laporan hplc

LAPORAN PRAKTIKUM KIMIA ANALITIK INSTRUMEN

PENENTUAN ZAT ADITIF DALAM SAMPEL MINUMAN MENGGUNAKAN

INSTRUMEN HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAFI (HPLC)

(11 Maret 2014)

Disusun untuk Memenuhi Salah Satu Tugas pada Mata Kuliah

Praktikum Kimia Analitik III: Kimia Analitik Instrumen

dosen pembimbing:

Dra. Soja Siti Fatimah, MSi

disusun oleh:

Kelompok 8

Kiki Maya Wulandari 1100067

Lelly Shelviyani 1105121

JURUSAN PENDIDIKAN KIMIA

FAKULTAS PENDIDIKAN MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS PENDIDIKAN INDONESIA

2014

1

Penentuan Kadar Zat Aditif dalam Sampel Minuman menggunakan Instrumen High

Performance Liquid Chromatography (HPLC)

Tanggal Praktikum: 11 Maret 2014

A. Tujuan Praktikum

1. Memahami cara kerja instrument HPLC untuk analisis kuantitatif

2. Dapat melakukan preparasi dengan tepat dan akurat, serta mengikuti manual

pengoprasian HPLC

3. Dapat menentukan atau menghitung kadar zat aditif dalam sampel minuman

B. Tinjauan Pustaka

Kromatografi adalah suatu teknik pemisahan campuran berdasarkan perbedaan kecepatan

perambatan komponen dalam medium tertentu. Pada kromatografi, komponen-

komponennya akan dipisahkan antara dua buah fasa yaitu fasa diam dan fasa gerak. Fasa

diam akan menahan komponen campuran, sedangkan fasa gerak akan melarutkan zat

komponen campuran. Komponen yang mudah tertahan pada fasa diam akan tertinggal,

sedangkan komponen yang mudah larut dalam fasa gerak lebih cepat.

Metode pemisahan adalah aspek yang penting dalam bidang kimia karena kebanyakan

materi yang terdapat dialam berupa campuran. Kromatografi merupakan salah satu metode

pemisahan komponen-komponen campuran dimana cuplikan berkesetimbangan diantara

dua fasa. Fasa gerak yang membawa cuplikan dan fasa diam yang menahan cuplikan

secara selektif. Pemisahan dengan kromatografi didasarkan pada perbedaan

kesetimbangan diantara komponen-komponen campuran diantara fasa gerak dan fasa

diam. Kesetimbangan ini dapat dijelaskan secara kuantitatif dengan istilah koefisisen

partisi. K;

K=

Keterangan :

Cs : konsentrasi komponen dalam fasa diam

Cm: konsentrasi komponen dalam fasa gerak

2

HPLC didefinisikan sebagai kromatografi cair yang dilakukan dengan memakai fasa diam

yang terikat secara kimia pada penyangga halus yang didistribusi ukurannya sempit

(kolom) dan fasa gerak yang dipaksa mengalir dengan laju alir yang terkendali dengan

solusi tinggi dan waktu yang relatif singkat. HPLC berasal dari kromatografi kolom klasik.

Meskipun diantara teori dan praktiknya HPLC mirip dengan kromatografi gas. HPLC

merupakan kromatografi dengan zat cair sebagai fasa gerak dan fasa diamnya. Dalam

kromatografi cair, kedudukan gas diganti oleh zat cair yang bertekanan tinggi sebagai

akibat penggunaan fasa gerak zat cair, maka sangat sukar zat cair mengalir ke dalam

kolom yang dipadatkan dengan serbuk halus. Oleh karena itu zat cair dapat melewati

kolom secara cepat maka dibutuhkan bantuan berupa pompa bertekanan tinggi. Biasanya

dipompa hingga tekanan mencapai 3000 psi (200 bar) dan laju pengaliran sekitar 1-5 cm3

per menit yaitu pada kolom sepanjang 20 cm. Dibandingkan dengan GC, HPLC lebih baik

dalam hal kecepatan, resolusi dan efesiensi.

Prinsip dasar HPLC adalah pemisahan senyawa berdasarkan perbedaan kepolaran, dimana

terdapat fasa gerak dan fasa diam. Fasa geraknya adalah sampel dan eluen yang bercampur

dan fasa diamnya adalah silika gel yang mengandung hidrokarbon. Senyawa yang

memiliki kepolaran lebih tinggi akan tertahan dalam fasa diam yang bersifat polar. Metode

umum dalam pemisahan HPLC bergantung pada sifat polaritas senyawa dalam eluet. Fasa

normal adalah fasa gerak berupa nonpolar dan fasa diam bersifat polar. Sedangkan fasa

terbalik adalah fasa gerak yang bersifat polar dan fasa diam bersifat nonpolar.

Teknik HPLC merupakan suatu metode kromatografi cair-cair yang dapat digunakan baik

untuk keperluan pemisahan maupun analisis kuantitatif. Analisis kuantitatif dengan teknik

HPLC didasarkan pada pengukuran luas area puncak analit dalam kromatogram

dibandingkan luasa area standar. Pada prakteknya, metode perbandingan area standar dan

sampel kurang menghasilkan data yang akurat bila hanya melibatkan satu konsentrasi

standar. Oleh karena itu dilakukan dengan kurva kalibrasi.

Terdapat berbagai zat aditif yang digunakan oleh produsen makanan dan minuman

diantaranya: natrium benzoat, vitamin C dan kafein untuk masing-masing tujuan tertentu.

Ketiga zat aditif tersebut merupakan senyawa yang memiliki sifat kepolaran yang berbeda

dan memiliki gugus kromofon yang menyebabkan senyawa tersebut dapat menyerap sinar

3

uv. Berdasarkan karakteristik senyawa ini memungkinkan dilakukannya analisis dengan

teknik HPLC menggunakan kolom non polar seperti c-18 dan fasa gerak polar.

Prinsip kerja HPLC adalah sebagai berikut: dengan bantuan pompa fasa gerak cair

dialirkan melalui kolom detektor. Cuplikan dimasukkan kedalam aliran fasa gerak dengan

cara penyuntikan. Didalam kolom terjadi pemisahan komponen-komponen campuran

karena perbedaan kekuatan interaksi antara solut-solut terhadap fasa diam solut-solut yang

kurang kuat interaksinya dengan fasa diam akan keluar dari kolom terlebih dahulu.

Sebaliknya solut-solut yang kuat interaksinya dengan fasa diam maka solut-solut tersebut

akan keluar dari kolom lebih lama. Setiap komponen campuran yang keluar kolom

dideteksi oleh detektor kemudian direkam dalam bentuk kromatogram. Kromatogram

HPLC serupa dengan kromatogram kromatografi gas.

Elusi pada HPLC dapat dibagi menjadi dua sistem:

1. Sistem elusi isokrotik

Pada sistem ini, elusi dilakukan dengan satu macam atau lebih fasa gerak dengan

perbandingan tetap (komposisi fasa gerak tetap selama elusi)

2. Sistem elusi gradien

Pada sistem ini, elusi dilakukan dengan campuran fasa gerak yang perbandingannya

berubah-ubah dalam waktu tertentu (komposisi fasa gerak berubah-ubah selama elusi)

Elusi gradien didefinisikan sebagai penambahan kekuatan fasa gerak selama suatu

analisis kromatografi berlangsung. Digunakan untuk meningkatkan resolusi campuran

yang kompleks terutama jika sampel mempunyai kisaran polaritas yang luas. Pengaruh

yang menguntungkan dari elusi gradien adalah memperpendek waktu elusi analisis

senyawa-senyawa yang secara kuat ditahan dalam kolom.

Beberapa jenis HPLC berdasarkan jenis fasa diam dan fasa geraknya

1. Kromatografi adsorbsi

Cocok untuk pemisahan senyawa yang agak polar. Partikel silika atau alumina

digunakan sebagai adsorben

2. Kromatografi partisi

Fasa gerak lebih polar daripada fasa diam. Fasa diamnya non polar namun hanya

dilapiskan. Maka fasa gerak tidak bercampur dengan fasa diam, kemudian fasa gerak

harus dijenuhkan dengan zat cair fasa diam untuk mengurangi elusi fasa diam.

3. Kromatografi fasa terikat kromatografi penukar ion

4

Fasa terikat adalah fasa yang stabil. Setiap pelarut dapat dipakai tanpa harus

menambahkan penjenuhan. Pemisahan berlangsung bila solut-solut bervariasi

4. Kromatografi ekslusi ukuran

Kriteria warna yaitu ukuran molekul. Interaksi polar dan non polar diantara solut dan

fasa diam

Komponen instrumen HPLC

1. Fasa gerak

Fasa gerak HPLC berupa zat cair dan disebut juga eluen atau pelarut. Fasa gerak

berfungsi sebagai pembawa komponen-komponen cmpuran menuju detektor. Syarat-

syarat yang harus dipenuhi suatu zat cair agar dapat digunakan sebagai fasa gerak

yaitu:

a. Dapat bertindak sebgai pelarut yang baik untuk cuplikan yang akan dianalisis

b. Zat cair yang akan digunakan harus murni dan jernih untuk menghindarkan dari

masuknya kotoran yang dapat menyumbat kolom

c. Mudah diperoleh, murah, tidak terbakar dan tidak beracun

d. Sesuai dengan detektor yang akan ditunjukkan

2. Fasa diam

Banyak senyawa organik dan anorganik yang dipakai sebagai packing kolom

a. Silika gel

Karakteristik dari silika gel tergantung pada beberapa parameter diantaranya

struktur internal, ukuran partikel, porositas (dimensi dan distribusi) ketahanan

hancur dengan polaritas. Silika gel yang digunakan dalam HPLC mempunyai lima

gugus fungsi silanol per m2.

b. Silika terikat

Dibuat untuk menghasilkan kapasitas adsorpsi yang besar

5

3. Pompa

Pompa dalam HPLC berfungsi untuk menyalurkan fasa gerak menuju kolom dengan

adanya tekanan yang dihasilkan dari sistem pompa. Syarat pompa yang dpaat

digunakan dalam HPLC yaitu:

a. Dapat memberikan tekanan pada fasa gerak hingga 600 psi

b. Kecepatan alir yang dihasilkan yaitu berkisar antara 0,1-10 ml/menit

c. Bahan pompa harus tahan terhadap korosi

Jenis pompa yang dapat digunakan dalam HPLC:

a. Pompa reaprocating

Pompa reaprocating dapat menghasilkan tekanan tinggi sampai 1000 psi

gambar Pompa reaprocating

b. Pompa displacement

Pompa ini menyerupai syringe, terdiri dari tabung yang dilengkapi pendorong yang

digerakkan oleh motor

c. Pompa pnematic

Pompa ini bertekanan kurang dari 200 psi

4. Injektor

Untuk mengalirkan sampel yang paling sederhana adalah menggunakan katup injeksi.

Cairan sampel dapat disuntikkan secara langsung dan sampel padat hanya perlu

dialrutkan dalam pelarut yang sesuai. Sampel yang diinjeksikan tidak boleh terlalu

banyak karena akan menyebabkan band broadening (senyawa akan menjadi encer)

akibat ketidakmerataan partikel-partikel fasa diam.

6

Beberapa teknik injeksi pada istem HPLC:

a. Injeksi syringe

Syringe (alat untuk memasukkan cuplikan) disuntikkan melalui alat septum (seal

karet) dan untuk ini dirancang syringe yang tahan sampai 1500 psi

b. Injeksi stop-flow

Jenis injeksi kedua, pada injeksi ini aliran fasa gerak dihentikan sementara

sambungan pada kolom dibuka dan cuplikan disuntikan langsung ke dalam kolom.

c. Kran cuplikan (loop)

Sejumlah cuplikan disuntikan kedalam loop dalam posisi load cuplikan masih

dalam loop, kran diputar untuk mengubah posisi load menjadi injeksi dan fasa

gerak akan membeawa cuplikan

5. Kolom

Kolom merupakan tempat pemisahan komponen-komponen yang terdapat dalam

cuplikan didalam kolom terdapat fasa diam yang akan berinteraksi dengan cuplikan.

Fasa diam yang digunakan merupakan fasa jenis terikat yang dapat dibuat dengan

mereaksikan silika dan alkiklorosiana yang dikenal dengan reaksi silanasi. Kolom jenis

c-18 dan c-8 banyak digunakan dalam HPLC.

a. Kolom utama

Berisi fasa diam yang merupakan tempat terjadinya pemisahan campuran. Dapat

digunakan untuk analisis dan preparatis berukuran panjang antara 5-30 cm.

Diletakkan setelah pemasukkan cuplikan.

b. Kolom pengaman

Diletakkan sebelum sistem pemasukkan cuplikan berukuran pendek 5cm dengan

diameter 4,6 mm. Dipaking dengan silika besar dan partikel kolom utama berisi

menyaring kotoran yang belum terbawa dalam fasa diam dan menjenuhkan fasa

diam untuk menghindarkan terjadinya erosi fasa diam oleh aliran pelarut sehingga

menghindari kerusakan.

7

6. Detektor

Syarat detektor:

a. Cukup sensitif

b. Stabilitasa dan keterulangan tinggi

c. Respon linier terhadap solut

d. Waktu respon pendek sehingga tiadak bergantung kecepatan alir

e. Relibilitas tinggi dan mudah digunakan

f. Tidak merusak cuplikan

7. Rekorder

Untuk mencetak hasil percobaan pada lembaran kertas berupa kumpulan puncak

(kromatogram) komponen yang terelusi mengalir ke detektor dan dicatat sebagai

puncak-puncak yang secara keseluruhan disebut kromatogram

Kelebihan instrumen HPLC:

1. Mampu memisahkan molekul-molekul dari suatu campuran

2. Resolusinya baik

3. Kecepatan analisis dan kepekaannya tinggi

4. Dapat menghindari terjadinya dekomposisi atau kerusakan bahan yang dianalisis

5. Kolom dapat digunakan kembali

6. Mudah melakukan recovery cuplikan

7. Tekniknya tidak begitu tergantung pada keahlian operator dan reproduksibilitasnya

lebih baik

8. Instrumennya memungkinkan untuk bekerja secara otomatis dan kuantitatif

9. Waktu analisis umumnya singkat

10. Kromatografi cair preparatif memungkinkan dalam skala besar

11. Ideal untuk molekul besar dan ion

Analisis yang akan dilakukan adalah menentukan kadar vitamin C, kafein dan natrium

benzoat dari sampel minuman.

1. Vitamin C (asam askarbat)

Struktur vitamin C

8

Asam askarbat adalah salah satu senyawa kimia yang disebut vitamin C. Selain asam

dehidroaskarbat. Asam askarbat berbentuk bubuk kristal kuning keputihan yang larut

dalam air dan memiliki sifat-sifat antioksidan.

2. Kafein

Struktur kafein

Kafein adalah senyawa alkaloid xantina berbentuk kristal dan berasa pahit yang

bekerja sebagai alat perangsang psikoaktif. Kafein merupakan obat perangsang sistem

pusat pada manusia dan mengusir rasa kantuk

3. Natrium benzoat

Struktur natrium benzoat

Natrium benzoat biasanya digunakan sebagai pengawet. Sodium benzoat diproduksi

dengan menetralisasi dari asam benzoat dengan sodium hidroksida.

C. Alat dan Bahan Praktikum

Alat:

1. Perangkat HPLC 1 set

2. Spatula 1 buah

3. Labu ukur 50 ml dan 10 ml 6 buah

4. Neraca Analitik 1 set

5. Corong pendek 1 buah

6. Pipet tetes 3 buah

7. Gelas kimia 200 ml 1 buah

8. Gelas kimia 500 ml 1 buah

9. Ultrasonic vibration 1 set

10. Pipet seukuran (1,2,3,4 dan 5 mL) 1 buah

11. Kertas saring whatman 1 buah

12. Membran PTFE dan selulosa nitrat 1 buah

9

Bahan :

1. Natrium benzoat 9,7 mg

2. Vitamin C standar 10,2 mg

3. Kafein 9,5 mg

4. Metanol secukupnya

5. Sampel minuman (hemaviton energy drink) 10 mg

6. metanol 70 mg

7. Aquades secukupnya

8. Asetonitril secukupnya

D. Sifat kimia dan fisika bahan

No Bahan Sifat fisika Sifat kimia

1 Vitamin C

Massa molekul : 176,12 g/mol

Wujud : padatan putih kekuningan

Berat jenis : 1,65 g/cm3

Kelarutan : tidak larut dalam

benzena

Kelarutan dalam air : 33 gram/100

ml

Rumus kimia :

C6H8O6

2 Kafein Massa molekul: 194,19 g/mol

Wujud : bubuk putih

Td : 1780C

Kelarutan dalam air: 22 mg/ml (25

0C)

Rumus kimia :

C8H10N4O2

3 Natrium benzoat Massa molekul : 144,11 g/mol

Berat jenis: 1,479 g/cm3

Tl : 3000C

Rumus kimia :

C6H5COONa

10

E. Prosedur Kerja Praktikum

a. Pembuatan fasa gerak (Pelarut)

Volume metanol yang diperlukan untuk membuat larutan etanol sebanyak 500

mL di hitung terlebih dahulu. Kemudian ajust pH pada nilai 2,65 dengan asam

fosfat. Selanjutnya larutan metanol disaring menggunakan membran selulosa nitrat.

Kemudian lakukan penyaringan untuk asetonitril dengan PTFE. Gelembung yang

terdapat pada larutan dihilangkan dengan ultrasonic vibrator selama 15 menit. Lalu

dibuat campuran larutan fasa gerak metanol dan asetonitril (70:30) untuk keperluan

larutan standar dan larutan sampel.

b. Pembuatan larutan induk natrium benzoat, Vit C, dan kafein

Padatan natrium benzoat, vitamin C dan kafein masing-masing ditimbang

sebanyak 10 mg. Ketiga zat standar dicampurkan dengan cara melarutkannya dalam

50 mL fasa gerak secara kuntitatif pada labu ukur dan dihomogenkan selama 5 menit

menggunakan ultra sonic vibrator.

c. Pembuatan deret larutan standar natrium benzoat, Vit C, dan kafein

Larutan induk masing-masing dipipet sebanyak 1 mL, 2 mL, 3 mL, 4 mL, dan

5 mL dan diencerkan dengan fasa gerak dalam labu ukur 10 mL. Larutan

dihomogenkan 5 menit dengan ultrasonic vibrator. Semua larutan standar disaring

menggunakan membran PTFE. Hasil saringan dimasukkan ke dalam botol vial

bertutup yang telah diberi label. Larutan di degassing selama 5 menit. Larutan standar

siap diinjeksikan.

d. Pembuatan larutan sampel

Larutan sampel yaitu hemaviton energy drink sebanyak 5 mL dilarutkan

dengan fasa gerak hingga 10 mL pada labu ukur. Larutan campuran disaring dengan

PTFE, ditampung dalam botol vial bertutup. gelembung pada larutan sampel

dihomogenkan dengan menggunakan ultrasonic vibrator selama 5 menit.

e. Penyiapan Instrumen HPLC

Peralatan HPLC dihidupkan dengan ketentuan sebagai berikut:

Kolom : C-18 (12,5 cm)

Panjang gelombang : 254 nm

Laju alir : 0,75 mL/menit

Volume injeksi : 20 L

Pastikan kabel penghubung listrik telah tersambung dengan benar. Kemudian

tekan tombol ON pada sakelar listrik. Botol fasa gerak diisi dengan volume yang

11

memadai dan botol penampang dikosongkan. Tombol ON pada power, detektor

dan pompa ditekan. Pemrograman alat dilakukan dengan computer. Langkah-langkah

pemrogramannya sesuai dengan instruksi dalam komputer. Mode yang akan

digunakan dipilih sesuai dengan parameter kondisi instrumen.

Instrumen siap digunakan jika kromatogram sudah menunjukkan base line

yang datar. Larutan diinjeksikan mulai dari konsentrasi terendah dan larutan sampel

diinjeksikan terakhir. Hasil pengukuran dicetak dan dicatat kondisi percobaannya.

Jika percobaan yang dilakukan telah selesai, pompa dimatikan dengan menyoroti

tanda pompa dalam komputer. File pada komputer ditutup sesuai dengan petunjuk lalu

komputer dimatikan. Cara mematikannya tekan tombol off secara berurutan untuk

pompa, detektor dan power. Sambungan listrik diputuskan.

F. Hasil dan Analisis data

Percobaan yang telah dilakukan yaitu penentuan kadar zat aditif dalam sampel

minuman menggunakan instrumen High Performance Liquid Chromatography (HPLC).

Tujuan dari percobaan ini adalah untuk menentukan kadar zat aditif vitamin C, kafein,

dan natrium benzoat yang terkandung dalam sampel. Sampel yang digunakan pada

percobaan ini adalah minuman hemaviton energy drink. Prinsip dasar dari instrumen

HPLC adalah polaritas dan interaksi fasa gerak dan fasa diam jenis fasa terbalik. Fasa

geraknya bersifat polar sedangkan fasa diamnya bersifat nonpolar. Fasa gerak yang

digunakan pada percobaan ini adalah campuran metanol dan aquabides dengan

perbandingan 70 : 30. Sedangkan fasa diam yang digunakan yaitu oktadesil silika. Proses

yang digunakan yaitu elusi gradien dikarenakan komponen-komponen yang dianalisis

memiliki kepolaran yang berbeda-beda. Teknik ini memvariasikan fasa gerak selama

dilakukan pengukuran. Teknik elusi gradien memiliki kelebihan yaitu lebih akurat dan

efisien. Komponen dalam sampel yang bersifat non polar akan tertahan lebih lama dalam

fasa diam sehingga memiliki waktu retensi yang besar. Sedangkan komponen yang

bersifat polar akan memiliki waktu retensi yang kecil karena lebih cepat keluar dari fasa

diam. Berdasarkan struktur ketiga jenis zat aditif yang akan dianalisis maka urutan

kepolarannya yaitu :

Vitamin C > kafein > natrium benzoat

Vitamin C akan keluar terlebih dahulu karena kurang tertahan pada fasa diam sehingga

memiliki waktu retensi yang kecil dibandingkan dengan kafein dan natrium benzoat.

Waktu retensi menjadi acuan dalam menentukan komponen-komponen yang terdapat pada

sampel.

12

Dalam praktikum ini dibuat larutan standar dari campuran vitamin C, kafein dan

natrium benzoat. Pembuatan larutan deret standar yang berbeda-beda bertujuan untuk

pembuatan kurva kalibrasi standar yaitu plot grafik antara konsentrasi dan luas area.

Sebelum diinjeksikan sampel disaring terlebih dahulu dengan membran PTFE dengan

tujuan untuk meminimalisir pengotor padat yang mungkin terkandung pada sampel.

Sampel, fasa gerak dan larutan standar yang digunakan harus dihilangkan gelembungnya

menggunakan ultra sonic vibratior. Sehingga nantinya gelembung tidak akan menganggu

pengukuran. Syringe yang digunakan sebelumnya harus dibilas terlebih dahulu dengan

metanol agar tidak ada pengotor pada syringe yang terukur. Jumlah peak yang muncul

pada kromatogram menunjukkan banyaknya komponen pada sampel yang dianalisis.

Analisis yang dilakukan pada percobaan ini dilakukan secara kualitatif dan kuantitatif.

Analisis kualitatif yang dilakukan yaitu dengan membandingkan waktu retensi sampel

dengan deret standar dari setiap komponen. Data kromatogram yang dihasilkan sebagai

berikut:

Komponen yang dianalisis Rentang waktu retensi pada

deret standar

Rentang waktu retensi pada

sampel

Vitamin C 1,28 1,85 1,99

Kafein 1,82 2,85 2,53

Natrium benzoat 3,11 3,15 3,19

Berdasarkan data kromatogram diketahui waktu retensi pada sampel memiliki selisih

yang tidak jauh dengan rentang waktu retensi vitamin C pada deret standar yaitu sebesar

0,14. Begitu juga dengan natrium benzoat yang waktu retensinya pada sampel memiliki

selisih yang tidak jauh dengan rentang waktu retensi natrium benzoat pada deret standar

yaitu sebesar 0,04. Sehingga sampel minuman hemaviton energy drink zat aditif yang

dianalisis yaitu vitamin C, kafein dan natrium benzoat.

Analisis kuantitatif dilakukan dengan cara membuat kurva kalibrasi pada deret

standar. Kurva kalibrasi yang dibuat diperoleh dari hubungan luas area dengan konsentrasi

deret standar sehingga akan didapatkan persamaan garis yang digunakan untuk

menentukan konsentrasi komponen sampel

13

Komponen yang dianalisis Persamaan garis konsentrasi Massa dalam

sampel

Vitamin C y = 53253x 536333 42,69 ppm 32,0175 mg

Kafein y = 39708x - 95124 50,27 ppm 37,7025 mg

Natrium benzoat y = 36008x - 363162 163,18 ppm 122,385 mg

Berdasarkan hasil analisis sampel minuman hemaviton energy drink mengandung

kadar natrium benzoat yang tinggi dibandingkan dengan kadar kafein dan vitamin C.

G. Kesimpulan

Berdasarkan hasil percobaan penentuan kadar zat aditif dalam sampel minuman

menggunakan instrumen High Performance Liquid Chromatography (HPLC) yang telah

dilakukan diperoleh kadar vitamin C, kafein dan natrium benzoat dalam minuman

hemaviton energy drink masing-masing yaitu 32,0175 mg, 37,7025 mg, dan 122,385 mg.

14

H. Daftar Pustaka

Hendayana, Sumar. (1994). Kimia Analitik Instrumen. Semarang: IKIP Semarang Press.

Poedjiadi, Anna dan Supriyatin, F.M. Titin. (2005). Dasar-dasar Biokimia. Jakarta: UI

Press.

Skoog, Douglas A.(1985). Principle of Instrumental Analysis Third Edition. Philadhepia:

Saunders College Publishing.

Wiji, dkk. (2011). Penuntun Praktikum Kimia Analitik Instrumen. Bandung: Jurusan

Pendidikan Kimia.

15

I. Lampiran

1. Pembuatan larutan

a. Pembuatan fasa gerak

b. Pembuatan larutan induk vitamin C, kafein, dan natrium benzoat

Fasa gerak (pelarut)

Dihitung

Di adjust pH = 2,65

Disaring

Etanol

Larutan etanol

Disaring dengan PTFE

Dihilangkan

gelembungnya

Asetonitril

asetonitril

Dicampurkan (perbandingan 70:30)

Masing-masing ditimbang 10

mg

Dicampurkan

Dilarutkan dalam 50 mL fasa

gerak

dihomogenkan

Natrium benzoat Vitamin C Kafein

Larutan induk

16

c. Pembuatan deret larutan standar

d. Penginjeksian larutan sampel

2. Perhitungan

Kadar vitamin C, kafein, dan natrium benzoat pada larutan induk

1) Kadar vitamin C =

= 204 ppm

2) Kadar kafein =

= 190 ppm

Larutan induk

Masing-masing dipipet 1mL,

2mL, 3mL, 4mL, 5 mL dan 6

mL

Diencerkan dengan pelarut

10 mL

Deret larutan standar

Dihomogenkan dengan ultra

sonic vibration

Disaring dengan membran

PTFE

Filtrat larutan

Dimasukkan ke botol vial

Diberi label

Di deggasing 5 menit

Larutan deret standar siap digunakan

filtrat

Dihilangkan gelembung

dengan ultra sonic vibration

Larutan sampel siap diinjeksi

Disaring dengan PTFE

Ditampung di botol vial

Larutan sampel

Dilarutkan dalam fasa gerak

hingga 10 mL

Larutan sampel + fasa gerak

17

3) Kadar Na-benzoat =

= 194 ppm

Kadar vitamin C dalam larutan deret

1) Larutan deret 1 mL 4) Larutan deret 4 mL

V1 M1 = V2 M2 V1 M1 = V2 M2

1 mL 204 ppm = 10 M2 4 mL 204 ppm = 10 M2

M2 = 20,4 ppm M2 = 81,6 ppm


V1 M1 = V2 M2 V1 M1 = V2 M2

2 mL 204 ppm = 10 M2 5 mL 204 ppm = 10 M2

M2 = 40,8 ppm M2 = 102 ppm


V1 M1 = V2 M2 V1 M1 = V2 M2

3 mL 204 ppm = 10 M2 6 mL 204 ppm = 10 M2

M2 = 61,2 ppm M2 = 122,4 ppm

Kadar kafein dalam larutan deret


V1 M1 = V2 M2 V1 M1 = V2 M2

1 mL 190 ppm = 10 M2 4 mL 190 ppm = 10 M2

M2 = 19 ppm M2 = 76 ppm


V1 M1 = V2 M2 V1 M1 = V2 M2

2 mL 190 ppm = 10 M2 5 mL 190 ppm = 10 M2

M2 = 38 ppm M2 = 95 ppm


V1 M1 = V2 M2 V1 M1 = V2 M2

3 mL 190 ppm = 10 M2 6 mL 190 ppm = 10 M2

M2 = 57 ppm M2 = 114 ppm

Kadar natrium benzoat dalam larutan deret


V1 M1 = V2 M2 V1 M1 = V2 M2

18

1 mL 194 ppm = 10 M2 4 mL 194 ppm = 10 M2

M2 = 19,4 ppm M2 = 77,6 ppm


V1 M1 = V2 M2 V1 M1 = V2 M2

2 mL 194 ppm = 10 M2 5 mL 194 ppm = 10 M2

M2 = 38,8 ppm M2 = 97 ppm


V1 M1 = V2 M2 V1 M1 = V2 M2

3 mL 194 ppm = 10 M2 6 mL 194 ppm = 10 M2

M2 = 58,2 ppm M2 = 116,4 ppm

Kadar vitamin C pada sampel

Persamaan garis : y = 53253x 536333

y = 1737545 (luas area vitamin C)

x =

= 42,69 ppm

V1 M1 = V2 M2

10 mL 42,69 ppm = 2 mL M2

M2 = 213,45 ppm

Massa vitamin C = 213,45

0,01 L = 2,1345 mg

konsentrasi(ppm) TR

20,4 412122

40,8 1813062

81,6 3800447

122,4 5951628

y = 53253x - 536333 R = 0.9971

0

2000000

4000000

6000000

8000000

0 50 100 150

luas

are

a

konsentrasi (ppm)

vitamin C

Series1

Linear (Series1)

19

Massa vitamin C dalam sampel =

2,1345 mg = 32,0175 mg

Kadar vitamin C =

= 0,021 %

Kadar kafein pada sampel

Persamaan garis : y = 39708x - 95124

y = 1901194 (luas area kafein)

x =

= 50,27 ppm

V1 M1 = V2 M2

10 mL 50,27 ppm = 2 mL M2

M2 = 251,35 ppm

Massa kafein = 251,35

0,01 L = 2,5135 mg

Massa kafein dalam sampel =

2,5135 mg = 37,7025 mg

Kadar kafein =

= 0,251 %

Kadar natrium benzoat pada sampel

Konsentrasi (ppm) TR

19 392346

38 1703964

57 2198220

114 5569539

y = 39708x - 95124 R = 0,9891

0

2000000

4000000

6000000

0 50 100 150

luas

are

a

konsentrasi (ppm)

kafein

Series1

Linear (Series1)

Konsentrasi (ppm) TR

19,4 229396

38,8 1120022

77,6 2523979

116,4 3755266

20

Persamaan garis : y = 36008x - 363162

y = 5513752 (luas area natrium benzoat)

x =

= 163,18 ppm

V1 M1 = V2 M2

10 mL 163,18 ppm = 2 mL M2

M2 = 815,9 ppm

Massa natrium benzoat = 815,9

0,01 L = 8,159 mg

Massa natrium benzoat dalam sampel =

8,159mg = 122,385 mg

Kadar natrium benzoat =

= 0,081 %

y = 36008x - 363162 R = 0.9955

0

2000000

4000000

6000000

0 50 100 150

luas

are

a

konsentrasi (ppm)

natrium benzoat

Series1

Linear (Series1)

21

Langkah Kerja Pengamatan

Pembuatan Fasa Gerak

(pelarut)

Asetonitril : larutan tidak berwarna

Kalium dihidrogen posfat : larutan tidak berwarna

Perbandingan metanol dan asetonitril = 70ml : 30ml

Pembuatan Larutan Induk

Natrium Benzoat, Vitamin C

dan Kafein

Vitamin C : serbuk putih

Massa vitamin C : 10,2 mg

Natrium Benzoat : serbuk putih

Massa natrium benzoat : 9,7 mg

Kafein : serbuk putih

Massa kafein : 9,5 mg

Larutan induk (campuran natrium benzoat, vitamin C dan

kafein) : larutan tidak berwarna

Pembuatan Deret Larutan

Standar Natrium Benzoat,

Vitamin C dan Kafein

Larutan deret standar : larutan tidak berwarna

Dihomogenkan selama 5 menit dengan ultrasonik vibrator

Pembuatan Larutan Sampel Sampel minuman hemaviton energy drink

Komposisi :

Taurine 1000 mg

1,3,7 trimethylxanthine 50 mg

Inositol 50 mg

Ginseng extract 10 mg

Vitamin B6 5 mg

Vitamin B12 5 mcg

Mengandung gula alami dan gula sorbitol

Penyiapan Instrumen HPLC Kondisi HPLC

1. Tekanan : 400 barr

2. Kolom : C-18

3. Partikel size : 5 m

4. : 254 nm

5. laju alir : 0,75 ml/menit

Tabel pengamatan

22

DOKUMENTASI

sampel Fasa gerak : aqua bides dan metanol

hasil penimbangan kafein, natrium benzoat,

vitamin C

ultra sonic vibrator

penginjeksian sampel

6. volume injeksi : 200 L

Sebelum digunakan Syringe dibilas dengan metanol

laporan hplc

Documents