identificación de nuevos biomarcadores para el pronóstico del ictus isquémico

Identificación de nuevos

biomarcadores para el

pronóstico del ictus isquémico

Teresa García Berrocoso, Dolors Giralt,

Israel Fernández, Anna Penalba, Cristina Boada,

Alejandro Bustamante, Joan Montaner

Laboratorio de Investigación Neurovascular

Vall d’Hebron Institut de Recerca (VHIR), Barcelona

6a Jornada Científica VHIR – Barcelona, 29-30 Noviembre 2012


Coágulo

bloqueando el flujo

cerebral

• 36,7% de pacientes sufrirá discapacidad1

• Segunda causa de muerte2,3

El ictus

2. Roger VL. Circulation. 2012;125:e2-e220.

3. INE, Defunciones según causa de muerte – 2010. 2012

1. Estrategia en Ictus, SNS. 2009


Causas empeoramiento

Reoclusión del vaso

tPA

Transformación

hemorrágica

Problemas

cardíacos Infecciones

Crecimiento del infarto

y edema cerebral

Urgencias Unidad de ictus

Todos los

ictus

peor

estable

Test

Biomarcador

• Información al paciente y familia

• Riesgo/beneficio del tratamiento

• Asignación de los pacientes

¿Cómo predecir la evolución?

mejor


¿Biomarcadores pronósticos?


ajuste

Whiteley W. Stroke. 2009; 40:e380-9

Actualmente ningún biomarcador es

utilizado para predecir la evolución del ictus

Aportar información


Montaner J. Cerebrovasc Dis. 2012; 34, 240-5

BNP + Clínica

Sólo clínica

Sólo BNP

Los biomarcadores deben mejorar la

predicción basada en los datos clínicos

(uso de nuevos tests estadísticos)

Descubrir cambios moleculares generales

que nos permitan identificar biomarcadores

para la predicción del pronóstico en la fase

subaguda del ictus isquémico

Objetivo

Proteínas mRNA

Leucocitos y

plaquetas (Buffy coat)

Plasma

Eritrocitos

Proteínas

NIHSS en

admisión

Edad

Muestras

individuales

(N = 36)

NIHSS al alta

Empeoramiento Estabilidad Mejoría

N = 4

N = 4

N = 4

N = 4

N = 4

N = 4

N = 4

N = 4

N = 4

15,6 ± 5,7

75,7 ± 8,1

16,7 ± 3,7

70,1 ± 13,6

14,5 ± 4,5

69,7 ± 11,4

28,1 ± 4,5 15,0 ± 3,5 1,7 ± 1,4

Pools de plasma

Librería de 177

anticuerpos SearchLight®

(ELISA múltiple)

Varios anticuerpos

en cada pocillo


29 proteínas asociadas con empeoramiento

y 6 proteínas asociadas con mejoría


Proteínas - Discovery

García-Berrocoso T (Manuscript in preparation).


Proteínas - Replicación

10 candidatos: β-defensina-2, MIP-3b, PAI-1 activo,

BCA-1, Exodus-2, IL-4R, IL-12p40, LIF, MIP-1b y

TWEAK.

ELISA simple y múltiple SearchLight® Muestras individuales

(N = 80)

Empeoramiento 24h

p=0,046 p=0,062


Proteínas - Replicación


Regresión logística ajustada por edad y sexo.

BD-2 > 1,15 ng/mL (82%se, 48% sp) y IL-4R > 503,40 pg/mL (53% se, 72% sp).

BD-2 e IL-4R son predictores

independientes de empeoramiento a las 24h

Niveles elevados de BD-2 e IL-4R suponen 3,8

veces mayor riesgo de empeorar a las 24h


Proteínas – Modelo predictivo 24h


Clínica Biom. +

clínica

Clínica Biom. +

clínica

No Empeoran Empeoran

Prob. disminuida

1,9% para no-eventos

Prob. aumentada

7,6% para eventos

Combinación BD2 + IL-4R

Mejora discriminación

9,5 % (IDI) (p=0,033)

BD-2 e IL-4R aportan información a la

predicción de la evolución en la fase

subaguda del ictus

Integrated Discrimination Improvement (IDI)


Leucocitos y

plaquetas (Buffy coat)

Plasma

Eritrocitos

mRNA

NIHSS en

admisión

Edad

Muestras

individuales

RIN # 5-7

(N = 41)

NIHSS al alta

Empeoramiento Estabilidad Mejoría

16,2 ± 6

77,5 (65 - 80)

16,9 ± 4,5

77 (67,5 - 80)

14,8 ± 4,1

77,5 (66 – 80,5)

27,9 ± 4,7 15,4 ± 4,4 2,8 ± 2,4

Pools de RNA

N = 3

N = 2

N = 3

N = 3

N = 2

N = 3

N = 4

N = 2

N = 2

N = 2 N = 2

N = 2

N = 3

N = 2

N = 3

N = 3

Affymetrix GeneChip Human Exon 1.0 ST Array



mRNA - Discovery

EMP EST MEJ

4581 tránscritos

diferencialmente expresados

6a Jornada Científica VHIR – Barcelona, 29-30 Noviembre 2012 6a Jornada Científica VHIR – Barcelona, 29-30 Noviembre 2012

mRNA - Discovery

22

20 5 25

031

22

EMP vs EST EMP vs MEJ

MEJ vs EST

85 tránscritos alterados

(p<0,01) entre grupos de

evolución

14 tránscritos correlación +

24 tránscritos correlación –

(R>0,500, p<0,05)

Correlación positiva Correlación negativa

Me

dia

dif

ere

ncia

NIH

SS

Me

dia

dif

ere

ncia

NIH

SS

Expresión normalizada Expresión normalizada

En total, 85 genes presentan alteraciones en su

expresión según la evolución neurológica


mRNA - Replicación

Muestras individuales

(N = 60)

30 candidatos (tarjetas microfluídicas)

RT-PCR (2 controles endógenos: GAPDH, PPIA)


mRNA - Replicación

A B C D E F

Menor expresión de genes implicados en

señalización y reparación se asocia con

empeoramiento en la fase subaguda del ictus


Todos los

ictus

peor

estable

mejor

Proteínas mRNA

BD-2

IL-4R

A

B

C

D

E

F

Proteínas mRNA

BD-2

IL-4R

A

B

C

D

E

F

Futuro

Resumen

o Nuestra estrategia de pooling nos ha permitido

determinar cambios generales en el proteoma y el

transcriptoma según la evolución neurológica de los

pacientes con ictus

o La diferenciación de linfocitos T a Th2 (IL-4R) y el papel

de defensa frente a infecciones (BD-2) son procesos

inmunes asociados al empeoramiento de los pacientes con

ictus

o Procesos de señalización y reparación están disminuidos

en los pacientes que van a empeorar


Resumen

o Nuevos análisis estadísticos (IDI, NRI) deben ser

implantados para conocer la utilidad real de los

biomarcadores

o Aunar los resultados de ambas ómicas permitirá generar

un panel de moléculas para ayudar en la predicción de la

evolución en los pacientes con ictus


J. Montaner

T. García-Berrocoso

V. Llombart

A. Bustamante

A. Penalba

C. Boada

I. Fernández-Cadenas

C. Carrera

P. Delgado

I. Riba

C. Nafría

I. Fernández

M. Hernández- Guillamon

C. Merino

A. Rosell

A. Morancho

V. Barceló

M. Campos

J. Montaner

N. Corbeto

D. Giralt

I. Cristobo

F. Ma

www.lin-bcn.com

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