informe cromatografia en capa fina farmacognosia
TRANSCRIPT
INFORME DE LABORATORIO
PRACTICA N° 10: EXTRACCION Y SEPARACION DE PRINCIPIOS ACTIVOS
EN PLANTAS MEDICINALES APROBADAS EN COLOMBIA MEDIANTE
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA - SAUCO
DAVID STIVEN ESCUDERO AGUDELO
ESTEBAN GONZÁLEZ ACEVEDO
LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA
GLORIA AMPARO VALENCIA P.
V SEMESTRE
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE QUIMICA FARMACEUTICA
TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA
OCTIBRE 2012.
OBJETIVO:
Identificar mediante la técnica de cromatografía en capa fina la presencia
de metabolitos secundarios en la parte aprobada de las plantas medicinales
comercializadas en Colombia, teniendo como referencia el metabolito
secundario la rutina.
PRACTICA N° 10: EXTRACCION Y SEPARACION DE PRINCIPIOS ACTIVOS
EN PLANTAS MEDICINALES APROBADAS EN COLOMBIA MEDIANTE
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA – SAUCO
Para el desarrollo de esta práctica se empleo extracto de las flores de sauco para
identificar mediante cromatografía en capa fina la presencia de metabolitos
secundarios, teniendo como referente el metabolito rutina y otros que están
presentes en las flores de la planta.
Los materiales empleados para el desarrollo de la práctica fueron:
Extracto: Flores de Sauco ( Sambucus nigra)
Fase estacionaria: Placa de Silica gel GF-254
Fase móvil: acetato de etilo (100): ácido fórmico (11) : ácido acético (11) :
agua (26)
Revelador Químico: Revelador de productos Naturales: ácido deifenilborico
(solución 1) y polietilenglicol (solución 2).
Revelador físico: Luz UV 365 nm
Luego se procede a realizar el montaje de la prueba, primero se realiza las
medidas de la fase dividiéndola en varios sectores, marcando la línea y los puntos
de siembre del extracto; cuando se tiene todo medido se realiza la siembra de la
muestra y del patrón, en este caso Rutina, de manera simultanea se tiene la fase
móvil en estado de saturación del recipiente donde esta; luego se introduce la fase
estacionaria con la siembra, cuidando siempre que la fase móvil no sobrepase el
punto de siembra. Se tapa y empieza a observar como se hace el desplazamiento
hasta llegar al punto final.
En la siguiente imagen se muestra el proceso de montaje de la prueba
Imagen 1: Montaje Prueba de cromatografía en capa fina.
Fuente: Manual de prácticas de Laboratorio de Farmacognosia. 2009. Luz Mariela Sorza S – Gloria A. Valencia P.
Después de uno minutos de retira la fase estacionaria de la móvil, se deja secar;
luego se observa bajo luz a 254 nm para identificar la rutina. Se marcan los
puntos de referencia donde aparece el patrón de la rutina junto con el del extracto
de las flores de sauco. En la siguiente imagen se muestra los puntos donde
aparece la rutina.
Punto de Siembra
Rutina
3.1 cm
Punto de llegada
1.2 cm
Patrón Ref.
Imagen 2: Rf rutina en extracto de flores de sauco – Patrón de referencia.Fuente: Creación propia
La mancha que corresponde a la rutina se observa (bajo la luz a 254 nm) de color
amarillo – naranja, esta a una distancia de 1.2 cm del punto de siembra; por lo
tanto su Rf para esta muestra es de 0.38, este se cálculo de la siguiente manera:
Rf = DistanciaRecorrida por elmetabolito
Distancia totalrecorrida = 1.23.1 = 0.38
Este calculo aplica también para determinar el Rf de los otros metabolitos.
En la teoría la rutina se debe de notar a un Rf de 0.4; en la práctica apareció un
poco antes, cerca de 0,02 puntos, pero puede deberse a las características
químicas de la fase móvil que pueden haber estado levemente alteradas las
concentraciones.
Dentro de la practica también se identificaron otros metabolitos secundarios
presentes en el extracto de las flores de sauco; para identificarlos el proceso fue el
mismo, solo que se emplearon dos reveladores químicos como el ácido
deifenilborico (solución 1) y polietilenglicol (solución 2) y bajo la presencia de Luz
UV 365 nm para poder identificar con mayor facilidad estos compuestos. Entre
ellos esta: Isoquercitrina, que después de aplicar el revelador quimico y observar
bajo la luz UV presenta un color amarillo, lo que le permite diferenciar de la ruina
que es entre amarillo y naranja; se logra apreciar a 2.3 cm de la siembra y esta por
encima de la rutina. Su Rf en esta práctica fue de 0.73, coincidiendo con el dato
consignado en el manual.
En la siguiente imagen se ilustra la posición en donde aparece la isoquercitrina
Punto de Siembra
3.1 cm
Punto de llegada
2.3 cm
Isoquercitrina
Imagen 3: Rf Isoquercitrina en extracto de flores de sauco
Fuente: creación Propia.
El otro metabolito que se identifico en la practica fue el ácido Caféico, que bajo la
luz UV 365 nm, se observa de un color azul fluorescente y esta mucho mas arriba
que la isoquercitina; su Rf corresponde a 0.9; en la practica de laboratorio se
obtuvo un Rf de 0.90, calculado de la misma forma que se calculo el de la rutina.
En la siguiente imagen se muestra la distancia en la que se halla el acido Caféico.
Punto de Siembra
3.1 cm
Punto de llegada
2.8 cm
Ácido Cafeico
Imagen 4: Rf ácido Caféico en extracto de flores de sauco
Fuente: Creación propia.
Imagen 5: Metabolitos secundarios presentes e identificados en el extracto de
las flores de sauco.
Fuente: Creación propia.
Punto de Siembra
Acido Caféico
Isoquercitrina
Rutina
3.1 cm
Punto de llegada
RESULTADOS OBTENIDOS
En la siguiente tabla se consignan los valores obtenidos durante la práctica de
laboratorio.
Identificación de Metabolitos Secundarios en extracto de flores de sauco
Rf Metabolito Color0.38
RutinaAmarillo – Naranja; se observa una franja grande, tanto en
el patrón como en la muestra
0.7 IsoquercitinaAmarillo, se observa una pequeña línea, esta mas arriba
que la línea de la rutina
0.9 Ácido CaféicoAzul Fluorescente; es una línea muy delgada que se
aprecia al final de la fase estacionaria.
ANALISIS DE RESULTADOS.
Después de realizar la prueba se pudo determinar la presencia de metabolitos
secundarios en el extracto de las flores de sauco como Rutina, Isoquercitina y
ácido Caféico; aunque se tiene una leve variación en el Rf de la Rutina, cerca de
0.02, puede deberse a las características químicas de la fase móvil, que por ser
volátiles se pueden haber perdido pequeñas cantidades durante el proceso de
inmersión y esto influyo en los resultados, pero también cabe anotar que la rutina
no estaba completamente sola o pura en la planta se encontraba en compañía de
otras sustancias químicas.
Los demás Rf de Isoquercitrina y el ácido Caféico si coincidieron con los valores
registrados en el manual, por lo que se puede descartar una alteración en la fase
móvil e inclinarse más por la combinación de sustancias químicas en el extracto
que se estaba estudiando.
CONCLUSIONES
Con el desarrollo de la practica se pudo determinar con que “pureza” se esta
adquiriendo los productos fitoterapéuticos en nuestro país, al realizar pruebas
sencillas como las de cromatografía en capa fina que permiten identificar que el
producto que nos venden si sea el que estamos comprando, y no estemos
poniendo en riesgo nuestra salud.
Las posibles variaciones en los resultados comparadas con las planteadas en los
manuales y demás documentos se puede deber a varias factores como por
ejemplo la presencia de mas sustancias químicas que acompañan el extracto,
alguna modificación genética o factores ambientales que influyeran en la planta
alterando las concentraciones de metabolitos secundarios al momento de su
recolección.
BIBLIOGRAFIA:
SORZA S. Luz Mariela. VALENCIA P. Gloria A. MORA A. Cristina L. Manual de
prácticas de laboratorio de Farmacognosia. Universidad de Antioquia. 2009. Pág.
30 - 32.