INTRODUCCION:

La lipasa es una enzima ubicua que se usa en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber. Su función principal es catalizar la hidrólisis de triacilglicerol a glicerol. Las lipasas se encuentran en gran variedad de seres vivos. Esta enzima en humanos se encuentra en la leche materna y, según estudios bioquímicos, es idéntica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreática no específica), por lo que se supone que el origen es pancreático y llega a las glándulas mamarias a través de la circulación sanguínea. La función principal de esta lipasa gástrica es ayudar a la absorción de grasas. Hay que destacar que la producción de jugo gástrico está controlada por dos mecanismos:

• Nervioso (sensaciones visuales, gustativas, etc).

• Hormonal, a través de la hormona gastrina.

En microorganismos, las lipasas se encuentran presentes para la digestión de grasas, la reconstitución del organismo y el metabolismo lipoproteico. Las células vegetales las producen para fabricar reservas de energía.

OBJETIVOS:

Al finalizar esta práctica, el alumno será capaz de:

Determinar por titulación ácido-base la cantidad de miliequivalentes de ácidos grasos

libres generados por a acción enzimático de la lipasa pancreática

Apreciar el efecto de las sales biliares sobre el aceite y la correspondiente generación

de los ácidos grasos por acción de la lipasa pancreática

PROCEDIMIENTO:

Primero rotulamos cuatro tubos de ensayos con los nombres de blanco (1y2); y tubo (1y2). Luego con los siguientes datos de la tabla preparamos las soluciones en cada tubo de ensayo

1 B1 2 B2mL. Aceite neutralizado 1.0 --- 1.0 ---mL. Buffer Fosfato 0,1M pH 8 --- --- 2.0 2.0mL. Sales biliares 0.25 % en buffer

2.0 2.0 ---- ---

mL. Agua destilada 2.0 3.0 2.0 3.0mL de Pancreatina 1% (en buffer)

5.0 5.0 5.0 5.0

La Pancreatina es un extracto de enzimas que contiene a la lipasa pancreática. Agitar los tubos fuertemente por 1 min. Incubar por 1 hora a 37°C (Baño María). Mezclar los tubos cada 10 minutos en el la hora de incubación. Adicionar II gotas de indicador de fenolftaleína a cada tubo antes de la titulación.

Titular cada tubo con NaOH 0.05N hasta coloración rosa, anotar el gasto en mL. Restar el gasto de los tubos blancos (B1 y B2) a los tubos 1 y 2 respectivamente.

RESULTADOS:

Gasto en ml de los cuatro tubos:

GB1 GB2 GT1 GT2

10,3 ml 7,8 ml 12,2 ml 10,4 ml

Restando los gastos:

GT1 – GB1 GT2 – GB2

1,9 ml 2,6 ml

Expresar la acidez de ácidos grasos liberados en miliequivalentes.

Cálculo de los resultados:

Se realizan mediante la siguiente expresión:

1. Miliequivalentes = 0,05 x 1,9 = 0,095 ml

2. Miliequivalentes = 0,05 x 2,6 = 0,13 ml

CONCLUSIONES:

Con respecto a la práctica se puede concluir:

La actividad de la enzima se evalúa por el incremento en el medio de incubación de los ácidos grasos libres que se liberan en el curso de la hidrólisis de la grasa por la lipasa pancreática.

La concentración de los ácidos grasos libres se determina mediante la valoración con NaOH 0,05N; en consecuencia a mayor acidez producida, mayor gasto del titulante y mayor actividad enzimática.

Miliequivalentes mEqacg = mEqNaOH = N x Greal