lp8
DESCRIPTION
lp microbiologie antibiogramaTRANSCRIPT
ANTIBIOGRAMA
LABORATORUL DE BACTERIOLOGIE
INITIEREA
TINTIREA
MONITORIZAREA
TERAPIEI ANTIMICROBIENE
TERAPIA ANTIMICROBIANA POSIBILA
Diferentierea infectiei bacteriene de infectia virala
Microorganismul infectant a fost stabilit prin rationament clinico-epidemiologic
Depistarea microorganismului infectant prin metode rapide
Izolarea in cultura pura; identificarea microorganismului infectant si testarea sensibilitatii la antibiotice
TERAPIA ANTIMICROBIANA POSIBILA
SPECTRUL REAL DE SENSIBILITATE
AL TULPINII
CU SEMNIFICATIE CLINICA
ANTIBIOGRAMA
DEFINITIE
Testarea sensibilităţii microorganismelor
“in vitro”
faţă de antibiotice
RELATIA MICROB-MEDICAMENT
IN VITRO:
- CMI (cea mai mica concentratie de antibiotic care inhiba cresterea bacteriana)
- CMB (cea mai mica concentratie de antibiotic care omoara 99.9% din populatia bacteriana)
IN VIVO: CONCENTRATIA DE MEDICAMENT ANTIMICROBIAN ACTIV IN FOCARUL DE INFECTIE (concentratia terapeutica)
Clasificarea microorganismelor in categorii de sensibilitate
SENSIBIL
CMI = 2-4 X< NIVELUL ATB. IN SER (UMORI)in conditiile unor doze
unice sau repetate normale
CMI/CT<1
EFECT TERAPEUTIC POSIBIL
Clasificarea microorganismelor in categorii de sensibilitate
REZISTENT
CMI > NIVELUL ATB. IN SER (UMORI)
CMI/CT>1
EFECT TERAPEUTIC NEVEROSIMIL
Clasificarea microorganismelor in categorii de sensibilitate
INTERMEDIAR
CMI apropiat NIVELUL ATB. IN SER (UMORI)
CMI/CT=1
EFECT TERAPEUTIC IMPREVIZIBIL(exceptii: doze f.mari, concentrare in focar, administrare locala)
Clasificarea microorganismelor in categorii de sensibilitate
PUNCTELE DE RUPTURA ALE CMI
FACTORI FARMACOLOGICI CONCENTRATIA MAX. A MEDICAMENTULUI IN FOCAR SI
TIMPUL DE INJUMATATIRE FRACTIUNEA ACTIVA ANTIMICROBIANA METABOLITI CU ACTIVITATE ANTIMICROBIANA RESTANTA CONCENTRATIA DE MEDICAMENT ACTIV VARIAZA
CONTINUU IN ORGANISMUL PACIENTULUI
Clasificarea microorganismelor in categorii de sensibilitate
PUNCTELE DE RUPTURA ALE CMI
FACTORI MICROBIENI CMI ESTE O VALOARE STATICA DISTRIBUTIA CMI VARIAZA:
- ZONE GEOGRAFICE
- COLECTIVITATI
- SPECII
TESTE DE EFICIENTA TERAPEUTICA
Cinetica proteinei C reactive (CRP)
Testarea activitatii antibacteriene a serului
Nivelul de Eficienta Bactericida (NEB)
cea mai mare dilutie a serului care omoara cel putin 99.9% din organismele inoculate
METODE DE TESTARE
Calitativemetoda difuzimetrică
Cantitativedeterminarea CMI
(concentraţia minimă inhibitorie)
STANDARDIZAREA TESTELOR DE SENSIBILITATE
MEDIUL DE CULTURA ORGANISME AEROBE: m. MUELLER-HINTON
30.0% beef infusion1.75% casein hydrolysate0.15% starch1.7% agarpH adjusted to neutral at 25 °C.
STANDARDIZAREA TESTELOR DE SENSIBILITATE
MEDIUL DE CULTURA ORGANISME ANAEROBE ISA supplemented with 5 % defibrinated horse blood and
20 mg/L NAD Fastidious Anaerobe agar m. WILKINS—CHALGREN
MEDIUL DE CULTURA Bazele purinice, pirimidinice, nucleozidele (din peptone) antagonizeaza
sulfamidele si trimetoprimul Mineralele (cationii de Mg si Ca) interfera:
- activitatea tetraciclinelelor (stafilococ)
- aminoglicozidelor (pseudomonade)
pH-ul mediului (7,2-7,4):
- acid: scade activitatea macrolidelor si aminoglicozidelor
creste activitatea tetraciclinelor, nitrofuranului
- alcalin: invers
Suplimentele nutritive:
- glucoza: creste zonele de inhibitie la penicilina,ampicilina; nu modifica CMI
- sange: reduce zonele de inhibitie la aminoglicozide, sulfamide, trimetoprim, rifampicina
Grosimea, uniformitatea
STANDARDIZAREA TESTELOR DE SENSIBILITATE
INOCULUL
ATESTAREA SEMNIFICATIEI CLINICE
DENSITATE
- METODA DIFUZIMETRICA = 108 UFC/ml (std.turbidimetric 0.5 MacFarland)
- METODA DILUTIILOR= 105 UFC/ml
VARSTA (culturii): FAZA LOGARITMICA
INOCULUL
Prepararea inoculului: - se suspensionează 2-3 colonii izolate, în ser fiziologic Etalonarea - turbiditatea suspensiei se controlează nefelometric sau comparând cu tuburi etalon (conţin suspensii de particule latex/sulfat de Ba cu turbiditate determinată)- se ajustează la 0.5 McFarland- timp: max.15min.
PROCEDURA
Temperarea placilor cu m.Mueller-Hinton
Insamantarea cu inoculul etalonat Adsorbtia inoculului 3-5min. Aplicarea discurilor/benzilor Etest
STANDARDIZAREA TESTELOR DE SENSIBILITATE
INCUBATIA
TIMPUL
16 - 18ore
TEMPERATURA
35C - 37C (functie de specie)
ATMOSFERA
(functie de specie)
STANDARDIZAREA TESTELOR DE SENSIBILITATE
SELECTAREA SUBSTANTELOR ANTIMICROBIENE
CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute)
EUCAST (European Committee on Antibiotic Susceptibility)
SELECTAREA SUBSTANTELOR ANTIMICROBIENE
Grupele de antibiotice testate/raportate Grup A: antibiotice testate şi raportate de rutină (de primă intenţie) Grup B: antibiotice importante clinic, care se testează de rutină dar rezultatele se raportează selectiv; dacă: - o tulpina este rezistentă faţă de aceeaşi clasă de antibiotic din grup A - izolatul provine din produs patologic special (de ex. sensibilitatea faţă de
cefalosporine de generaţia a III-a a izolatelor din LCR) - infecţia este polimicrobiană - infecţia se extinde la mai multe situsuri - alergie la antibiotice - eşec terapeutic la tratament cu antibiotic grup A - raportare către SPCIN, scop epidemiologic Grup C: antibiotice suplimentare sau alternative: - tulpini nosocomiale - alergii - scop epidemiologic Grup U: antibiotice testate în infecţii urinare Grup O (other): antibiotice utilizabile în terapie dar care nu se testează de rutină
CONTROLUL DE CALITATEAmerican Type Culture Collection
TESTE CALITATIVE
A. ANTIBIOGRAMA DIFUZIMETRICA PE SUBCULTURA STANDARDIZATA (Metoda Kirby-Bauer)
O cantitate de substanta antimicrobiana este depusa pe suprafata mediului agarizat preinsamantat cu bacteria testata
Se produc: difuzia antibioticului si cresterea bacteriei In locul unde antibioticul realizeaza concentratii>CMI, bacteria nu creste;
circumferinta zonei de inhibitie: locul geometric al punctelor in care antibioticul a atins CMI in momentul critic al culturii (faza de lag + primele 2-4 generatii)
Diametrul zonei de inhibitie variaza invers proportional cu CMI Nu permite cuantificarea nivelului de rezistenţă, rezultatele fiind exprimate
în sensibil, intermediar sau rezistent
B. ANTIBIOGRAMA DIFUZIMETRICA PE CULTURA PRIMARA
ANTIBIOGRAMA DIFUZIMETRICA PE SUBCULTURA STANDARDIZATA
(Metoda Kirby-Bauer)
ANTIBIOGRAMA DIFUZIMETRICA PE SUBCULTURA STANDARDIZATA (Metoda Kirby-Bauer)
ANTIBIOGRAMA DIFUZIMETRICA PE SUBCULTURA STANDARDIZATA (Metoda Kirby-Bauer)
Citire Cultură bacteriană confluentă în jurul microcomprimatelor (R) Zone de inhibiţie (lipsa creşterii bacteriene) (S/I)- se masoara diametrele zonelor de inhibiţie - se compară diametrele citite cu diametrele din standard
Interpretare CLSI
Sinergism
Rezistenta inductibila
ESBL
TESTE CANTITATIVE
Determina concentraţia minima inhibitorie (CMI) a unui antibiotic (CMI: cantitatea cea mai mică de antibiotic care inhibă complet
multiplicarea unei bacterii) Se recomandată în următoarele situaţii: - cazuri clinice grave (septicemii, endocardite, meningite) - rezultate incerte la metoda difuzimetrică / sensibilitate
nedeterminată - situaţii speciale (ex. testarea sensibilităţii pneumococului la
penicilină când diametrul zonei de inhibiţie la oxacilină este <20 mm)
CMI obţinut se raportează la punctele de ruptură superior şi inferior date de CLSI
TEHNICI
METODA DILUTIILOR IN AGAR
Se efectueaza diluţii succesive din antibioticul testat în geloză Mueller-Hinton
Se însămânţează cultura bacteriană în spoturiIncubare Citire CMI
TEHNICI
METODA DILUTIILOR IN BULIONSe efectueaza diluţii succesive din antibioticul de testat în
mediu de cultură lichid
Se adaugă cantităţi fixe din cultura bacteriană cercetată
Incubare 18 ore 35°C
Se urmăreşte apariţia culturii în mediul lichid
Citire CMI
TEHNICA MACRODILUTIILORIN BULION
TEHNICA MACRODILUTIILORIN BULION
TEHNICA MICRODILUTIILOR IN BULION
VITEK 2C
TESTUL E
Inoculul standardizat este insamantat intr-un gradient discontinuu de concentratii ale antibioticului
E-teste: bandelete din plastic impregnate cu antibiotic în gradient exponential (la un capăt concentraţia minimă, la celălalt maximă)
PROCEDURA Se insamanteaza inoculul
standardizat Se aplica benzile Etest
Incubare Citire CMI: zone de inhibiţie de formă elipsoidală (în dreptul intersectării cu banda de plastic)