Laboratórne metódy a postupy pri Laboratórne metódy a postupy pri vyšetrovaní vzoriek odobratých pri vyšetrovaní vzoriek odobratých pri

podozrení na nákazu MVPpodozrení na nákazu MVP

Vypracovala: Ing. Andrea Brtková, PhD.Vypracovala: Ing. Andrea Brtková, PhD.

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu Pôvodca MVP: Paenibacillus larvae

- grampozitívna fakultatívne anaeróbna sporulujúca baktéria v tvare tyčinky

- tvorí spóry – veľmi rezistentné voči vysokej teplote (deštrukcia v mede po 8,6 min., pri 121°C; vo vosku po 30 min., pri 121°C)- nedisponujú enzýmom kataláza štiepi H2O2 (opak iný Bacillus spp.)- rod Paenibacillus biochemicky aktívny (štiepi široké spektrum anorg. substrátov)- produkcia pyrazínov (charakteristická vôňa na kultivačných médiách)- produkcia enolázy – štiepi proteíny – virulenčný faktor- vysoká genotypová variabilita dokázaná fingerprintingom

Diagnostika pôvodcu moru včelieho ploduDiagnostika pôvodcu moru včelieho plodu

Klinická prehliadka - hodnotí:

- sila včelstva a jeho prejavy- intenzita a kvalita plodovania, rovnomernosť zakladania- celková úroveň a hygiena chovu

Odber vzoriek k laboratórnemu vyšetreniu:

- včelí plást s plodom alebo zásobami- med- melivo, vosk

-ďalší materiál (peľ, materská kašička, propolis, dospelé včely)

Diagnostika pôvodcu moru včelieho ploduDiagnostika pôvodcu moru včelieho ploduVzorky je nutné dobre zabaliť (papierový sáčok, papierový obal ...) s

presným označením mena a adresy + dôkladne vyplnená žiadanka veter.lekárom resp. povereným asistentom

Laboratórne metódy:

A) Mikroskopické: natívne preparáty (fázová mikroskopia), farbené preparáty (Gramovo farbenie, Schaefer Fulton acidorezistentné farbenie)

B) Kultivačné metódy: krvný agar, MYPGP agar, MYPPN agar;

inkubácia: aeróbne, pri 34-37ºC po dobu 4-5 dní

C) Detekcia pôvodcu MVP na úrovni molekulárnej biológie

Diagnostika pôvodcu moru včelieho ploduDiagnostika pôvodcu moru včelieho ploduKultivácia pôvodcu MVP z meliva:

- extrakcia: 1,5 g meliva + extrakčné činidlo = 1h trepať - pridať extrahovanú zmes k dH2O v pomere 1:3- 5 minút povariť pri teplote 88-91ºC (aktivácia spór, deaktivácia sprievod.MIO)- pretrepať vyočkovať 5 x 0,2 ml na kultivačné média- kultivácia 4 – 5 dní, pri teplote 37 ºC (chyby)

Kultivácia pôvodcu MVP z plástov:

- pri zaviečkovanom plode uvoľníme pomocou sterilného skalpela viečko bunky- k zaschnutým larvám a príškvarom - kvapka sterilnej dH2O - obsah 5 – 10 podozrivých buniek – naočkovať na 5 PM s Krvným agarom - kultivácia 4 – 5 dní, pri teplote 37 ºC (chyby)

Kultivácia pôvodcu MVP z medu a peľu:

- zriediť med so sterilnú dH2O v pomere 1:1, v prípade peľu v pomere 1:10- 5 minút povariť pri teplote 88-91ºC (aktivácia spór, deaktivácia sprievod.MIO)- pretrepať vyočkovať 5 x 0,2 ml na kultivačné média- kultivácia 4 – 5 dní, pri teplote 37 ºC (chyby)

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRLv NRL

2010, 2011, 2012: Národný eradikačný program moru včelieho Národný eradikačný program moru včelieho plodu (MVP)plodu (MVP)

• trvanie NP: jeden rok, v prípade nepriaznivej epizootologickej situácie pokračovanie aj v ďalšom roku

• vyšetrenie zmesných vzoriek zimného meliva: u všetkých chovateľov matiek; kočujúcich včelstiev

• + melivo klinická prehliadka + klinické zmeny vyšetrenie plod. plástu

• + plodový plást laboratórne potvrdenie MVP opatrenia na zabránenie šírenia MVP

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRLv NRL

•Slovensko - melivá: r.2010: celkom: 3922 / (+) 93 = 2% r.2011: celkom: 4921 / (+) 196 = 4%

‹50 KTJ/1g meliva; ›50-150; ›150-250; ›250-500; ›500 r.2011 89 58 21 13 15

• Slovensko - plásty: r.2010: celkom: 379 / (+) 260 = 69% r.2011: celkom: 715 / (+) 527 = 73%

- nesúlad: (+) melivo – nevyšetrený plást

nevyšetrené melivo – vyšetrený plást

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRLv NRL

• Západné Slovensko: r.2010: celkom: 731 / (+) 17 = 2,3% r.2011: celkom: 983 / (+) 49 = 5,0%

• pozitivita v roku 2011 stúpla oproti r.2010 (viac vyšetrených vzoriek)• TN – 11% nárast; SC – 6,5% (výnimka TT pokles o 10%)

Plásty: r.2011: celkom: 148 / (+) 125 = 84% r.2010: celkom : 77 / (+) 58 = 75%

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRLv NRL

• Južné Slovensko: r.2010: celkom: 1120 / (+) 30 = 2,7% r.2011: celkom: 1626 / (+) 65 = 4,0%

• pozitivita v roku 2011 stúpla oproti r.2010 (viac vyšetrených vzoriek)• RS – 11% nárast; NZ – 9,7% (naopak pokles: DS - 3%; GA – 4,5%)

Plásty: r.2011: celkom: 150 / (+) 127 = 85% r.2010: celkom : 68 / (+) 18 = 26%

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRLv NRL

• Severné Slovensko: r.2010: celkom: 956 / (+) 17 = 1,78% r.2011: celkom: 1440 / (+) 40 = 6,25%

• pozitivita v roku 2011 stúpla oproti r.2010 (viac vyšetrených vzoriek)• ZA – 8,5% nárast; DK – 3,5% (naopak pokles: MT 11%)

Plásty: r.2011: celkom: 349 / (+) 213 = 61% r.2010: celkom : 150 / (+) 108 = 72%

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRLv NRL

• Východné Slovensko: r.2010: celkom: 1115 / (+) 29 = 2,60% r.2011: celkom: 896 / (+) 42 = 4,69%

• pozitivita v roku 2011 stúpla oproti r.2010 (viac vyšetrených vzoriek)• RO – 52% nárast; PE – 43% (naopak pokles: MI 20%)

Plásty: r.2011: celkom: 68 / (+) 62 = 91% r.2010: celkom : 84 / (+) 76 = 90%

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRLv NRL

Program dohľadu nad zdravotnou Program dohľadu nad zdravotnou situáciou v chovoch včiel v SRsituáciou v chovoch včiel v SR

- Cieľ programu: zistiť zdravotnú situáciu včelstiev u registrovaných chovateľoch včiel na celom území SR

- na základe zistených výsledkov vypracovať stratégiu na zabránenie znižovania počtu včelstiev

- v rámci programu sa budú sledovať: AFB, EFB, varoáza, akarióza, Aetina Tumida, Tropilaelaps clarae (SK free), nozematóza, vírus chronickej paralýzy včiel, vírus akútnej paralýzy včiel a vírus deformovaných krídel

- ozdravením chovov sa zlepší zdravotný stav, znížia sa straty na produkcii medu a ďalších včelích produktov, zabezpečí sa optimálne opelenie poľnohospodár. kultúr a ostatných rastlín

- klinické prehliadky, odber meliva a vzoriek, laboratórna diagnostika úradných vzoriek a ostatné náklady potrebné na realizáciu programu = hradené zo štátneho rozpočtu SR

Program dohľadu nad zdravotnou Program dohľadu nad zdravotnou situáciou v chovoch včiel v SRsituáciou v chovoch včiel v SR

- štruktúra programu: 3. klinické prehliadky – úradní veterinárni lekári + školení asistenti

I. prehliadka: zhromaždenie údajov - pracovné postupy včelárov, životného prostredí, v ktorom sú včelíny umiestnené, životaschopnosť a zdravotný stav včelstva

II. prehliadka: zistenie abnormálnej úmrtnosti, pri príznakoch ochorenia – odber vzoriek na laboratórne vyšetrenie. Včelár bude upozornený na potrebu samokontroly a povinnosti hlásenia úhynu alebo abnormálneho správania včiel

III. prehliadka: zistenie abnormálnej úmrtnosti, životaschopnosti a zdravotného stavu včelstiev – odber vzoriek na laboratórne vyšetrenie

Program dohľadu nad zdravotnou Program dohľadu nad zdravotnou situáciou v chovoch včiel v SRsituáciou v chovoch včiel v SR

Kraj Počet včelstiev Počet vyšetrených včelstiev

Bratislavský 484 18

Trnavský 1302 49

Trenčiansky 2464 93

Nitriansky 2036 77

Žilinský 2667 101

Banskobystrický 2799 106

Prešovský 2609 98

Košický 2068 79

Spolu 16429 621

Ďakujem za pozornosťĎakujem za pozornosť