informe ensayo cometa

8/17/2019 Informe Ensayo Cometa

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OBJETIVODesarrollar la metodología del ensayo de EUG en condiciones alcalinaspH > 13, en leucocitos humanos en G0, tratados n vitro con algún!rmaco de eecto genot"#ico conocido$

INTRODUCCIÓNEl %D& est! compuesto por grupos osato y deso#irri'osa (ue es una)úcar unidos a 'ases nitrogenadas como adenina, timina, citosina yguanina$ E#isten diversos agentes (ue pueden causar da*o al %D& comoagentes (uímicos, rayos + y radiaci"n solar, en esta última se encuentrapresente la radiaci"n ultravioleta el da*o (ue produce en el %D&consiste en la introducci"n de enlaces covalentes entre dos timinasadyacentes dando como resultado un dimero de pirimidina$

tros tipos de da*o (ue puede surir el %D& son el rompimiento de lacadena, modi-caci"n de 'ases, uniones cru)adas %D&.%D& y %D&./E2&%$ os compuestos genoto#icos ocasionan rompimiento en el%D& induciendo a la apoptosis$

%simismo las c4lulas tam'i4n cuentan con mecanismos de reparaci"ndel %D& da*ado, estos de pueden dividir de manera general enreparaci"n directa donde simplemente se elimina el da*o y la reparaci"npor escisi"n (ue se inicia con una en)ima (ue reconoce alteraciones delas 'ases o la estructura ha'itual de %D&, tras el reconocimiento se da la

escisi"n de la secuencia donde se encuentran las 'ases da*adas$

Un m4todo para detectar el da*o en el %D& es la electrooresis en gel deuna sola c4lula me5or conocido como ensayo cometa este detecta losrompimientos en las cadenas de %D& y los sitios l!'iles a los !lcalismidiendo la migraci"n de núcleos de %D& inmovili)ados$ El ensayoconsiste en (ue las c4lulas situadas so're el gel de agarosa se lisan condetergentes y alta concentraci"n de sal para ormar nucleoides (uecontienen asas súper enrolladas de %D& unidas a la matri) nuclear,cuando estos nulcleoides se someten a electrooresis a un pH alcalino

se orman estructuras muy similares a los cometas (ue se puedeno'servar por microscopia de 6uorescencia y medirse para determinar elgrado de da*o considerando (ue la longitud de la cola del cometa enrelaci"n al núcleo re6e5a el número de rompimientos en la mol4cula de%D&$


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/reparar las

laminillas con uncapa de agarosaregular$

7e me)cla lamuestra con

agarosa de 'a5o

punto de usi"ny se coloca otracapa so're la

laminilla$

7e adiciona la

soluci"n de lisispor una hora a 8o9$

7e produce eldesenrollamient

o en soluci"n'u:er pH;13durante


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Núcleoµm

1@ 18


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• EF%U%92& / E&7% 9E% DE D%I 9EU%2&DU92D 9& /E+2D DE H2DGE& %2&?927 DE 7%&GE /E2?J29% 2& F2 9amachoKanda G$ 7$ L1MN or!n artíne) O$ L


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E(uipo 11

7emestre

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