nyssaceae). Genet Mol Res 2010; 9: 2104-2112.

58- Dingle J. and McGee P. A. Some endophytic fungi reduce the density of pustules of Pucciniarecondita f. sp. tritici in wheat. Mycol Res 2003; 107: 310-316.

59- Ebel R. Secondary metabolites from marine-derived fungi. In: Proksch P. Müller W.E.G.(eds).Frontiers in Marine Biotechnology.Horizon Scientific Press, Norwich 2006; pp. 43-173

60- El-Gendy M. M. and El-Bondkly A. M. Production and genetic improvement of a novelantimycotic agent, saadamycin, against dermatophytes and other clinical fungi from endophyticStreptomyces sp. Hedaya48. J Ind Microbiol Biotechnol 2010; 37: 831-841.

61- El-kady I. S., Mazen M. B. and Saber S. M. Some enzimatic activities of fungi isolated fromcotton seeds and cotton seed products. Qatar Univ Sci Bull 1984; 4: 85-93.

62- El-Shatoury S., Abdulla H., El-Karaaly O., El-Kazzaz W. and Dewedar A. Bioactivities ofEndophytic Actinomycetes from Selected Medicinal Plants in the World Heritage Site of SaintKatherine, Egypt. International Journal of Botany 2006; 2: 307-312.

2011المراجع

91

63- El-Tarabily K. A. Promotion of tomato (Lycopersicon esculentum Mill.) plant growth byrhizosphere competent 1-aminocyclopropane-1- carboxylic acid deaminase-producingstreptomycete actinomycetes. Plant Soil 2008; 308: 161-174.

64- Fang L., Ke L., Xiaoming L. and Bingui W. Chemical constituents of marine algal-derivedendophytic fungus Exophiala oligosperma EN-21. Chinese journal of oceanology and limnology2011; 29: 63-67.

65- Faucher E., Paradis E., Goyer C., Hodge N. C., Hougue R., Stall R. E. and Beaulieu C.Characterization of streptomycetes causing Deep-pitted scab of potato in québec, canada.International Journal of Systematic Bacteriology 1995; 45: 222-225.

66- Fernandes M. D. R. V., Silva T. A. C., Pfenning L. H., Costa-Neto C. M. D. C., HeinrichT. A., Alencar S. M. D., Lima M. A. D. and Ikegaki M. Biological activities of the fermentationextract of the endophytic fungus Alternaria alternata isolated from Coffea arabica L. BrazilianJournal of Pharmaceutical Sciences 2009; 45: 677-685.

67- Gangadevi V., Murugan M. and Muthumary J. Taxol determination from Pestalotiopsispauciseta, a fungal endophyte of a medicinal plant. Sheng Wu Gong Cheng Xue Bao 2008; 24:1433-1438.

68- Gao K. F., Dai C. C. and iu X. Z. Mechanisms of fungal endophytes in plant protectionagainst pathogens. African Journal of Microbiology Research 2010; 4: 1346-1351.

69- Gao K., Lui X., Kang Z. and Mendgen K. Mycoparasitism of Rhizoctonia solani byEndophytic Chaetomium spirale ND35:Ultrastructure and Cytochemistry of the Interaction. Firstpubl in: Journal of Phytopathology 2005; 153: 280-290.

70- Gayathri S., Saravanan D., Radhakrishnan M., Balaguruna R. and Kathiresan K.Bioprospecting potential of fast growing endophytic bacteria from leaves of mangrove and salt-marsh plant species. India Journal of Biotechnology 2010; 9: 402.

71- Gehlot P., Bohra N. K. and Purohit D. K. Endophytic mycoflora of inner bark of Prosopiscineraria - a key stone free species of Indian desert. American-Eurasian Journal of Botany 2008; 1:1-4.

72- Ghadin N., Zin N. M., Sabaratnam V., Badya N., Basri D. F., Lian H. H. and Sidik N. M.Isolation and characterization of a novel endophytic streptomyces SUK 06 With AntimicrobalActivity From Malaysian Plant. Asian Journal of Plant Sciences 2008; 7: 189-194.

73- Ghimire S. R. and Hyde K. D. Fungal endophytes. In: Plant Surface Microbiology. Varma,A., Abbott, L., Werner,D., and Hampp, R. (eds). Springer Verlag 2004; 281-288.

74- Goggin F. L. Plant-aphid interactions: molecular and ecological perspectives. Curr Opin PlantBiol 2007; 10: 399-408.

75- Gong l. J., Gou S. X. and . Endophytic fungi from Dracaena cambodiana and Aquilariasinensis and their antimicrobial activity. African Journal of Biotechnology 2009; 8: 731-736.

76- Gorden R. E. and Smith M. M. Proposed group of characters for the separation ofStreptomyces and Nocardia. J Bacteriol 1954; 69: 147-150.

77- Guiraud J.P. Techniques d'analyses microbiologiques. In: Microbiologie alimentaire. Dunod,Paris.1998 ; pp .168-333.

78- Guo B., Wang Y., Sun X. and Tang K. Bioactive natural products from endophytes: a review.Prikl Biokhim Mikrobiol 2008; 44: 153-158.

2011المراجع

92

79- Guo L. D., Hyde K. D. and Liew E. C. Detection and taxonomic placement of endophyticfungi within frond tissues of Livistona chinensis based on rDNA sequences. Mol Phylogenet Evol2001; 20: 1-13.

80- Guo L. D., Hyde K. D. and Liew E. C. Y. Identification of endophytic fungi from Livistonachinensis based on morphology and rDNA sequences. New Phytol 2000; 147: 617-630.

81- Haggag W. M. Role of Entophytic Microorganisms in Biocontrol of Plant Diseases. LifeScience Journal 2010; 7: 57-62.

82- Hamayun M., Khan S. A., Iqbal I., Ahmad B. and Lee I. J. Isolation of a Gibberellin-producing fungus (Penicillium sp. MH7) and Growth Promotion of Crown Daisy (Chrysanthemumcoronarium). J Microbiol Biotechnol (2010), 2010; 20 : 202-207.

83- Harper J. K., Ford E. J., Strobel G. A., Arif A., Grant D. M., Porco J., Tomer D. P. andOneill K. Pestacin: a 1,3-dihydro isobenzofuran from Pestalotiopsis microspora possessingantioxidant and antimycotic activities. Tetrahedron 2003; 59: 2476.

84- Hasegawa S., Meguro A., Shimizu M., Nishimura T. and Kunoh H. Endophyticactinomycetes and fheir interactions with host plants. Actinomycetologica 2006; 20: 72-81.

85- Hata K., Futai K. and Tsuda M. Seasonal and needle age-dependent changes of theendophytic mycobiota in Pinus thunbergii and Pinus densiflora needles. Can J Bot 1998; 76: 245-250.

86- Hawkswo D. L. The fungal dimension of biodiversity: magnitude, significance, andconservation. Mycological Research 1991; 95: 641-655.

87- He R. L., Wang G. P., Liu X. H., Zhang C. L. and Lin F. C. Antagonistic bioactivity of anendophytic bacterium isolated from Epimedium brevicornu Maxim. African Journal ofBiotechnology 2009; 8: 191-195.

88- Hoffman A. M., Mayer S. G., Strobel G. A., Hess W. M., Sovocool G. W., Grange A. H.,Harper J. K., Arif A. M., Grant D. M. and Kelley-Swift E. G. Purification, identification andactivity of phomodione, a furandione from an endophytic Phoma species. Phytochemistry 2008; 69:1049-1056.

89- Holt J.G.; Krieg N.R.; Sneath P.H.A.; Staley J.T. and Williams S.T. Bergey'sManual of determinative bacteriology. 9 th ed. Lippincott Williams & Wilkins. Baltimore1994; pp. 605-619

90- Huang W. Y., Cai Y. Z., Hyde K. D., Corke H. and Sun M. Biodiversity of endophytic fungiassosiated with 29 traditional chinese medicinal plants. Fungal Diversity 2008; 33: 61-75.

91- Huang W. Y., Cai Y. Z., Hyhe K. D., Corke H. and Sun M. Endophytic fungi from Neriumoleander L (Apocynaceae): main constituents and antioxidant activity. World Journal ofMicrobiology and Biotechnology 2007a; 23: 1253-1263.

92- Huang W. Y., Cai Y. Z., Xing J., Corke H. and Sun M. A potential antioxidant resource:endophytic fungi from medicinal plants. Springer 2007b; 61: 14-30.

93- Hyde K. D. and Soytong K. D. The fungal endophytes dilomma. Fungal Diversity 2008; 33:163-173.

94-Igarashi Y. Screening of novel bioactive compounds from plant-associated actinomycetes.Actinomycetologica 2004; 18: 63-66.

2011المراجع

93

95- Igarashi Y., Trujillo M. E., Martinez-Molina E., Yanase S., Miyanaga S., Obata T.,Sakurai H., Saiki I., Fujita T. and Furumai T. Antitumor anthraquinones from an endophyticactinomycete Micromonospora lupini sp. nov. Bioorg Med Chem Lett 2007a; 17: 3702-3705.

96- Inderiati S. and Muliani S. Isolation and characterization of endophytic actinomycetes oftobacco plants . Journal Agrisistem 2008; 4: 89-100.

97- Istifadah N. and McGee P. A. Endophytic Chaetomium globosum reduces development of tanspot in wheat caused by Pyrenophora tritici-repentis. Australas Plant Path 2006; 35: 411-418.

98- Jalgaonwala R. E., Mohite B. V. and Mahajan R. T. Evaluation of endophytes for theirantimicrobial activity from indigenous medicinal plants belonging to north maharashtra regionindia. International Journal on Pharmaceutical and Biomedical Research (IJPBR) 2010; 1: 136-141.

99- Janso J. E. and Carter G. T. Biosynthetic potential of phylogenetically unique endophyticactinomycetes from tropical plants. Appl Environ Microbiol 2010; 76: 4377-4386.

100- Jayapakasha G. K., Singh R. P. and Sakariah K. K. Antioxidant activity of grape seed(Vitis Vinifera) extracts on peroxidation models in vitro. Food Chem 2001; 73: 285-290.

101- Kannan V. and Sureendar R. Synergistic effect of beneficial rhizosphere microflora inbiocontrol and plant growth promotion. J Basic Microbiol 2009; 49: 158-164.

102- Khamna S., Yokota A., Peberdy J. F. and Lumyong S. Indole-3-acetic acid production byStreptomyces sp.isolated from some Thai medicinal plant rhizosphere soils. Eur Asian Journal ofBiosciences 2010; 4: 23-32.

103- Khamna S., yotoka A. and Lumyong S. Actinobacteria isolated from medicinal plantrhizosphere soils: diversity and screening of antifungal compounds, indole-3-acetic acid andsiderophore production. World J Microbiol Biotechnol 2009; 25: 649-655.

104- Seddik K., Nadjet I., Abderrahmane B., Daoud H. and Lekhmici A. Antioxidant andantibacterial activities of extracts from Artemisia herba alba Asso. leaves and some phenoliccompounds. Journal of Medicinal Plants Research Vol 2010; 4: 1273-280.

105- Kumar D. S. S. and Hyde K. D. Biodiversity and tissue-recurrence of endophytic fungi in

Tripterygium wilfordii. Fungal Diversity 2004; 17: 69-90.

106- Kwon H. P., Son S. W., Han H. R., Choi G. J., Jang K. S., Choi Y. H., Lee S., Sung N. D.and Kim J.C. Nematicidal activity of bikaverin and fusaric acid isolated from Fusariumoxysporum against pine wood nematode, Bursaphelenchus xylophilus. Plant Pathol J 2007; 23:318-321.

107- Larpent J.P. and Larpent-Gourgaud M. Manuel pratique de microbiologie. Hermann,Paris1985 ; pp. 157-162 .

108- Larran S., Perello A. and Simon M. R. The endophytic fungi from wheat (Triticumaestivum L.). World J Microbiol Biotechnol 2007; 23: 565-572.

109- Larran S., Perello A., Simon M. R. and Moreno V. Isolation and analysis of endophyticmicroorganisms in wheat (Triticum aestivum L.) leaves. World Journal of Microbiology &Biotechnology 2002; 18: 683-686.

110- Larran S., Perello A., Simon M. R. and Moreno V. The endophytic fungi from wheat(Triticum aestivum L.). World J Microbiol Biotechnol 2007; 23: 565-572.

2011المراجع

94

111- Larsen T. O., Smedsgaard J., Nielsen K. F., Hansen M. E. and Frisvad J. C. Phenotypictaxonomy and metabolite profiling in microbial drug discovery. Nat Prod Rep 2005; 22: 672-695.

112- Latch G. C. M., Hunt W. F. and Musgrave D. R. Endophytic fungi affect growth ofperennial ryegrass. New Zealand Journal of Agricultural Research 1985; 28: 129-132.

113- Lee J. Y., Lee J. Y., Jung H. W. and Hwang B. K. Streptomyces koyangensis sp. nov., anovel actinomycete that produces 4-phenyl-3-butenoic acid. Int J Syst Evol Microbiol 2005; 55:257-262.

114- Lee S. O., Choi G. J., Choi Y. H., Jang K. S., Park D. J., Kim C. J. and Kim J. C.Isolation and characterization of endophytic actinomycetes from Chinese cabbage roots asantagonists to Plasmodiophora brassicae. J Microbiol Biotechnol 2008; 18: 1741-1746.

115- Li E., Jiang L., Guo L., Zhang H. and Che Y. Pestalachlorides A-C, antifungal metabolitesfrom the plant endophytic fungus Pestalotiopsis adusta. Bioorg Med Chem 2008; 16: 7894-7899.

116- Li X. Streptomyces cellulolyticus sp. nov., a new cellulolytic member of the genusStreptomyces. International Journaolf Systematbica Cteriology 1997; 47: 443-445.

117- Liu C., Liu T., Yuan F. and Gu Y. Isolating endophytic fungi from evergreen plants anddetermining their antifungal activities. African Journal of Microbiology Research 2010; 4: 2243-2248.

118- Liu X., Dong M., Chen X., Jiang M., Lv X. and Zhou J. Antimicrobial activity of anendophytic Xylaria sp.YX-28 and identification of its antimicrobial compound 7-amino-4-methylcoumarin. Appl Microbiol Biotechnol 2008; 78: 241-247.

119- Lv Y. L., Zhang F. S., Chen J., Cui j. L., Xing Y. M., Li X. D. and Guo S. X. Diversity andantimicrobial activity of endophytic fungi associated withthe alpine plant Saussurea involucrata.Biol Pharm Bull 2010; 8: 1300-1306.

120- Madki M. A., Manzoor A. S., Powar P. V. and Patil K. S. Isolation and Biological Activityof Endophytic Fungi fromWithania Somnifera. International Journal of Pharmaceutical Sciences2010; 2: 848-858.

121- Maria G. L., Sridhan K. S. and Raviraja N. S. Antimicrobial and enzyme activity ofmangrove endophyticfungi of southwest coast of India. Journal of Agricultural Technology 2005;1: 67-80.

122- Márquez S. S., Bills G. F. and Zabalgogeazcoa I. The endophytic mycobiota of the grassDactylis glomerata. Fungal Diversity 2007; 27: 171-195.

123- Merzaeva O. V. and Shirokikh I. G. The production of auxins by the endophytic bacteria ofwinter rye. Appl Biochem Microbiol 2010; 46: 44-50.

124- Mohanta S., harma G. D. S. and Deb B. Diversity of endophytic diazotrophs in Non-Leguminous Crops - A Review. Assam University Journal of Science & Technology :Biologicaland Environmental Sciences 2010; 6: 109-122

125- Moon C. D., Guillaumin J. J., Ravel C., Li C., Craven K. D. and Schardl C. L. Newneotyphodium endophyte species from the grass tribes stipeae and meliceae. Mycologia 2007; 99:895-905.

126- Mukhtar I. Influence of Trichoderma species on seed germination in okra . Mycopath 2008;6: 47-50.

2011المراجع

95

127- Myadoh S., Tsuchizaki N., Ishikawa J. and Hotta K. Digital Atlas ofActinomycetes.(Http://www.nih.go.jp/saj/DigitalAtlas). The Society of Actinomycetes. The Societyof Actinomycetes Tokyo, Japan 2002.

128- Nadeem A., Hamayun M., Khan S. A., Khan A. L., Lee I. J. and Shin D. H. Gibberellin-producing endophytic fungi isolated from Monochoria vaginalis. J Microbiol Biotechnol 2010; 20:1744-1749.

129- Naik B. S., Shashikala J. and Krishnamurthy Y. L. Study on the diversity of endophyticcommunities from rice (Oryza sativa L.) and their antagonistic activities in vitro. Microbiol Res2009; 164: 290-296.

130- Nakashima T., Mayuzumi S., Inaba S., Park J. Y., Anzai K., Suzuki R., Kuwahara N.,Utsumi N., Yokoyama F., Sato H., Okane I., Tsurumi Y. and Ando K. Production of bioactivecompounds based on phylogeny in the genus Penicillium preserved at NBRC. Biosci BiotechnolBiochem 2008; 72: 3051-3054.

131- Nedialkova D. and Naidenova M. Screening the antimicrobial activity of actinomycetesstrains isolated from antarctica. Journal Of Culture Collections 2005; 4: 29-35.

132- Nimnoi P. and Pongsilp N. Genetic diversity and plant-growth promoting ability of theindole-3-acetic acid (IAA) synthetic bacteria isolated from agricultural soil as well as rhizosphere,rhizoplane and root tissue of Ficus Religiosa L., Leucaena Leucocephala and Piper SarmentosumRoxb. Res J Agric Biol Sci 2009; 5: 29-41.

133- Nimnoi P., Pongsilp N. and Lumyoung S. Endophytic actinomycetes isolated fromAquilaria crassna Pierre ex Lec and screening of plant growth promoters production. World JMicrobiol Biotechnol 2010; 26: 193-203.

134- Nithyanand P. and Pandian S. K. Phylogenetic characterization of culturable bacterialdiversity associated with the mucus and tissue of the coral Acropora digitifera from the Gulf ofMannar. FEMS Microbiol Ecol 2009; 69: 384-394.

135- Nuangmek W., Mckenzie E. H. C. and Lumyong S. Endophytic fungi from wild banana.(Musa acuminata. Colla) works against anthracnose disease caused by Colletotrichum musae.Rsearch Journal of Microbiology 2008; 3: 386-374.

136- Ogundare A. O., Adetuyi F. C. and Akinyosoye F. A. Antimicrobial activities of Vernoniatenoreana. African Journal of Biotechnology 2006; 5: 1663-1668.

137- Oliveira M. F. D., Silva M. G. D., Sueli T. and Sand V. D. Anti-phytopathogen potential ofendophytic actinobacteria isolated from tomato plants (Lycopersicon esculentum) in southernBrazil, and characterization of Streptomyces sp. R18(6), a potential biocontrol agent. Research inMicrobiology 2010; 161: 565-572.

138- Ownley B. H., Griffin M. R., Klingeman W. E., Gwinn K. D., Moulton J. K. and PereiraR. M. Beauveria bassiana: endophytic colonization and plant disease control. J Invertebr Pathol2008; 98: 267-270.

139- Ownley B. H., Gwinn K. D. and Vega F. E. Endophytic fungal entomopathogens withactivity against plant pathogens: ecology and evolution. BioControl 2010; 55: 113-128.

140- Pal K. K. and Gardener B. M. Biological control of plant pathogens. The plant healthInstructor 2006; DOI: 10.1094/PHI-A-2006-1117-02.

141- Pandey B., Ghimire P. and garwal V. P. Studies on theantibacterial activity of theActinomycetes isolated from the Khumbu region of Nepal. J Biol Sci 2004; 23: 44-53.

2011المراجع

96

142- Parthasarathi S., Kim C. J., Kim P. K., Sathya S., Manikandan M., Manikandan T. andKaruppaiya B. Taxonomic characterization and UV/VIS analysis of antagonistic marineactinomycete isolated from South West Coast of South Korea. Int J Med Res 2010; 1: 99-105.

143- Paul N. C., Kim W. K., Woo S. K., Park M. S. and Yu S. H. Diversity of Endophytic FungiAssociated with Taraxacum coreanum and Their Antifungal Activity. Mycobiology 2006; 34: 185-190.

144- Paul N. C., Kim W. K., Woo S. K., Park M. S. and Yu S. H. Fungal Endophytes in Rootsof Aralia Species and Their Antifungal Activity. Plant Pathol J 2007; 23: 287-294.

145- Paulus B. C., Kanowski J., Gadek P. A. and Hyde K. D. Diversity and distribution ofsaprobic microfungi in leaf litter of an Australian tropical rainforest. Mycol Res 2006; 110: 1441-1454.

146- Persoh D., Melcher M., Flessa F. and Rambold G. First fungal community analyses ofendophytic ascomycetes associated with Viscum album ssp. austriacum and its host Pinussylvestris. Fungal Biol 2010; 114: 585-596.

147- Pertrini O. Fungal endophytes of tree leaves. In: Andrews, J.H., Hirano, S.S. (Eds.),Microbial Ecology of Leaves. Springer-Verlag, New York, USA, 1991; pp. 179-197.

148- Pertrini O. Taxonomy of endophytci gungi of aerial plant tissues. In: Fokkinna N. J. Van DenHeuvel J. (eds). Microbiologye of the fylosphere. Cambredge University Press, Cmabredge 1986;pp. 175-187.

149- Petrini O., Sieber T. N., Toti L. and Viret O. Ecology, metabolite production, and substrateutilization in endophytic fungi. Natural Toxins 1992; 1: 185-196.

150- Photita W., Lumyong S., Lumyong P. and Hyde K. D. Endophytic fungi of wild banana(Musa acuminata) at Doi Suthep Pui National Park, Thailand. Mycological Research 2001; 105:1508-1513.

151- Pimentel I. C., Glienke-Blanco C., Gabardo J., Stuart M. R. and Azevedo J. L.Identification and colonization of endophytic fungi from soybean (Glycine max L.) Merril) underdifferent environmental conditions. Brazilian Archives of Biology and Technology 2006; 49: 705-711.

152- Pimentel M. R., Molina G., Dioniýsio A. P., Junior M. R. M. and Pastore G. M. The Useof Endophytes to Obtain Bioactive Compounds and Their Application in BiotransformationProcess. Biotechnology Research International 2010; doi:10.4061/2011/576286.

153- Pitt J. I. and Hocking A. D. Fungi and food spoilage. Academic press Inc. Sydney. Orlando,San Diego, New York, London, Toronto, Montréal, Tokyo 1985. pp. 414.

154- Pointing S. B. Qualitative methods for the determination of lignocellulolytic enzymeproduction by tropical fungi. Fungal Diversity 1999; 2: 17-33.

155- Prapagdee B., Kuekulvong C. and Mongkolsuk S. Antifungal potential of extracellularmetabolites produced by Streptomyces hygroscopicus against phytopathogenic fungi. Int J Biol Sci2008; 4: 330-337.

156- Qin J. C., Zhang Y. M., Gao J. M., Bai M. S., Yang S. X., Laatsch H. and Zhang A. L.Bioactive metabolites produced by Chaetomium globosum, an endophytic fungus isolated fromGinkgo biloba. Bioorg Med Chem Lett 2009a; 19: 1572-1574.

157- Qin S., Li J., Chen H. H., Zhao G. Z., Zhu W. Y., Jiang C. L., Xu L. H. and Li W. J.Isolation, diversity, and antimicrobial activity of rare actinobacteria from medicinal plants of

2011المراجع

97

tropical rain forests in Xishuangbanna, China. Applied And Environmental Microbiology 2009b;75: 6176-6186.

158- Qin S., Xing K., Jiang J. H., Xu L. H. and Li W. J. Biodiversity, bioactive natural productsand biotechnological potential of plant-associated endophytic actinobacteria. Appl MicrobiolBiotechnol 2011; 89: 457-473.

159- Quecine M. C., Araujo W. L., Marcon J., Gai C. S., Azevedo J. L. and Pizzirani-KleinerA. A. Chitinolytic activity of endophytic Streptomyces and potential for biocontrol. Letters inApplied Microbiology 2008; 47: 486-491.

160- Qui M., Xie R. S., Shi Y., Zhang H. and Chen H. M. Isolation and identification of twoflavonoid-producing endophytic fungi from Ginkgo biloba L. Ann Microbiol 2010; 60: 143-150.

161- Rabah F. L., Elshafei A., Saker M., Cheikh B. and Hocine H. Screening, Isolation andcharacterization of a novel antimicrobial producing actinomycete, Strain RAF10. Biotechnology2007; 6: 489-496.

162- Redlin S. C. and Carris L. M. Endophytic Fungi in Grasses and Woody Plants. APS Press,Minnesota 1996.

163- Remya M. and Vijayakumar R. Isolation and characterization of marine antagonisticactinomycetes from west coast of india. Medicine and Biology 2008; 15: 13-19.

164- Roberts C. A., Benedict H. R., Hill N. S., Kjallenbach R. L. and Rottinghaus G. E.Determination of ergot alkaloid content in tall fescue by near-infected spectroscopy. Corp Science2005; 45: 778-783.

165- Roberts C. and Andrae J. Tall fescue toxicosis and management. Online Corp Management2004; doi: 10: 1094/CM-2004-0427-01-MG.

166- Rocha R., Luz D. E. D., Engels C., Pileggi S. A. V., Filho D. S. J. F., Matiello R. R. andPileggi M. selection of endophytic fungi from comfrey (Symphytum officinale l.) for in vitrobiological control of the phytopathogen Sclerotinia sclerotiorum (lib.). Brazilian Journal ofMicrobiology 2009; 40: 73-78.

167- Rodriguez K. F. and Samuels G. D. Preliminary study of endophytic fungi in a tropicalpalm. Mycological Research 1990; 94: 827-830.

168- Rodriguez K. F. Fungal endophytes of palms. In: Redlin, S.C., Carris, L.M. (Eds.),Endophytic Fungi in Grass and Woody Plants: Systematics, Ecology, and Evolution. APS Press, StPaul, Minnesota, USA, 1996; pp. 31-65.

169- Rodriguez R. J., White Jr J. F., Arnold A. E. and Redman R. S. Fungal endophytes:diversity and functional roles. New Phytologist 2008; 182: 314-330.

170- Rosenblueth M. and Martinez-Romero E. Bacterial endophytes and their interactions withhosts. Mol Plant Microbe Interact 2006; 19: 827-837.

171- Roy B. D., Deb B. and Sharma G. D. Role of Acetic Acid Bacteria in Biological NitrogenFixation. Biofrontiers 2010; 1: 47-57.

172- Saffo M. B. Mutualistic Symbioses. Wiley Online Library: Book Abstract 2001; DOI:10.1038/npg.els.0003281.

173- Saha D. C., Johnson-Cicalese J. M., Halisky P. M., van Heemstra M. L. and Funk C. R.Occurrence and significance of endophytic fungi in fine fescues. Plant Disease 1987; 71: 1021-1024.

2011المراجع

98

174- Saithong P., Panthavee W., Stonsaovapak S. and Congfa L. Isolation and primaryidentification of endophytic fungi from Cephalotaxus mannii trees. Maejo Int J Sci Technol 2010,2010; 4: 446-453.

175- Sampson K. Further observations on the systemic infection of Lolium. Transactions of theBritish Mycological Society 1938; 21: 84-97.

176- 17Saurav K. and Kannabiran K. Diversity and Optimization of process parameters for thegrowth of Streptomyces VITSVK9 spp. isolated from Bay of Bengal, India. Journal of Natural &Environmental Sciences 2010; 1: 56-65.

177- Schulz B. and Boyle C. The endophytic continuum. Mycol Res 2005; 109: 661-686.

178- Seifried H. E., Anderson D. E., Fisher E. I. and Milner J. A. A review of the interactionamong dietary antioxidants and reactive oxygen species. J Nutr Biochem 2007; 18: 567-579.

179- Sekar S. and Kandavel D. Interaction of plant growth promoting Rhizobacteria (PGPR) andendophytes with Medicinal plants – new avenues for Phytochemicals. Journal of Phytology 2010;2: 91-100.

180- Shirling E. B. and Gottlied D. Methods for characterization of streptomyces species. I n t e rn a t i o n a l Journal of Sy s t e m a t i c Bacteriology 1966; 16: 313-340.

181- Shrivastava S., D'Souza S. F. and Desai P. D. Production of indole-3-acetic acid byimmobilized actinomycete (Kitasatospora sp.) for soil applications. Current Science 2008; 94:1595-1604.

182- Sieber T. N. Endophytic fungi in forest trees: are they mutualists? fungal biology reviews2007; 21: 75-89.

183- Sieber T. N., Sieber-Canaversi F. and Dorworth C. E. Endophytic fungi of red alder (Alnusrubra) leaveq and twijes in british columbia. Canadien Journal of Botany 1991; 69: 407-411.

184- Sieber T., Riesen T. K., Muller E. and Fried P. M. endophytic fungi in four winter wheatcultivars (Triticum aestivum L.) differing inresistance against Stagonospora nodorum (Berk.) Cast.& Germ. = Septoria nodorum (Berk.) Berk. J Phytopathology 1988; 122: 289-306.

185- Silva C. F., Azevedo R. S., Braga C., Sliva R. D., Dias E. S. and Schwan R. S. Microbialdiversity in a bagasse-based compost prepared for the production of agaricus brasiliensis.Brazilian Journal of Microbiology 2009; 40: 590-600.

186- Slippers B. and Wingfield M. J. Botryosphaeriaceae as endophytes and latent pathogens ofwoody plants: diversity, ecology and impact. fungal biology reviews 2007; 21: 90-106.

187- Soltani A. A., Khavazi K., Asadi-Rahmani H., Omidvari M., Dahaji P. A. andMirhoseyni H. Plant growth promoting characteristics in some Flavobacterium spp. Isolated fromSoils of Iran. Journal of Agricultural Science 2010; 2: 106-115.

188- Song J. H. What's new on the antimicrobial horizon? Int J Antimicrob Agents 2008; 32 Suppl4: S207-S213.

189- Song Y. C., Huang W. Y., Sun C., Wang F. W. and Tan R. X. Characterization ofgraphislactone A as the antioxidant and free radical-scavenging substance from the culture ofCephalosporium sp. IFB-E001, an endophytic fungus in Trachelospermum jasminoides. Biologicaland PharmaceuticalBulletin 2005; 28: 506-509.

190- Sousa C. D. S., Soars A. C. F. and Garrido M. D. S. Characterization of streptomyceteswith potential to promot plant growth and biocontrol. Sci Agric 2008; 65: 50-55.

2011المراجع

99

191- Spiering M. J., Moon C. D., Wilkinson H. H. and Schardl C. L. Gene clusters forinsecticidal loline alkaloids in the grass-endophytic fungus Neotyphodium uncinatum. Genetics2005; 169: 1403-1414.

192- Srinivasan K., Jagadish L. K., Shenbhagaraman R. and Muthumary J. Antioxidantactivity of endophytic fungus phyllosticta sp. isolated from guazuma tomentosa. Journal ofPhytology 2010; 2: 37-41.

193- Strobel G. A. Endophytes as sources of bioactive products. Microbes Infect 2003; 5: 535-544.

194- Strobel G. A. Microbial gifts from rain forests. Can J Plant Pathol 2002; 24: 14-20.

195- Strobel G. A. Muscodor albus and its biological promise. J Ind Microbiol Biotechnol 2006;33: 514-522.

196- Strobel G. A., Ford E., Worapong J., Harper J. K., Arif A. M., Grant D. M., Fung P. C.W. and Chan K. Ispoestacin, an isobenzofuranone from Pestalotiopsis microspora, possessingantifungal and antioxidant activities. Phytochemistry 2002; 60: 179-183.

197- Strobel G. and Daisy B. Bioprospecting for microbial endophytes and their natural products.Microbiol Mol Biol Rev 2003; 67: 491-502.

198- Strobel G., Daisy B. and Castillo U. The biological Promise of Microbial Endophytes andtheir Natural Products. Plant Pathology Journal 2005; 161-176.

199- Strobel G., Daisy B., Castillo U. and Harper J. Natural products from endophyticmicroorganisms. J Nat Prod 2004; 67: 257-268.

200- Su Y. Y., Guo L. D. and Hyde K. D. Response of endophytic fungi of Stipa grandis toexperimental plant function group removal in Inner Mongolia steppe, China. Fungal Diversity2010; 43: 93-101.

201- Sun Y., Cheng Z. and Glick B. R. The presence of a 1-aminocyclopropane-1-carboxylate(ACC) deaminase deletion mutation alters the physiology of the endophytic plant growth-promoting bacterium Burkholderia phytofirmans PsJN. FEMS Microbiol Lett 2009; 296: 131-136.

202- Suryanarayanan T. S. and Kumaresan V. Endophytic fungi of some halophytes from anestuarine mangrove forest. Mycological Research 2000; 104 : 1465-1467 .

203- Suryanarayanan T. S., Kumaresan V. and Johnson J. A. Foliar fungal endophytes fromtwo species of the mangrove Rhizophora. Can J Microbiol 1998; 44: 1003-1006.

204- Suryanarayanan T. S., Venkatesan G. and Murali T. S. Endophytic fungal communities inleaves of tropical forest trees: Diversity and distribution patterns. Current Science 2003; 85: 489-92.

205- Suryanarayanan T. S., Wittlinger S. K. and Faeth S. H. Endophytic fungi associated withcacti in Arizona. Mycol Res 2005; 109: 635-639.

206- Suthep W., Nongluksna S., Wattana P., Nuntawan T., Kannawat D. K., Nijsiri R. andVithaya. Endophytic fungi with anti-microbial, anti-cancer and anti-malarial activities isolatedfrom Thai medicinal plants . World Journal of Microbiology & Biotechnology 2004; 20: 265-272.

207- Sutjaritvorakul T., Sihanonth P. and Roengsumran S. Antimicrobial activity fromendophytic fungi isolated from plant leaves in Dipterocarpous forest at Viengsa district Nanprovince, Thailand. Journal of Agricultural Technology 2011; 7: 115-121.

2011المراجع

100

208- Sutjaritvorakul T., Whalley A. J. S., Sihanonth P. and Roengsumran S. Antimicrobialactivity from endophytic fungi isolated from plant leaves in Dipterocarpous forest at Viengsadistrict Nan province, Thailand . Journal of Agricultural Technology 2010; 6: 309-315.

209- Taddei A., Rodriguez M. J., Marquez-Vilchez E. and Castelli C. Isolation andidentification of Streptomyces spp. from Venezuelan soils: morphological and biochemical studies.I. Microbiol Res 2006; 161: 222-231.

210- Taechowisan T. and Lumyong S. Activity of endophytic actinomycetes from roots ofZingiber officinale and Alpinia galanga against phytopathogenic fungi. Annals of Microbiology2003; 53: 291-298.

211- Taechowisan T., Chuaychot N., Chanaphat S., Wanbanjob A. and Shen A. Anti-oxidativeand inhibitory activity on nitric oxide production of flavonoids from Streptomyces sp. Tc052.Journal of Pharmacy Research 2009; 2: 313-316.

212- Taechowisan T., Lu C., Shen Y. and Lumyong S. Secondary metabolites from endophyticStreptomyces aureofaciens CMUAc130 and their antifungal activity. Microbiology 2005; 151:1691-1695.

213- Tan R. X. and Zou W. X. Endophytes: a rich source of functional metabolites. Nat Prod Rep2001; 18: 448-459.

214- Taskin E., Eltem R., Silva E. S. D. and Souza J. V. B. D. Screening of Aspergillus strainsisolated from vineyards for pectinase production. Journal of Food, Agriculture & Environment2008; 6: 412-414.

215- Taskin E., Eltem R., Silva E. S. D. and Souza J. V. B. D. Screening of Aspergillus strainsisolated from vineyards for pectinase production. Journal of Food, Agriculture & Environment2008; 6: 412-414.

216- Taylor J. E., Hyde K. D. and Jones E. B. G. Endophytic fungi associated with the temperatepalm Trachycarpus fortunei within and outside its natural geographic range. New Phytologist 1999;142: 335-346.

217- Tejesvi M. V., Kini K. R., Prakash H. S., Subbiad V. and Shetty H. S. Genetic diversityand antifungal activity of species of Pestalotiopsis isolated as endophytes from medicinal plants.Fungal Diversity 2007; 24: 37-54.

218- Tejesvi M. V., Nalini M. S., Mahesh B., Prakash H. S., Kini K. R., Shetty H. S. andSubbiah V. New hopes from endophytic fungal secondary metabolites. Bol Soc Quím Méx 2007; 1:19-26.

219- Thongchai T., Asawin W., Pittaya T. and Liu J. Anti-inflammatory activity of lansais fromendophytic Streptomyces sp. SUC1 in LPS-induced RAW 264.7 cells. Food and agriculturalimmunology 2009; 20: 67-77.

220- Tian X. l., Cao L. X., Tan H. M., Zeng Q. G., Jia Y. Y., Han W. Q. and Zhou S. N. Studyon the communities of endophytic fungi and endophytic actinomycetes from rice and theirantipathogenic activities in vitro. World Journal of Microbiology & Biotechnology 2004; 20: 303-309.

221- Tomita F. Endophytes in Southeast Asia and Japan: their taxonomic diversity and potentialapplications. Fungal Diversity 2003; 14: 187-204.

222- Ulrich K., Ulrich A. and Ewald D. Diversity of endophytic bacterial communities in poplargrown under field conditions. FEMS Microbiol Ecol 2008; 63: 169-180.

2011المراجع

101

223- Verma V. C., Gond S. K., Kumar A., Mishra A., Kharwar R. N. and Gange A. C.Endophytic actinomycetes from Azadirachta indica A. Juss.: isolation, diversity,and anti-microbialactivity. Microb Ecol 2009; 57: 749-756.

224- Vijayakuman R., murugesan S. and Panneerselvan A. Isolation, characterization andantimicrobial activity of actinobacteria from point calimere coastal region, east coast of India.International Research Journal of Pharmacy 2010; 1: 358-365.

225- Wang F. W., Jiao R. H., Cheng A. B., Tan S. H. and Song Y. C. Antimicrobial potentialsof endophytic fungi residing in Quercus variabilis and brefeldin A obtained from Cladosporium sp.World J Microbiol Biotech 2007; 23: 79-83.

226- Weber D., Sterner O., Anke T., Gorzalczancy S., Martino V. and Acevedo C. Phomol, anew antiinflammatory metabolite from an endophyte of the medicinal plant Erythrina crista-galli. JAntibiot (Tokyo) 2004; 57: 559-563.

227- White J. F., Morgan-Jones G. and Morrow A. C. Taxonomy, life cycle, reproduction anddetection of Acremonium endophytes. Agric Ecosyst Environ 1993; 44: 13-37.

228- Wilson A. D. Rosources and testing of endophyte-infected germplasm in national grassrepository cllections. In: Redlin S.C. and Carris L.M.(eds). Endophytic Fungi in Grasses andWoody Plants. APS Press, Minnesota 1996; pp.179-195.

229- Wilson D. Endophyte-the evolution of a term, a clarification of its use and definition. Oikos2005; 73: 274-276.

230- Wu C. H., Bernard S. M., Andersen G. L. and Chen W. Developing microbe-plantinteractions for applications in plant-growth promotion and disease control, production of usefulcompounds, remediation and carbon sequestration. Microb Biotechnol 2009 Jul; 2009; 2: 428-40.

231- Yu H., Zhang L., Li L., Zheng C., Guo L., Li W., Sun P. and Qin L. Recent developmentsand future prospects of antimicrobial metabolites produced by endophytes . MicrobiologicalResearch 2009; doi:10.1016/j.micres.2009.11.009.

232- Yuan Z. L., Zhang C. L., Lin F. C. and Kubicek C. P. Identity, diversity, and molecularphylogeny of the endophytic mycobiota in the roots of rare wild rice (Oryza granulate) from anature reserve in Yunnan, China. Appl Environ Microbiol 2010; 76: 1642-1652.

233- Zabalgogeazcoa I. Fungal endophytes and their interaction with plant pathogens. SpanishJournal of Agricultural Research 2008; 6: 138-146.

234- Zaitlin B., Watson S. B., Ridal J., Satchwill T. and Parkinson D. Actinomycetes in lakeOntario: Habitats and geosmin and MIB production. Res J Can 2003; 95: 113-118.

235- Zamora P., Martinez-Ruiz C. and Diez J. J. Fungi in needles and twigs of pine plantationsfrom northern Spain. Fungal Diversity 2008; 30: 171-181.

236- Zhang H. W., Song Y. C. and Tan R. X. Biology and chemistry of endophytes. Nat ProdRep 2006; 23: 753-771.

237- Zhang Y., Mu J., Feng Y., Kang Y., Zhang J., Gu P. J., Wang Y., Ma L. F. and Zhu Y.H. Broad-spectrum antimicrobial epiphytic and endophytic fungi from marine organisms: isolation,bioassay and taxonomy. Mar Drugs 2009; 7: 97-112.

238- Zhao J., Mou Y., Shan T., Li Y., Zhou L., Wang M. and Wang J. Antimicrobialmetabolites from the endophytic fungus Pichia guilliermondii isolated from Paris polyphylla var.yunnanensis. Molecules 2010; 15: 7961-7970.

2011المراجع

102

239- Zhao K., Penttinen P., Guan T., Xiao J., Chen Q., Xu J., Lindström K., Zhang L., ZhangX. and Storbel G. A. The diversity and anti-microbial activity of endophytic actinomycetesisolated from medicinal plants in Panxi plateau, China. Curr Microbiol 2011; 62: 182-190.

240- Zhou D. and Hyde K. D. Host-specificity, host-exclusivity, and host-recurrence in saprobicfungi. Mycological Research 2001; 105 : 1449-1457.

241- Zin N. M., Sarmin N. I., Ghadin N., Basri D. F., Sidik N. M., Hess W. M. and Strobel G.A. Bioactive endophytic streptomycetes from the Malay Peninsula. FEMS Microbiol Lett 2007;274: 83-88.

2011الملحق

الملحـــــــــــــق

2011الملحق

قائمة األوساط)1(الملحق Yeast Extract-Malt Extract Agar (YMA):

Yeast extract 3.0 gMalt extract 3.0 gPeptone 5.0 gGlucose 10.0 gAgar 15.0 gDistilled water 1000 ml

YeastExtract-Malt Extract Broth (YMB):Yeast extract 3.0 gMalt extract 3.0 gPeptone 5.0 gGlucose 10.0 gDistilled water 1000 ml

Glucose yeast extract peptone (GYP) agar :Glucose 1 gPeptone 0.5 gYeast extract 0.1 gAgar 16 gDistilled water 1000 mlPH 6

Casein Agar :Skimmilk powder 10 gDistilled water 90 mlAgar 3 gDistilled water 97 ml

Cellulose Agar (CA): basal Gauze agarK2HPO4 0.5 gMgSO4 .7H2O 0.5 gKNO3 1 gNacl 0.5 gFeSO4 2H2O 0.01 gAgar 25 gCarboxymethyl cellulose 1%Distilled water 1000 ml

Cellulolysis basal medium (CBM):C4H12N2O6 5 gKH2P04 1 gMgS04· 7H2O 0.5 gYeast Extract 0.1 gCaC12.2H2O 0.001 gDistilled water 1000 ml

peptone agar:Peptone 10 gNacl 5 gCaCl2 2H2O 0.1gAgar 16gDistilled water 1000 ml

Pikovskaya (PKV):

2011الملحق

Glucose 10g(NH4)2SO4 0.5gYeast extract 0.5gKCL 0.2gNaCl 0.2gFeSO4.7H2O 0.002gMnSO4. H2O 0.002gCa3(PO4)5 5gDistilled water 1000 ml

Potato Sucrose Agar (PSA):Potatoes 200 gSucrose 20 gAgar 20 gDistilled water 1000 ml

Potato Dextrose Broth(PDB) :Potatoes 200 gGlucose 10 gDistilled water 1000 ml

Starch Casein Agar (SCA):Sooluble starch 10 gCasien 0.3 gKNO3 2 gNaCl 2 gK2HPO4 2 gMgSO4.7H2O 0.05 gCaCO3 0.02 gFeSO4.7H2O 0.01 gAgar 18 gDistilled water 1000 mlPH 7.2

Potato Dextrose Agar (PDA) : ACTYNO ISOLMENTPotatoes 200 gGlucose 10 gAgar 15 gDistilled water 1000 ml

Nutrient broth (NB):Peptone 10 gYeast extract 5 gNaCl 5 gDistilled water 1000 mlpH 7,2

Nutrient agar (NA):Peptone 10 gYeast extract 5 gNaCl 5 gDistilled water 1000 mlAgar 18 gpH 7,2

Malt Extract Agar(MEA) :Malt extract 20 g

2011الملحق

Peptone 1 gGlucose 20 gAgar 20 gDistilled water 1000 ml

czapek yeast agar (CYA):K2HPO4 1 gCzabek cincentrate 10 ml ( 2امللحق )Yeast extract 5 gSucrose 30 gAgar 15 gDistilled water 1000 ml

Inorganic salts-starch agar (ISP 4):Soluble starch 10 gK2HPO4 1 gMgSO4. 7H2O 1 gNaCl 1 g(NH4)2SO4 2 gCaCO3 2 gTrace salts solution 1 ml (2 امللحق )Distilled water 1000 mlAgar 20 gpH 7,0-7,4

Yeast extract-malt extract agar (IPS2) :Yeast extract 4 gMalt extract 10 gGlucose 4 gAgar 15.0 gDistilled water 1000 mlpH 7,3

Glycerol-asparagine agar (IPS5):L-asparagine 1 gGlycerol 10 gK2HPO4 anhydrous 1 gDistilled water 1000 mlTrace salts solution 1 ml ( 2امللحق )Agar 20 gpH 7,0-7,4

Tyrosine agar (IPS7):Glycerol 15 gL-tyrosine 0.5 gL- asparagine 1 gK2HP04 anhydrous 0.5 gMgSO4.7H2O 0.5 gNaCl 0.5 gFeSO4. 7H2O 0.01 gDistilled water 1000 mlTrace salts solution 1ml ( 2امللحق )Agar 20 gpH 7,2-7,4

2011الملحق

Basal mineral salts agar (ISP9):(NH4)2SO4 2.64 gKH2PO4 anhydrous 2.38 gK2HPO4.3H2O 5.65 gMgSO4 .7H2O 1 gPridham and Cottliebtracesalts

100 ml ( 2امللحق )

Distilled water 1000 mlAgar 15gpH 6,8-7,0

Pridham and Cottlieb trace salts :CuSO4 .5 H2O 0.64gFeSO4. 7 H2O 0.11gMnCl2. 4H2O 0.79gZnSO4.7H H2O 0.15 gDistilled water 100 ml

Basal mineral :(NH4)2HPO4 1 gKCl 0.2 gMgSO4.7H2O 0.5 gAgar 15 gDistilled water 1000 ml

Mannitol-Mobility (Guiraud, 1998):Peptone 20 gPotassium nitrate 1 gMannitol 2 gPhenol Red 40 mgDistilled water 1000 mlAgar 4 gpH 8,1

Meat liver agar (MLA):Meat extract 10 gPeptone 20 gYeast extract 10 gGlucose 5 gDistilled water 1000 mlAgar 20 gpH 7,6

2011الملحق

قائمة المحاليل)2(الملحق Czabek concentrate:

NaNO3 30 gKcl 5 gMgSO4.7H2O 5 gFeSO4.7H2O 0.1 gWater 100 ml

Trace salts solution :FeS04. 7H2O 0.1 gMnCl2.4H2 0.1 gZnSO4.7H2O 0.1 gDistilled water 100 ml

Pridham and Cottlieb trace salts :CuSO4 .5 H2O 0.64gFeSO4. 7 H2O 0.11gMnCl2. 4H2O 0.79gZnSO4.7H H2O 0.15 gDistilled water 100 ml

Carbol Fuchsin in Ziehl-Neelsen Staining:(solution A) 10 ml(solution B) 90 ml(solution A):Fuchsine basic 3 gEthyl alcohol 95 % until 100 mlDye was filtred before use.

Aqueous solution of phenol (solution B) :Phenol 5 gDistilled water until 90 ml

phenol is liquefied in a vial by a gentle heating in a water bath.Methylen bleu contertsain solution:

Methylen bleu 0,3 gDistilled water until 100 ml

Decolouring solution of Ziehl-Neelson Stain:Methylen bleu 10 gAbsolute ethyl alcohol 300 mlSulfuric acid 60° 200 mlDistilled water 500 ml

Decolouring solution Modified Ziehl-Neelsen StainHCl (35%) 3 mlEthyl alcohol (95%) 97 ml

2011الملحق

)3(الملحق

و البكتيريةالمضادةلألكسدة لمختلف العزالت الفطرية جدول تحليل تغيرات النشاطية: 17الجدول F Value(FV)Mean

Square(MS)DFSum of

Squares (SS)Source

3828635.50700CorrectedTotal

54.94***2295.748691227548.98431Samples41.78933261086.52269Error

:DFدرجة الحرية.)P<0.05 ،***P<0.001*(وجود فرق معنوي في النشاطية اإلنزيمية بين مختلف العزالت *

.جدول تحليل تغيرات النشاطيات اإلنزيمية لمختلف العزالت الفطرية و البكتيرية: 18الجدول

Enzimatic activitySource

Sum ofSquares(SS) DF Mean

Square(MS) F Value(FV)

Esterase(T80)

Corrected Total 20.36847943 29isolates 20.26147943 9 2.25127549 420.80***Error 0.10700000 20 0.00535000

Lipase(T20)


Amylase(Strach)


Amylase(Dextrine)


Protease(Casein)

Corrected Total 14.90864498 8isolates 9.90300534 2 4.95150267 5.94*Error 5.00563964 6 0.83427327

Protease(Gelatin)


:DFدرجة الحرية.

)P<0.05 ،***P<0.001*(جود فرق معنوي في النشاطية اإلنزيمية بين مختلف العزالت و*

2011الملحق

:(mean)

تث مكررا

معدل ثال .

Phytophtora infestansspp

Fusarium

oxysporiumF

.sp .albidinis

Candida albicans

pseudomonas sp.

Citrobacter freundii

Stenotrophomonas

maltophilia

klebsiella pneumoniae

Pseudomonas

aerugenosa

Enterobacter agglom

eran

Serratia marcescens

Escherichia coli

Salmonella

typhimurium

Enterococcus faecalis

Staphylococcus aureus

Bcillus sp. .

PathogenicM

icro-organisms

الجدول16

:ت الممرضة المختبرة

ف البكتيريا و الفطريات و الكلوروفورم على نمو مختل

ت اإليثيل أسيتاصا

نتائج تأثير مستخل.

8,0

7,0

20,7

9,3

1,7

0,0

12,0

6,0

2,3

14,3

18,3

14,3

11,712,0

11,7

Ethyleacétate

Alternaria sp.

Extracts

Zone of inhibition (m

m)(m

ean)

5,0

4,0

6,0

0,0

7,0

2,3

7,0

14,0

7,0

7,0

5,0

13,0

0,011,0

13,0

Chloro-

forme

10,0

0,0

15,0

9,0

1,0

12,0

9,7

0,0

11,0

10,7

16,0

12,3

10,310,7

10,7

Ethyleacétate

Cladosporium

sp.

5,0

0,0

5,5

12,0

0,0

0,0

9,7

15,0

0,0

10,0

0,0

11,0

0,015,7

14,0

Chloro-

forme

14,0

19,0

23,0

9,0

3,3

12,3

13,0

4,0

3,3

12,0

25,3

14,3

12,713,0

13,7

Ethyleacétate

Penicilium sp.1

7,0

12,0

6,0

12,0

7,0

5,0

10,0

16,0

9,0

13,0

8,0

17,0

0,015,5

17,0

Chloro-

forme

17,0

11,0

20,0

10,3

2,3

11,7

12,0

2,0

2,3

12,0

19,0

11,3

12,010,7

13,0

Ethyleacétate

Penicilium sp.2

10,0

7,0

7,0

13,0

2,0

0,0

10,0

15,0

0,0

7,5

0,0

20,0

0,014,0

21,5

Chloro-

forme

16,0

17,0

13,0

11,3

4,3

13,3

11,7

1,8

3,3

11,3

21,7

13,3

11,311,7

11,7

Ethyleacétate

Aspergillus sp.

9,0

10,0

5,0

10,0

0,0

0,0

7,0

11,0

0,0

0,0

7,0

15,0

0,07,5

16,5

Chloro-

Forme

2011الملحق

:(mean)

تث مكررا

معدل ثال.

Phytophtora infestansspp.

Fusarium

oxysporiumF

.sp .albidinis

Candida albicans

pseudomonas sp.

Citrobacter freundii

Stenotrophomonas

maltophilia

klebsiella pneumoniae

Pseudomonas aerugenosa

Enterobacter agglom

eran

Serratia marcescens

Escherichia coli

Salmonella

typhimurium

Enterococcus faecalis

Staphylococcus aureusB

cillus sp.

PathogenicM

icro-organisms

الجدول16

:ت الممرضة المختبرة

ف البكتيريا و الفطريات و الكلوروفورم على نمو مختل

ت اإليثيل أسيتاصا

نتائج تأثير مستخل)

تابع.(

10,0

10,0

15,0

7,7

1,7

0,0

12,7

0,0

2,3

10,7

20,0

11,7

11,79,7

12,0

Ethyleacétate

Chaetom

ium sp.

extracts

Zone of inhibition (m

m)(m

ean)

7,0

6,0

4,5

0,0

0,0

0,0

0,0

13,0

0,0

9,0

0,0

20,0

0,06,0

23,0

Chloro-

forme

0,0

15,0

14,0

7,7

4,7

10,0

14,0

4,0

10,0

11,0

15,0

10,0

13,00,00,0

Ethyleacétate

Phoma sp.0,0

7,0

7,0

11,0

5,0

3,0

7,0

13,0

8,0

8,0

0,0

12,0

0,012,013,0

Chloro-

forme

16,0

12,0

19,0

14,0

0,0

0,0

0,0

0,0

13,0

17,0

24,5

0,0

0,00,0

12,0

Ethyleacétate

Streptomyces sp.1

14,0

10,0

13,5

14,0

5,0

11,3

4,0

16,0

15,0

15,0

15,5

8,0

16,015,012,0

Chloro-

forme

14,0

15,0

25,0

0,0

0,0

0,0

0,0

0,0

10,0

13,0

13,0

0,0

0,00,00,0

Ethyleacétate

Streptomyces sp.2

13,0

12,0

17,0

14,0

6,5

13,0

6,0

15,0

15,0

16,0

16,5

11,0

16,515,00,0

Chloro-

forme

15,3

0,0

16,0

0,0

0,0

10,0

0,0

17,0

9,0

14,0

15,3

11,0

0,00,0

16,0

Ethyleacétate

Streptomyces sp.3

15,0

0,0

16,0

15,0

7,0

12,0

4,0

15,0

0,0

14,0

18,5

14,0

14,014,09,0

Chloro-

Forme

2011الملحق

ﺷ لﯾﻧﻟ ﺔﻘﯾﻗدﻟا ءﺎﯾﺣا مﻠﻋ ó ¥و Â ð ÷ ﺔﺳدﻧﻫ...

Documents