TSK-GEL TECHNICAL INFORMATION No.123

LC/MS による 2-アミノ安息香酸誘導体化糖鎖の分析

Analysis of 2AB-labeled isomaltooligosaccharides by LC/MS ポストゲノム研究の中心的課題の１つに糖鎖構造・機能の解明があり近年目覚しい進展を遂げて

います。糖鎖構造の解析は糖鎖を誘導体化した後、逆相HPLC、或いは順相HPLC (HILIC)、若し

くは逆相-順相の 2 次元 LC が用いられてきました。近年は MS の進化とともに LC/MS(/MS)やMALDI-TOF-MSによる解析が幅広く行われるようになってきました。 本資料では 2-アミノ安息香酸で誘導体化した糖鎖を HILIC/MS で分析した例を紹介します。分

離カラムにTSKgel Amide-80 3µmを用い条件を最適化することにより糖鎖が3量体から26量体

まで良好に分離・同定されました。 ＊本データは近畿大学薬学部 木下充弘先生のご厚意によります。

図１. TSKgel Amide-80 3µm を用いた LC/MS による２AA 誘導体化イソマルトオリゴ糖の測定

カラム： TSKgel Amide-80 3µm (2.0 mmI.D. x 15 cm)

溶離液： A) 15mmol/L CH3COONH4/CH3CN=10/90

B) 15mmol/L CH3COONH4/CH3CN=195/5

グラジエント： 30% B (0min) → 30% B (2min) → 90% B (32min)

流速： 0.25mL/min

検出： MS

イオン化 ESI、CDL temp.: 190 ℃、Detector voltage: 1.7 kV、Neuburising gas: 1.5 L/min

温度： 40℃

注入量： 2µL

試料：2 アミノ安息香酸誘導体化イソマルトオリゴ糖

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32

Positive ion moded.p3

d.p4

d.p5

d.p6

d.p7 d.

p8d.

p9d.

p10

d.p1

5

d.p2

0

d.p3

d.p4

d.p5

d.p6

d.p7

Negative ion mode

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32

Positive ion moded.p3

d.p4

d.p5

d.p6

d.p7 d.

p8d.

p9d.

p10

d.p1

5

d.p2

0

d.p3

d.p4

d.p5

d.p6

d.p7

Negative ion mode

min

min

600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000

[M+H] 1+ =626

[M+H] 1+ =788

[M+H] 1+ =950

[M+H] 1+ =1112

[M+H] 1+ =1274

[M+H] 1+ =1436

[M+2H] 2+ =718

dp:3

dp:4

dp:5

dp:6

dp:7

dp:8

m/z

600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000

[M+H] 1+ =626

[M+H] 1+ =788

[M+H] 1+ =950

[M+H] 1+ =1112

[M+H] 1+ =1274

[M+H] 1+ =1436

[M+2H] 2+ =718

dp:3

dp:4

dp:5

dp:6

dp:7

dp:8

m/z

図２-1． 2AA 誘導体化イソマルトオリゴ糖の ESI-MS スペクトル（ポジティブモード）

600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000

[M+H] 2+ =889

[M+H] 2+ =970

[M+H] 1+ =1598

[M+H] 2+ =809

[M+H] 2+ =1132

[M+H] 2+ =1214

[M+H] 2+ =1052

dp:9

dp:10

dp:11

dp:12

dp:13

dp:14

m/z

600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000

[M+H] 2+ =889

[M+H] 2+ =970

[M+H] 1+ =1598

[M+H] 2+ =809

[M+H] 2+ =1132

[M+H] 2+ =1214

[M+H] 2+ =1052

dp:9

dp:10

dp:11

dp:12

dp:13

dp:14

m/z

600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000

[M+H] 2+ =889

[M+H] 2+ =970

[M+H] 1+ =1598

[M+H] 2+ =809

[M+H] 2+ =1132

[M+H] 2+ =1214

[M+H] 2+ =1052

dp:9

dp:10

dp:11

dp:12

dp:13

dp:14

m/z

図２-２． 2AA 誘導体化イソマルトオリゴ糖の ESI-MS スペクトル（ポジティブモード）

600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000

[M+H] 2+ =1376

[M+H] 2+ =1457

[M+H] 2+ =1295

[M+H] 2+ =1619

[M+H] 2+ =1700

[M+H] 2+ =12538

[M+H] 3+ =1140

[M+H] 3+ =1086

dp:15

dp:16

dp:17

dp:18

dp:19

dp:20

m/z

600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000

[M+H] 2+ =1376

[M+H] 2+ =1457

[M+H] 2+ =1295

[M+H] 2+ =1619

[M+H] 2+ =1700

[M+H] 2+ =12538

[M+H] 3+ =1140

[M+H] 3+ =1086

dp:15

dp:16

dp:17

dp:18

dp:19

dp:20

m/z

図２-３． 2AA 誘導体化イソマルトオリゴ糖の ESI-MS スペクトル（ポジティブモード）

600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000

[M+H] 2+ =1782

[M+H] 3+ =1194

[M+H] 3+ =1248

[M+H] 3+ =1302

[M+H] 3+ =1357

[M+H] 3+ =1411

[M+H] 3+ =1465

[M+H] 2+ =1863.

dp:21

dp:22

dp:23

dp:24

dp:25

dp:26

m/z

600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000

[M+H] 2+ =1782

[M+H] 3+ =1194

[M+H] 3+ =1248

[M+H] 3+ =1302

[M+H] 3+ =1357

[M+H] 3+ =1411

[M+H] 3+ =1465

[M+H] 2+ =1863.

dp:21

dp:22

dp:23

dp:24

dp:25

dp:26

m/z

600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000

[M+H] 2+ =1782

[M+H] 3+ =1194

[M+H] 3+ =1248

[M+H] 3+ =1302

[M+H] 3+ =1357

[M+H] 3+ =1411

[M+H] 3+ =1465

[M+H] 2+ =1863.

dp:21

dp:22

dp:23

dp:24

dp:25

dp:26

m/z

図２-４． 2AA 誘導体化イソマルトオリゴ糖の ESI-MS スペクトル（ポジティブモード）