Listeria monocytogenes

Gram+

rövid pálca

0,5-1 – 1-2 μm

spóra nincs

csilló

16 szerotípus

Morfológia

Előfordulás

szaporodni képes:talaj (barna erdőtalaj)vízszennyvíz

növényekszilázs takarmányegészséges állatok és ember bélcsatornájaélelmiszerek:

nyers húshúskészítménybaromfitej

Fertőzést okozó élelmiszerek

nyerstej

lágysajtok camembert, brie

hús

zöldség

Ellenállóképesség

Talaj, víz, szennyvíz: hónapokig túlél, sőt szaporodik is!!!

>60°C, fertőtlenítőszerek: perceken belül elpusztul

10% NaCl koncentrációig szaporodik

Min. pH=4,4 (szerves savak jobban elpusztítják, mint a szervetlenek)

Fagyasztást, szárítást jól bírja

Tenyésztés

Fakultatív anaerob

0-42°C (optimum: 37°C)

20-25°C: csillós, bukfencező mozgás

Közönséges agar: apró, kerek. Henry-féle megvilágításban kékesfehér fényű telep.

Véres agar (juh, szm., ló): keskeny, β-hemolízises udvar.

Dúsító

Fraser leves

LiCl, nalidixinsav, akriflavin-hidroklorid: gátlóanyagok

eszkulin, ammónium-vas(III)-citrát: differenciáló rendszer

glükóz-eszkulin → β-D-glükozidáz enzim → glükóz + eszkuletin → eszkuletin + Fe3+ → olívazöld, fekete komplex

Fraser leves

Szilárd táptalajok

Oxford-agarLiCl, nalidixinsav, akriflavin-hidroklorid,

eszkulin, ammónium-vas(III)-citrátBarnászöld, fekete udvarú telepek

Palcam agar Polimixin-B, akriflavin, lítium-klorid, Na-

ceftazimid, aesculin, mannitSzürkés-zöld, fekete udvarú telepek

Ez jóval szelektívebb az Oxford agarnál

Oxford & Palcam agar

A vizsgálat menete

minta + első dúsító (feles erősségű Fraser leves)

↓

Inkubálás 30°C, 24±2h

↓ ↓

Szélesztés Palcam és Oxford agarra 0,1 ml tenyészet 10 ml második ↓ dúsítóba (Fraser leves)

Inkubálás 30, 35 vagy 37°C, ↓

24±2h (+24h ha szükséges) Inkubálás 35 vagy37°C, 48±2h

↓ ↓

Megerősítés Szélesztés Palcam és Oxford agarra ↓

Inkubálás 30, 35 vagy 37°C, 24±2h(+24h ha szükséges)

↓

Megerősítés

Megerősítés

Kataláz próba: +

Gram festés: +, karcsú, rövid pálca

Mozgásvizsgálat:

telepet leoltani tripton-szója-élesztő levesbe, 25°C, 8-24 óra → 1 csepp tárgylemezre → körkörös, bukfencező mozgás

lágy agarba szúrókaccsal mély leoltás, 25 °C 8-24 óra → esernyő formájú növekedés

Megerősítés - Haemolysis

Hemolízis: juhvéres agaron, 37°C, 24 óraL. monocytogenes: egyenletes, tiszta, világos,

keskeny β-hemolízis

L. ivanovii: széles, világos β-hemolízis

L. innocua: nincs feltisztulás

L. seeligeri: gyenge β-hemolízis

Haemolysis

Haemolyis

Megerősítés – CAMP próba

CAMP-próba (Christie, Atkins, Munch, Paterson)Juhvéres agarra oltókaccsal ismert β-hemolízáló

Staphylococcus aureus- és Rhodococcus equi-csíkot húzunk → Listeria monocytogenes β-hemolízise felerősíti a Staphylococcus aureus haemolysisét → csésze, ásó alakú feltisztulás

– (A L. ivanovii ugyanezt csinálja, csak a Rhodococcus equi-vel)

CAMP test

Megerősítés

Henry-féle megvilágítás: 45°-ban alulról világított Petri-csésze kékes szín

Savtermelés cukrokból: ramnóz(+)

xilóz(-)

Henry-féle megvilágítás

Azonosítás

Fajok Hemo-lízis

Savtermelés CAMP-teszt

ramnóz

xilóz S. aureus

Rh. equi

L. monocytogenes

+ + - + -

L. innocua - V - - -

L. ivanovii + - + - +

L. seeligeri (+) - + (+) -

L. welshimeri - V + - -

L. grayi subsp. grayi

- - - - -

L. grayi subsp. murray

- V - - -

V: változó reakció; (+): gyenge reakció; + : >90%-ban pozitív reakció; - : nincs reakció

Campylobacter jejuni

Gram-,

S-alakú, hajlott pálcaöreg tenyészetben coccoid

0,2-0,8 – 0,5-5 μm,

spórátlan

Dugóhúzó-szerű mozgás poláris flagellum

a sejt egyik v. mindkét végén

Campylobacter jejuni

•

•

Campylobacter jejuni

Általános tulajdonságok

Microaerophil (3-5% O2 és 2-10% CO2)

30,5-45°C (optimum: 42°C – generációs idő még itt is hosszú: ~ 1 óra)

Energiát aminosavak, trikarboxi-savak bontásából nyer, szénhidrátokat nem bont

Kataláz+, Oxidáz+

Általános tulajdonságok

Metilvörös-, Voges-Proskauer-

Indol-, lipáz-, lecitináz-

Zselatint, keményítőt, kazeint nem bontja

Nitrátredukció+

Fumarátot redukálja szukcináttá

Hippurát-hidrolízis+ (csak C. jejuni!)

Rezisztencia:nalidixsav-

cephalotin+

Előfordulás

Állatok, ember bélcsatornájának természetes lakója; madarak tűnnek a természetes rezervoárnak; környezetben nem bizonyított, de feltételezhető a túlélése

Közvetítő: főleg baromfihús (csirke), de más élelmiszerek (tej, víz) közvetítő szerepe is lehetséges

Fertőzési források (fontossági sorrendben)

Rosszul hőkezelt baromfi

Nyers baromfi feldolgozása

Háziállatokkal való érintkezés

Utazás, kirándulás

Nyerstej fogyasztása

Ellenállóképesség

Élelmiszerekben hűtve sokkal jobban túlél, mint szobahőmérsékleten

Felületeken, kézen ~1 óráig túlél

Fagyasztás sem pusztítja el teljesen

Vákuumcsomagolást jól bírja, oxigénre érzékenyebb

55°C-on hamar elpusztul

Szárítást nem bírja, de bizonyos (alacsony) hőmérsékleten így is túlél

Sózásra, savanyú pH-ra érzékeny

Tenyésztés

1. lépés: dúsítás 42°C-on, 24-48 óráig

2. lépés: izolálás szelektív agaron 42°C-on, 24-48 óráig, microaerophil körülmények között

3. lépés: megerősítés

Dúsítók

Preston leves:Fe(II)-szulfát, Na-metabiszulfit, Na-piruvát, vér: oxigén-gyökök megkötésePolymyxin-B

Bolton leves: ketolgutársav, Na-metabiszulfit, Na-piruvát, Na-

karbonátLóvér

Cycloheximide, cefoperazone, vancomycin, trimethoprim

Táptalajok

Mikroaerofil tenyésztés!!!

Skirrow agar, Butzler agar, Preston agar, Blaser-Wang agar: hasonlók, a különbség a szelektív adalékokból adódik: (vancomycin, polymyxin, thrimethoprim, bacitracin,

cycloheximide, colistin-sulphate, cephazolin-sodium, novobiocin, cephalotin, amphoterecin B, stb.)

Karmali agar: aktív szén, haematin

mCCDA agar: modified charcoal cefoperazone deoxycholate agar: az oxigén megkötését az aktív szén végzi;

telepek: cseppszerűek, színtelenek v. szürkék

mCCDA

Megerősítés

1. Kataláz+

2. Oxidáz+

3. Gram-festés: -

4. Natív kenet,

függőcsepp-készítmény: dugóhúzó-szerű mozgás

Megerősítés

5. Hippurát-hidrolízis: 0,4 cm3 Na-hippurát-oldat beoltása → 37°C, 2 óra → + 1 csepp ninhidrin-reagens → 5 perc 100°C → +: lila színCsak C. jejuni +

6. Tenyésztés 25°C-on: nem nő

7. Rezisztencia- (érzékenység-) vizsgálat: nalidixinsavas korong → rátenni egy szelektív komponenseket nem tartalmazó, a vizsgált tenyészettel beoltott agarra → 42±1°C, 16-24 óra → pozitív esetben gátlási zóna figyelhető meg. A C. jejuni mindig érzékeny a nalidixinsavra!