指導教授指導教授 :: 台灣師範大學 生命科學台灣師範大學 生命科學系 王玉麒 教授系 王玉麒 教授指導老師指導老師 :: 詹豐碩、陸一麟 老師詹豐碩、陸一麟 老師研究生研究生 :: 一誠 徐啟端、陳妘、黃承一誠 徐啟端、陳妘、黃承勛勛

研究目的 應用價值 免疫試劑檢測原理 研究方法、步驟 實驗結果 心得分享

報告大綱

醫學 毒品檢測 驗孕 癌症檢驗 - 大腸癌 ( 糞便潛血 )

抗體的應用

又稱為「免疫球蛋白」 具保護、防禦功能 為 Y 形單體構造 ( 重鍊、輕鍊 ) 哺乳類抗體可分為 5

種 :IgD 、 IgE 、 IgG 、 IgA 和 IgM 鳥類體內有 :IgA 、 IgM 、 IgY

何謂抗體

鳥類血液中含量最多的抗體 蛋黃中唯一存在的抗體 IgY 可視為哺乳類 IgG 的先祖

何謂 IgY

抗體的結合方式

抗原抗體之間專一性鍵結之特性，對檢體進行檢測 識別特定外來物的一個獨特特徵該外來目標被稱為抗原。

將抗原吸附於 96孔盤後，洗去未吸附之抗原 加入待測檢體，含有待測之一次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結 加入帶有酵素之二次抗體，與一次抗體鍵結 洗去多餘未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色測定塑膠盤中的吸光值

ELISA( 酵素免疫分析法 )

加入抗原( 人類血紅素 )加入一級抗體

加入帶有酵素二級抗體加入酵素受質

未免疫注射( 對照組 )

免疫注射( 實驗組 )

10 1 0.01 00.1 0 0.010.1110 ug/ml

雞 (IgY) 兔子 (IgG)

成本考量 空間小、較便宜 空間大、較昂貴生產方面 收蛋抗體年產量較高 採血具人道爭議性產生抗體的容易度 雞隻與人類的親緣關係較遠

抗體來源的比較雞 vs.兔

因此，我們選用雞隻作為抗體的生產來源

雞隻較易產生辨識人類血紅素的抗體

Identity (%)

Positive (%)

人人 鼠鼠 兔兔 羊羊 雞雞人人 87 8282 87 7070M 92 82 85 71R 91 89 81 68G 92 89 89 70C 77 80 75 80

chain blast chain blast Identity

(%)

Positive (%)

人 鼠 兔 羊 雞人 80 90 78 69M 90 80 72 66R 95 91 79 67G 88 83 90 64C 82 80 84 79  

Hemoglobin(x2)+(x2)

雞蛋數量多 蛋黃中 IgY 含量多 能有效減少動物用量

IgY 的好處

抗體生產—動物免疫注射 實驗動物： 白色來亨雞 抗原：人類血紅素 劑量： 0, 250, 500, 1000 g 注射方式：肌肉注射

取出蛋黃 粗萃取 局部純化 抗原管柱純化

蛋黃 IgY 收集

蛋白質電泳

負極正極

蛋黃 IgY 純化後的純度分析

1標準品IgY

蛋黃粗萃取液局部純化

抗原管柱純化IgY (輕鏈 )

IgY (重鏈 )

2 蛋 黃

3.粗萃取液

4.局部純化

5.抗原管柱純化

抗體專一性分析 -不同動物的血紅素人 雞 豬 羊 牛 兔

實驗組對照組

定量結果 血紅素血紅素

對於不同動物血紅素，抗體對人類血紅素辨識能力較佳

抗體專一性分析 -功能類似的蛋白質 myo Hb myo Hb myo Hb

實驗組對照組

定量結果 血紅素肌紅素血紅素

儘管遇上與血紅素相同功能的抗原，抗體仍能清楚辨識

抗體比較免疫注射 vs.一般抗體

蛋黃粗萃液稀釋 10000倍，仍然能有效的辨識抗原。

實驗組

對照組

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