korai microglia aktiv.4,ci6 isciiaemia. iiypoxia es...
TRANSCRIPT
KORAI MICROGLIA AKTIV.4,CI6 ISCIIAEMIA. IIYPOXIA ESKULONBOz6 FARMAKoLOcTAT BEAvATKozAsoK
nerAsAnq,
Do|lori (Ph.D.) - drtekez6s
Dr. Abrah6m Hajnalka
PECSI TUDOMAI{YEG\'ETEMALTATANoS oRvosrtrDoMANYr KAR
ANATOMIAI INTEZET
Programvezet6: Dr. L'nird LitszloAlprogramvezet6: Dr. 5&616 Gydrgy
Temavezet6: Dr. L6zAr Glula
P€cs, 2003.
rmur,omlrcyzfr
Bevezet6s
C6lkitt26sek
Alkalmazott m6dszer€k.... . . . . . . . . . .----. . . . . . . . . .
L Miiteri bear atlozisokl. l En) he eloa$ i rschaem ia
L l. L Kiserletr dl lal,csoponok ... . .1.1.1.1. Hipot€rmi6s ii'llatcsoport1.1.1.2. Normotermias iillatcsoport
1.2. Folt i l is rschaemia..| .2 | Kisdrlet i el latcsoportok .. . . . . . . . .
L2. L L Az erebinisra haszliilt fonalak vastagsi*a, a hipertermiam&tdke 6s az infarltus mdrete kdzdtti dsszeffiggds vizsgalata .....,__.......-.......-.| .2.l .2. Az erclzAt|sm haszdlt fonalak vastagsrg4 a hipertermiamdrtdke ds a komi ischaemiis kirosodas kdzdtti dsszefiiggis vizsgiilata...._---..1 -2. 1 .3. A microglia rea.kci6 vizsgiilata fokdlis ischaemi6bana preoptikus dreaban...... ....
I 2.2. Neurologiai vizsgelai.. . .-. . . . . . . . .
2. Hippocampus szeletpreparatum, elektrofiziol6gia___.. ... _.2.L Szeletpreparatum kdszitdse a hippocampusb6l ................_____- -- - ..2.2. Exlracellubris elvezetdssel vdgzett elekrofiziol6giai vizsgiilatok2.3. Kontroll sz€let€k2.4. Kis6rleti szeletek.. 18
2.4.1. Hlpoxia - 182.4.2. Kainsav,,.. . . . . . . . . . . . . . . ._-.. . . .__-- 182.4.3. Schaffer kollaterelisok ingerl6s6vel kivaltott epileptiform akivit is l 92.4.4. Magas extracellul6ris kiliumion koncentr6ci6----.- .. 192.4.5. K6'liumion-csatoma blokkol6k .. _.2O
2.4.5.1. Tetraetil-arnm6nium ......._ 20202.4.5.2. 4-aminopir idrn
3. Szdvettani In6dszerek------_... . . . . . .----_... . . . . . . 2l3.L Fix6l5s 2l3 2.Irnmuniisztokdmia3 3. Lekinhisztokdmia3 4. Hemato\i l i0-eozin ds \ issl fesrds.... .3.5.Szupravililis2,3,5,-trifeniltetaz6liumkloridfest6s...................-.....
4. Az eredminyel drtdkelisdnek m6dszerei.4. L A microglia aktiv6ci6 fokdnak ertdkoldse4.2. A micmglia sejtek szimolasa Neurolucida programmal ..,,..,-...........----...._---. .4.3. A microglia sejtek optikai denzitisadak m6rdse4.4. Az infarktus teriilet€nek m6r6se fokilis ischaemi6ban
I
9
1 0
t'l
l 0l0t 0l0l l
12
t4
l )
l 6I616
4.5 Sta riszti kat a-nal'zis
2223
24
2424242527
29
2929
Eredmdnyek---_.._... . . . . .
L Szubletalis eliiagyi ischaemia Altal kiv6ltott microglia aktiv6ci6 patka.nyban._ --1 . L Microglia reakci6 reperfuzi6 ndlkiil hipoterrni6s allatokban ,,,_...........,...... _. -.
1.2. Microglia realci6 repertuzi6 utin hipotermias a atokban 331.3. Microglia reakci6 repcrfiizi6 nelkiil nonotermias illatokban 351.4. Microglia reakci6 repefizi6val normotermi6s 611atokban.... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .-. . .37L5. N€uronpusztulis hiAnya a hippocampusban 38
2. Az agykirosodiis, a hipertermia 6sdsszeffiggdse fokelis ischacmiSban
az crelz6msra hasznat fonal vastagsaganak
2.1. Az allatopk h6mdrsdkletdnek v6ltozisa2.2. Az aglkdrosodis krtcqedese
3. Microglia akivici6 a preoptikus ereeban fokalis ischaemi6t kdvet6en3. L Az rnlakrus krtcrjcdese a preoptikus areabar3.2. Microglia akivici6 vizsgalata az 6relzar6st kdvet6 cls6 hat 6raban a preoptikusdreaban..
4. Hypoxia, kainsav 6s rnogas extracelluliris k6liumion koncontrdci6 6ltal ldtrehozottmicroglia akiv6ci6 patkiny hippocampus szeletprepardtumon
4040
4444
4.1. Kontroll szeletck4.2. Hlpoxia hatasa4.3. Kainsav hat:isa4.4. Schaffer kollateralisok sorozatingorlisivcl kiviltott epileptiform akivitas hatasa 564.5. Emelt extraccllul6ris keliumion koncentraci6 hatasa 584.6. Tetraetil-amm6nium hatasa4 7 4 - a m i n o p i r i d i n h a 1 6 s a . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Az eredmdnyek me9bes2616se.. . . . . . . . . . . . .
L Az alkalmMott m6dszerekkel kapcsolatos teclmikai r6szletck1.1. Az 6llatok maghijm6rsdkletdnek 6s ̂ z agy hitmerseklet6nek kapcsolata 68L2. A microglia akiveci6 kavntifikiilasa.. __...... 69
2. Microglia akivici6 sejtpusdulist nem okoz6 ischaemia eseten.... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .692.l.Szubleti l iscl i tagyi ischaemiail talkivl l tottmicrogliaal l iv6ci6... . . . . . . . . . . . ._. '102.2. Microglia akivacio a preoptil:us iretbal fok6lis ischaemi6ban '12
3. Microglia akivrici6 hippocampus szeletpreparatumon
4848
53
6 l63
68
68
4 A mrcroglia aklrvdcio mechani2musa.... . . . . . . . . . . . . . . . .
Az el6rt ii eredm6nyek dsszefoghlAsa---... 8I
L l . A hwoxia hatdsa a mrcroglra aki \ ic iora3.2. Kainsav hatAsa a microelia aklivaci6ra3.3. Keliumion hatdsa a microglia aktiveci6ra
5. Az aktivalt microglia szerepe
Irodalomjegyzdk
Rijvidit6sek jegy26ke
Az 6rtekez6s alapjful szolg{16 sajAt kiizlem6ny€k jegyzeke
'74
76
78
80
Az 6rtekez6ssel kapcsolatos el6adiskivonatok, poszterek
92
93
95Kiisziinetnyilvdnitrs
BEVEZETfS
Az iparilag fejlett orszagokban az agydrrendszeri megbetegeddsek
kdzvetlen vagy kdzvetett m6don a harmadik leggyakoribb hal6lokot jelentik
(World Health Report, 1997). A stroke (: ictus vascula s, agyi drkatasztr6fa)
miatt bekdvetkezett mortalitas hazankban is magas, dvente 100000 lakosb6l
kdriilbehl 200 hal meg agydrbetegsdg kdvetkezteben (Demografiai Evkdnyv,
2000). A stroke v6z6ses 6s ischaemias formeban jelentkezhet Az ischaemias
stroke hitter6ben leggyakabban atherosclerosis, kardiogdn embolizAci6 vagy
lacunaris infarctus 611. Szint6n jelent6s v6r6raml6s csdkkendst - globAlis
ischaemi6t - id,6z el6 a krizponti idegrendszerben az ugyancsak gyakori
myocardialis infarktushoz t6rsul6 kering6szavar, illetve szivmegalles (Petito ds
mtsai., 1987; Ng 6s mtsai., 1989; White 6s mtsai., 1996; Fujioka ds mtsai., 2000).
Nem hanyagolhat6 el a traumes agys6rtl6ssel egynttj616, t6bbd-kevdsb6 lokalizalt
ischaemia, amely jelent6sen ronthatja az egyszeii fejs6riil6s k6vetkeztdben
kialakul6 agyk6rosodes m6rtdkdt (Verweij 6s Muizelaar, 1996, von Oettingen ds
mtsai, 2002). Emiatt az agyi ischaemia 6ltal okozott neuronpusztul6s, ennek
lokaliz6ci6ja ds mechanizmusa, az idegsejtek degener6ci6jrit megel6z6, illetve az
azt kdvet6 neuron is, 6s nem-neuron6lis sejtes reakci6k az egyik
legintenzivebben kutatott teriilete az idegtudomanyoknak (Schmidt-Kastner es
Freund, 1991; Lipton, 1999).
Az emberi globalis illetve fokiilis ischaemia kisdrletes, fdkdnt
laborat6riumi r6gcs6l6kon alkalmazott modellje szdles kdrben elterjedt, 6s az
ischaemia ldtrehoz6s6nak m6dszere r6szletesen kidolgozott (Pulsinelli 6s Brierley,
1979, Tamura 6s mtsai., l98l;Watson 6s mtsai., 1985; Ginsberg 6s Busto, 1989,
Longa 6s mtsai., 1989; Schmid-Elsaesser 6s mtsai., 1998).
A fokalis ischaemia kisdrletes modellje az arl�erta (a.) cerebri media
elz6r6s6n alapul, amelyet tdbbfdle m6don lehet el6iddzni,. Az dr elektromos
koagul6ci6ja 6s fototrombotikus okk[izi6ja mellett kevdsbbd eszkdzig6nyes, es
emiatt gyakrabban alkalmazott m6dszer az a. cerebri media elziir6sa a lumen6be
vezetett (intraluminAlis) sebdszi var6fonallal (Tamura 6s mtsai., 1981; Watson es
mtsai., 1985; Longa 6s mtsai, 1989) Az 6r elzdr6sdt kovet6en leginkabb a
putamen-nucleus caudatus lateralis rdsze, valamint a hozzit k6ze1 es6 parietalis
kdreg s6riil, amelyek az ischaemi6s magot kdpezik. A mag teniletdn valamennyi
neuron 6s gliasejt n6hiny 6r6n beliil elpusztul. A sejt degenerdci6nak ezt a
formdjit "pan necrosis"-nak nevezik. A medielis putamen-nucleus caudatus,
illetve a neocortex fennmarad6 r6sze, valamint az entorhinalis kereg az infarktus
szdli teriiletdt, a penumbrat alkotjik (Lipton, 1999) A penumbra ternletdn f6kdnt a
neuronok kirosodnak, ds titbbs6gijk apopt6zissal pusztul el (Bar, 1996; Rupalla es
mtsai., 1998).
Klinikai adatok alapj6n a stroke gyakan jAr egytitt l,zas reakci6val, amely
sirlyosbitja az ischaemia trineteit ds negativan befolyrisolja a betegek feldpiil6s6t
(Azzimondi 6s mtsai., 1995; Reith 6s mtsai., 1996; Boysen 6s Christensen, 2001).
Az a. cerebri media intralumin6lis fonal m6dszerrel tort6n6 elzArAsa ebb6l a
szempontb6l kdlondsen drdekes. Az 'relziritst kovet6 els6 6r6ban ugyanis az
allatok magh6mdrsdklete emelkedik, amely felt6telezhet6en a hypothalamikus
h6szab6lyoz6 kdzpont, a preoptikus Area ischaemias karosodasa,val hozhat6
osszefiiggdsbe (Zhao ds mtsai, 1994, Regl6di ds mtsai, 2000) Ezilltal ez d
m6dszer a tdbbivel ellentdtben nemcsak mag6t a vdrell6tisi zavart, hanem a hozza
tersul6 szdv6dmdn!,t is modellezi.
A globelis ischaemia l6trehozisera a leggyakabban alkalmazott m6dszer
az agyat ell6t6 n6gy 6r (a k6t a. vertebralis 6s a kdt a. carotis communis) koponyan
kiviili elzArasa (Pulsinelli 6s Brierley, 1979) Ezzel a m6dszerrel patkenyban a
v6raraml6st az ischaemia el6tti 6ftdk 90-95yo-6yal lehet csdkkenteni az
idegrendszer ischaemiiira egyik legdrzdkenyebb teniletdn, a hippocampusban.
Ennek kdvetkeztdben a hippocampus ischaemi6ra kiilonosen 6rzekeny
neuronpopul6ci6ja, a CAI r6gi6 piramissejtjei, valamint a gyrus dentatus hiliins
sejtjei pusztulnak (Pulsinelli ds mtsai., 1982; Petito 6s mtsai., 1987; Ng 6s mtsai.,
1989; SchmidfKastner 6s Freund, 1991). Hasonl6 hat6s 6rhet6 el az a. carotis
communis kdtoldali lekot6s6vel egyidejiileg alkalmazott hipotenzi6val (Smith es
mtsai., 1984). A kdt 6r lekotdse, a vdrnyom6s cs6kkent6se ndlkril, a v6riraml6s
5oolo-os cs6kkends6t okozza, amely olyan enyhe m6fi6Ki, hogy patkdnyban nem
okoz szdvettanilag megfigyelhet6 neuronpusztul6st (Eklof 6s Siesjo, 1973, Smith
es mtsa i . 1o84. Ja .pe ls es mtsa i . 1940,
Az in yivo m6dszerek mellett a neuronok ischaemi6s k6rosod6sa soran
fell6p6 funkcion6lis v6ltoz6sok vizsgalatdra a tildl6 agyszelet-technika ugyancsak
+c*{ru, agli ktur!
^ vddkdDrh dor!. $$, rqsn
\ ! !mn, ! &ae*qi t6dnu joLD.sMr@4do (soirin Les)
R dai d6. amdr hs'rtr r 4
4, i$0) r ndr ii r.wd'rbln
K bN4riLd (Kt.r a negsqtkr
er$i ond (sD) rr?r lrls{ 4 zsrft( Lrf r !ru 6 Hfuld, i eqn
Fderis fjr uhr regriiF,j$ a r I
h . hi hFeohor ,L iuhrjd hs z
i.trdilsr !,h d n4{nF ilri$a
vicsqLsub4]|i6[lmigr.@L
! Az degfjdez hs I uq d o igo&dm3 i qk{
,i[eb, (sdo$(; nki rqr,
i41) tu Nderi sEo ri*dd
n4h4!e (xn8 a Dfii ref) r h:q!8isqr4, u sk(nikho?
disldqelgLiiq'!rlPdrodn$ ts4)
a niqogruq'lrd ds d N$r([qe), nur !!cil! r*i firdd t. . . " ) c - . , i
: h|dosd tuNrvi a kFs (Rds$r L$.)
eni'i (t trrr rorro). i*aq rqr n
d l d d o ! ' " . o . . 1
Lqr) Fdde'i, rue i dnrugi$ncr
^.or (rm) nlgFr
, mddbr I lHuE d orai. i4r.
or igLi$tldk ari
htr4 rfE A iy4lni d uqru4 L
(GFsqA nrii r4r) c*4i h!d!r nde{, i sjl nrnrhrin kri e
tu*iin ,M ,oed, 6rae 4 E!d, 6$ ezddri Mia e *@dihi s tri*n
hriia akr !6 d r ((rcd*!ry. rs6 &rr ir nta , | 43)
u "i d 'd xhrNi! jrioi r krdrlr ! ^sdhr (c!$!riir ! ((drqq' ) " T ' r \ ! . ' .
d i r l n 4 r L r l r L ( n c L A d h i r 4 E
tes $dr. iFo ^ 664tr 6{d ;ruin !$sa | lqr dihimk
rotreni6n * a ENuh rdsdn &
kedbbi ftznftu ! *jr mnuo oeii,errnu i s Esribzrr(ereii rs,,
i{3) A rjr 6kzh6 d6?q a 5uior biroDFd Lr} sr iq (\(() r
k@k vgY anibod ! ir i s" odnq;
rLjes egdi&! 0e{,gr44 i n&!i3(
d.oi akb ih,6!i istrci G m& .
^ 0 tros hfn* & rchiq r !M u' , i ! . i ! ' o o i & 1 . d "
ri$i,* dli{l i ie* kad r!RuFh * de' ne4j FaureG 6ki
($st r ir!$qkr dcgqqiddnd
Md!h $ nri (rrr) lrou ! Ddr
5 " ( ) i i o - i { '
n!!nk 4 rcqs. hbjedo irLi
i qruPj 4 fti6. ojn r d d 'aPd !
vabr*vd .syid6b.i d j.rh vrd.h Yiasirtuk a niqo4nsjd
koBi 'ekidlr, r1rdds rlii.el r m
ctLKrazasE(
vbsrri uv6d I niqosrigct.r €rci6i
6s $mr id6b.Li hfolys&
id.sGlrps,urh' .avuokd & .&'r4sd m4is .rdro'd
oimsriaen* rcarci6t, . e@eflu lrlbtu, nivd . t3i6 ndrcnjli
s4frsa i4ih6n* cajibd !ry dy
i'LssjrpoNl.cid akrividslmk aolanrbbdtu tusirjuk Es{ r ki&Ldi r
nreo?d, * r idsnik 6ik!i6j. vmroi'itur ddi16 6isi3ir&ooL' dfr pr hrFid4 u qdrdh
Kl. nidoglh divr.i.n sko6l h,'6ii HvdmL lEsihi
1 vrgihbj*ei .m h {rer ke66nrq ios a n€4wk&n K t.dhlokobtrni6ghdbtkirtdbd;e
, r " . G " r , L , r i t . . i l
@pdz6 teje, onbr z d tsb
^
. ,
(r4e) dnLki! loDtr o6dzq
drrtsi! kd6dqd io s 40 trr d (rdio! Er Mn h. sonnfli h, Nr).
Brus?d, Bdefuo rew
m!d!L. A s d de qvir 4qoiji!{ r
( ! . . !
t d ' { h d , 4 ] ' u o s & 5 ! 6 g i h i i i t ' n d l
,!!duiim6dsc( 3r 'rbh6r ftgk n 4,e
D6N hrtrs hi. rhiai h!
o i . ^ - \ ' ) d , L - u .
" ( q m ) . . i v ' . ! . " r i @ ) i r r L r "
r.{Lkd rr$ i Lsjd !h,nbb!r @ !
rn$uk iosr bno \or
h t d l ] q l a D ' 8 d r c J d ' ( e ! o
Nqlzi*i A mrii lrF:) mlsrigrd$crhlz h8!da4 a n 6 d Ldiurq hog!
{uyunsn$sLsese4sdhltdhd&r aiddom&erkntrr mcgrgw .wb& D4r; e d{ (z
nier . :@o d nrA* d ros {okb!
oqrcr4hi trnd* bn$s. l rerrtrdr. d
si.c rcL, aGrrd kuore *Li
re[oldshiluftkl|.np|dkh|qli$d&tFiditrk
Mi y krr q (50 og!3) rh'6e, I hj
) ) tut4dhbE.L'?d'd \is:d, t&.qnud8i, q.sddi
Gr) adhi! Dr! I s !,!r d
vohh) A{Drcbcq6ft ({oD hnrumedr,.^) esrdg.€ 4ied(:5 Hz
ddok rcsrdfrq rchmp 60 (,ror harunstri cA) | Ard4.:o
i n p | l i d 6 ] i [ ! | d h z c !
gflnii6 Lord€ (6 ,$rarr M de
$d&D rceGiur a c^i prMNsir rdegeD* derci?b oshiierkn4i hld
;"
cAr s cAr Dnsi,ntn id{q* d.kLrutu d6sii wi sd I rcsrdiuk o! d ) ' . l f
stur, Njd txdiur a *da*d
54]d*dbwbbigowtralLtdoLg@6ailJlu*
r4rdtu ,0 40 Fda qis/B tr r, nljr !
r ;n
e . " . ! i o , o ( r ! ) ! ! i L ! , i o ! d .
(4 ̂ P) hedur. mid ! nrcrcsh$r
iurxr a '!^r ha @d knr$a r
lndr t( l.o.k! L0 nM r[A n 'ukr
. j i ! ! P r . r , i . j
E0dr I(1. rerli, r!. !. LoD lNr +^rj lhiads 20 rdE 1o Nn,! nsih
vtrlsi dok L+. fr' Fdobrln 1 e irtrid. 6! lrji s'e
4 i i i r ( r ' n , r . '
s{&4 iq8) Am*;&krs b$ nNgiudur, bly E sdhss nrogia
kdln o o! 0qlq) arsdi$e 0 r
(r'Bs. pH r 4) u rciib! hLRdr hruh
F6e6ri mr!!l
okd!rini lrutr(Nm D rrr rr
!l; j!4riD e16 itre. !
niruoeoieidu!(i i000)
€gs rgc r. D4d e' roE.od,
t L L ' P " r '
D4d 7 !0 qrlg
i , d , L , , d - ( 6 . ) r - - , 1 . i . 5 , .
(L x) otrbr LabqdqLca) ?ddd G
i kooos{r6, Ds4r 100e%)ft rv6'rdr Hror (0 004%) lor
3 t x.1'k\t41q 6 ri\IJ\t^
!i!g!ds eth ronolrD+4i $ NN rsdn
t3 s@ardtr ) 3 5..rlqi1t\rilun+t!\dJ4tlt
rcig hiiidiut, n4d u rs$i ? ur
(rr() ddiM rr!{ , 6 r F@ e
t r I ntr'er1 /&r\dookk'Et e&b!
,{h! i f$bi!!e (e?h$ d4ni bnaL 4 en.|d lRr.lrddruL
(NqtuLli[ 2 0. NrooBr ghic d b! , irrni( v r) [nn!i &
irq, ad& nee ^ D qogh ftr4!
nrcgrierer viu r4ju feshhro/_lur r
o 0 . , i ) i f
i{.n4d i izi6kL r4q $
r4i e & !r! D {ei sei' rn6djc 4
I o r ' ) " ! . 1
ntr4rsei,* ei,rsr Dgrohi rdl.
ahtur D trog hftL e*l.ltri !s!
mgF$ Gna, i ddd ie 4.trd. n r
! rso k 6tddr resir a' hi &, bs ,ar {r olrrrrii A mnrcg i$nck
' ' . , . . i ! " . o e - i
nooE i4rdi siak ri 6n6d!tr Dd'faooi 1i orAr (r4Lirk6' r l
I
q a L m f . , r n r r { [ ) a m c l g r
(5irj) nqLs ntui. uuFi €drisbL
r ! ):'tt4r6ttrt.tk'!4. tud^ ^tv4iura
A? oldln ri1.je&s v4nlihi s i!
en 1 oR Fi, ! ! rc'! G$dddr {
, . f L ( 8 o " " ,
d 0,q) !d'd ,.rur. e.ror 'rc
I i MLti4tb 1@knt Qpttdti "tktr rpdo,n;s dhlebqr
ih6 rrje! ddan!ru i d' t !'c r{
r ,
h4@inpr qhhrryi fshi u 6 .!ked{ ue stnho wdkk iLq !
rcddkd D4sLoin cregLulr4 ( L din,^d.,, d^. ^ D)
o r,$ fl redddi irdrtrlD
kk,h|id('L 'sru')
dar E !r' iF, mercs scnlr simi
!d. (r xbo B 6 D. r itrc, LL. i0 irtkd) A ncosrisrjr4 ,uhromo
fitrstrd ftdc kzdi ( iro D) t oa 4 oftn ndLd, ofior dh6an !
rd&Mq ,\rdjda b,izd&iaad '5 ntqd.rik i npi!3 6.n4d t?
a-
. ' . )
:r*:.
r,\l -
'u ,t.i rfi'r' i:. t.l.:. 'r,'
' ' . , t ! ' t i
. ( , , . i . ' A
1, ,,1-i:
,,,tl.r,
. . , . i \ i :" .. 1:rt,' :
F - : : r '
: ' ' : ' ' .
a o , . r , r i . . - I . i | \
n46edddk (: dn. L, f!hr) A? irgrt,
nhbho s.irz k!p$, (LL ritL40 E3r4 rr'dni a Dodboslidhz6
harc$n mo&dre,d+bo,.uL r t hr$u 6d\ r dd
.
. "
t ) MEl ashq 't&di 4(Jaii tur hNknr)4\ akhttun
& a arcris @ms 5 kadidi r rscG
g 6irr doa 0ag4 rch ( r,
,ibLtd) sok &tyir ni.,os Aejld iniud 0 cAL in6e\ i cf-cAl
i 6i[sb (r cbB Ac) Aroft
i !j"b. .L r'
4aqs !d, (r i6rbi) k !hnd,
i r e l i " : : r ' ' ; n
, . r " p r . , e . . " ] t r . 4 j . ! i i o J . -
. .
A -; . ' . . ,1 1' ' '-'i:-1'1 ' r i - l . - .. , l : " ' . ,
r..: - r
s, : ' ..
. : i , " i '
:-, s
F
s
g :
d A D ' r c ! . ! * \ * d r I E E l + i
41ikL&dt5in*€DD*t4rddetr
e d n u n l m q d L z 6 i ] r t a (
nlgNbb (P<0 6) &d6 dn*d nids! I rotrd io? cen (: da, D d E,
b (P<0 05) i, i bdrcn dkb(re
(ir !$iuo ^ is;sr<aLdbr+kd o
dm4di;oiisu 6 o .^r .t6 ruo
(r0 Ls I rilria,' r c J ! " i t r ' r r - .
ej'd (r 14. r 6 G) A iiPp{erps
er4kL(| ribrer)
t t Mrn\Liluk4t ryre.Jrtr' rhr rq|ktnii dLdtEL
h6tus& da e tu6 r!!! dda roa i
deeb' (r bR e), ! cr-.a rcgdLgqrck io*r -46d ( rnr c).slaseDids I Nse, anh'!5i
aegb{ iiu! e ro, D) Az ox {!ii41 idhtr ! niqlgh$jr*d 1 ,odrw lrth,tlda h @hknaDd
*dal ft,q|nd* rdo ?ir$m rc r* 'e s a .Ar i{roir ad'udll
vhmir a h[s ar a vnN$n dlg hhrr o $c ^.) ^ caL rig! rf
cl r. d' O s4 D, nlirqt
."n
" : ' i . .dd1
, | - r . . '
: :+iFq4' 't".
*' '-r.,ji!{'
B '."1-
t t M'u asra &k'i ' lptdrt.iwt'p,,Dtq ntd anddtu'
s a i o s x | ' i ' l D h r c d n E ] ' 4 h i u * ! i
nirclhsnek jdqrdc
' ! j d ' o r - - " n d "
(ox 13. or 6 6
Etr$ql idegd (6 dn. A A J
irare a ss dqhr5 h[sr 16 ibn c r) 6i* dk,&q hos ds'6rrq , , 3 r ) . 4 4 - .
nqdtu$ude odk&D kddr (7 alin.
{ t { i
!I
0rybildultkhadllrorn&d;!ft
'l)$&hedu! ! r 6mL eEDHn! hry
f,lo^rbdnj Lar. ( ns$bb inrh!
I
!6 viF riM60 (P< 0 0t ,i lFbb
u16ijetr,* A Nmrrfrid dLr$
eEhlrs r$ia ! 4rLsbb kr4&r h$dr{ 06?o
l1
v i k $ g s r e k , r . b 4 e i t o l r s r j
rkrr mr*dj! &dnnilud1e16.lhl4Etr!soF'hol
aiI
It
3 t az !ta.h6 hrtreda. o y@pitu beiul
p s p l ' , i d e ' " e n n "
. a - . . i ( , ) p s r . . d r o .
es 60 didr&d akrdr frqlgrusq4
dt'd&Li ndii s rcqlil ls tdbD ( L2 sE, c.D e skjw&! edhn.rN
reerLgd'd6hyhn(rcglirq|c
Ea'bs nq €g.v&c jdLln, rr
on@gh*Md6lorrfuer1r do ()
miod* dinru rs6sFr* A rodrfn* i!s&L orit'6i lprrL. & NftLdsi'uk ! olsrn
ohehEn*iEmLir.nddL(ir qE)
i1:''�? i t
lh;rl
T
-:f
P, ."
1 fffi#i#tw,
6 e dGrcrddir4Pritu\ tlibdi (r ? rsru.
sd ^; u) aFNd fn(sLhq*d cer
L . v ! ' i \ s '
hi[$f (i4 $a, c 4 F) his! msebb ]
i:i:is ,
t;:-'u;* " '
D
E -:.'
- 4. " +
d{rc'ir6ahi u[o?*rDz rn4ois rnsldLjuk.
rG D). o4i €rie$ Negebdr. sok 6deo i
@xt{idid o4siorbtr (16 ibE..). A ru4{irli slir r srd(
hs $ors & bt8 vo ,. nis na*tr
I
l
:f-r.:
rned'tit $q B) dE a tsrc or $q. c) rih I hslqnr5Eh ! rLdod. ^ herfeiedlbb &orE! a
' i ' f i i ! i r ' r " ' i
r a, B
t ,
t a , ;
. ,.t
{
- . , h . - , j .
^ @xisofuci& kE6D a niqoeriejtk Dobldeirj, d 6sd.
g\rirrn4 ([ ibn)
l
t'11'
i i
I
l li Itr'i
sdEeo e h sN i€ diadb !!3i3 fts
A d itrrb$lcr *'irn on I r /M k
A m qurr\st4 iqo r ir1ih, d4? d
rsriao H! ! kwln
ilii Lqr6lm n! lqihr d{!6{ irdwL i
D lrgLbri,er c r.6d! b! ^zirea6rdevds
!n!d!rd!p!^!uilidLqdo4ioLiral ftri4o
k !M ble,i&idti bie! r
iirFqtrNs rLjes
" J j ( b D ) " , . !
Mdgnftbfu'nniALn@ki|edn!t4l
.l
' :-- o ,. '^tfi,..1
".-, ': ; -' tT'R' ' - - ' . - @ i . :
, . !r-ai{}__ .l"'" ; -i":-:' g'"{R
,* , "1"i, i.;':ffSili'.'*::1'4ffR$:, i'-. l6flrn}as.!: l
t
llqordrfo rishd' { !4D!r !$[444 rujd {rs'trom ddidr
b, 1 iond ris!t*.r imPri,i rj6*
idlsnror ! ! i$nrhd!s!$ ,{!s lssdrid. naid i s4hr $N! ,
I '--
il i
i l *
tr4. c). ! .A, car 3hr Edhrn ahoman !o (dle {rnlndi djrt4
i
. i b - - 6 . o t . l
aDriiion nlgnr( Krsdbb vori&' e " . d i d " " f
lsd&! a $jbn \i avlt O{ rton
e 6D) lrdrik (I ier.
l l '
6 h{[s@{dsdc at3eiki cr i
hpjh i mrreerh rfi.cbr o]i64
N{rii6 40 Frc dan nd 'dbb $nr
' ' ' ' " ' . ' ' ' . ;
. o o i u - . c r . r p ' !" b ) o . . , , v (
trn. r) loLr r0r6trdrtr hr'i\ ^ deu,as fts rEdDiNd rdb '
p ' . ' ( 6 t . - n ! .
dhr. u 1, r ' n lnar nqd vin! e
. ; ' ; : . ,
. b."-*' i .
; - | . . : .
-4ttl t'. F . t?"
I " ' � : r . ,'a.t:|4w" n,
x nj{olrieir{ rr l irjdia Mixi { dd4
A chLdr.uDDDD (r rA) r0Nll6N
L\. e0 , !nd, jK.t. sd$q ^sr
- { -
",1'ercr I( l. lnL ridb(
n{reeiG diqua ^ sir! iddigidi
.mdr lK t. ft ru. I hipFatrN\ $ho!
i ; ^ '
.Sd'/ i . , s1$,i , t
'4
,
B \
,+? o
'D."
t?
,tF 1{
' j r tl 1
G, | f
rrkk i nPhii4[ c6 ibRBcc)
1 ' _
ld{qdd ! 4AP 000 rM) dkLod
jrriGr.r. {' kdldi{ r ENijd eoru {E(rd{l c7 rbo. B e c).
NT 6idlirl A +AP d (nr /M) idtu
0 \ r t x t . , . r i .
u er, t('1. lbi dortr
h!P4dru5 qLhdi! d! Lrj$u nea
.^i..N str dhrDsu c3 ib!. A ( B).5 ! s5 elkhbu (r3 ib!.
"', "*"' fi'iX
B
' *
g
l r
;&n&|
*
"4
It
ID ; . d i
. s ffA
I ' . . . ' j I
' L ; ' ' u i r r : i
reldr ur6 Dratde,&r caakiL6s rcsn,r$ard rel ce. 6G B .s c) ^ ddcrd ! rceid& r,
sr6 *'i!i!id (r0 dbc)
I'
, . *,6",
* :
B A5, '. E
'':i
t?
ca :-' * . '
'13rbDL
4
iid\igd (r0 rdr@o
! 1.^P orrij n [!r1ja i
'.9't)
Mukhr $nD r@r + bturi be i ncrcsri.fn* *&ti6j1 dF^
k66Lyih{!!rD G Lartjo( udFk ! o
okozd! e Nn ]tur ide$ei'psadier A nrcrcgltuljtcl 3eM', r0 rD
'irdn drd nodd4 jc!+ lr1uii
lasj!r. hrdonq*
,iqi8Fr*e uh ! miqogrisjrer(uuhnu! hos] r.r a ihorek, ond
4rtrE ! hrs!, oid u cmd' l( l
] ) ) , d r b 6 n q ( h a ^ e L L N k 4 t @
.ai. r4!) EaD,imq6q mft i
' G c i 5 e ' o i " r ' i "
l9M ^?joodje oMi, rF5 R.L| 6Ita ' |9i)
r ) t uirqtu 6r\iott A"|k|Ls
nrcogLilcn* votr* aruhkoigrc
*n4 surdcii emr n!sr4.*. rod 4y oircsrlfj, !hnd' sgy
4!grm, rlp,blr qi wr!d,! 6dd odnby!. od ql .tj.ktui)
tdkEgfigrc \ad|o"dd1 yrtr j4j
, !n4 iqrrr oprh d{z,i;nd h{sc i4lai 'dda'
r u 6 r 6 e i j ! h s d i r e ' s l o / . L i .
A mjdqriiel.er Elrodjlr ftmnd- d
hlnoid!4if?sgirk
2)s{i |4i l^j i [$n|hq444||ulLv|d|hld|!]E}6&p
ounMrk ki a !! Gt?r u (rqq{$ I i
rr moqnp$e (s nib s o'ei. s&,i+q!6fta. Neo
!64hbrH, ndylr ! nilo{risljr.r r
$ . i r . , ( \ r " " o ' :
d ) - r . " @ r F r o
(ErL.$ sisjq rer r$qr$rrsi ro)
n.ogjfaflcidL'o|!niknckko
l J a ] d 6 f , ' n - .
r " o " i d , ! , i ! r , 1 ' , ! c t
a " r $ i . . d ! a " , n s r 4 r . { ( ,
n { ' € r l N r l t i o e ! 4 i k q i h d n c g
, r c J ! " d . , i i . . o n , . '
dk iaen r hn r *E \ ! c ( r e r )<d
, . j i r r r o i ' k i
*E K ne 6 E{r5 ( r4r) moigd
,g6cg&btr i cAr 4id danircilFhe
t aLir !oL, v{$oi a qlNeiuLi
b(.i. d4 ^*u i ltr ikqd i6md*h
Nr @a!a * mGli ( Le5) L nd{rlr h
Dh$Ntgithj6kpFoje&dn's
(qr6! w4id.r d4ni
!r5 u,oq&bsi!8 (scnm. ito,
c i , ! , . . a i a ! )
evGg6{ e 1 lssi !r.dq qd*a Ls dzrn E4
, ^ r r , . , . i , - ( , .
r$i) Midh .$6q dkPdrb. r
) r " " i r
F l ! i d f t 6 | E k i P 4 h d d b ! } e
i q r u l n * , A t r i u o h r { h u r i 9 a k i !
U g u * r q ! n [ 4 r s q t l * i e i d F L ' d ? ' i j 1
. , 4 , . / . . r o i e o : d " j - .
tr sfd.kq$4 smidr es *@h,
h d i n i u s Y o m i g i u n q s e
s oG! , r$t E?
lKl I e sD tr oko&r n'osLi
. 3 , " t r i - i t s , - c . \ i .
milosrtuLjr& ! odiri
\ . i o " ! . i ' ! 6 , i !
nqjlqu p 'q6 hdr6u.i.fidi.r*$
r (rr. ), uoq i4d/n fitur, (nr d
{MrP r) {rin 6 ml$i
euir rcuredaL iE*eN* rL i E $
NlP r( (rdLn. rer. Mid! 6 nr! Fro),
r.!l!eq!!&!t!!
d4rons jch0* v.gihb
riDedDr nqejG
r[ rF,j onogrn fici.L (Mqi!r!
dh r!e, nrdi!ryir
s&hareFrnls4 Mcs kr &s4 li6d egyib f*o@L c &iorli$r tr't;r a Dn.qr a rdcidL ((ri'&, Ler
sdnir(dhq$nra tseD)
^ on@gh r1i{c! tunde i hFo* &jiEl
L o " ' o j ! . t i
& s , i F ! , - E i 1 { 1
r!, hos suoL! ! hfqri hF$ds
r) Kq^q tptiq o nEruqlh ditudoa
drgsnjei* F,rhn oha (waDef qft.. rFr) Mds egFrir a
rcogLnq* &ri@r6jdd oqgosn .
onyiG Ms e lkriii6 d6? s$sb
fe$;ge Mh&? '. ,lYilj!
dls€nek 6*c ur ! lrbrer
tsrdrk' rioaz!! n I sditrq
c4l'n6 tudftornsbhkiniqh,6!r
l ]Xdnnn,hd|^qqni4lr1aihfurcN
u ir!s.n* frrkoqd s G briia
d+dizq oial, sd4Ld @ e${r $l
a D oej arj14 ihn{qi
oro,Er* &' 5 dri!4 hd6r 6er a ( b4d6rur ui i n qogLisn*re
neg & eod tr't. i! di dr-r n qog
craMddGa (T4n * s 3$ rq: rqR d F r d D ] n , j $ | ' s q t d t l . l D ? )
€!d!c^r 6gi a(vd|qr!sA6s, r{5 ch{r6 swD lrs) Ahblr
Fknd, Liorrs4 1 irrcsr ! *f!i! o
Lti i hnrcg a lhido6 ftdeM
icbu6dtetdl.^' reeob. Aiyq nii4*(d!ao q ogLrlqrdd
!.!!iqsdi3\!l !4!ru
[ " " ' d ' . . d ' r . . . - .
dcaen* frDklidk+$ d 4dbsrrL riihhb4 d ,siee€
. " { " c r € ' ' , r d !
eird e (Btuu.s osri r01) Mld &o$d a- - ' o i - i t s ' | . " - - , i ' J .
i o n d 6 ' F
* tGdruN $ xcd^qg, Ls!
! ( ' e i I o d s i g f i j . t r D l l ! d [
Asreedb6r nrNd lrgnd h olgLiscir*{
s c t r * i t r i , : 0 o o ) A n p g r o i
flhh {rou $ m'ei Ne3 Kor{h
2 0 m ) ̂ ( b , h $ d e r
! driqir$jr &trre qi q64a En !o{r!
nrcebid r4jds.s 6 u lkLrii6 € 3F^! i! rodE,
koo!(r{i6ji qobb\ o rqr k *4!
larcnok, csi6 !r a- * 4ddb sid
r0:) E4k u qdoind auhD tri se{o/dhr6r dFstr e D rr!
!.!4[!!!i!lr!!r!!!.:!!4
niqru*ner tuec6ti6L kE*'
dri eind 1j6r t ren ,tudqes
r . . a . . 1 ( d " . "
i r0r) wdau& d ntd (:0t
&$ei, ruaiuh{ E4L E qdmiFr
wdo{LkMmq s$ I mi@gLa$j' e} rig}oi s.kry ;s syocd rqsir6 dqE
q$4d rtrcnewas; q otri€! d
nz ELaRr i, ERE NTiNyE( osszrroclAl,isa
rLsgtnahksL kiubnu( 64 i ^L
u $db{ n rdrcjli, h P dhrlr.i iri
qr . sn.r xk'ie dii.r orGr.a qo.urd dcti€ pnbuarc$, sokoo, nhgnia a iy4ini nl@gLh fn4&€ hedi
u ] q h o a a h t d | i P r c o P l 6 ' 6
ideg 6 g aqid n . d4an kdEb4
uzaisdd a nhsa q'd ar'iri.nKflrtu( bel ! n qodi riick s
nv d€ Drs\ LK t. rri!tr!
h er u id4rir*
hi$w dkdmir$kq u t( t. cmdkdy ! { 4 ' ] h y i i h c ( s r ! J . u ! t b | i
o o n s h o i s d . ! 8 j i i d . { . h l . | o ,
hlril i i i i *!rdjisd detr hosy ren *ddlora n.s u €nd, tK t"
kd4dhrur lkriila a niresh fn*Lnqsi$qr nesqrdq ! 4-e \d kirbi epi[r.irqm *,!]6 rlrjd*a a
- i!s€n* eritcplibrD r{ilhy5igd6r is
nr*i*, ld4dLo
drk dFo 6ri.hrcr ktrrir*,sq€tu!16 kn&tu(ls, !ndy* 6kor!'j*
RoD\roN EcYzi(
ndrDirtrsEK ncvio
tuer@,btdtlnhq6d^
M nRE(rzris aLApriuLsmre,ild sArir (ozlrMnsEKr.cYza{E
Ardih n. L!'ar cmo) b|!- nrcsmd(dby&hddarcdmlloEIJui
lbrMh H. sdoslh.lar ^ Mdqir
, ca c0, !.6s!D dd,. doiei,
,ibnMn ts, $-qr*. vrr A, Mdcdtu,
Az aRrr(EznssEL spcsohros f, Lo^DisKvoNAro(,
bd o ds7) (i io! Fd dNd 'u616d+ nrir d
m|Nqqhldig!{wJid'sagJ
n h l i n H , c . h . . u ' J c ] ( l ! J ) ( d r
$jdsNqwFleT'€q.Mfuign$4llPc
iedm H ka' c!
6 cy. ahdr
H, sd$ L {rs7, rwin grdr *.ht s!r! dNas
Ibdrn H, .$ c, b cy (r4o Mtr
Lqqqy A. Abrr6 4 crh o. k cy 0ry9 ae h&bnm d Dr@{
(oszdNrrryrLvA\iris
tubi s4rchLn kosqdlDd rtrlj€4i d
I Rssrch Ldqdodg !e!.ijqLr, hos
! n r i , r i o r
dqie 6Pqd ruierq idFck ruo 6
ier6 [oie$zor um!]q ! m io(
Labnbiui !€d6ra€L hogy r$dd*gd
