laporan praktikum protein biuret

7/23/2019 Laporan Praktikum Protein Biuret

1/20

I. JUDUL : Penentuan Kadar Protein dengan Metode

Biuret

II. HARI/TANGGAL : Kamis, 23 Oktober 2014

III. TUJUAN PERCOBAAN : Menentukan kadar protein yang ada pada

sampel dengan menggunakan cara biuretIV. DASAR TEORI :

ecara umum, sumber dari protein adala! dari sumber nabati dan

!e"ani# Protein sangat penting bagi ke!idupan organisme pada umumnya,

karena ia ber$ungsi untuk memperbaiki sel%sel tubu! yang rusak dan suplai

nutrisi yang dibutu!kan tubu!# Maka, penting bagi kita untuk mengeta!ui

tentang protein dan !al%!al yang berkaitan dengannya# truktur protein

tidak stabil karena muda! mengalami denaturasi, yaitu keadaan dimana

protein terurai men&adi struktur primernya, baik re'ersibel maupun

irre'ersibel# (aktor%$aktor yang menyebabkan denaturasi adala! p),

panas, pelarut, kekuatan ion *at terlarut, dan radiasi# Protein ada yang

reakti$ karena asam amino penyusunnya mengandung gugus $ungsi yang reakti$, seperti

), %O), +)2, dan -OO)# Kelarutan protein di dalam suatu cairan,

sesunggu!nya sangat dipengaru!i ole! beberapa $aktor antara lain, p),

su!u, kekuatan ionik dan konstanta dielektrik pelarutnya#.elur puyu! memiliki ciri k!as unik yang berbeda dengan &enis

telur lainnya yaitu berbentuk o'al, mungil, ber"arna puti! keabuan

dengan corak !itam kecoklatan dan memiliki berat antara 10 !ingga 12

gram perbutirnya# .elur yang memiliki genus -onturni/ ini memang

muda! di dapat dengan !arga yang relati'e mura!#

alam 100 gram telur puyu! mengandung 13,0 gram protein,

sedikit lebi! tinggi dari telur ayam dan telur bebek# ari kandungan

protein yang tinggi ini menyimpan satu keunggulan, yaitu memiliki daya

cerna yang sangat tinggi, artinya setiap gram protein yang masuk akan

dicerna di dalam tubu! secara sempurna# Ole! karena itu, telur puyu!

merupakan sumber protein terbaik# .elur puyu! mempunyai beberapa

man$aat yaitu:

1# ebagai nutrisi otak dari kandungan 23,4 mg kolin dalam 100

gramnya# Man$aat ini sangat membantu untuk memperkuat daya


2/20

ingat bagi anak% anak, meng!indari kepikunan bagi orang tua lan&ut

usia, mengurangi resiko kematian pada &anin bagi ibu !amil,

mendukung perkembangan otak bayi secara optimal bagi ibu

menyusui, &uga memperta!ankan $ungsi otak agar tetap bugar dan

memperbaiki memori otak yang rusak bagi mereka dalam usia

produkti$,

2# ntuk melindungi mata dari kandungan senya"a lutein dan

*eaksatin# ari kedua senya"a inila! yang memberikan pigmen

ber"arna kuning, se!ingga dapat membantu melindungi mata dari

kerusakan dengan cara mem$ilter sinar biru yang berasal dari

pancaran sinar mata!ari, layar tele'isi, ataupun komputer bagi bayidan anak% anak#

3# ntuk mereduksi resiko penyakit kanker dan tumor dari kandungan

leutin dan *eaksatin

ntuk mendapat man$aat tersebut, !endaknya makan secukupnya

atau dengan kata lain berada dalam batas yang normal dan tidak sering

dikonsumsi untuk meng!indari ter&adinya !al% !al yang tidak diinginkan#

pabila konsumsi telur puyu! secara berlebi!an dan berulang% ulang,kemungkinan dapat ter&adi alergi pada semua usia yang ditandai dengan

gatal% gatal, mera!, mual, munta!, pusing dan bentuk alergi lainnya# elain

itu &uga dapat menimbulkan &era"at pada usia rema&a !ingga kolesterol

yang bisa menyerang dari usia anak% anak !ingga de"asa#

nalisis protein dapat dilakukan dengan dua metode, yaitu, secara

kualitati$ terdiri atas: reaksi 5antoprotein, reaksi )opkins%-ole, reaksi

Millon, reaksi +itroprusida, dan reaksi akaguc!i# ecara kuantitati$

terdiri dari 6 metode K&elda!l, metode titrasi $ormol, metode 7o"ry,

metode spektro$otometri 'isible 8Biuret9, dan metode spektro$otometri #

Metode Biuret 7arutan protein dibuat alkalis dengan +aO)

kemudian ditamba!kan larutan -uO4encer# &i ini untuk menun&ukkan

adanya senya"a%senya"a yang mengandung gugus amida asam yang

berada bersama gugus amida yang lain# &i ini memberikan reaksi positi$


3/20

yaitu ditandai dengan timbulnya "arna mera! 'iolet atau biru 'iolet#

;eaksinya yang terbentuk adala! sebagai berikut:

Konsentrasi larutan yang dianalisis sebanding dengan &umla! sinar

yang diserap ole! *at yang terdapat dalam larutan tersebut# alam !al ini,

!ukum 7ambert%Beer dapat menyatakan !ubungan antara serapan ca!aya

dengan konsentrasi *at dalam larutan# i ba"a! ini adala! persamaan

7ambert%Beer:

< % log . < =b c

engan < absorban 6 . < transmitan6 = < absorti'itas molar 87cm%1#mol%

19 6 b < pan&ang sel 8cm9 6 dan c < konsentrasi *at 8mol>79#


4/20

pektrum absorpsi yang diperole! dari !asil analisis dapat

memberikan in$ormasi pan&ang gelombang dengan absorbansi maksimum

dari senya"a atau unsur# Pan&ang gelombang dan absorbansi yang

di!asilkan selama proses analisis digunakan untuk membuat kur'a standar#

Konsentrasi suatu senya"a atau unsur dapat di!itung dari kur'a standar

yang diukur pada pan&ang gelombang dengan absorbansi maksimum# ari

kur'a standar kalibrasi, diperole! persamaan garis: y < a/ ? b

imana y merupakan serapan dan / adala! konsentrasi unsur atau

senya"a# engan persamaan garis tersebut dapat ditentukan konsentrasi

sampel# Pada spektro$otometer %is, "arna yang diserap ole! suatu

senya"a atau unsur adala! "arna komplementer dari "arna yang teramati#

)al tersebut dapat diketa!ui dari larutan ber"arna yang memiliki serapan

maksimum pada "arna komplementernya# +amun, apabila larutan

ber"arna dile"ati radiasi atau ca!aya puti!, maka radiasi tersebut pada

pan&ang gelombang tertentu akan diserap secara selekti$ sedangkan radiasi

yang tidak diserap akan diteruskan#

V. ALAT DAN BAHAN

1# lat:

a# .abung reaksi @ bua!

b# Pipet gondok 1 bua!

c# Aelas kimia bua!

d# Aelas ukur 1 bua!

e# patula 1 bua!

2# Ba!an :

a# 7arutan standar protein

b# 7arutan sampel proteinc# ;eagen biuret

d# Cuades


5/20

larutan standar protein dengan kadar 1mg, 2mg,3mg, 4mg, 5mg per ml protein

Absorbansi

Ditambah 4 ml reagen biuret

Dikocok

Diinkubasi pada suhu 39oC selama 10 menit

Dibiarkan pada suhu ruang selama 10 menit sampai terbentuk warna ungu ang stabil dan sem

Diukur absorbansi pada pan!ang gelombang 520 nm dengan alat spektro"otometer #$%$is

1 ml a&uades

Absorbansi

Ditambah 4 ml reagen biuretDikocok


Diukur absorbansi pada pan!ang gelombang 520 nm dengan alat spektro"otometer #$%

VI. ALUR KERJA

Pembuatan 7arutan standar

Penetapan absorbansi larutan blanko


6/20

0'4 gram putih telur puuh

Absorbansi

Dilarutkan pada 100 m( air

1 ml putih larutan sampel

Absorbansi


Dikocok


Diukur absorbansi pada pan!ang gelombang 520 nm dengan alat spektro"otometer #$%$is

Penetapan absorbansi larutan sampel


7/20

andar protein dengan kadar 1 mg, 2 mg,3 mg, 4 mg, 5 mg per ml protein

Absorbansi

ml reagen biuret

da suhu 39oC selama 10 menit

da suhu ruang selama 10 menit sampai terbentuk warna ungu ang stabil dan sempurnabansi pada pan!ang gelombang 520 nm dengan alat spektro"otometer #$%$is

VII. HASIL PENGAMATAN

Prosedur Percobaan )asil Pengamatan ugaan>;eaksi Kesimpulan

Pembuatan larutan standar 7arutan tandar: tidak

ber"arna

)2O: tidak ber"arna

;eagen biuret : larutanbiru &erni!

olume pengenceran

berta!ap mg>l !ingga 1

mg>l pada labu ukur 10

m7:

a# 1< ml

b# 2< D ml

c# 3< #ml

d# 4< # ml

e# < ml

Kandungan senya"a>*at pada

reagen biuret :

-uO4 memberikan

kompleks ber"arna

+aO) memberikan

suasana basa 8menguba! -u2?

-u?9

7arutan ion -u2? membentuk

kompleks dengan ikatan peptida

suatu protein se!ingga

meng!silkan "arna ungu dengan

absorbansi dari pan&ang

gelombang 8 9 maksimal 40

nm

Reaksi :

-uO4#)2O8aC9 ? 2+aO)8aC9

ari spektros$otometri

%is didapatkan

persamaan :

E


8/20

Sebel! :

7arutan standar berbagai

konsentrasi : tidak

ber"arna

Ses"a# :

7arutan standar ?

;eagen Biuret : larutan

biru &erni!

7arutan standar ? r#

Biuret ? diinkubasi :

larutan biru%ungu

Kepekatan larutan dari

pekat sampai tidak pekat

8ungu%biru tua

keunguan9

mgF 4mgF 3mgF 2mgF

1mg

-u8O)928aC9? +a2O48aC9? )2O8l9

alam suasana basa

-u8O)928aC9G -u2?

8aC9? 2O)%8aC9


9/20

- 8mg>ml9

1 0#043

2 0#0@1

3 0#132

4 0#203

0#22

ari sepktros$otometri %

is didapatkan persamaan :

y < 0,03@/ ? 0,02@42

;2< 0,@@1D

2# Penetapan absorbansi larutan blanko Sebel! :

Cuades : tidak

ber"arna

;eagen biuret : biru

7arutan blangko

aCuades adala! 0


10/20

1 ml a&uades

Absorbansi

4 ml reagen biuret

pada suhu 39oC selama 10 menit

orbansi pada pan!ang gelombang 520 nm dengan alat spektro"otometer #$%$is

&erni!

Ses"a# :

Cuades ? reagen biuret

: biru &erni! 8?9

Penetapan absorbansi larutan sampel Sebel! :

ampel : tidak ber"arna H kadar protein telur puyu! esuai per!itungan


11/20

0'4 gram putih telur puuh

Absorbansi

Dilarutkan pada 100 m( air

1 ml sampel

Absorbansi


DikocokDiinkubasi pada suhu 39oC

selama 10 menit

Diukur absorbansi pada

pan!ang gelombang 520 nm

dengan alat spektro"otometer

#$%$is

dan encer

;eagen biuret : biru

&erni!

Ses"a# :

ampel ? reagen biuret :

biru &erni!

ampel ? reagen biuret

? diinkubasi : biru 8?9

ampel bsorbansi

ampel 1 0#0@

ampel 2 0#03@

ampel 3 0#02@

literatur 13, H dari gra$ik e/cel

didapatkan kadar

protein rata%rata

sebesar 3#0H


12/20

VIII. ANALISIS DATA DAN PEMBAHASAN

Pe!ba$a% La&$a% S$a%"a&

Pada percobaan ini terlebi! da!ulu membuat lima larutan standar

dengan kadar yang berbeda% beda, yaitu 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, dan mg

dari larutan induk yang sama# Kemudian masing% masing larutan standar

protein dari kadar yang berbeda% beda tersebut dimasukkan ke dalam tabung

reaksi sebanyak 1 m7# 7alu masing% masing tabung reaksi ditamba!kan 4 m7

reagen biuret dan dikocok# ;eagen biuret dapat dibuat dengan

mencampurkan larutan +aO) dengan -uO4yang sesuai dengan persamaan

reaksi sebagai berikut:

-uO4#)2O8aC9? 2+aO)8aC9-u8O)928aC9? +a2O48aC9? )2O8l9

Penamba!an biuret mengakibatkan larutan yang a"alnya tidak

ber"arna men&adi biru, &erni!# )al ini dikarenakan ion -u2?dalam pereaksi

biuret dapat membentuk kompleks dengan ikatan peptida pada larutan induk

protein, yang sesuai dengan reaksi di ba"a! ini:


13/20

Kemudian diinkubasi pada su!u 3@I- selama 10 menit yang bertu&uan

menstabilkan senya"a kompleks yang terbentuk dari reaksi antara ion -u 2?

dengan larutan induk protein# etela! itu diukur absorbansi larutan standar

ini pada pan&ang gelombang 20 nm dengan alat spektro$otometer %is#

)asil absorbansinya adala! sebagai berikut:

Konsentrasi

8mg>ml9bsorbansi

1 0,043

2 0,0@1

3 0,132

4 0,203

0,22

ari data konsentrasi dan absorbansi pada larutan standar tersebut,

didapatkan kur'a seperti berikut ini:

0'5 1 1'5 2 2'5 3 3'5 4 4'5 5 5'5

0

0'05

0'1

0'15

0'2

0'25

")*+ 0'05* % 0

-. 0'9/

Kurva Standar

konsentrasi (mg/mL)

Absorbansi

ari kur'a larutan standar protein didapatkan persamaan y < 0,04/ ? 0,004

denga regresi linear 8;29 sebesar 0,@D2# Persamaan garis tersebut akan

digunakan untuk meng!itung kadar protein dalam larutan blanko dan larutan

sampel#


14/20

Pe%e$a'a% Abs(&ba%si La&$a% Bla%k(

7arutan blanko ini terbuat dari 1 m7 aCuades yang merupakan larutan

tidak ber"arna ditamba! 4 m7 reagen biuret, se!ingga meng!asilkan larutan

ber"arna biru &erni!# Jarna biru &erni! ini menandakan tidak terbentuknya

senya"a kompleks karena aCuades tidak mengandung protein# etela! itu

larutan blanko diinkubasi pada su!u 3@I- selama 10 menit agar mendapat

kepekatan larutan secara maksimal# Kemudian diukur absorbansi larutan

blanko ini pada pan&ang gelombang 20 nm dengan alat spektro$otometer %

is# ari pengukuran tersebut didapatkan nilai absorbansi sebesar 0#

Pe%e%$a% Abs(&ba%si La&$a% Sa!'el

Pada penentuan absirbansi larutan sampel mula% mula sampel yang

berupa puti! telur puyu! ditimbang seberat 0,4 gr, kemudian diencerkan

dengan 100 m7 aCudes# etela! itu sampel yang tela! diencerkan diambil 1

m7 dan dimasukkan masing% masing ke dalam 3 tabung reaksi# Pada masing%

masing tabung reaksi tersebut ditamba!kan 4 m7 reagen biuret kemudian

dikocok se!ingga meng!asilkan larutan ber"arna ungu &erni!# Jarna ungu

ini menandakan ion -u2?dalam pereaksi biuret dapat membentuk kompleks

dengan ikatan peptida pada larutan sampel protein# etela! itu diinkubasi

pada su!u 3@I- selama 10 menit untuk menstabilkan senya"a kompleks

yang terbentuk dari reaksi antara ion -u2?dengan larutan sampel protein#

Kemudian diukur absorbansi larutan sampel ini pada pan&ang gelombang 20

nm dengan alat spektro$otometer %is# ari pengukuran tersebut

didapatkan nilai absorbansi sebagai berikut#

-

8m

g>

m

79

bsorb

a

n

s

i

2,044 0,0@

0,D3 0,03@

0,1 0,02@


15/20

+ilai absorbansi ini akan digunakan untuk mencari kadar protein dalam

larutan sampel dengan menggunakan persamaan kur'a larutan standar#

y < 0,04/ ? 0,004

dimana:

y < bsorbansi larutan sampel

/ < Kadar protein dalam larutan sampel

se!ingga diperole!:

ampel 1

y < 0#04/ % 0#004

0#0@ < 0#04/ 0#004

/< 2#0@D mg>m7 8 / adala! konsentrasi sampel9

ampel 2

y < 0#04/ % 0#004

0#03@ < 0#04/ 0#004

/< 0#@034 mg>m7 8 / adala! konsentrasi sampel9

ampel 3

y < 0#04/ % 0#004

0#02@ < 0#04D/ 0#004


Kadar protein m7 8 / adala! konsentrasi sampel9

ampel 2

y < 0#04/ % 0#004

0#03@ < 0#04/ 0#004


ampel 3

y < 0#04/ % 0#004

0#02@ < 0#04D/ 0#004


Kadar protein 2012>0>man$aat%dan%ba!aya%

telur%puyu!#!tml8diakses tanggal 22 Oktober 20149

7# 7e!ninger, lbert# 1@D2# Dasar-dasar Biokimia.Lilid 1# 8Pener&ema!:

Maggy .!ena"id&a&a9# Lakarta: Nrlangga#

.im# 2012#Petunjuk Praktikum Biokimia.urabaya: nesa niPress#

LAMPIRAN
http://www.beritaterkinionline.com/2012/07/manfaat-dan-bahaya-telur-puyuh.htmlhttp://www.beritaterkinionline.com/2012/07/manfaat-dan-bahaya-telur-puyuh.htmlhttp://www.beritaterkinionline.com/2012/07/manfaat-dan-bahaya-telur-puyuh.htmlhttp://www.beritaterkinionline.com/2012/07/manfaat-dan-bahaya-telur-puyuh.html


20/20

ampel ditimbang seberat 0,4 gr ampel yang tela! diencerkan

7arutan standart protein, larutan blanko 7arutan standart protein, larutan blanko

dan sampel dan sampel yang tela! di inkubasi

laporan praktikum protein biuret

Documents