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La etoxiquina modifica los efectos bioqumicos ehistopatolgicos de la intoxicacin crnica poraflatoxinas en gallinas de posturaPublicado el:23/10/2012

Autor/es:Mara Carolina de Luna-Lpez,Arturo G. Valdivia, Teodulo Quezada Tristan (Depto. de ClnicaVeterinaria), Armando Martnez-de-Anda, Raul Ortiz(Depto. de Disciplinas Pecuarias) del Centro de Ciencias

Agropecuarias de la Universidad Autnoma de Aguascalientes, Fernando Jaramillo-Jurez (Departamento deFisiologa y Toxicologa, Centro de Ciencias Bsicas, Centro de Ciencias Agropecuarias de la UAA) y JosLuis Reyes (Departamento de Fisiologa Celular y Neurociencias, CINVESTAV-IPN)

Resumen

Se evalu la capacidad de etoxiquina para prevenir el efecto txico de las aflatoxinas sobreparmetros bioqumicos e histopatolgicos en gallinas de postura. Las aves consumieronaflatoxinas (0.00, 0.50, 1.00 y 1.50 mg/kg) con y sin etoxiquina (500 mg/kg de alimento). Sesacrificaron aves a las 0, 14, 20, 46 y 72 semanas de intoxicacin. El consumo crnico de

aflatoxinas produjo cambios morfolgicos y bioqumicos significativos (P


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,moderados a bajos y de manera crnica, ocasionan una reduccin de la productividad debidoal dao producido principalmente a nivel heptico, renal e inmunolgico (11).

En gallinas de postura, se ha demostrado que las aflatoxinas inducen una disminucin dela cantidad y calidad en el huevo producido (31), y aunque el organismo del animallogra inactivar una buena parte de la aflatoxina incluida en los granos, cuando las dosisde stas son altas, los niveles de contaminacin en el huevo rebasan los lmites de detecciny los lmites mximos de tolerancia (43). Durante los ltimos aos, varias investigaciones sehan centrado en componentes no nutricionales contenidos en la dieta (7, 13, 35) que ayudena prevenir, disminuir o inactivar el efecto de las aflatoxinas. Se ha demostrado quela quimioproteccin puede prevenir, inhibir o revertir el efecto patolgico ocasionadopor algunos agentes txicos, como es el caso de las aflatoxinas (22). La etoxiquina esun compuesto sinttico empleado para proteger sustancias lipdicas y preservar carotenosy vitaminas A y E, adems previene la combustin espontnea de productos almacenados alinhibir el calor producido por la oxidacin de lpidos (3, 40). En la avicultura se usa para inhibirla oxidacin de lpidos y compuestos liposolubles en el alimento y as mejorar la estabilidad dela grasa y protenas en el pollo de engorda (26) la prevencin de la oxidacin de compuestosnutricionales se vuelve importante para que exista un crecimiento y desarrollo ptimos, ya

que el incremento del consumo de perxidos puede causar una disminucin de crecimiento yun efecto negativo en la eficiencia alimenticia (40). Con base en lo anterior, se haplanteado que el uso de agentes quimioprotectores, como la etoxiquina, adicionados en ladieta puede prevenir o atenuar los efectos txicos sobre los parmetros bioqumicosy patolgicos ocasionados por la intoxicacin crnica alimentaria con aflatoxinas.

MATERIALES Y MTODOS

Se adquirieron 240 gallinas de postura Hy- Line W36 de un da de edad, con semejanza de

peso corporal (media 5.0 %) y ausencia de defectos morfolgicos. Las aves fueron criadasbajo procedimientos zootcnicos estndar (16) el agua y alimento fueron suministrados adlibitum desde el primer da hasta la semana 85 de edad. Para la etapa de crianza las avesfueron alojadas en jaulas en batera con calefaccin manual y para la etapa de desarrollo yproduccin se utilizaron jaulas invertidas en pirmide de dos pisos. El manejo de las aves y delas instalaciones fueron mantenidas dentro de las recomendaciones de la Federation of

Animal Science Societies (5). La dieta base fue elaborada de acuerdo a losrequerimientos nutricionales sealados por la National Research Council (27), no seaadieron coccidiostatos, antibiticos ni promotores del crecimiento.

Las aflatoxinas se obtuvieron mediante la contaminacin de maz con utilizando dos cepas

toxicognicas de Aspergillus flavus (39). La dieta base y el maz contaminado se analizaronmediante cromatografa lquida de alta resolucin para cuantificar la concentracin demicotoxinas de acuerdo al mtodo sealado por la AOAC (mtodo 990.33) (34).

Las aves fueron anestesiadas (25 mg/kg de pc de pentobarbital sdico va IV) hastaque alcanzaron un plano quirrgico para luego realizar una perfusin in situ. El hgado ylos riones fueron pesados, adems se obtuvieron muestras de ambos rganos yse conservaron en una solucin fijadora (formalina neutra al 10%) hasta que se les realiz latcnica histolgica con hematoxilina y eosina (28). Tambin se obtuvieron muestras de dichosrganos para cuantificar la concentracin de glutatin reducido (14), para determinar laactividad enzimtica de las transferasas de glutatin (10) y de gamma glutamiltranspeptidasa(4, 17).

Se utiliz un diseo experimental completamente al azar con un anlisis estadstico conarreglo factorial de tratamientos (36), comparando dos niveles del quimioprotector (0.00 y 500mg/kg de alimento) contra cuatro niveles de aflatoxinas (0.00, 0.50, 1.00 y 1.50 mg/kg de

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a men o . ara a eva uac n e os par me ros oqu m cos y pa o g cos se rea zaroncinco muestreos que correspondientes a un da de edad (da cero), 27 semanas de edad(14 semanas de intoxicacin), 31 semanas de edad (20 semanas de intoxicacin),59 semanas de edad (46 semanas de intoxicacin) y 85 semanas de edad (72 semanas deintoxicacin) de las gallinas. La comparacin de medias de los tratamientos se realiz pormedio de la prueba protegida de Fischer, considerando un nivel de probabilidad P < 0.05. Losdatos de todas las variables fueron sometidos a un anlisis de varianza mediante elprocedimiento para modelos lineares generales del software Statistical Analysis System (33).

RESULTADOS

En el anlisis microscpico del hgado y rin de las gallinas que no consumieron aflatoxinas,mostr un arreglo estructural caracterstico de ambos rganos. Con la metodologa utilizada,no se detectaron diferencias en el grado de dao a la estructura celular atribuible a lasdiferentes dosis de las aflatoxinas ni tampoco al empleo del quimioprotector combinado conlas mismas. La principal alteracin en el caso del hgado fue la degeneracingrasa microvesicular y macrovesicular, focos necrticos en hgado y rin de lasgallinas intoxicadas, focos de infiltracin linfocitaria y amiloidosis en la periferia de

vasos sanguneos y en el espacio perisinusoidal. En el caso del rin, tambin seobservaron focos de infiltracin linfocitaria entre los glomrulos y tbulos renales ascomo amiloidosis en vasos sanguneos en el rea mesangial de los glomrulos y alrededorde los tbulos.

En las aves intoxicadas con aflatoxinas se observ un descenso en la concentracinde glutatin reducido heptico, principalmente en las dosis ms elevadas y al final de lafase experimental (Figura No. 1).

FIGURA No. 1. Efecto del tratamiento con aflatoxinas y etoxiquina sobre la concentracin deglutatin reducido en hgado y rin. Los asteriscos (**) indican diferencias significativas

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. a a prue a e rango e amp u m p e e uncan

En lo que respecta al glutatin reducido renal, todos los grupos de tratamiento mostraron undescenso en la semana 72 de intoxicacin aunque las aves intoxicadas y tratadascon etoxiquina tuvieron una concentracin deglutatin reducido similar al del grupo control, hubo diferencias significativas (P


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. .

FIGURA No. 3. Efecto del tratamiento con aflatoxinas y etoxiquina sobre la actividad de

gamma glutamiltranspeptidasa en hgado y rin. Los asteriscos (**) indican diferenciassignificativas (P


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micotoxinas. Los cambios producidos en la estructura renal, tales como el incremento en elespacio de la cpsula de Bowman y en la morfometra glomerular (23, 38), ocasionan unafalla en el funcionamiento renal, dependiendo de la dosis y duracin de la exposicinal xenobitico (8, 21, 32).

Los niveles de glutatin reducido heptico y renal de las aves intoxicadas tratadascon etoxiquina, posiblemente no se incrementaron debido a la funcin antioxidante delcompuesto. Sin embargo, las variaciones observadas en hgado, se interpreta como una

menor produccin de epxidos de aflatoxina y que no requiri de manera importante lautilizacin de la ruta metablica de formacin de cido mercaptrico. En presencia deaflatoxinas, el nivel de glutatin reducido heptico disminuye debido a que es elprincipal rgano blanco (38), adems de que sus niveles son ms elevados comparado conlos riones (24, 29), los cuales reciben un menor porcentaje de la aflatoxinaabsorbida, ejerciendo el mismo efecto sobre la concentracin de glutatin reducidopresente en este rgano. En las aves intoxicadas, el glutatin reducido renal descendi talvez porque sus niveles no son tan elevados como los que presenta el hgado, por lo quefue insuficiente para formar conjugados con los epxidos de aflatoxinas sin embargo, seha reportado que la deplecin de los niveles de glutatin reducido por este tipo de

agentes txicos produce consecuencias celulares que culminan con la destruccin de la clulay falla del rgano afectado (19). Aunque la etoxiquina no confiri proteccin en las gallinasintoxicadas sobre este parmetro a nivel de hgado y rin, estudios en ratas han demostradoque este quimioprotector es capaz de inducir la formacin de conjugados que epxidos conglutatin reducido heptico (12). En aves, los efectos quimioprotectores de etoxiquinacontra aflatoxinas son poco conocidos.

El incremento de la actividad de la gamma glutamiltranspeptidasa en hgado de las gallinasintoxicadas puede interpretarse como una respuesta del organismo para sintetizar estaenzima ante la presencia de conjugados de epxidos de aflatoxina con glutatin reducido. Eldescenso de la actividad al final del estudio puede relacionarse a un efecto de consumo de la

enzima al participar en la eliminacin de los conjugados por la va del cido mercaptrico.Mientras que la estabilidad de la actividad enzimtica en las aves intoxicadas y tratadas conetoxiquina, probablemente se produjo porque se el quimioprotector evit la formacinde epxidos, reduciendo as la utilizacin de la va del cido mercaptrico, debido a su efectoantioxidante. La actividad disminuida y estable de la gamma glutamiltranspeptidasa en rinde las gallinas intoxicadas durante las primeras semanas de la fase experimental, pudodeberse a que el hgado es el principal rgano encargado de metabolizar las aflatoxinas,mientras que los riones tienen un porcentaje menor de participacin. Sin embargo, en lasaves intoxicadas tratadas con etoxiquina, este compuesto ejerci sus propiedadesantioxidantes, pues el incremento de la actividad que se present, posiblemente se debi a un

menor porcentaje de aflatoxinas que logr llegar al rin, observndose un efecto crnico alfinal del experimento, donde el grado de actividad enzimtica fue proporcional a la dosisde aflatoxinas, suponiendo que tal vez la nica dosis del quimioprotector que fue suministrada,se satur conforme se increment la dosis de la micotoxina. Estudios en ratas, han indicadoque el rin juega un papel muy importante en la eliminacin de este tipo de xenobiticos porfiltracin va glomerular, debido a que presentan una elevada actividad enzimtica de lagamma glutamiltranspeptidasa y niveles altos de glutatin reducido (9, 41). Se sabe poco del efecto de etoxiquina sobre la actividad de lagamma glutamiltranspeptidasa enpollos intoxicados con aflatoxinas. Pero algunos autores reportaron la eficacia de laetoxiquina en pollos alimentados con dietas que contenan grasas oxidadas, dondelos resultados obtenidos indicaron concentraciones elevadas de glutatin reducido y gammaglutamiltranspeptidasa a nivel intestinal, donde la etoxiquina se encarg de transportarglutatin reducido a las clulas intestinales y por tantoincrementar la actividad enzimticacontra toxinas presentes en ellos (2, 20).


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REFERENCIAS

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Autor/es

Armando Martnez de Anda
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