kuljar

i

LAPORAN PRAKTIKUM

KULTUR JARINGAN

Disusun Oleh :

Nama : Ana Isnawati

NIM : H0712019

Kelompok : 08

LABORATORIUM KULTUR JARINGAN

FAKULTAS PERTANIAN

UNIVERSITAS SEBELAS MARET

SURAKARTA

2014

ii

HALAMAN PENGESAHAN

Laporan Praktikum Kultur Jaringan ini disusun guna melengkapi tugas mata

kuliahKultur Jaringan. Laporan ini diketahui dan disahkan oleh Co-Assisten dan

Dosen Koordinator Praktikum Kultur Jaringan pada:

Hari :

Tanggal :

Disusun Oleh :

Nama : Ana Isnawati

NIM : H0712019

Kelompok : 08

Mengetahui,

Dosen Koordinator Praktikum

Kultur Jaringan, Co-Assisten,

Dr. Ir. Endang Yuniastuti, M.Si

NIP. 197006091994022001

Bunga Cahaya Permata H

NIM. H0710020

iii

KATA PENGANTAR

Puji syukur senantiasa penulis panjatkan kehadirat Allah yang telah

melimpahkan rahmat dan hidayah-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan

Laporan Praktikum Kultur Jaringan ini. Laporan Praktikum Kultur Jaringan ini

penulis buat untuk memenuhi tugas mata kuliah Kultur Jaringan di Fakultas

Pertanian Universitas Sebelas Maret Surakarta.

Dalam penyusunan laporan ini tidak terlepas dari bantuan berbagai pihak,

sehingga penulis dapat menyelesaikannya dengan baik. Untuk itu penulis selaku

penyusun mengucapkan terima kasih kepada:

1. Tim Dosen mata kuliah Kultur Jaringan Fakultas Pertanian Universitas

Sebelas Maret Surakarta.

2. Tim Co-Assisten praktikum Kultur Jaringan Fakultas Pertanian Universitas


3. Semua pihak yang telah membantu dalam penulisan laporan ini.

Penulis menyadari bahwa dalam laporan ini masih jauh dari sempurna baik

dalam pengolahan data maupun penyajiannya. Oleh karena itu, penulis sangat

mengharapkan kritik dan saran yang bersifat membangun dari pembaca demi

perbaikan penulisan laporan selanjutnya. Penulis berharap semoga laporan

praktikum ini bermanfaat bagi penulis khususnya dan seluruh pembaca pada

umumnya.

Surakarta, Mei 2014

Penulis

iv

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ......................................................................................... i

HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................... ii

KATA PENGANTAR ....................................................................................... iii

DAFTAR ISI ...................................................................................................... iv

DAFTAR TABEL ............................................................................................. vii

DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... viii

ACARA I STERILISASI ALAT, PEMBUATAN LARUTAN STOCK,

DAN PEMBUATAN MEDIA A. Pendahuluan .......................................................................... 1

1. Latar Belakang ................................................................... 1 2. Tujuan Praktikum............................................................... 2 3. Waktu dan Tempat Praktikum ........................................... 2

B. Tinjauan Pustaka .................................................................. 3 C. Alat, Bahan, dan Cara Kerja ............................................... 6

1. Alat ..................................................................................... 6 2. Bahan ................................................................................. 6 3. Cara Kerja .......................................................................... 6

D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan ................................... 9 1. Hasil Pengamatan............................................................... 9 2. Pembahasan........................................................................ 11

E. Kesimpulan dan Saran ......................................................... 16 1. Kesimpulan ........................................................................ 16 2. Saran .................................................................................. 16

DAFTAR PUSTAKA

ACARA II KULTUR UMBI (BAWANG PUTIH, BAWANG MERAH,

UMBI JALAR, DAN KENTANG)

A. Pendahuluan .......................................................................... 18 1. Latar Belakang ................................................................... 18 2. Tujuan Praktikum............................................................... 18 3. Waktu dan Tempat Praktikum ........................................... 19





DAFTAR PUSTAKA

v

ACARA III KULTUR TANAMAN KHASIAT OBAT (KENCUR,

JAHE, KUNYIT, DAN TEMULAWAK)






DAFTAR PUSTAKA

ACARA IV KULTUR TANAMAN CAM (SANSEVIERA, NANAS,

KAKTUS, DAN BUAH NAGA)






DAFTAR PUSTAKA

ACARA V SUBKULTUR ANGGREK



1. Alat ..................................................................................... 62 2. Bahan ................................................................................. 62

vi

3. Cara Kerja .......................................................................... 62 D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan ................................... 64

1. Hasil Pengamatan............................................................... 64 2. Pembahasan........................................................................ 65


DAFTAR PUSTAKA

ACARA VI AKLIMATISASI ANGGREK






DAFTAR PUSTAKA

LAMPIRAN

vii

DAFTAR TABEL

Tabel 1.1 Alat yang Digunakan dalam Pembuatan Media ............................... 9

Tabel 1.2 Prosedur Pembuatan Media ............................................................. 10

Tabel 2.1 Pengaruh BAP terhadap Pertumbuhan dan Perkembangan

Eksplan Bawang Merah (Allium cepa) ............................................ 26


Eksplan Kencur (Curcuma longa L.) ............................................... 39


Eksplan Sansivera (Trifasciata) ...................................................... 52

Tabel 5.1 Pengamatan Sub Kultur Anggrek (Dendrobium sp.) ....................... 64

Tabel 6.1 Pengamatan Aklimatisasi Anggrek (Dendrobium sp.) .................... 75

viii

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1.1 Botol Kultur ................................................................................... 9

Gambar 1.2 Bahan Pembuatan Media ............................................................... 9

Gambar 1.3 Timbangan Analitik ....................................................................... 9

Gambar 1.4 Alat-alat Pembuatan Media ........................................................... 9

Gambar 1.5 Alat Pemanas ................................................................................. 9

Gambar 1.6 Media ............................................................................................. 10

Gambar 1.7 penyiapan bahan pembuatan media .............................................. 10

Gambar 1.8 Penambahan aquades dalam larutan media ..................................... 10

Gambar 1.9 Pengukuran pH Larutan Media ...................................................... 10

Gambar 1.10 Penambahan Gula.......................................................................... 10

Gambar 1.11Media Kultur Siap Digunakan ....................................................... 10

Gambar 1.12 Media Kultur Dalam Botol Kultur ................................................ 11

Gambar 1.13 Media yang Siap Disterilisasi dengan Autoclave ......................... 11

Gambar 2.1 Eksplan Bawang Merah (Allium cepa) .......................................... 26

Gambar 3.1 Ekspan Kencur (Curcuma longa L.) .............................................. 39

Gambar 4.1 Eksplan Sansivera (Trifasciata) ..................................................... 53

Gambar 5.1 Sub Kultur Anggrek (Dendrobium sp.) ........................................ 64 Gambar 5.1 Aklimatisasi Anggrek (Dendrobium sp.) ...................................... 75

1

ACARA I

PEMBUATAN LARUTAN STOK, MEDIA KULTUR

DAN STERILISASI ALAT

A. Pendahuluan

1. Latar belakang

Kultur jaringan merupakan salah satu perbanyakan tanaman secara

vegetatif dengan cara menumbuhkan bagian-bagian tertentu dari tanaman,

seperti sel jaringan dan organ dalam kondisi yang aseptik dan secara in vitro.

Kultur jaringan juga dapat didefinisikan sebagai suatu teknik menumbuh

kembangbiakkan bagian tanaman dalam kondisi aseptik secara in vitro. Prinsip

pelaksanan kultur jaringan adalah bahan dan peralatan yang digunakan harus

dalam keadaan steril. Hal ini disebabkan apabila bahan dan peralatan tidak

steril kemungkinan besar akan terjadi kontaminasi yang berati pengulturan

gagal.

Media yang umum digunakan dalam kultur jaringan adalah medium

padat, medium semi padat dan medium cair. Keadaan fisik media akan

mempengaruhi pertumbuhan kultur, kecepatan pertumbuhan dan

diferensiasinya. Keadaan fisik media ini mempengaruhi pertumbuhan antara

lain karena efeknya terhadap osmolaritas larutan dalam media serta

ketersediaan oksigen bagi pertumbuhan eksplan yang dikulturkan.

Berbagai komposisi media kultur telah diformulasikan untuk

mengoptimalkan pertumbuhan dan perkembangan tanaman yang dikulturkan.

Unsur-unsur yang dibutuhkan pada media kultur jaringan antara lain seperti

unsur mikro, unsur makro, gula, vitamin, zat pengatur tumbuh, dan agar-agar.

Media yang digunakan pada praktikum ini adalah media MS (Murashige and

Skoog) dan SK (Sub Kultur). Media ini mempunyai konsentrasi yang tepat

untuk semua jenis eksplan. Media yang sudah jadi ditempatkan pada tabung

reaksi atau botol-botol kaca. Media dan peralatan yang digunakan harus

2

disterilkan dengan cara memanaskannya dengan autoklaf. Dilakukannya

praktikum ini maka dapat kita ketahui macam sterilisasi dalam kultur jaringan ,

bagaimana prosedur sterilisasi peralatan tanam dan langkah-langkah membuat

media.

2. Tujuan Praktikum

Tujuan praktikum acara sterilisasi alat dan pembuatan media kultur

adalah:

a. Mengetahui macam sterilisasi dalam kultur jaringan

b. Mengetahui prosedur sterilisasi alat-alat penanaman

c. Mengetahui langkah-langkah dalam pembuatan media kultur jaringan

3. Waktu dan Tempat Praktikum

Praktikum acara I Pembuatan Larutan Stok, Media Kultur dan

Sterilisasi Alat ini dilaksanakan pada hari Selasa tanggal 11 Maret 2014 pukul

08.00 WIB, bertempat di Laboratorium Kultur Jaringan, Fakultas Pertanian,

Universitas Sebelas Maret Surakarta.

3

B. Tinjauan Pustaka

Kultur Jaringan adalah teknik perbanyakan tanaman dengan cara

mengisolasi bagian tanaman seperti daun, mata tunas, serta menumbuhkan bagian-

bagian tersebut dalam media buatan secara aseptik yang kaya nutrisi dan zat

pengatur tumbuh dalam wadah tertutup yang tembus cahaya sehingga bagian

tanaman dapat memperbanyak diri dan bergenerasi menjadi tanaman lengkap.

Prinsip utamanya adalah perbanyakan tanaman dengan menggunakan bagian

vegetatif tanaman, menggunakan media buatan yang dilakukan di tempat steril.

Teknik kultur jaringan pada saat ini telah berkembang menjadi teknik

perkembangbiakan tanaman yang sangat penting pada berbagai spesies tanaman

(Iswanto 2002).

Ada tiga cara utama yang umum dipakai dalam sterilisasi yaitu dengan

penggunaan panas, menggunakan bahan kimia dan dengan cara penyaringan

(filtrasi). Bila panas digunakan bersama-sama dengan uap disebut sterilisasi panas

lembab atau sterilisasi basah. Bila tanpa kelembaban maka disebut sterilisasi panas

kering atau sterilisasi kering. Dari pihak lain, sterilisasi kimiawi dapat dilakukan

dengan menggunakan gas atau radiasi atau bahan kimiawi. Pemilihan metode

didasarkan pada sifat bahan yang akan disterilkan. Umum digunakan secara rutin

di laboratorium adalah menggunakan panas (Hadioetomo 2006).

Sterilisasi eksplan merupakan bagian yang paling sulit dalam

prosesproduksi bibit melalui kultur jaringan. Sterilisasi biasanya dilakukan

dalambeberapa tahap. Pertama tama eksplan dicuci dengan deterjen atau bahan

pencucilain, selanjutnya direndam dalam bahan-bahan sterilan baik yang bersifat

sistemik atau desinfektan. Bahan-bahan yang biasa digunakan untuk sterilisasi

antara lainclorox, kaporit atau sublimat (Yusnita 2003).

Menurut Hemawan dan Naiem (2006) media adalah tempat bagi

jaringan untuk tumbuh dan mengambil nutrisi yang mendukung kehidupan

jaringan. Media tumbuh menyediakan berbagai bahan yang diperlukan jaringan

untuk hidup dan memperbanyak dirinya. Ada dua penggolongan media tumbuh

4

yaitu media padat dan media cair. Media padat umumnya berupa padatan gel

seperti agar, nutrisi dicampurkan pada agar. Media cair adalah nutrisi yang

dilarutkan di air. Media cair dapat bersifat tenang atau dalam kondisi selalu

bergerak tergantung kebutuhan.

Pembuatan media pada prinsipnya dilakukan dengan melarutkan semua

komponen media dalam air sesuai dengan konsentrasinya pada formulasi yang

diinginkan. Namun, penimbangan satu persatu komponen media untuk setiap 4

pembuatan media kultur adalah tidak praktis dan hanya dapat dilakukan jika

jumlah zatnya cukup besar. Masalah tersebut dapat diatasi dengan pembuatan

larutan stok. Larutan stok adalah larutan berisi satu atau lebih komponen media

yang konsentrasinya lebih besar dari konsentrasi komponen tersebut dalam

formulasi media akan dibuat (Torres 2005).

Desriatin (2004) berpendapat bahwa media tanam memberikan

pengaruh yang besar terhadap keberhasilan kultur jaringan. Dalam media tanam

kultur jaringan terdapat penambahan zat pengatur tumbuh. Tanaman

membutuhkan zat pengatur tumbuh alami (fitohormon) untuk proses pertumbuhan,

yaitu zat pengatur tumbuh auksi dan sitokinin. Zat pengatur tumbuh berfungsi

merangsang pertumbuhan, misalnya pertumbuhan akar, tunas, perkecambahan dan

sebagainya. Zat pengatur tumbuh golongan auksin terdiri dari Indo Asam Asetat

(IAA), Indol Asam Butirat (IBA), Naftalen Asam Asetat (NAA), dan 2,4 D. Zat

pengatur tumbuh golongan sitokinin terdiri dari Kinetin, Zeatin, Ribosil, dan

Bensil Aminopurin (BAP). Dalam pertumbuhan jaringan, sitokinin bersamansama

dengan auksin memberikan pengaruh interaksi terhadap deferensiasi jaringan.

Komposisi auksin dan sitokinin dalam media kultur in vitro memainkan peranan

penting dalam induksi dan regenerasi kalus menjadi tunas Sedangkan konsentrasi

2 : 3 pada penelitan lain hanya mampu menginduksi kalus dan tunas pada varietas

yang berbeda. Mengacu pada penelitian tersebut, maka dilakukan penelitian

dengan berbagai konsentrasi yaitu 0 - 2,5 ppm untuk IAA dan 0 4 ppm untuk

Kinetin. Penelitian ini bertujuan mendapatkan kombinasi konsentrasi IAA dan

5

Kinetin yang efektif untuk induksi morfogenesis eksplan daun tembakau Nicotiana

tabacu

Ada beberapa jenis ZPT yang digunakan dalam kultur jaringan tanaman,

namun efisiensi dan efektivitasnya berbeda terhadap jenis tanaman yang berbeda.

Sebagai contoh, kinetin sangat efektif untuk kultur buku batang), sementara

sitokinin konsentrasi rendah dapat memacu perkembangan tunas sedangkan

konsentrasi tinggi merangsang penggandaan tunas. Auksin pada konsentrasi

rendah dapat memacu pertumbuhan akar dan pada konsentrasi tinggi dapat

merangsang pertumbuhan kalus. Dengan demikian, pengaturan zat pengatur

tumbuh di dalam media sangat menentukan terhadap keberhasilan pertumbuhan

dan perkembangan kultur. Dalam perbanyakan tanaman dibutuhkan pemilihan

perbandingan konsentrasi auksin, sitokinin dan suplemen yang tepat, karena hal ini

akan menentukan dalam derajat keberhasilan pembentukan tanaman baru

(Nurwahyuni dan Elimasni 2006).

6

C. Alat, Bahan dan Cara Kerja

1. Alat

a. Peralatan untuk menanam eksplan, meliputi :

1) Laminar Air Flow Cabinet (LAFC) lengkap lampu Bunsen yang berisi

spritus.

2) Petridish dan botol-botol kultur

3) Peralatan diseksi, yaitu pinset besar atau kecil, pisau pemes, gunting

eksplan.

b. Alat pembuatan media tanam

1) Magneitk stirer

2) Timbangan analitik

3) Pipet

4) Ph meter

5) Gelas piala

6) Botol-botol kultur

7) Plastik pp 0.3 mm

8) Karet gelang

9) Kertas label

2. Bahan

a. Gula

b. Agar-agar

c. Aqua destilata (aquadest)

d. Larutan stok terdiri atas hara makro, hara mikro, vitamin, ZPT

e. NaOH 1 N dan HCL 1 N

3. Cara Kerja

a. Membuat larutan stok

1). Larutan stok media

7

a) Menimbang bahan-bahan kimia yang telah dikalikan menjadi

beberapa kali konsentrasi, misalnya untuk unsur hara makro

dikalikan 20 dan unsur hara mikro dikalikan 100 kali konsentrasi

b) Melarutkan bahan-bahan kimia tersebut ke dalam aquadest dengan

volume tertentu, misalnya 500 ml

c) Memasukkan masing-masing larutan ke dalanm botol dan

menyimpannnya ke dalam refrigerator.

2). Larutan stok zat pengatur tumbuh

a) Menghitung kebutuhan BAP 100 ppm sebanyak 300 ml adalah

sebagai berikut : 100ppm = 100mg/l = 30 mg/0.3 l = 30 mg/300 ml

b) Melarutkan bahan dengan alkohol atau NaOH 1 N kemudian

ditambah dengan aquadest sampai 300 ml untuk BAP

c) Memasukkan masing-masing larutan tersebut ke dalam botol dan

menyimpannya ke dalam refrigerator.

b. Membuat media

1) Mengambil larutan stok sesuai denagn ukuran yang telah ditentukan dan

memasukkanya ke dalam gelas piala.

2) Mengambil larutan stok ZPT sesuai dengan perlakuan,misalnya

a) Untuk membuat media 1 L dengan konsentrasi BAP 2 ppm, maka

volume larutan stok yang diambil adalah :

V1 X M1 = V2 X M2

V1 X 100 ppm = 1000 ml x 2 ppm

V1 = 20 ml/L

3) Menambah aquadest sampai 1000 ml

4) Menambah gula sebanyak 30 gr

5) Mengatur pH dalam kisaran 6,2-6,3 dengan menambahkan beberapa tetes

NaOH unyuk menaikkan pH . Pada saat pengukuran pH larutan diaduk

dengan magnetic stirrer.

6) Menambahkan agar-agar 8 gr kemudian dididihkan

8

7) Menuangkan larutan media ke dalam botol-botol kultur kurang lebih 25

ml tiap botol

8) Menutup botol berisi larutan media dengan plastic

9) Memasukkan botol berisi media ke dalam autoklaf untuk proses sterilisasi

pada tekanan 1,5 kg/cm2 selama 45 menit.

10) Menyimpan media pada rak penyimpan media yang bertujuan untuk

mengantisipasi ada tidaknya kontaminasi pada media sehingga dapat

dicegah penggunaan media yang telah terkontaminasi pada saat

penanaman.

c. Media Penanaman

Dalam Praktikum ini media yang digunakan adalah nedia Murashige

and Skoog (MS) yang dimodifikasi dengan penambahn semisal ZPT BAP 2

ppm. Media kultur tersebut digunakan untuk penanaman 4 macam eksplan

dengan masing-masing eksplan untuk setiap mahasiswa/ praktikan.

9

D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan

1. Hasil Pengamatan

Tabel 1.1 Alat yang Digunakan dalam Pembuatan Media Gambar Langkah Kerja

Gambar 1.1 Botol Kultur

Menyiapkan botol-botol kultur

yang selanjutnya dilakukan

pencucian dengan bersih dan

dikering anginkan

Gambar 1.2 Bahan Pembuat

Media

Menyiapkan semua bahan-bahan

dalam pembuatan media yang

terdiri dari nutrisi untuk

pertumbuhan eksplan

Gambar 1.3 Timbangan analitik

Menimbang bahan-bahan yang

akan dijadikan dalam media

Gambar 1.4 Alat-Alat Pembuat

Media

Tempat untuk mencampurkan

bahan-bahan dalam tabung

erlenmeyer yang akan dijadikan

media

Gambar 1.5 Alat Pemanas

Alat yang digunakan dalam

memanaskan media sehingga

warna bahab media homogen.

Gambar 1.6 Media

Memindahkan media dari tabung

erlenmeyer ke botol kultur

jaringan

Sumber : Dokumentasi

10

Tabel.1.2 Pembuatan Media

Gambar Langkah Kerja

Gambar 1.7 Penyiapan Bahan

Pembuatan Media

Menyiapakan segala bahan yang

akan dicampur dan dibuat untuk

media eksplan

Gambar 1.8 Menambahkan

Aquadesh

Menambahkan aquadesh sampai

dengan 1000 ml

Gambar 1.9 Pengukuran pH

Dimana mengukur pH yang

sesuai dengan media yang akan

digunakan

Gambar 1.10 Penambahan Gula

pada Media

Menambah gula sebanyak 30

gram

Gambar 1.11 Media Kultur Siap

Digunakan

Media yang telah tercampur siap

digunakan

11

Gambar 1.12 Media dalam Botol

Kultur

Media yang telah siap dituangkan

di dalam botol kultur jaringan

Gambar 1.13 Media yang Siap

Disterilisasi dengan Autoclave

Media yang siap digunakan

disterilisasi dengan autoclave

selama 45 menit

Sumber : Dokumentasi

2. Pembahasan

Kultur jaringan merupakan suatu teknik isolasi bagian tanaman, seperti

jaringan, organ atau embrio, lalu dikultur pada medium buatan yang steril

sehingga bagian tanaman tersebut mampu bergenerasi dan berdiferensiasi

menjadi tanaman lengkap (Winata, 1987 dalam Zulkarnain, 2009). Pelaksanaan

kultur jaringan harus mengutamakan teknik aseptik. Semua yang ada dalam

ruangan atau yang bersangkut paut dengan pelaksanaan kultur jaringan harus

dalam keadaan steril sehingga dibutuhkan sterilisasi. Sterilisasi ini dapat

meliputi sterilisasi ruangan, sterilisasi alat, sterilisasi media, sterilisasi eksplan

dan sterilisasi praktikan.

Sterilisasi dengan uap air panas bertekanan akan menggunakan alat yang

disebut autoklaf (autoclave), untuk steriliasasi ini alat dilengkapi dengan katup

pengaman. Alat diisi dengan air kemudian bahan dimasukkan. Panaskan sampai

mendidih dan dari katup pengaman kelaur uap air dengan lancar lalu ditutup.

Suhu akan naik sampai 1210C dan biarkan selama 15 menit (untuk industry

pengalengan ada perhitungan tersendiri), lalu biarkan dingin sampai tekanan

normal dan klep pengamandibuka, cara ini akan mematikan spora dengan cara

12

penetrasi panas kedalam sel atau spora sehingga lebih cepat. Cara mana yang

dipilih tergantung bahan, biaya dan ketersediaan alat, untuk bahan yang tidak

tahan panas, maka cara diatas tidak dapat dipakai (Machmud 2008).

Proses sterilisasi pada peralatan pembuatan media maupun pada media itu

sendiri dilakukan dengan menggunakan autoklaf. Alat dan media yang

dimasukan dalam autoklaf dipanaskan pada suhu 1210 C dengan tekanan

sebesar 17.5 psi dalam batas waktu tertentu. Hal ini ditujukan untuk membunuh

berbagai mikroorganisme seperti bakteri ataupun cendawan karena pada

kondisi ini mikroorganisme tidak dapat hidup atau mati, sehingga peralatan dan

media pun menjadi steril.

Media kultur jaringan yang baik, selain dapat menyediakan semua

keperluan tanaman juga harus steril dari kontaminasi. Hal ini bertujuan agar

dapat diperoleh tanaman yang steril dari berbagai mikroorganisme penggangu,

sehingga pengulturan dapat berhasil. Media yang baik harus selalu berada

dalam pH yang optimal yaitu 5,5-5,8. Pada praktikum ini pH dijaga pada 5,8-

6,3. Pengaruh ph adalah semakin bias dipenuhi maka pertumbuhan eksplan

akan semakin baik, dipilih pH yang masam dapat memacu pertumbuhan awal

dan mematikan mikroorganisme yang mengganggu. Jika pH lebih tinggi dari

6.0, media mungkin menjadi terlalu keras dan jika pH kurang dari 5.2, agar

tidak dapat memadat.

Media yang dibuat pada saat praktikum kultur jaringan ini berupa media

MS (Murashige dan Skoog) dan SK (Sub Kultur). Pembuatan media MS

(Murashige dan Skoog) dalam 1 L menggunakan bahan gula pasir 30 gr, agar-

agar 8 gr, larutan makro 50 ml, larutan mikro 5 ml, mikro EDTA 50 ml, vitamin

50 ml dan BAP 2 ppm. Semua bahan dipanaskan diatas kompor listrik. Volume

media yang dibuat adalah 1 L, jadi ketika belum ada 1 L maka perlu ditambah

aquades sehingga mencapai 1 L. Penambahan aquades tidak akan

mempengaruhi pH media karena aquades bersifat netral. pH yang dihendaki

untuk media MS adalah 6,2 6,3. pH yang melebihi 6,3 akan diturunkan

13

dengan menetesi HCL dan apabila kurang maka perlu menetesi NaOH.

Diusahakan ketika mengukur pH agar-agar tidak dimasukan terlebih dahulu,

karena biasanya akan merusak dari alat pengukur pH itu sendiri. Bahan sudah

masuk dan dipanaskan, pH sudah sesuai dan volume sudah mencapai 1 L maka

media siap dituang kedalam botol-botol yang telah disiapkan. Media yang telah

dituang kedalam botol kemudian ditutup dan dimasukan kedalam autoklaf

selama 45 menit.

Media yang dibuat yang kedua adalah SK (Sub Kultur), dimana

komposisinya dalam 1 L berupa arang aktir 19 gr, agar-agar 7 gr, air kelapa 150

ml, jus pisang 50 gr, tiamin 1 ppm, NAA 1 ppm dan gromore 1,5 gr. Cara

pembuatannya sama dengan membuat media MS, hanya saja untuk pH media

SK 5,3 5,5. Media MS akan terlihat bening sadangkan media SK akan terlihat

hitam karena ada campuran dari arang aktif.

Sukrosa merupakan sumber karbohidrat yang biasanya digunakan dalam

media kultur. Glukosa dan fruktosa dalam beberapa hal dapat digunakan

sebagai pengganti sukrosa, dimana glukosa mempunyai efektivitas yang sama

dengan sukrosa dibandingkan dengan fruktosa. Gula pasir dalam pembuatan

media ini berfungsi sebagai sumber energy sebagai pengganti hasil fotosintesis

tanaman yang akan digunakan pada seluruh tubuh tanaman. Dalam media

kultur harus tersedia karbohidrat karena sangat sedikit sel dari jenis tanaman

yang diisolasi dapat bersifat autotropik, yaitu kemampuan menyediakan

karbohidrat sendiri melalui asimilasi CO2 selama proses fotosintesa.

Media kultur jaringan tanaman dapat dibuat padat atau semi padat, yaitu

dengan penambahan bahan pemadat berupa agar. Dibandingkan bahan pemadat

lain, agar mempunyai beberapa keuntungan, yaitu saat dicampur dengan air,

agar akan terbentuk bila dilelehkan pada suhu 60o-100

oC dan memadat pada

suhu 45oC, gel agar bersifat stabil pada suhu inkubasi, agar gel tidak bereaksi

dengan komponen dalam media dan tidak dicerna oleh ensim tanaman. Kualitas

fisik agar dalam media kultur tergantung pada konsentrasi dan merek agar yang

14

diguinakan serta pH media. Konsentrasi agar yang digunakan dalam media

kultur berkisar antara 0,5-1%, dengan catatan pH media sesuai dengan aturan.

Penggunaan arang aktif (0,8-1%) dapat mempengaruhi kepadatan agar yang

terbentuk.Kemurnian agar yang digunakan dalam media kultur juga merupakan

faktor yang penting. Agar yang mengandung garam-garam Ca, Mg, K dan Na

dapat mempengaruhi ketersediaan hara dalam media. (Gunawan 1988)

Arang aktif (activated charcoal) juga sering digunakan pada media

kultur. Beberapa hasil penelitianmenunjukkan pengaruh yang menguntungkan

dan juga dapat merugikan. Pada kultur beberapa tanaman seperti anggrek,

bawang, wortel dan tomat dapat menstimulir pertumbuhan dan diferensiasi,

tetapi pada kultur tanaman tembakau, kedelai dan teh justru akan menghambat

pertumbuhan. Pengaruh arang aktif umumnya digunakan untuk penyerapan

senyawa-senyawa penghambat, penyerapan ZPT atau menggelapkan warna

media. Arang aktif dapat menstimulasi pertumbuhan sel umumnya karena

kemampuan arang aktif mengikat senyawa fenol yang bersifat toksik.

Konsentrasi arang aktif yang ditambahkan kedalam media kultur umumnya

sebanyak 0,5-3 %.

Sukrosa dalam media kultur secara cepat akan diurai menjadi fruktosa

dan glukosa. Glukosa adalah yang pertama digunakan oleh sel, diikuti oleh

fruktosa. Saat media disterilisasi dengan autoclave, sebagian sukrosa akan

mengalami hidrolisa. Apabila sukrosa yang diautoklave ada bersama komponen

media lain maka proses hidrolisa lebih besar. Kultur dari beberapa spesies

tanaman akan tumbuh baik pada media yang sukrosanya diautoklave

dibandingkan dengan media yang sukrosanya disterilisasi dengan filter. Hal ini

dimungkinkan akan menguntungkan sel-sel karena tresedianya glukosa dan

fruktosa.

Unsur hara mikro yang paling dibutuhkan untuk pertumbuhan sel dan

jaringan tanaman mencangkup besi (Fe), mangan (Mn), seng (Zn), boron (B),

terusi (Cu) dan molibdenum (Mo). Biasanya penambahan vitamin-vitamin

15

tersebut ke dalam media dilakukan apabila konsentrasi thiamin dianggap di

bawah taraf yang diinginkan atau apabila jumlah populasi sel-sel yang tumbuh

masih rendah. Hara makro terdiri dari enam unsur utama yang dibutuhkan

untuk pertumbuhan sel dan jaringan tanaman, yaitu: nitrogen (N), fosfor (P),

kalium (K), kalsium (Ca), magnesium (Mg) dan sulfur (S). Media kultur harus

mengandung sedikitnya 25-60 mM nitrogen anorganik untuk pertumbuhan sel

tanaman. Sel-sel tanaman mungkin dapat tumbuh pada sumber N dari nitrat

saja, tetapi diketahui bahwa pertumbuhan yang lebih baik adalah apabila

mengandung nitrat dan amonium. Nitrat yang disediakan umumnya berkisar

25-40 mM, konsentrasi amonium berkisar antara 2-20 mM. Akan tetapi untuk

beberapa spesies tanaman konsentrasi amonium > 8 mM akan menghambat

pertumbuhan sel. Sel-sel dapat tumbuh dalam media kultur yang hanya

mengandung amonium sebagai sumber nitrogen jika satu atau lebih terdapat

asam-asam yang terlibat dalam siklus TCA (seperti sitrat, suksinat, atau malat)

juga terdapat dalam media pada konsentrasi sekitar 10 mM. Apabila nitrat dan

amonium sebagai sumber nitrogen digunakan bersama dalam media maka ion-

ion amonium akan digunakan lebih cepat dibandingkan dengan ion-ion nitrat.

Kalium dibutuhkan untuk pertumbuhan sel bagi sebagian besar spesies

tanaman. Umumnya media mengandung kalium (dalam bentuk nitrat atau

klorida) pada konsentrasi 20-30 mM. Konsentrasi optimum untuk unsur P, Mg,

S dan Ca berkisar antara 1-3 mM. Konsentasi yang lebih tinggi dari hara-hara

tersebut mungkin diperlukan jika terjadi defisiensi dari hara yang lain.

16

E. Kesimpulan dan Saran

1. Kesimpulan

Berdasarkan pengmatan dan pelaksanaan praktikum dapat disimpulkan :

a. Indikator keberhasilan dalam pembuatan media kultur jaringan tanaman

yang baik adalah tidak adanya kontaminan pada media.

b. Sterilisasi pada kultur jaringan berupa sterilisasi ruangan, sterilisasi alat,

sterilisasi media dan sterilisasi eksplan.

c. Praktikum ini membuat media dalam dua macam yaitu MS (Murashige dan

Skoog) dan SK (Sub Kultur).

2. Saran

Saran yang dapat praktikan berikan dengan adanya praktikum sterilisasi

alat, pembuatan larutan stock dan pembuatan media ini sebaiknya pengamatan

dilakukan tidak hanya terhadap tingkat kekontaman media, tapi dapat pula

ditambahkan dengan bentuk media yang dibuat.

17

DAFTAR PUSTAKA

Desriatin NL 2004. Pengaruh Kombinasi Zat Pengatur Tumbuh Iaa Dan Kinetin

Terhadap Morfogenesis Pada Kultur In Vitro Tanaman Tembakau

(Nicotiana tabacum L. var. Prancak-95).Jurnal Jaringan Tembakau. Vol.

11 (7):15-22.

Gunawan LW 1988. Teknik Kultur Jaringan Tumbuhan. Laboratorium Kultur

Jaringan PAU Bioteknologi. Institut Pertanian Bogor. Bogor.

Hadioetomo PS 2006. Mikrobia Dasar Dalam Praktek, Teknik dan Prosedur Dasar

Laboratorium. Jakarta: Gramedia.

Hemawan TN 2006. Pengaruh Jenis Media dan Konsentrasi Zat Pengatur Tumbuh

Terhadap Perakaran pada Kultur Jaringan Cendana (Santalum album

Linn.). Jurnal Agrosains. Vol 19 (2) : 103-109.

Iswanto H 2002. Petunjuk Perawatan Anggrek. Jakarta: AgroMedia Pustaka.

Machmud M 2008. Teknik Penyimpanan dan Pemeliharaan Mikroba. Balai Penelitian

Bioteknologi Tanaman Pangan, Bogor.

http://anekaplanta.wordpress.com/2008 /03/02/teknik-penyimpanan-dan-

pemeliharaan-mikroba/. Diakses pada tanggal 16 April 2014.

Nurwahyuni, Isnaini, Elimasni 2006. Pertumbuhan Dan Perkembangan Kultur

Jaringan Kemenyan Sumatrana (Styrax Benzoin Dryander). Jurnal

Biologi Sumatera. Vol. 1(2):26-33.

Torres KC 2005. Tissue Culture techniques for Horticultural Crops. New York: Von

Hostrand Reinheld.

Yusnita 2003. Kultur Jaringan: Cara Memperbanyak Tanaman Secara Efisien. Agro

Media Pustaka, Jakarta.

18

ACARA II

KULTUR UMBI

(BAWANG MERAH,BAWNG PUTIH, UBI JALAR, KENTANG)

A. Pendahuluan

1. Latar Belakang

Kultur umbi adalah istilah untuk mengulturkan tanaman-tanaman yang

akan diperbanyak dengan bagian umbinya. Umbi ini dapat berupa bawang

merah, bawang putih, ubi jalar dan kentang. Umumnya bawang merah dan

bawang putih di perbanyak dengan menggunakan umbinya, akan tetapi

pemakaian bibit secara vegetatif yang terus menerus akan menurunkan kualitas

dan hasil.

Tanaman kentang dan ubi jalar merupakan tanaman penghasil karbohidrat

cukup tinggi. Kandungan karbohidrat yang cukup tinggi ini menjadi alassan

mengapa di Indonesia banyak digunakan sebagai bahan makanan pokok

maupun makanan alternatif. Ubi jalar juga tidak hanya sebagai bahan pangan

melainkan dapat diolah menjadi bahan industry dan makan ternak.

Pengulturan umbi ini memiliki kelebihan yaitu mendapatkan hasil yang

sama dengan iduknya, sehingga kualitas tetap terjaga. Mendapatkan hasil dalam

jumlah yang lebih banyak. Tentunya untuk mencapai itu semua perlu dilakukan

pengontrolan lingkungan agar tetap steril. Memelihara bagian tanaman tersebut

agar selalu dalam kondisi steril. Prinsip kultur jaringan perlu diterapkan dalam

pelaksanan praktikum ini, sehingga dapat meminimalisir kegagalan akibat

kontaminasi.

2. Tujuan Praktikum

Tujuan yang diharapakan dalam praktikum ini adalah :

a. Mengetahui cara sterilisasi dari kultur umbi

b. Mempelajari cara penanaman kultur umbi

c. Mengetahui pengaruh media terhadap kultur umbi

18

19


Praktikum acara kultur umbi (bawang merah, bawang putih, umbi jalar,

dan kentang) pada hari Selasa, 25 Maret 2014 pukul 07.30 WIB yang bertempat

di Laboratorium Kultur Jaringan Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret

Surakarta.

20

B. Tinjauan Pustaka

Sebelum melakukan kultur jaringan untuk suatu tanaman, kegiatan

yang pertama harus dilakukan adalah memilih bahan induk yang akan

diperbanyak. Tanaman tersebut harus jelas jenis, spesies, dan varietasnya serta

harus sehat dan bebas dari hama dan penyakit. Tanaman indukan sumber

eksplan tersebut harus dikondisikan dan dipersiapkan secara khusus di rumah

kaca atau greenhouse agar eksplan yang akan dikulturkan sehat dan dapat

tumbuh baik serta bebas dari sumber kontaminan pada waktu dikulturkan

secara in-vitro (Andini 2001).

Bahan tanam yang digunakan dalam kultur jaringan dapat mengambil

dari bagian tanaman baik berupa organ, jaringan, sel ataupun protoplasma dan

selanjutnya bagian tanaman tersebut dikulturkan pada media buatan yang

dalam kondisi lingkungan yang steril dan terkendali (Basri 2004). Bahan

tanam umbi dapat berasal dari tanaman atau umbi bawang merah. Budidaya

bawang merah dengan teknik in viltro ternyata memiliki beberapa kelebihan

diantaranya pelaksanaan kultur jaringan tidak tergantung dengan musim,

hanya menggunakan sebagian kecil dari tanaman, sama dengan induknyadan

dapat memenuhi dalam kebutuhan yang besar. Kultur bawang merah juga

harus memperhatikan prinsip-prinsip kultur jaringan yakni dalam mengisolasi

baguian tanaman harus dilakukan secara asepti. Memelihara bagian tanaman

tersebut agar selalu dalam kondisi yang steril (Karjadi 2008).

Bawang merah merupakan salah satu komoditas sayuran unggulan yang

sejak lama telah diusahakan oleh petani secara intensif. Komoditas sayuran ini

termasuk ke dalam kelompok rempah tidak bersubstitusi yang berfungsi

sebagai bumbu penyedap makanan serta bahan obat tradisional. Bawang

merah (Allium cepa, grup Aggregatum) merupakan komoditas holtikultura

yang sudah sangat dikenal oleh masyarakat Indonesia. Tanaman ini umumnya

ditanam dua kali dalam satu tahun, meskipun ada yang bisa ditanam

sepanjang tahun (Rabinowitch dan Currah 2002)

21

Umbi bawang putih ada di pangkal tanaman, tepat di atas pokok

rudimeternya dan berada di dalam tanah. Tiap umbi terdiri dari siung-siung

kecil, siung ini terbentuk dari tunas-tunas diantaraa daun-daun muda dekat

pusat tajuk. Pada waktu tanaman bawang putih tumbuh, dari tunas-tunas

tersebut akan terbentuk siung. Siung ini terdiri dari dua bagian yaitu dua helai

daun dewasa dan sebuah tunas vegetattif. Salah satu dari dari dua helai daun

tersebut, yaitu daun dewasa yang terletak disebelah luar, berfungsi sebagai

daun pelindung berbentuk silindris dan berlubang kecil di pucuknya. Daun

pelindung ini menjadi tipis, kering, kuat dan berfungsi sebagai pelindung bagi

sehelai daun dan tunas vegetatif sebelah dalamnya, kemudian siung-siung

tersebut dilapisi selaput tipis yang kuat dan kering sehingga membentuk umbi

yang lebih besar, yang merupakan gabungan dari banyak siung. Siung-siung

yang membentuk umbi ini berkisar 13-13 buah (Singgih W 2008). Bawang

putih mengandung minyak atsiri yang sangat mudah menguap di udara bebas.

Minyak atsiri dari senyawa ini diduga mempunyai kemampuan sebagai

antibakteri dan antiseptik. Alisin merupakan zat aktif yang mempunyai daya

yang cukup ampuh (Purwaningsi 2005).

Menurut Suprapti (2003), tanaman ubi jalar memiliki ciri-ciri susunan

tubuh utama terdiri atas batang, daun, bunga, buah, biji, dan umbi. Batang

tanaman berbentuk bulat, tidak berkayu, dan berbuku-buku. Tipe

pertumbuhan tegak dan merambat atau menjalar. Panjang batang tipe tegak: 1

m 2 m, sedangkan tipe merambat: 2 m- 3m.

Menurut Juanda dan Cahyono (2000), berdasarkan warna ubi jalar

dibedakan menjadi beberapa golongan yaitu ubi jalar putih, yakni jenis ubi

jalar yang dagingnya berwarna putih. Ubi jalar kuning, yakni jenis ubi jalar

yang memiliki daging umbi berwarna, kuning, kuning muda, atau kekuning-

kuningan. Ubi jalar orange, yakni ubi jalar dengan warna daging berwarna

orange. Ubi jalar ungu, yakni jenis ubi jalar yang memiliki daging berwarna

ungu hingga ungu muda.

22

Kentang merupakan tanaman yang berbentuk semak atau herba, dengan

susunan utama terdiri atas stolon, umbi, batang, daun, bunga, buah dan biji

serta akar. Stolon merupakan tunas lateral yang tumbuh dari ketiak daun di

bawah permukaan tanah stolon tumbuh memanjang dan melengkung di

bagian ujungnya, kemudian membesar dan membengkak untuk membentuk

umbi sebagai tempat menyimpan cadangan makanan. Batang tanaman

kentang berbentuk bulat dan persegi, berbuku-buku dan berongga dengan

pertumbuhan batang tegak, menyebar, atau menjalar. Batang tanaman kentang

di atas permukaan tanah berwarna hijau, hijau kemerahan atau hijau keunguan

(Setiadi 2009).

23

C. Alat , Bahan dan Cara kerja

1. Alat

a. Pisau Scapel

b. Petridish

c. Botol Kultur Kosong

d. Bunsen

e. Sprayer

f. Pinset

g. LAF

h. Plastik Wrap

i. Karet Gelang

j. Tissue

2. Bahan

a. Eksplan : bawang merah (Allium cepa)

b. Media Kultur

c. Alkohol 70%

d. Aquadesh Steril

e. Spirtus

f. Chlorox (Sunclin)

3. Cara Kerja

a. Persiapan bahan tanam ubi jalar dan kentang

1) Menyemai semua bahan tanam kentang dan ubi jalar hingga

tumbuh tunas

b. Sterilisasi ubi jalar dan kentang

1) Mengambil tunas dengan mengikutsertakan sedikit daging buah

2) Potong kentang dan ubi jalar hingga setinggi 6 cm

3) Mencuci tunas dengan air mengalir hingga bersih

4) Memasukkan kembali ke dalam botol kosong lainnya lalu isi

aquadesh diulang sebanyak 3 kali atau sampai bersih

24

c. Penanaman kentang dan ubi jalar

1) Menyiapkan alat-alat yang akan digunakan serta membersihkan

LAF

2) Eksplan yang telah disterilkan kemudian diletakkan di dalam LAF

3) Mengambil eksplan lalu memasukkan ke dlam clorox selama 6-8

menit

4) Mengangkat lalu diletakkan pada botol kosong dan dipindahkan

satu persatu pada petridish

5) Memotong tunas hingga 2,5 cm dan tetap mengikutsertakan

daging buah di awal

6) Mencelupkan tunas pada larutan spirtus lalu dibakar

7) Membuka botol kultur berisi media lalu dibersihkan

8) Kemudian menanam ekspan pada media di dalam botol kultur

tutup kembali lalu dibungkus dengan plastik wrap dan beri label

d. Persiapan bahan tanam bawang merah dan bawang putih

1) Mengupas lapisan kulit terluar dari bawang putih dan merah

2) Mencuci bersih bawang putih dan merah

3) Membilas dengan aquadesh sebanyak dua kali

e. Sterilisasi ekspan bawang merah dan bawang putih

1) Memindahkan bawnag putih ke dalam aquadesh steril yang sudah

disediakan di dlam LAF

2) Merendam eksplan dalam larutan dilanjutkan dengan chlorox

5,25% selama 6 menit

3) Membilas ekspan dengan bersih

f. Penanaman eksplan bawang merah dan bawang putih

1) Menyiapkan alat-alat yang akan digunakan serta membersihkan

LAF

2) Eksplan yang telah disterilkan kemudian diletakkan di dalam LAF

25

3) Mengambil eksplan dari umbi bawang merah dan bawang putih

dan dikupas lapisan pertama dengan menggunakan pisau scapel

4) Mencelupkan eksplan ke dalam spirtus lalu diapi-apikan

5) Mengupas lapisan bawang selanjutnya

6) Mencelupkan eksplan ke dalam spirtus kemudia diapi-apikan

7) Memotong eksplan 1/3 bagian dari umbi

8) Menanam eksplan yang telah dipotong ke dlam botol kultur berisi

media yang telah dibersihkan sebelumnya

9) Menutup botol dengan menggunakan plastik dan diikat dengan

karet lali diberi wrap dan label

g. Pemeliharaan bahan tanam umbi

1) Menempatkan botol media berisi ekspan di rak kultur

2) Lingkungan di luar botol dijaga suhu, kelembapan, dan cahayanya

3) Melakukan penyemprotan botol kultur denga spirtus 2 hari sekali

untuk mencegah kontaminasi

h. Pengamatan bahan tanam umbi selama 5 minggu yang diamati

1) Saat muncul akar, tunas, daun dan kalus (HST) diamati setiap hari

2) Jumlah akar, tunas dan daun diamati 1 minggu sekali

3) Mendeskripsikan tunas (tinggi tunas) dilakukan pada akhir

pengamatan

4) Presentase keberhasilan dilakukan pada akhir pengamatan

26


1. Hasil Pengamatan

Tabel 2.1 Pengaruh BAP terhadap Pertumbuhan dan Perkembangan Eksplan

Bawang Merah (Allium cepa)

Eks

plan

Tang

gal

Saat Muncul (HST) Jumlah Keter

angan Akar Tuna

s

Dau

n Kalus Akar

Tun

as

Dau

n

Baw

ang

mer

ah

3-4-

2014 - - - - - - -

Konta

minas

i

Jamur

4-4-

2014 - - - - - - -

Konta

minas

i

Jamur

8-4-

204 - - - - - - -

Konta

minas

i

Jamur

Sumber: Logbook

Gambar 2.1 Eksplan Bawang Merah (Allium cepa)

2. Pembahasan

Bahan tanam yang digunakan dalam kultur jaringan dapat mengambil dari

bagian tanaman baik berupa organ, jaringan, sel ataupun protoplasma,

27

praktikum ini menggunakan ekplan dari umbi bawang merah (Allium cepa).

Menurut Rufaida et al. (2013) pada kultur jaringan bawang merah (Allium

cepa) dapat digunakan bahan tanam berupa tunas lateral. Hal ini mengacu pada

salah satu konsep dasar kultur jaringan yaitu organ yang digunakan dalam

kultur jaringan harus mempunyai sifat totipotensi. Penggunaan tunas lateral

bawang merah bertujuan untuk mendapatkan organ yang masih bersifat

meristematik, artinya organ tersebut masih aktif membelah.

Bawang merah (Allium cepa) memiliki akar serabut dengan sistem

perakaran dangkal dan bercabang terpencar, pada kedalaman antara 15 30 cm

di dalam tanah. Memiliki batang sejati atau disebut discus yang bentuknya

seperti cakram, tipis dan pendek sebagai tempat melekat perakaran dan mata

tunas (titik tumbuh). Di bagian atas discus terbentuk batang semu dari pelepah-

pelepah daun. Batang semu yang berada di dalam tanah akan berubah bentuk

dan fungsinya menjadi umbi lapis (bulbus). Diantara kelopak bulbus terdapat

mata tunas yang dapat membentuk tanaman baru atau anakan, terutama pada

spesies bawang merah biasa. Daunnya berbentuk seperti pipa, yakni bulat kecil

memanjang antara 50 70 cm, berlubang, bagian ujungnya meruncing,

berwarna hijau muda sampai hijau tua, dan letak daun melekat pada tangkai

yang ukurannya relatif pendek. Tangkai daun keluar dari ujung tanaman (titik

tumbuh) yang panjangnya antara 30 90 cm, dan diujungnya terdapat 50 200

kuntum bunga yang tersusun melingkar (bulat) seolah berbentuk payung

(umbrella).

Tiap kuntum bunga terdiri atas 5 6 helai daun bunga yang berwarna putih, 6

benang sari berwarna hijau atau kekuning-kuningan, 1 putik dan bakal buah

berbentuk hampir segitiga.

Dalam penanaman eksplan harus dilakukan di lingkungan yang aseptic.

Syarat pertama kultur jaringan juga masih digunakan pada pelaksanaan ini yaitu

kondisi yang aseptik. Pada proses penanaman eksplan, lingkungan yang

digunakan haruslah benar-benar dalam kondisi yang aseptic. Oleh karenanya

28

penanaman biasanya dilakukan di LAF (Laminar Air Flow). Selain peralatan

yang digunakan yang perlu disterilisasi maka ruangan yang digunkan juga

harus dalam keadaan aseptic. Hal ini sesuai pendapat Rahardja (1995) yang

menyatakan, keberadaan kontaminan yang berasal dari spora maupun mikroba

lainnya sangat sulit dihindari termasuk juga di dalam ruang kultur. Untuk itu

sterilisasi ruangan juga perlu dilakukan tentunya dengan tujuan untuk

menciptakan lingkungan yang aseptic dan menghilangkan mikroba maupun

spora penyebab kontaminan.

Didalam medium yang digunakan untuk kultur jaringan mengandung zat

pengatur tumbuh. Zat pengatur tumbuh mempunyai peranan yang penting

dalam pertumbuhan dan perkembangan tanaman. Media kultur merupakan

salah satu faktor penentu keberhasilan perbanyakan tanaman secara kultur

jaringan. Berbagai komposisi media kultur telah diformulasikan untuk

mengoptimalkan pertumbuhan dan perkembangan tanaman yang dikulturkan.

Dalam media kultur jaringan diperlukan penambahan zat pengatur tumbuh

untuk mendukung pertumbuhan eksplan. Salah satu zat pengatur tumbuh yang

sering digunakan adalah zat pengatur tumbuh yang berasal dari kelompok

sitokinin. Sitokinin berpengaruh terhadap inisiasi tunas. Menurut Yusinta

(2003) jenis sitokinin yang yang paling sering dipakai adalah 6-Benzyl Amino

Purine (BAP) karena efektivitasnya tinggi.

Sitokinin (BAP) sangat penting peranannya dalam pembelahan sel dan

morfogenesis, serta memacu terjadinya pembelahan sel. Didalam tubuh

tanaman, zat pengatur tumbuh tidak bekerja sendiri-sendiri, tetapi saling

berinteraksi yang dicirikan dalam perkembangan tanaman. Perbandingan

konsentrasi antara zat pengatur tumbuh tersebut arah pertumbuhan tanaman

(Hartmann 2006).

Bedasarkan hasil pengamatan dapat dikatakan bahwa persentase

keberhasilan pada kultur umbi bawang merah (Allium cepa) ini 0%. Persentase

keberhasilan eksplan ubi jalar 0% disebabkan karena sebagian besar eksplan

29

banyak yang sudah terkontaminasi oleh jamur. Meskipun pada awalnya eksplan

tumbuh dalam keadaan kontaminasi pada akhirnya layu, kering dan mati. Hal

ini disebabkan oleh beberapa faktor yaitu media yang kurang steril dan

kelembaban di dalam botol kultur tinggi karena banyaknya uap air di dalam

botol kultur yang dapat memicu munculnya jamur. Dikarenakan pula pada saat

sterilisasi perlatan maupun tangan tidak steril. Seringnya tangan keluar dari

LAF mengakibatkan eksplan dan media dapat terkontaminasi. Dapat

disebabkan pula oleh faktor lingkungan luar berupa suhu, kelembaban dan

cahaya.

Saran agar untuk ke depannya kultur jaringan dengan eksplan bawang

merah (Allium cepa) dapat berhasil adalah dengan cara memperhatikan dalam

pemilihan eksplan, pemotongan eksplan dan pembersihan eksplan. Selain itu,

lingkungan juga harus dijaga agar tetap dalam kondisi aseptik. Ketika

penanaman hendaknya tidak terlalu banyak mengeluarkan CO2 sehingga

dibituhkan masker untuk mengurangi kontaminan. Kontaminasi biasanya

disebabkan karena faktor dari luar (lingkungan) yaitu pada saat pembuatan

media sampai pada pemeliharaan eksplan.

30


1. Kesimpulan

Dari praktikum Kultur jaringan umbi dapat disimpulkan bahwa :

a. Pada proses penanaman eksplan, lingkungan yang digunakan haruslah

benar-benar dalam kondisi yang aseptic hal ini bertujuan untuk

menghindari adanya kontaminasi.

b. Benzyl AminoPurine (BAP) merupakan zat pengatur tumbuh yang berasal

dari kelompok sitokinin yang berpengaruh terhadap inisiasi tunas.

c. Penyebab terjadinya kontaminasi diakibatkan karena kesalahan pada saat

penanaman, saat sterilisasi media dan eksplan atau bahkan pada saat

pembuatan media.

d. Persentase keberhasilan dari kultur jaringan pada bawang merah (Allium

cepa) adalah 0%.

2. Saran

Saran yang dapat diberikan untuk praktikum ini adalah sterilisasi alat,

bahan dan kebersihan laboratorium perlu diperhatikan lagi untuk mencegah

resiko kontaminasi dan praktikan sebaiknya lebih menjaga kesterilan alat

maupun lingkungan serta kegiatan selama proses kultur jaringan untuk

mencegah risiko ada kontaminasi.

31

DAFTAR PUSTAKA

Andini L 2001. Cara memperbanyak Tanaman Secara Efisien. Jakarta: Agromedia

Pustaka

Basri Z 2004. Kultur Jaringan Tanaman. Universitas Tadulako Press, Palu.

Gunaeni N, Karjadi AK 2008. Kultur meristem dan antiviral ribavirin pada tanaman

kentang. J. Agrivigor.7(2): 105-112.

Hartmann H T 2006. Plant Propagation Principles and Practices. New Jersey:

Prientice Hall Inc.

Juanda D, Cahyono B 2000. Ubi jalar. Budidaya dan analisis usaha tani. Kanisius. 82

hal.

Purwanti S, Mutia, Widhyari, Winarsih 2008. Kajian Efektifitas Kunyit, Bawang

Putih dan Mineral, Zink Terhadap Performa, Kolestrol Karkas dan Status

Kesehatan Broiler. Prosiding Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan

Veteriner Inovasi Teknologi Mendukung Pengembangan Agribisnis

Peternakan Ramah Lingkungan Bogor. Pusat Penelitian dan Pengembangan

Peternakan Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian Departemen

Pertanian. Hal: 690-695.

Rabinowitch HD, Currah L 2002. Allium Crop Science: Recent Advances. Cabi

Publishing. Shanhua Taiwan.

Rahardja PC 1995. Kultur Jaringan Teknik Perbanyakan Tanaman Secara Modern.

Bandung : Penerbit Swadaya.

Rufaida A, Waeniaty, Muslimin, Suwastika N 2013. Organogenesis Tanaman

Bawang Merah (Allium ascalonicum L.) Lokal Palu Secara In Vitro pada

Medium MS dengan Penambahan IAA dan BAP. Online Jurnal of Natural

Science 2 (2): 1-7.

Setiadi 2009. Budidaya Kentang. Penebar Swadaya. Jakarta

Singgih W 2008. Budidaya Bawang Putih, Merah, dan Bombay. Penerbit Swadaya,

Jakarta.

Suprapti L 2003. Tepung Ubi Jalar, Pembuatan, dan Pemanfaatannya. Kanisius.

Yogyakarta.

Yusnita 2004. Kultur Jaringan: Cara Memperbanyak Tanaman Secara Efisien.

Jakarta: Agromedia Pustaka.

32

ACARA III

KULTUR TANAMAN KHASIAT OBAT

(KENCUR, JAHE, KUNYIT, TEMULAWAK)

A. Pendahuluan

1. Latar Belakang

Sejak ratusan tahun yang lalu, nenek moyang bangsa kita telah terkenal

pandai meracik jamu dan obat-obatan tradisional. Beragam jenis tumbuhan,

akar-akaran, dan bahan-bahan alamiah lainnya diracik sebagai ramuan jamu

untuk menyembuhkan berbagai penyakit. Nenek moyang mendapatkan ilmu ini

dari berbagai kitab. Indonesia sendiri merupakan Negara pengekspor tanaman

biofragma yang berupa jahe, kunyit, kencur dan temulawak. Disis lain sebagai

bahan pengekspor tanaman ini juga digunakan sebagai bahan baku dalam

pembuatan obat tradisional.

Permintaan yang semakin tinggi tidak seimbang dengan jumlah atau

pasokan yang ada. Kualitas makin hari semakin menurun. Metabolit sekunder

yang di hasilkan tanaman tidak sama lagi dengan induknya. Tanaman obat ini

perlu dilakukan pembudidayaan yang serius untuk meningkatkan hasil, seperti

kultur jaringan yang mana akan meningkatkan metabolit sekunder dan yang

pasti dapat sesuai dengan induknya.

Tanaman obat merupakan tanaman budidaya rumahan yang memiliki

fungsi sebagai obat. Tanaman obat mempunyai banyak fungsi, antara lain

sarana untuk memperbaiki status gizi masyarakat, sarana untuk pelestarian

alam, sarana penyebaran gerakan penghijauan, sarana untuk pemerataan

pendapatan dan sarana keindahan. Tanaman obat yang telah dikulturkan dapat

disimpan lebih lama pada suhu yang rendah.

32

33

2. Tujuan Praktikum

Tujuan dilaksanakannya praktikum Kultur Tanaman Khasiat Obat (Kencur,

Jahe, Kunyit, Temulawak) adalah :

a. Mengetahui teknik kultur jaringan jahe, kunyit, kencur dan temulawak

b. Mengetahui pengaruh BAP dan IBA terhadap pertumbuhan dan

perkembangan eksplan jahe, kunyit, kencur dan temulawak


Praktikum acara kultur Kultur Tanaman Khasiat Obat (kencur, jahe,

kunyit, temulawak), pada hari Selasa, 25 Maret 2014 pukul 07.30 WIB yang

bertempat di Laboratorium Kultur Jaringan Fakultas Pertanian Universitas


34

B. Tinjauan Pustaka

Kencur (Kaempferia galanga L.) merupakan tanaman tropis yang banyak

tumbuh di berbagai daerah di Indonesia sebagai tanaman yang dipelihara.

Tanaman ini banyak digunakan sebagai ramuan obat tradisional dan sebagai

bumbu dalam masakan sehingga para petani banyak yang membudidayakan

tanaman kencur sebagai hasil pertanian yang diperdagangkan. Bagian dari kencur

yang diperdagangkan adalah buah akar yang ada di dalam tanah yang disebut

rimpang kencur (Barus 2009).

Kencur (Kamferia galanga L) adalah salah satu jenis temu-temuan yang

banyak dimanfaatkan oleh rumah tangga dan industri obat maupun makanan serta

minuman dan industri rokok kretek yang memiliki prospek pasar cukup baik.

Kandungan etil p-metoksisinamat (EPMS) didalam rimpang kencur menjadi

bagian yang penting didalam industri kosmetik karena bermanfaat sebagai bahan

pemutih dan juga anti eging (Rosita 2007). Menurut Nursal, 2006 senyawa-

senyawa metabolit sekunder golongan fenolik, flavanoiada, terpenoida dan minyak

atsiri yang terdapat pada ekstrak jahe diduga merupakan golongan senyawa

bioaktif yang dapat menghambat pertumbuhan bakeri.

Tanaman jahe (Zingiber officinale Rosc.) termasuk dalam

keluargatumbuhan berbunga (temu-temuan).Diantara jenis rimpang jahe, ada 2

jenis jahe yang telah dikenal secara umum, yaitu jahe merah (Zingiber officinale

var. rubrum) dan jahe putih (Zingiber officinale var. amarum). Rimpang jahe

termasuk kelas Monocotyledonae, bangsa Zingiberales, suku Zingiberaceae, marga

Zingiber. Tanaman ini sudah lama dikenal baik sebagai bumbu masak maupun

untuk pengobatan.Rimpang dan batang tanaman jahe sejak tahun 1500 telah

digunakan di dalam dunia pengobatan di beberapa negara di Asia (Gholib 2008).

Jahe merupakan tanaman berbatang semu,tinggi 30 cm sampai dengan 1m,

tegak, tidak bercabang, tersusun ataslembaran pelepah daun, berbentuk bulat,

berwarna hijau pucat dan warnapangkal batang kemerahan. Akar jahe berbentuk

bulat, ramping, berserat,berwarna putih sampai coklat terang.Tanaman ini

35

berbunga majemuk berupamalai muncul di permukaan tanah, berbentuk tongkat

atau bulat telur yangsempit, dan sangat tajam (Wardana 2002).

Kunyit merupakan tanaman dari family jahe dengan nama latin Curcuma

longa Koen atau Curcuma domestica Val. Kunyit ini dikenal luas di Indonesia

sebagai bahan pewarna dan penyedap makanan, rimpangnya sudah sejak dulu

dipakai untuk mewarnai kapas, wol, sutera, tikar, dan barang-barang kerajinan

lainnya. Senyawa utama yang terkandung dalam rimpang kunyit adalah senyawa

kurkuminoid yang memberi warna kuning pada kunyit. Kurkuminoid ini

(kebanyakan berupa kurkumin) menjadi pusat perhatian para peneliti

yangmempelajari keamanan, sifat antioksidan, antiinflamasi, efek pencegahkanker,

ditambah kemampuannya menurunkan resiko serangan jantung (Asghari G.A.

Mostajeran and M. Shebli 2009).

Kunyit merupakan jenis temu-temuan yang mengandung senyawa kimia

yaitu minyak atsiri dan senyawa kurkumin. Akar kunyit juga mengandung pati

getah yang terdiri dari kurkumin (zat berwarna kuning) turmeron, zingibern,

turmerol (minyak turmerin yang menyebabkan aroma dan wangi pada kunyit)

lemak, pati dan damar (Agusta 2000).

Kunyit (Curcuma domestica Val) merupakan salah satu tanaman obat

potensial penghasil kurkumin. Selain sebagai bahan baku obat dapat juga dipakai

sebagai bumbu dapur dan zat pewarna alami. Rimpangnya sangat bermanfaat

sebagai antikoagulan, me-nurunkan tekanan darah, obat cacing, obat asma,

penambah darah, mengobati sakit perut, penyakit hati, karminatif, stimulan, gatal-

gatal, gigitan serangga, diare, dan rematik. Kandungan utama didalam rimpangnya

terdiri dari mi-nyak atsiri, kurkumin, resin, oleoresin, desmetoksikurkumin, dan

bidesmetok-sikirkumin, damar, gom, lemak, pro-tein, kalsium, fosfor dan besi. Zat

warna kurkumin dimanfaatkan sebagai pewarna untuk makanan manusia dan

ternak. Kandungan kimia minyak atsiri kunyit terdiri dari artumeron, dan -

tumeron, tumerol, -atlanton, -kario-filen, linalol, 1,8 sineol (Rahardjo dan

Rostiana 2004).

36

Kurkumin merupakan salah satu produk senyawa metabolit sekunder dari

tanaman Zingiberaceae, khususnya kunyit dan temulawak. Yang telah di-

manfaatkan dalam industri farmasi, makanan, parfum, dan lain- lain. Ada banyak

data dan literatur yang menun-jukkan bahwa kunyit dan temulawak berpotensi

besar dalam aktifitas farma-kologi yaitu anti imflamatori, anti imunodefisiensi,

anti virus (virus flu burung), anti bakteri, anti jamur, anti oksidan, anti

karsinogenik dan anti infeksi (Joe et al. 2004).

Temulawak merupakan tanaman asli Indonesia dan termasuk salah satu

jenis temu-temuan yang paling banyak digunakan sebagai bahan baku obat

tradisional. Temulawak merupakan sumber bahan pangan, pewarna, bahan baku

industri (seperti kosmetika), maupun dibuat makanan atau minuman segar.

Temulawak telah dibudidayakan dan banyak ditanam di pekarangan atau tegalan,

juga sering ditemukan tumbuh liar di hutan jati dan padang alang-alang. Tanaman

ini lebih produktif pada tempat terbuka yang terkena sinar matahari dan dapat

tumbuh mulai dari dataran rendah sampai dataran tinggi. Temulawak mempunyai

khasiat laktagoga, kolagoga, antiinflamasi, tonikum, dan diuretika. Minyak atsiri

temulawak, juga berkhasiat fungistatik pada beberapa jenis jamur dan

bakteriostatik pada mikroba Staphylococcus sp. Dan Salmonella sp. (Dalimartha

2007).

37


1. Alat

a. LAFC lengkap dengan Bunsen

b. Petridist dan botol-botol kultur

c. Peralatan diseksi yaitu pinset besar/kecil dan pisau memes

2. Bahan

a. Eksplan : kencur (Kamferia galanga L)

b. Media kultur

c. Alcohol 96%

d. Aquadest steril

e. Spiritus

f. Chlorox (Sunlin)

3. Cara Kerja

a. Persiapan eksplan

1) Melakukan perseamian pada semua bahan tanam dan melakukan

pengamatan sampai tumbuh tunas

2) Mengambil tunas dengan mengikut sertakan sedikit bagian daging

buahnya

3) Memotong bagian tunas dengan ukuran tertentu, maksimal 6 cm

4) Mencuci bagian tunas yanga telah dipotong sebelumnya dengan air

mengalir hingga bersih

5) Menyiapkan media sterildalam botol yang berisi aquades

kemudian menggojok bagian tunas tersebut denagan aquades

sebanyak 3-4 kali

b. Sterilisasi eksplan

1) Merendam eksplan dengan chorox 50% (Sunlin 100%) selama 6-8

menit

2) Membilas eksplan dengan aquades steril

3) Mengangkat dan meniriskan eksplan pada botol kosong

38

4) Mengambil eksplan dan memotong tunasnya sepanjang 2,5 cm

dengan mengikut sertakan daging buahnya

5) Mencelupkan ekspaln pada spiritus lalu dibakar

6) Mengupas dan menghilangkan bagian yang terbakar

c. Penanaman eksplan

1) Membuka plastic penutup botol media

2) Mengabil eksplan kemudian menanamkan menggunakan pinset.

Setiap kali menggunakan pinset harus di masukan spiritus dan

dibakar terlebih dahulu

3) Mendekatkan mulut botol pada api ketika penanaman untuk

menghindari kontaminasi

d. Pemeliharaan

1) Menenmpatkan botol-botol eksplan pada rak kultur

2) Menjaga keadaan suhu, kelembaban dan cahayapada lingkungan

diluar botol

3) Menyemprotkan spiritus pada botol agar tidak terjadi kontaminasi

e. Pengamatan selama 5 minggu

1) Mengamati setiap hari saat muncul akar, tunas, daun dan kalus

2) Mengamati seminggu sekali mengenai jumlah akar, tunas dan daun

3) Melakukan diskripsi kalus

4) Membuat presentase keberhasilan dan penghitungan data pada

analisis data

39


1. Hasil Pengamatan

Tabel 3.1 Pengaruh BAP Terhadap Pertumbuhan dan Perkembangan Eksplan

Kencur (Curcuma longa L.)

Ekspl

an

Tang

gal

Saat Muncul (HST) Jumlah Ket

Akar Tunas Daun Kalus Akar Tunas Daun

Kenc

ur

3

April

2014

- - - - - - - Jam

ur

10

April

2014

- - - - - - - Jam

ur

Sumber : Logbook

Gambar 3.1 Eksplan kencur (Curcuma longa L.)

2. Pembahasan

Kencur (Curcuma longa L.) merupakan tanaman tropis yang banyak

tumbuh di berbagai daerah di Indonesia sebagai tanaman yang dipelihara.

Tanaman ini banyak digunakan sebagai ramuan obat tradisional dan sebagai

bumbu dalam masakan sehingga para petani banyak yang membudidayakan

40

tanaman kencur sebagai hasil pertanian yang diperdagangkan. Bagian dari

kencur yang diperdagangkan adalah buah akar yang ada di dalam tanah yang

disebut rimpang kencur (Barus 2009).

Secara konvensional tanaman kencur diperbanyak melalui rimpang

yang berasal dari pohon yang berumur 8-10 bulan. Tetapi cara perbanyakan

tersebut, di samping akan mengurangi pendapatan petani (karena nilai

ekonomi tanaman terletak pada rimpangnya), juga faktor perbanyakan relatif

rendah. Untuk memenuhi kebutuhan bibit yang mendesak dalam jumlah yang

banyak, maka kultur jaringan telah memberikan harapan baru. Di negara maju

seperti Amerika dan Eropa aplikasi kultur jaringan untuk pengadaan bibit

sudah dilakukan dalam skala industri. Produksi bibit hasil kultur jaringan

lebih cepat masuk pasaran daripada bibit hasil perbanyakan biasa. Selain itu

bibit dalam jumlah banyak dan seragam dapat dihasilkan hanya dari sejumlah

kecil bahan tanaman (Sudiarto et al. 2005).

Praktikum kultur kencur menghasilkan eksplan yang mati pada 6 HST.

Hal ini disebabkan adanya kontaminasi jamur pada media tanam, akibatnya

eksplan menjadi berwarna coklat dan mati. Penyebab terjadinya kontaminasi

disebabkan adanya kesalahan pada saat penanaman, saat sterilisasi media dan

eksplan atau pada saat pembuatan media.

Kontaminasi merupakan permasalahan mendasar yang sering terjadi

pada kultur in vitro. Pada kondisi media yang mengandung sukrosa dan hara,

serta kelembaban dan suhu yang relatif tinggi, memungkinkan

mikroorganisme serta spora jamur tumbuh dan berkembang dengan pesat.

Kontaminasi pada kultur in vitro dapat berasal dari udara, eksplan, baik secara

eksternal maupun internal, organisme kecil yang masuk ke dalam media,

seperti semut, botol kultur serta alat-alat yang kurang steril, lingkungan kerja

dan ruang kultur yang kotor, kecerobohan dalam bekerja.

Zat pengatur tumbuh yang sering digunakan untuk merangsang

terbentuknya tunas pada kultur in vitro tanaman temulawak adalah sitokinin

41

(BAP). Aktivitas kultur jaringan, BAP berperan dalam pembentukan tunas,

menstimulir terjadinya pembelahan sel, proliferasi kalus, mendorong

proliferasi meristem ujung, serta mendorong pembentukan klorofil pada kalus.

Apabila konsentrasi BAP semakin meningkat maka jumlah tunas yang

terbentuk juga meningkat (Surono 2010). Zat pengatur tumbuh pada tanaman

merupakan senyawa organic bukan hara, yang dalam jumlah sedikit dapat

mendukung, menghambat, dan dapat merubah proses fisiologi tumbuhan.

Penggunaan zat pengatur tumbuh tergantung pada jenis tanamannya. BAP

dalam pertumbuhan jaringan berpengaruh pada pembelahan sel, bersama

dengan IBA memberikan pengaruh interaksi terhadap diferensisasi jaringan.

42


1. Kesimpulan

Kesimpulan dari Praktikum Acara III Kultur Tanaman Khasiat Obat adalah :

a. Kultur jaringan merupakan teknik perbanyakan tanaman yang bertujuan

untuk mendapatkan tanaman dalam jumlah banyak dan seragam

pertumbuhannya

b. Praktikum kultur kencur (Curcuma longa L) menghasilkan eksplan yang

mati pada 6 HST.

c. Penyebab terjadinya kontaminasi disebabkan adanya kesalahan pada saat

penanaman, saat sterilisasi media dan eksplan atau pada saat pembuatan

media.

2. Saran

Saran yang dapat diberikan pada praktikum acara ini adalah sterilisasi

bahan dan kebersihan laboratorium perlu diperhatikan lagi untuk mencegah

resiko kontaminasi dan praktikan sebaiknya tidak terlalu banyak bicara dalam

melakukan penanaman eksplan supaya udara di luar tempat penanaman tetap

steril.

43

DAFTAR PUSTAKA

Agusta A 2000. Minyak Atsiri Tumbuhan Tropika Indonesia. Penerbit ITB.

Bandung.

Asghari GA, Mostajeran, Shebli M 2009, Curcuminoid and essential oil components

of turmeric at different stages of growth cultivated in,School of Pharmacy

and Pharmaceutical Sciences, Isfahan University of Medical Sciences,

Isfahan, IR.Iran.

Barus R 2009. Amidasi Etil p-metoksisinamat yang Diisolasi Dari Kencur. Thesis

PascaSarjana USU. Medan

Dalimartha S 2007. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia. Jakarta: Trubus Agriwidya.

Hal: 36

Gholib D 2008. Uji Daya Hambat Ekstrak Etanol Jahe Merah (Zingiber officinale

var. Rubrum) dan Jahe Putih (Zingiber officinale VAR. AMARUM)

Terhadap Trichophyton mentagrophytes dan Cryptococcus neoformans.

http://peternakan.litbang.deptan.go.id/fullteks/semnas/pro08-129.pdf.

Diakses pada tanggal 25 Maret 2014

Nursal, Wulandari S, Juwita WS 2006. Bioaktivitas Ekstrak Jahe (Zingiber officinale Roxb.) Dalam Menghambat Pertumbuhan Koloni Bakteri Escherichia coli Dan Bacillus subtilis. Jurnal Biogenesis Vol. 2 (2) : 64-66.

Rahardjo M, Rostiana O, 2004. Standar prosedur Operasional Bu-didaya Kunyit

dalam Standar Pro-sedur Operasional Jahe, Kencur, Kunyit dan

Temulawak. Badan Litbang Pertanian. Balittro- Bogor. 46 hal

Rosinta SMD, Rostiana O, Haryudin W 2006. Respon Kencur Terhadap Pemupukan.

Prosiding Seminar Nasiaonal Dan Pameran Tumbuhan Obat Indonesia

XXVIII.

Rostiana O, Bermawie N 2007. Budidaya tanaman jahe. Sirkuler No. 11. Badan

Penelitian dan Pengembangan Pertanian, Balai Penelitian Tanaman Obat

dan Aromatika, Bogor.

Sudiarto A, Ariiin R, Riyanto 2005. Pengaruh kedalaman tanah dan macam bibit

terhadap hasil rimpang kencur. Buletin Liri (2): 14-19.

Surono 2010. Pengaruh ZPT Terhadap Pertumbuhan Ekssplan. ITB. Bandung.

Wardana HD 2002. Budi Daya secara Organik Tanaman Obat Rimpang. Penebar

Swadaya. Jakarta.

44

ACARA IV

KULTUR TANAMAN CAM

(SENSEVERA, NANAS, KAKTUS DAN BUAH NAGA)

A. Pendahuluan

1. Latar Belakang

Tumbuhan CAM adalah tumbuhan sukulen yang pada umumnya tidak

memiliki lapisan sel palisade yang teratur. Sel daun dan ranting merupakan sel

mesofil bunga karang dan tedapat sel bundle sheath. Pembentukan asam malat

tumbuhan CAM pada malam hari, disertai dengan pengauraian gula, pati, atau

polimer glukosa yang mirip dengan pati.

Sel mesofil tumbuhan CAM menyimpan asam organik yang dibuatnya

selama malam hari di dalam vakoulanya hingga pagi, ketika stomata tertutup.

Pada siang hari, ketika reaksi terang dapat memasok ATP dan NADPH untuk

siklus Calvin, CO2 dilepas dari asam organik yang dibuat pada malam hari itu

sebelum dimasukkan ke dalam gula dalam kloroplas. Perilaku stomata yang

unik akan mempengaruhi metabolisme CO2 yang berlangsung pada tumbuhan

ini, metabolisme yang unik ini pertama kali diteliti pada tumbuhan dari familia

Crassulaceae, maka metabolisme CO2 ini sering disebut sebagai Metabolisme

Asam Crassulacean (Crassulacean Acid Metabolism).

Perlu ditekankan bahwa tidak semua tumbuhan CAM adalah tumbuhan

sukulen, sebaliknya juga tidak semua tumbuhan sukulen merupakan tumbuhan

CAM. Kebanyakan tumbuhan halofita (tumbuhan yang beradaptasi pada tempat

dengan salinitas tinggi) bukan merupakan tumbuhan CAM. Tumbuhan CAM

yang dapat mudah ditemukan adalah nanas, kaktus, dan buah naga..

Spesies yang tumbuh pada lingkungan yang kaya sumberdaya

mempunyai kapasitas fotosintesis yang jauh lebih tinggi daripada spesies yang

tumbuh pada lingkungan dengan persediaan air, hara, dan cahaya yang terbatas.

Kapasitas tertinggi ditemukan pada tumbuhan gurun setahun dan rumputan

44

45

gurun bila air tersedia. Tumbuhan sukulen gurun yang tumbuh lambat dan

menganut metabolisme asam crassulaceae (CAM) termasuk yang paling lambat

laju fotosintesisnya.

2. Tujuan Praktikum

Dilakukannya praktikum acara IV ini bertujuan untuk :

a. Mengetahui teknik kultur jaringan sensevera, nanas, kaktus dan buah naga

b. Mengetahui pengaruh BAP dan IBA terhadap pertumbuhan dan

perkembangan eksplan sensevera, nanas, kaktus dan buah naga


Praktikum acara kultur Kultur Tanaman Khasiat Obat (kencur, jahe,

kunyit, temulawak), pada hari Selasa, 25 Maret 2014 pukul 07.30 WIB yang

bertempat di Laboratorium Kultur Jaringan Fakultas Pertanian Universitas


46

B. Tinjauan pustaka

Perbanyakan tanaman secara kultur jaringan bertujuan untuk mendapatkan

tanaman dalam jumlah banyak dan seragam pertumbuhannya. Seiring dengan

permintaan bibit sansivera yang semakin meningkat, cara perbanyakan secara

konvensional menggunakan stek, anakan, dan cabut pucuk tidak lagi bisa

mencukupi. Satu-satunya cara perbanyakan yang sanggup memenuhi kebutuhan

permintaan bibit dalam jumlah besar itu hanyalah kultur jaringan. Eksplan yang

digunakan adalah jaringan yang masih muda. Jaringan muda ini tersusun atas sel-

sel yang masih muda dan aktif membelah sehingga diharapkan bisa menghasilkan

tanaman yang sempurna (Purwanto 2008).

Struktur kalus dari berbagai varietas yang digunakan berbeda-

bedatergantung kepada formulasi yang digunakan. Biasanya struktur kalus

menggambarkan daya regenerasinya membentuk tunas dan akar. Kalus yang

berbentuk globular (nodul-nodul) dan berwarna bening biasanya mempunyai

kemampuan lebih tinggi untuk membentuk tunas daripada kalus yang bersifat

kompak dan berwarna coklat-kehitaman. Dalam hal ini media yang digunakan

untuk memacu regenerasi kalus akan sangat menentukan. Keseimbangan nutrisi

dalam media tumbuh sangat mempengaruhi pertumbuhan kalus maupun

diferensiasinya membentuk tunas (Purnamaningsih 2006).

Sansevieria memiliki akar serabut berwarna putih kekuningan sampai

kemerahan. Pada tanaman yang sehat, akarnya banyak dan berserabut. Akar

tumbuh dari rimpang (rhizoma) yang dapat menghasilkan tunas anakan. Namun

pada beberapa jenis seperti S. tom grumbly dan S.ballyii tunas anakan keluar dari

ketiak daun melalui stolon (Tahir dan Sitanggang 2008).

Tanaman Sansevieria mudah dikenali dari daunnya yang tebal dan banyak

mengandung air (fleshy dan succulent). Struktur daun seperti ini membuat

Sansevieria tahan terhadap kekeringan. Proses penguapan air dan laju transpirasi

dapat ditekan. Daun tumbuh di sekeliling batang semu di atas permukaan tanah.

Bentuk daun panjang dan meruncing pada bagian ujungnya (Pramono 2008).

47

Buah Sansevieria adalah jenis buah beri, yaitu buah yang memiliki celah

berisi biji. Warna kulit buah saat masih muda hijau, setelah tua ada yang merah,

oranye, hitam, dan hijau kusam. Jumlah biji dalam satu celah antar spesies yang

satu dengan yang lain berbeda, yaitu 1-4 biji. Saat masih muda kulit buah halus

setelah tua kasar (Lingga 2008).

Nanas diperbanyak dengan mahkota atau stek. Secara umum bahan

penanaman yang baik digunakan untuk pertumbuhan dan pembuahan yang

seragam. Untuk nanas yang ditanam untuk pasar buah segar dan dimana semua

bahan tanam bernilai, campuran tipe tunas dapat digunakan. Propagasi vegetatif

dengan tunas daun, dimana setiap satu buku dari mahkota atau sulur yang masak

dapat memproduksi bibit merupakan teknik yang berguna untuk menyediakan

lebih dari 40 bibit per tunas, terutama dari mahkota daunnya. Penanaman dengan

kultur jaringan telah dikembangkan, terutama introduksi baru klon atau hibrid.

Penanaman biasanya dalam 2 garis dengan parit yang lebar (Hadioetomo 2008).

Keberhasilan penanaman nanas sangat ditentukan oleh kualitas bibit. Nanas

dapat dikembangbiakan dengan cara vegetatif dan generatif. Cara vegetatif

digunakan adalah tunas akar, tunas batang, tunas buah, mahkota buah dan stek

batang. Cara generatif dengan biji yang ditumbuhkan dengan persemaian, (jarang

digunakan). Kualitas bibit yang baik harus berasal dari tanaman yang

pertumbuhannya normal, sehat serta bebas dari hama dan penyakit. Kalus mampu

tumbuh bila semua aspek tersebut terpenuhi. Kalus merupakan suatu tunas yang

tumbuh dari eksplan yang ditanam pada media kultur jaringan (Tanaka 2008).

Kaktus adalah nama yang diberikan untuk anggota tumbuhan berbunga

famili Cactaceae. Kaktus dapat tumbuh pada waktu yang lama tanpa air. Kaktus

biasa ditemukan di daerah-daerah yang kering (gurun). Kata jamak untuk kaktus

adalahkakti. Kaktus memiliki akar yang panjang untuk mencari air dan

memperlebar penyerapan air dalam tanah. Air yang diserap kaktus disimpan dalam

ruang di batangnya. Kaktus juga memiliki daunyang berubah bentuk

48

menjadi duri sehingga dapat mengurangi penguapan air lewat daun. Oleh sebab

itu, kaktus dapat tumbuh pada waktu yang lama tanpa air (Anderson 2001).

Kaktus bisa dikembang-biakkan dengan berbagai cara. Sebagian orang

meperbanyak dengan biji. Pertama biji kaktus harus dikeringkan, direndam dalam

air hangat baru disebar dalam media semai yang biasanya berupa pasir halus, batu

bata tumbuk dan tanah kompos. Setelah kaktus berumur setahun dan mempunyai

panjang 4-5 cm, kaktus sudah bisa dipindahkan ke media tanam. Cara yang paling

mudah memperbanyak kaktus adalah dengan setek batang. Jika dilakukan dengan

cara yang benar, steak paling rendah risiko kegagalannya. Bekas potongan pada

tanaman induk biasanya akan tumbuh tunas baru yang siap menjadi bibit setek

baru. Menyambung kaktus/grafting semakin diminati. Teknik ini mempunyai

kelebihan, selain diperoleh bibit tanaman baru, grifting juga menciptakan dua jenis

tanaman dari kaktus yang berbeda sehingga mempercantik penampilan. Ada

banyak cara sambung kaktus, namun metode sambung rata dan sambung serong

paling banyak dilakukan. Prosesnya hampir sama, potong rata atau serong batang

induk dan batang atas dari jenis yang berbeda. Mempelkan dan perkuat dengan tali

rafia atau benang. Sambung kaktus terlihat berhasil jika terjadi pertumbuhan pada

batang atas dan tali pengikat bisa dilepas (Budi 2004).

Tanaman yang berasal dari Meksiko, Amerika Tengah dan Amerika selatan

bagian utara ini sudah lama dimanfaatkan buahnya untuk konsumsi segar. Jenis

dari tanaman ini menrupakan tanaman memanjat. Secara morfologi tanaman ini

termasuk tanaman tidak lengkap karena tidak memiliki xi daun yang mana hanya

memiliki akar, batang dan cabang, bunga, buah serta biji. (Daniel Kristanto 2009).

Akar tumbuhan buah naga tidak hanya tumbuh di pangkal batang di dalam

tanah tetapi juga pada celah-celah batang, yang berfungsi sebagai alat pelekat

sehingga tumbuhan dapat melekat atau memanjat tumbuhan lain atau pada tiang

penyangga. Akar pelekat ini dapat juga disebut akar udara atau akar gantung yang

memungkinkan tumbuhan tetap dapat hidup tanpa tanah atau hidup sebagai epifit.

(Winarsih 2007). Perakaran tanaman buah naga sangat tahan dengan kekeringan

49

dan tidak tahan genangan yang cukup lama. Kalaupun tanaman ini dicabut dari

tanah, ia masih hidup terus sebagai tanaman epifit karena menyerap air dan

mineral melalui akar udara yangada pada batangnya. (Daniel Kristanto 2009).

50


1. Alat

a. LAFC lengkap dengan Bunsen

b. Petridist dan botol-botol kultur

c. Peralatan diseksi yaitu pinset besar/kecil dan pisau memes

2. Bahan

a. Eksplan : sensivieria

b. Media kultur

c. Alcohol 96%

d. Aquadest steril

e. Spiritus

f. Chlorox (Sunlin)

3. Cara Kerja

a. Persiapan eksplan

b. Sterilisasi eksplan

1) Merendam eksplan dengan larutan Dithane M-45 3 mg/l selama 12

jam, dilanjutkan dengan chlorox 5,25 % (Sunlin 100%) selama 3

menit

2) Merendam dalan larutan Tween-80 untuk menghilangkan lapisan

lilin/kutikula/duri-duri/rambut

3) Membilas eksplan dengan aquadest steril

c. Penanaman eksplan

4) Membuka plastic penutup botol media

5) Mengabil eksplan kemudian menanamkan menggunakan pinset.

Setiap kali menggunakan pinset harus di masukan spiritus dan

dibakar terlebih dahulu

6) Mendekatkan mulut botol pada api ketika penanaman untuk

menghindari kontaminasi

51

d. Pemeliharaan

4) Menenmpatkan botol-botol eksplan pada rak kultur

5) Menjaga keadaan suhu, kelembaban dan cahayapada lingkungan

diluar botol

6) Menyemprotkan spiritus pada botol agar tidak terjadi kontaminasi

e. Pengamatan selama 5 minggu

5) Mengamati setiap hari saat

kuljar

Documents