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Fotos: Farfán, 2009
M Sc. SOLANGE BENÍTEZBacterióloga. UCMC
Universidad Nacional de Colombia
Asohofrucol Universidad Nacional de Colombia
Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural
I. A. Ph.D. LILLIANA HOYOSProfesora Asistente
Universidad Nacional de Colombia
Caracterizar mediante técnicas biológicas, bioquímicas y
moleculares el agente etiológico de la enfermedad mancha
de aceite incidente en cultivos de gulupa (Passiflora edulis
Sims) en zonas productoras de Colombia.
Objetivo IV
Pruebas bioquímicas Pruebas moleculares
Objetivo III
Pruebas de patogenicidad en gulupa. Análisis de cortes histopatológicos
Objetivo II
Pruebas de hipersensibilidad en pimentón.
Objetivo I
Observaciones en campo y obtención de aislamientos.
Muestras de Gulupa y Maracuyá.
El Peñol
CajamarcaIbaguéVilla Rica
GarzónGigante
La Argentina
San Martín
GranadaSan Bernardo
Venecia
Buenavista
ManizalesSta. Rosa de Cabal
La praderaLa UniónToro
Roldanillo
Características generales de las zonas recolectadas:
•15‐20 C°.
•1.400‐2.300 msnm.
•1‐3 años.
Benítez y Hoyos , 2009. Rev. Col. Cie. Hort.
La mayoría de aislamientos a partir de muestras de hojasafectadas corresponden a un 59 %, lo cual es un indicativode que los síntomas iniciales de la enfermedad demancha de aceite son foliares (tipo III).
Día 1-3
Día 7 Día 8-9
Día 14-15 Día 20
Día 30 Día 45
Tejido sano de gulupa.
Corte trasversal de hoja infectada en estado 4.
Avance de lesión.
Corte trasversal hoja sana de gulupa, nervadura central.
Corte trasversal de hoja infectada asociada lesión a nervadura
Disrupción celular y algunas fibras de pared celular
Árbol de análisis filogenético obtenido por Neighbour Joining de secuencias ADNr 16S de aislamientos bacterianos patogénicos obtenidos de gulupa. MEGA 4.1. Bootstrap: 1000 réplicas.
I.
II.
Xanthomonasaxonopodis
Stenotrophomonas sp.
Fotos: Farfán, 2009
PCR anidada para la confirmación del agente causal específicamente pv. passiflorae.
Munhoz, 2009.
•
•
•
641 pb
520pb
641 pb
Pruebas bioquímicas: Sistema de Identificación API 20NE® Pruebas moleculares
Familia: Xanthomodaceae Familia: Enterobacteriaceae
Amplificación y secuenciación de ADNr 16S Amplificación de región específica de ITS 16S‐23S. pv. passiflorae
Xanthomonas axonopodis
X. campestris Stenophomonas sp.
E. cloceae o E. amylovora
Pantoea aglomerans
Xanthomonas axonopodisR‐22580
Stenophomonassp.LMG 11002, 957 y 11087
E. cloceae
Pantoea agglomerans P5WAM y AE10
Aislamientosanalizados
15/22 1/22 3/22 2/22 1/22 10/18 5/18 1/18 2/18 0/10
N° total de aislamientos analizados
22 18 10
0
7
14,3
28,6
42,9
54,7457,1 57,1
71,4
85,7
98,9
1 3 5 7 9 11 13 15 20 30 45
Índices d
e Severid
ad% (P
roceso de la enfermed
ad).
Días Pos‐Inoculación (Tiempo).
Estado 0.
Estado 1.
2 X104 UFC/4cm2
(Fase epifítica).
Periodo de Incubación: Penetración e infección
Inicio de manifestación de síntomas:
Colonización (fase exponencial).
Estado 2.
Estado 3.
Inicio de Necrosis: Desarrollo de factores de
patogenicidad. Actividad metabólica.
Manifestación de síntomas:
Establecimiento y resistencia a estrés
oxidativo etc.
Necrosis: 2 x 109
UFC/4cm2. Capacidad máxima por cm2.
Observación de síntomas en otros órganos: P, C y E, traslado de población bacteriana. Necrosis
generalizada, defoliamiento.
Disrupción del PL
Halos aceitosos en tallos y presencia de síntomas en hojas ascendentes.
Dispersión de población bacteriana por haces vasculares.
Mora et al., 2009 reportan que la incidencia en los lotes infectados varía del 30% al 95% donde los factores ambientales que favorecieron el desarrollo y la incidencia de esta enfermedad fueron una precipitación media de 3,29 mm, temperatura media de 20,8°C, humectación de la lámina foliar 366,5 por minuto y una humedad relativa media de 72.1%.
Xanthomonas axonopodis en gulupa (P.edulis Sims)
1 X108 UFC/4cm2
(Clorosis).
Estado 4.
Fase de Establecimiento (Est I)Colonización I.Infección I Establecimiento
estableInfección II Enfermedad ‐
Coloniza. II
Fase Patogénica (Est II)Las condiciones favorables de la enfermedad de “Mancha de aceite” es:•HR: 70-90%•T: 20-30°C•Alta humedad de la lámina foliar para su diseminación.
Patovariedad en X. axonopodis:
•No hubo coincidencia en los productos deamplificación con primers específicos•No se puede concluir con certeza si es o no X.axonopodis pv. passiflorae.
Fotos: Farfán, 2009
Los agentes bacterianos causales de la enfermedad de “Mancha de aceite” en gulupa (P.edulis) son X. axonopodis y Stenotrophomonas sp.
Síntomas:
•Lesiones iniciales manchas acuosas de bordes irregulares, acompañadas de necrosis y normalmente de color amarillento en el ápice o lámina lateral de las hojas. • Prevalencia de lesión tipo III•Cuando el progreso de la enfermedad es máximo ocurre desprendimiento foliar (pérdida de área fotosintética)• Halos aceitosos en otros órganos como frutos, tallos y flores.•Enfermedad sistémica.
Fotos: Farfán, 2009
Histología:
Las masas bacterianas se alojan principalmente en los espacios intercelulares del parénquima lagunar y cortical.En estados avanzados de la enfermedad se observan masas bacterianas en los haces vasculares.
Enfermedad de mancha de aceite :
Fase I: Infección y establecimiento de inóculo. Periodo de incubación 5 días hasta el inicio de manifestación de síntomas.Población bacteriana aumentó 100.000 veces hasta el 7 día pos-inoculación.
Fase II: Enfermedad.Movimiento de inoculo a otras localizaciones de la planta dispersión de síntomas.
Fotos: Farfán, 2009