jurnal fitokim 2

8/19/2019 jurnal fitokim 2

1/8

Isolasi dan Identifikasi Senyawa ..,..,Ita Emilia,.,. Sainmatika,..Volume 7,.. No…. 2,….Desember... 2010,…. 46-53

ISSN 1829.586x 46

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA ALKALOID DARI DAUN

TUMBUHAN SENGUGU (Clerodendron serratum Spreng)

Ita Emilia

Dosen Jurusan Biologi FMIPA Universitas PGRI Palembang

ABSTRACT

Has been studied, entitled Isolation and Identification of Alkaloids from the

Leaves of Plant Compounds Senggugu (Clerodendron serratum Spreng) from April

untill November 2010 at the Laboratory of Genetics and Biotechnology, Department

of Biology, Faculty of Mathematics and Natural Sciences Sriwijaya University, and

to test the results of spectrophotometric determination of research that is conducted in

the Laboratory of Chemical Analysis Instruments UPI Bandung. Isolation of activecompounds carried out in stages starting from the extraction, fractionation, thin layer

chromatography (TLC), and purification of active compounds by using gravity

column chromatography. Identification of alkaloid compounds using UV, IR, and

GC-MS. TLC results obtained active compounds contained in the leaves senggugu

including group alkaloid with Rf 0.45 with brownish yellow color. The purified active

compounds by using gravity column chromatography active fraction obtained at F3.3,

From the experiments using UV spectrophotometer, infra red and gc-ms obtained

alkaloid class of compounds with molecular weight of 70 grams / mol and molecular

formula C2H2N2O.

Key words: Isolation, identification, Clerodendron serratum, alkaloid

ABSTRAK

Telah dilakukan penelitian yang berjudul Isolasi dan Identifikasi Senyawa

Alkaloid dari Daun Tumbuhan Senggugu (Clerodendron serratum Spreng) yang

dilaksanakan dari bulan April s.d. bulan November 2010 di Laboratorium Genetika

dan Bioteknologi, Jurusan Biologi Fakultas MIPA Universitas Sriwijaya untuk

pengujian hasil penelitian yaitu penentuan spektrofotometri dilaksanakan di Lab.

Kimia Analisa Instrumen UPI Bandung . Isolasi senyawa aktif dilakukan secara

bertahap dimulai dari proses ekstraksi, fraksinasi, kromatografi lapis tipis (KLT), dan

pemurnian senyawa aktif dengan menggunakan kromatografi kolom gravitasi.Identifikasi senyawa alkaloid menggunakan spektrofotometer UV, IR, dan GC-MS.

Hasil KLT didapat senyawa aktif yang terdapat pada daun senggugu termasuk

golongan senyawa alkaloid dengan Rf 0,45 dengan warna kuning kecoklatan. Hasil

pemurnian senyawa aktif dengan menggunakan kromatografi kolom gravitasi

diperoleh fraksi aktif pada F3.3, Dari hasil pengujian menggunakan spektrofotometer

uv, infra red dan gc-ms diperoleh senyawa golongan alkaloid dengan berat molekul

70 gram/mol dan rumus molekul C2H2N2O.

Kata kunci: Isolasi, Identifikasi, Clerodendron serratum, alkaloid


2/8


ISSN 1829.586x 47

PENDAHULUAN

Ditinjau dari penelitian ilmiahobat-obatan tradisional, Indonesia

merupakan negara yang masih

tertinggal dibandingkan dengan

negara-negara lainya, seperti Jepang,

Korea, Cina dan India. Perkembangan

obat tradisional di Indonesia tidak

terlalu pesat, hal ini diakibatkan karena

pemakaiannya hanya terbatas pada

jumlah atau jenis tanaman tertentu.

Dari sekitar 3.000 jenis tanaman obat

yang ada di Indonesia, baru sekitar 450 jenis saja yang sudah diketahui

khasiatnya.

Kurang lebih 80% obat-obatan

yang digunakan oleh masyarakat

Indonesia berasal dari tumbuhan. Pada

tumbuhan sudah dikenal mengandung

berbagai golongan senyawa kimia

sebagai bahan obat yang mempunyai

efek fisiologis terhadap organisme lain.

Senyawa alam hasil isolasi dari

tumbuhan juga digunakan sebagaibahan asal untuk sintesis bahan-bahan

biologis aktif dan sebagai senyawa

untuk mengobati penyakit infeksi yang

disebabkan oleh Staphylococcus

aureus (Supardi dan Sukamto, 1994).

Pada umumnya infeksi kulit

bisa terjadi pada luka atau goresan

sedikit pada kulit, kemudian dimasuki

mikroorganisme yang banyak terdapat

pada permukaan kulit yaitu umumnya

golongan Staphylococcus aureus.Staphylococcus aureus masuk ke kulit

selain melalui goresan luka dapat juga

melalui folikel-folikel rambut sehingga

terjadilah infeksi. Penyakit

Staphylococcus dari kulit biasanya

berakibat pada penumpukan nanah

ditempat, dikenal sebagai bisul

bernanah. Area yang terpengaruh

mungkin menjadi merah,

membengkak, dan terasa sakit. Infeksi-

infeksi Staphylococcus dari kulit dan

berlanjut ke impetigo (pengerasankulit) atau sellulitis (peradangan dari

jaringan penghubung di bawah kulit)

yang menjurus pada pembengkakan

dan kemerahan (Pratiwi, 2008).

Kasus penyakit kulit sering

ditemukan pada masyarakat Indonesia

yang berekonomi lemah. Harga

antibiotik yang mahal merupakan

kendala utama bagi masyrakat

berekonomi lemah untuk mengobati

penyakit infeksi kulit. Untuk itudiperlukan pengobatan alternatif.

Untuk mengatasi masalah

diatas maka diperlukan pencarian

metode alternatif yang salah satunya

adalah berasal dari tumbuh-tumbuhan,

yang secara alami dapat

menyembuhkan penyakit infeksi kulit.

Apabila dibandingkan dengan

pemakaian antibiotik, pemakaian obat

secara tradisional lebih aman, mudah

dan murah (Supardi dan Sukamto1994).

Salah satu komponen yang

dikandung oleh tumbuhan senggugu(Clerodendron serratum Spreng)

adalah senyawa alkaloid. Alkaloid

merupakan salah satu metabolit

sekunder yang banyak ditemukan dialam dan mempunyai keaktifan

fisiologis tertentu. Alkaloid ada yang

sangat beracun tetapi ada pula yang

sangat berguna dalam pengobatanmisalnya kuinin, morfin dan striknin

(Achmad, 1986).Untuk mengisolasi senyawa

alkaloid yang terkandung pada daun

senggugu (Clerodendron serratum

Spreng) dilakukan dengan metode

ekstraksi, fraksinasi dan pemurnian

senyawa aktif. Ekstraksi dilakukan

secara bertingkat dengan menggunakan


3/8


ISSN 1829.586x 48

alat soxhlet dengan kepolaran

meningkat. Fraksinasi dilakukan

dengan metode Kromatografi CairVakum (KCV) dengan fase diam silika

gel dan pelarut sebagai fase gerak,

sehingga diperoleh fraksi aktif dari

daun senggugu. Sedangkan untuk

pemurnian senyawa aktif digunakan

metode Kromatografi Kolom Gravitasi

Bumi dengan penyerapan silika gel

(Picman et al. 1998 dalam

Salni,2003).

Berdasarkan latar belakang

diatas maka, perlu dilakukan penelitian

tentang isolasi senyawa golongan

alkaloid pada daun tumbuhan


Spreng) dan identifikasi senyawa

golongan alkaloid.

BAHAN DAN METODE

Penelitian ini dilaksanakan

pada bulan April s.d. November 2010bertempat di Laboratorium Genetika

dan Bioteknologi, UNSRI Inderalalaya

dan Lab. Kimia Analisa Instrumen UPI

Bandung untuk identifikasi senyawa

hasil isolasi dengan spektrofotometer

UV, IR, dan GC-MS.

Alat-alat yang digunakan dalam

penelitian ini ádalah soxhlet , blender,

botol selai, bunsen, , corong gelas,

erlenmeyer, gelas ukur, magnetikstirer, kromatografi lapis tipis (KLT),

penangas air, pisau, spatula, tabung

reaksi, timbangan analitik, rotary

evaporator, pipa kapiler, tabung

reaksi, pompa air, soxhlet. Bahan yang

dibutuhkan adalah Aquadest, alkohol

70%, alumunium foil, kertas label, n-

heksan, etil asetat, metanol, kapas,

paper disc (diameter 6 mm), kertas

saring, plat silikagel 60 F254, daun


Spreng).

Isolasi dan Pemurnian Senyawa dari

Fraksi Metanol

Secara garis besar metode

isolasi bahan bioaktif terdiri dari

ekstraksi, fraksinasi dan pemurnian.

Ekstraksi dilakukan secara sinambung

menggunakan alat soxlet dengan

kepolaran pelarut bertingkat yaitu

dengan pelarut n-heksan, etil asetat dan

metanol sehingga diperoleh ekstrak

cair dari ketiga pelarut. Fraksinasi

dilakukan dengan metode

Kromatografi Cair Vakum (KCV)

dengan fase diam silika gel dan pelarut

sebagai fase gerak, sehingga diperoleh

fraksi aktif dari daun senggugu.

Pemurnian senyawa aktif dari fraksi

dilakukan secara kromatografi kolom

gravitasi dengan absorben silika. Elusidilakukan dengan fase gerak pelarut

eluen yang sesuai dengan laju elusi 20

tetes permenit, volume fraksi yang

ditampung adalah 10 ml (Salni, 2003).

Sebanyak 200 gram serbuk

simplisia diekstraksi secara bertingkat

dengan menggunakan alat soxhlet .

Pelarut yang digunakan untuk ekstraksi

berdasarkan kepolaran pelerut

bertingkat yaitu n-heksan, etil asetatdan etanol. Serbuk simplisia sebanyak

200 gram dibungkus dengan kertas

saring, lalu dimasukkan kedalam 2 alat

soxhlet , diberi larutan n-heksan

masing-masing sebanyak 1 liter

kemudian dipanaskan dalam panci

diatas kompor listrik. Ekstraksi

dilakukan selama ± 5 hari, dalam satu

hari dipanaskan selama ± 8 jam

(sampai larutan berwarna bening).


4/8


ISSN 1829.586x 49

Kemudian ampas dikeluarkan dan

dikeringkan agar pelarutnya menguap.

Ampas yang telah dikeringkanselanjutnya di ekstraksi dengan pelarut

etil asetat selama 5 hari. Ampas yang

telah dikeringkan dari ekstraksi

menggunakan etil asetat kemudian di

ekstraksi dengan menggunakan

metanol selama 5 hari. Lalu n-heksan

cair, eti asetat cair dan metanol cair

diuapkan dengan alat penguap vakum

putar hingga didapatkan ekstrak kental.

Ekstrak kental dikeringkan dengan alat

pengering sampai kering, sehingggadidapatkan ekstrak n-heksan, ekstrak

etil asetat dan ekstrak metanol kering

(Picman et al. 1998 modifikasi Salni

2003).

Ekstrak aktif difraksinasi

dengan metode kromatografi cair

vakum (KCV) dengan penyerapan

silika gel. Fase gerak menggunakan

larutan n-heksana 100%, n-heksana

80%, n-heksana 60%, n-heksana 40%,

n-heksana 20%, etil asetat 100%, etil

asetat 80%, etil asetat 60%, etil asetat

40%, etil asetat 20%, dan metanol

100%. Masing-masing persentase

diberikan volume larutan sebanyak 100

ml. Fraksi yang aktif diuji secara

bioautografi dan diisolasi senyawa

aktifnya (Picman et al. 1998 dalam

Salni 2003).

Daun senggugu (Clerodendron

serratum Spreng) yang telahdifraksinasi diuji secara bioautografi.

Uji bioautografi dilakukan untuk

mengetahui harga Rf (Retodansi

faktor) dan untuk mengetahui senyawa

aktif diketahui dengan menggunakan

Kromatografi Lapis Tipis ( KLT).

Prosedur bioautografi sebagai berikut :

fraksi aktif dengan menggunakan

konsentrasi 1% ditotolkan pada plat

silika gel 60 F254, kemudian

dikembangkan dengan fase gerak yangsesuai untuk pemisahan senyawa-

senyawa yang terdapat dalam fraksi.

Plat kemudian disemprotkan dengan

H2SO4 10%. Kemudian dikeringkan

dengan dipanaskan di atas hot plate,

sehingga akan terlihat senyawa aktif

berdasarkan warna yang terbentuk

setelah itu ditentukan Rf nya (Salni,

2003).

Dari hasil uji bioautugrafi

diketahui bercak aktif yangmenunjukan ciri-ciri senyawa aktif.

Selanjutnya senyawa aktif akan

diisolasi dengan metode kromatografi

kolom dengan penyerapan silika gel.

Pemurnian senyawa aktif dari fraksi

aktif dilakukan secara kromatografi

kolom gravitasi dengan adsorben silika

1:75 pada kolom berdiameter 1,7 cm.

Elusi dilakukan dengan fase gerak

pelarut eluen yang sesuai dengan laju

elusi 20 tetes permenit, volume fraksi

yang ditampung adalah 10 ml (Roth

dan Blaschke 1998). Identifikasi

senyawa golongan alkaloida setelah

didapatkan ekstrak murni diuji dengan

menggunakan alat UV, IR, dan GC-

MS di Laboratorium Kimia Analisa

Instrumen UPI Bandung.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Berdasarkan hasil ekstraksi

secara sinambung dengan

menggunakan alat soxhlet

menggunakan pelarut n-heksan, etil

asetat dan metanol terhadap daun

senggugu (Clerodendron seratum),

didapatkan berat mesing-masing

ekstrak pada tabel 1.


5/8


ISSN 1829.586x 50

Tabel 1 . Hasil Ekstraksi Secara Sinambung Daun Senggugu

No Pelarut Berat Ekstrak (gram) Persen Berat (%)1 N-Heksan 16 13.3

2 Etil asetat 16 13.3

3 Metanol 62 51.6

Dari hasil penelitian didapatkan

hasil ekstraksi daun senggugu

sebanyak 120 gr diperoleh ekstrak n-

heksan sebanyak 16 gr (13.3%) , ektrak

etil asetat 16 gr (13.3%), dan Ekstrakmetanol 62 gr (51.6%), pelarut-pelarut

yang digunakan mempunyai

kemampuan untuk menarik senyawa

yang terdapat dalam simplisia secara

berbeda-berbeda.

Pelarut non polar akan

melarutkan senyawa non polar, pelarut

semi polar akan melarutkan senyawa

semi polar dan pelarut polar akan

melarutkan senyawa polar. Dari hasil

ekstraksi, terdapat perbedaan beratyang dihasilkan dari masing-masing

ekstrak. Didalam ekstrak kemungkinan

terdapat senyawa dari golongan

senyawa kimia yang berbeda-beda

sesuai kepolaranya.

Fraksinasi dilakukan dengan

metode Kromatografi Cair Vakum

(KCV). Eksrak yang di fraksinasi

adalah ekstrak metanol yang memiliki

jumlah ekstrak paling banyak sebesar

62 gr (51,6%) dibandingkan dengan

jumlah ekstrak n-heksan dan etil asetat

(tabel 1).

Fraksi metanol yang aktif dari

daun senggugu di lanjutkan dengan

kromatografi lapis tipis (KLT) untuk

menentukan eluen yang sesuai pada

kromatografi kolom gravitasi bumi.

Kromatografi lapis tipis menggunakan

plat GF254 dengan menggunakan

perbandingan eluen yang sesuai

sebagai fase gerak. Hasil pengujian

KLT dapat dilihat pada gambar 1.

F1 F2 F3

Gambar 1. Kromatogram hasil kromatografilapis tipis (KLT)

Dari hasil uji KLT yang

menunjukan pola noda yang sama

kemudian dikelompokkan menjadi 3

fraksi yaitu F1, F2, F3. Jika dilihat daribercak yang tampak, pada noda F3diduga mengandung senyawa alkaloid.

Berdasarkan pola noda dari

kromatogram KLT yang diperoleh

maka noda pada F3 akan dipisahkan

dengan kromatografi kolom gravitasi.

Fraksi F3 dipisahkan lebih

lanjut dengan menggunakan

kromatografi kolom gravitasi


6/8


ISSN 1829.586x 51

menggunakan fase diam silika gel G60

(35-37 mesh). Fraksi F3 dielusi

menggunakan perbandingan eluen etilasetat dan metanol 7:3, eluen

ditampung didalan botol vial. Vial-vial

yang memberikan noda yang sama

dikelompokkan kedalam satu fraksi.

Pemisahan ini menghasilkan 3 fraksi.

Perbedaan fraksi dapat dilihat padatabel 2.

Tabel 2. Penggabungan Hasil Kromatografi Kolom Gravitasi dari Fraksi F3 Daun

Tumbuhan Senggugu.

No fraksi No Botol vial

1

2

3

F 3.1

F3.2

F3.3

1

2-3

4-6

Dari hasil pemurnian senyawa

menggunakan kromatografi kolom

gravitasi, yang menghasilkan vial-vial

sebanyak 6 botol dengan kelompok

fraksi yang berbeda.

Fraksi pada F3.3 (4)

memperlihatkan satu noda yang

berpotensi untuk dilakukan pemurnian

lebih lanjut, hal ini didasarkan atasadanya satu noda tunggal yang masih

terdapat pengotor, sehingga diperlukan

pemurnian. Uji kemurnian dilakukan

dengan menggunakan kromatografi

lapis tipis (KLT) menggunakan eluen

7:3 etil asetat : metanol.

Hasil uji kemurnian pada fraksi

F3.3 dengan kromatografi lapis tipis

(KLT) dengan menggunakan plat

GF254 dilakukan uji biautografi dan

penentuan golongan. Hasil pengujian

bioautografi dan golongan senyawaaktif yang diperoleh dapat dilihat pada

tabel 3.

Tabel 3. Hasil Pengujian Bioautografi dan Penentuan Golongan Senyawa Aktif Daun

Senggugu (Clerodendron serratum)

No Fraksi aktif RF Warna yang terbentuk Golongan senyawa aktif

1 F 3.3 (4) 0,45 Kuning Kecoklatan Alkaloid

Keterangan: Nilai Rf dan warna bercak menunjukkan golongan senyawa aktif yang

terbentuk, dengan perbandingan eluen etil asetat:metanol (7:3).

Berdasarkan tabel 3, terlihat

bahwa fraksi F3.3 (4) Metanol

menimbulkan bercak berwarna pada

kromatogram. Bercak berwarna kuning

kecoklatan pada fraksi F3.3

menunjukkan bahwa didalam fraksi

aktif terdapat senyawa alkaloid dengan

nilai RF 0,45.

Senyawa alkaoid juga efektif

terhadap virus, bakteri dan fungi. Hal


7/8


ISSN 1829.586x 52

ini menunjukan bahwa tanaman

memiliki suatu kemampuan yang

hampir tidak terbatas untukmensintesis substansi aromatik.

Penentuan Senyawa Alkaloid

Dengan Menggunakan

Spektrofotometer

Setelah dilakukan pemurnian

senyawa dengan menggunakan

kromatografi kolom gravitasi dan diuji

dengan menggunakan kromatografi

lapis tipis (KLT) didapatkan fraksiyang memiliki bercak satu noda adalah

F3.3 yang bewarna kuning kecoklatan

dengan nilai Rf 0.45.

Ekstrak kuning kecoklatan ini

dilakukan identifikasi senyawa

golongan alkaloid menggunakan

spektrofotometer uv, infra red dan gc-

ms. Hasil pengujian tes uv

menghasilkan serapan maksimum

dengan panjang gelombang 268,5

(absorban 0.580) dan panjanggelombang 208.5 (absorban 1.399) .

Adanya absorbansi pada panjang

gelombang 268.5

mengidentifikasikan bahwa senyawa

hasil isolasi mempunyai ikatan

rangkap terkonjugasi yang lazimnya

merupakan cincin aromatik, dimana

muncul panjang gelombang yang lebih

panjang dengan kenaikan intensitas

yang besar (200 – 400 nm) .

Adanya system aromatis inidikuatkan oleh spectrum infra merah

atau spektrum IR yang menunjukkan

adanya serapan karakteristik aromatic

pada bilangan gelombang 1465-1519

cm-1

. Dari hasil pengujian

menggunakan spektrofotometer gc-ms

diperoleh senyawa golongan alkaloid

dengan berat molekul 70 gram/mol dan

rumus molekul C2H2N2O (terlampir)

dimana ciri-ciri senyawa golongan

alkaloid adalah memiliki paling sedikit

sebuah atom nitrogen (unsure N) yangbiasanya bersifat basa dan dalam

sebagian besar atom nitrogen ini

merupakan bagian dari cincin aromatis

dan heterosiklik (Achmad, 1986).

KESIMPULAN

Berdasarkan penelitian yang

telah dilakukan, maka dapat diambil

kesimpulan sebagai berikut:

1.

Senyawa golongan alkaloid hasilisolasi terdapat pada ekstrak

metanol dengan jumlah ekstrak

terbanyak yaitu 62 gr (51.6%).

Hasil Pengujian Bioautografi

diperoleh bercak berwarna kuning

kecoklatan pada fraksi F3.3menunjukkan bahwa didalam

fraksi aktif terdapat senyawa

alkaloid dengan nilai RF 0,45.

2. Dari hasil pengujian menggunakan

spektrofotometer uv, infra red dangc-ms diperoleh senyawa

golongan alkaloid dengan berat

molekul 70 gram/mol dan rumus

molekul C2H2N2O .

DAFTAR PUSTAKA

Achmad, S.A. 1986. Buku Materi

Pokok Kimia Organik Bahan

Alam. Jakarta: Penerbit Karunika

Jakarta Universitas Terbuka.

Pratiwi, S.T.2008. Mikrobiologi

Farmasi. Penerbit Erlangga.

Jakarta.

Roth, HJ. Dan G. Blaschke.1998.

Analisis Farmasi. Penerbit Gajah

Mada University Press.

Yokyakarta.


8/8


ISSN 1829.586x 53

Salni, 2003. Karakterisasi dan Uji

Aktifitas Topikal Senyawa

antibakteri dari DaunKaramunting ( Rhodormyrtus

tomenfusa (Ait.) Hassk. Desertasi.

Penerbit ITB.

Supardi, I., dan Sukamto. 1994.

Mikrobiologi Dalam Pengolahan

dan Keamanan Pangan. PenerbitAlumni. Bandung.

jurnal fitokim 2

Documents