inoculación de fitopatógenos
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Inoculación de fitopatógenos. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales. Ing. Agr. Vivienne Gepp, MSc. 6 de mayo de 2011. Objetivos. Conocer las principales técnicas que se usan para inocular hongos, bacterias, virus y nematodos fitopatógenos. Esquema de la clase. PARTE TEÓRICA - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
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Inoculación de fitopatógenos
Curso: Diagnóstico de enfermedades
vegetales.Ing. Agr. Vivienne Gepp, MSc.
6 de mayo de 2011
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Objetivos
• Conocer las principales técnicas que se usan para inocular hongos, bacterias, virus y nematodos fitopatógenos.
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Esquema de la clase
PARTE TEÓRICA• Inóculo, calidad y cuantificación.• Métodos de inoculación de hongos,
bacterias, virus y nematodos en hojas, raíces, tallo, frutos.
PARTE PRÁCTICA• Inoculación
LUEGO DE LA CLASE• Observación, análisis e informe de
resultados
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Inóculo
• Hongos:
• Bacterias:
• Virus:
• Nematodos:
– trozos de micelio – esporas – esclerotos
– unidades formadoras de colonias (UFC)
– partículas en macerado, buffer, etc.
– larvas, huevos, quistes
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Calidad del inóculo
• Viable – en activo crecimiento (micelio, bacterias), esporas capaces de germinar
• Homogéneo: – siembra de hongo en centro de placa vs.
suspensión de esporas
• “Acostumbramiento a crecer en medio de cultivo” – pérdida de patogenicidad (Ralstonia) o de producción de esporas (Septoria, Cercospora)
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Cuantificación del inóculo
• Hematocitómetro
• Turbidez
• Unidades formadoras de colonias
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Cuantificación del inóculo en hematocitómetro
Rayado Neubauer: • 2 porciones c/u con 9 cuadrados principales de 0,1 mm3
• divididos en 16 cuadrados menores de 0,05 mm3
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Cuantificación de inóculo
• Turbidez - bacterias– Escala de McFarland: BaCl2 + H2SO4
– Densidad óptica: colorímetro o espectrofotómetro a 450 – 650 mµ
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Cuantificación de inóculo
• Recuento de colonias unidades formadoras de colonias (UFC)
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Inoculación al follaje
• Penetración por estomas o epidermis - mayoría penetra en 24 hs. en condiciones adecuadas de humedad y 20-24ºC
• Métodos:1. pulverización:
• 0,5% Tween o 0,1% jabón• cereales: 1º frotar hoja con dedos mojados para que se mojen
mejor• 0,5% gelatina o 0,1-0,2% agar – adhiere esporas y mantiene
humedad• aceite dispersa esporas, mantiene humedad. Oidios pierden
infectividad.
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Métodos de inoculación al follaje
1. pulverización: • 0,5% Tween o 0,1% jabón
• cereales: 1º frotar hoja con dedos mojados para que se mojen mejor
• 0,5% gelatina o 0,1-0,2% agar – adhiere esporas y mantiene humedad
• aceite dispersa esporas, mantiene humedad. Oidios pierden infectividad.
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Métodos de inoculación al follaje
2. espolvoreo con talco
• royas: humedecer hojas 1º
(aspersión)
• oidios – seco
3. rozar o colocar hojas esporuladas
sobre sanas (previamente
rociadas)
4. inmersión en suspensión de
inóculo
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Métodos de inoculación al follaje
4. infiltración
5. colocar trozo de micelio
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Métodos de inoculación al follaje
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Inoculación de virus
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Plantas indicadoras
• Tabaco, pepino, Chenopodium quinoa, etc.– Sin síntomas– Lesiones locales – Síntomas sistémicos
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Plantas indicadoras
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Transmisión mecánica
1. Macerado de planta enferma
2. Abrasivo (carborundum)
3. Planta sana
= Transmisión = Transmisión “por jugos”“por jugos”
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Transmisión por pulgones
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Transmisión por propagación vegetativa
• tubérculos, bulbos, estacas, etc.
• injerto
An overview of the paintings of Christina Brodiehttp://www.microscopy-uk.org.uk/mag/indexmag.html?http://www.microscopy-uk.org.uk/mag/indexmag.html?http://www.microscopy-uk.org.uk/mag/artnov05/http://www.microscopy-uk.org.uk/mag/artnov05/cbpaint.htmlcbpaint.html
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Inoculación al suelo o raíces
• efecto del suelo: microflora conducente o supresivo reducir variación sin suelo
• humedad muy alta para Pitáceas, • + síntomas a > temp. hasta 28ºC en gral.• Métodos:
– infestación de suelo– hidroponia– “cut and dip”– inoculación sin herir raíces (tubos en suelo)
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Inoculación al tallo o rama
• Generalmente con heridas
• Corte longitudinal – inocular inmediatamente – cubrir para evitar deshidratación. (gel, algodón mojado)
• Patógenos vasculares
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Inoculación al tallo o rama
• Patógenos vasculares: – axila - pinchar a través de
gota o con aguja o escarbadiente contaminado.
– inyección al tallo – evita stress de transplante
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Inoculación en órganos carnosos
• Pinchazo
• Sacabocado
• Corte
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Condiciones ambientales
Antes de inocular:
• Patógenos que penetran por estomas
• Patógenos que penetran por heridas
• Virus
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Condiciones ambientales
Post-inoculación:
• Humedad para bacterias y hongos – factor más importante
• Virus
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BIBLIOGRAFÍA• DHINGRA, O.D.; SINCLAIR, J.B. 1985. Basic plant
pathology methods.
• FRENCH, E.R. y HERBERT, T. 1980. Métodos de investigación fitopatológica.
• KIRÁLY, Z. 1970. Methods in plants pathology with special reference to breeding for disease resistance.
• LELLIOTT, R.A.; STEAD, D.E. 1987. Methods for the diagnosis of bacterial diseases of plants.
• THE COMMONWEALTH MYCOLOGICAL INSTITUTE. 1968. Plant pathologist's pocketbook.