maisto saugos laboratorinių tyrimų metodai nacionaliniame...
TRANSCRIPT
-
Snieguolė Ščeponavičienė NMVRVI Direktoriaus pavaduotoja
2019 10 03, Vilnius
Maisto saugos laboratorinių tyrimų metodai
Nacionaliniame maisto ir veterinarijos rizikos vertinimo institute
-
Vizija – profesionali ir kompetentinga gyvūnų sveikatos ir maisto saugos oficialios kontrolės institucija,
kurianti skaidrius, pasitikėjimu ir bendradarbiavimu parentus ryšius su visuomene, verslu ir socialiniais
partneriais.
Misija – kurti ir įgyvendinti optimalią ūkio subjektų priežiūros sistemą, siekiant apsaugoti visuomenę,
gyvūnus ir aplinką nuo jiems pavojingų veiksnių maisto, pašarų ir veterinarijos srityse.
Maisto grandinės kontrolė: pagal principą
„NUO LAUKO IKI STALO“
LAUKAI
IR FERMOS
Augalų apsauga
Gyvūnų sveikata ir
gerovė
Poveikis
aplinkai
VEIKSNIAI
ĮTAKOJANTYS
GALUTINĮ
PRODUKTĄ
Transportavimas ir
saugojimas
Gamyba ir
inovacijos
Duomenys apie
maisto sudėtį
MOKSLO VAIDMUO
SAUGANT
VARTOTOJUS
EFSA
Maisto sauga – pasiekimas!
Valstybinė maisto ir veterinarijos tarnyba
-
Nacionalinis maisto ir veterinarijos
rizikos vertinimo institutas
Atliekama virš 1 mln. tyrimų kasmet.
2018 m. teiktos paslaugos daugiau kaip 6000
verslo subjektų.
2012-2018 m. pateikta virš 400 mokslinių
nuomonių ir rizikos vertinimų.
Akreditacijos:
• ISO/IEC 17025 (nuo 2015 05 06 Nacionalinis akreditacijos biuras);
• ISO/IEC 17025 (iki 2015 – DAkkS, Vokietija); 423 akredituoti tyrimų metodai;
Lanksti akreditavimo sritis nuo 2018 09 21;
ILAC-MRA ženklas nuo 2018 04
LABORATOR
INIAI
TYRIMAI
RIZIKOS
VERTINIMAS
MOKSLINĖ
VEIKLA
-
NMVRVI
Teritoriniai
skyriai
Nacionalinis maisto ir veterinarijos
rizikos vertinimo institutas
-
Žmonių zoonozių atvejai ES, 2017 m.
EFSA Journal 2018;16(12):5500
-
Dažniausi protrūkių sukėlėjai
Bakterijos Salmonella
Campylobacter
Listeria monocytogenes
Patogeninė E. coli
Yersinia enterocolitica
Virusai Hepatitas A
Norovirusas
Pirmuonys Toxoplasma gondii
Parazitai Trichinella
-
Per maistą plintančių užkrečiamųjų ligų protrūkius
dažniausia sukelia šios bakterijos:
Campylobacter
Salmonella
E.coli
VTEC
Listeria
-
Ūmių žarnyno infekcijų protrūkiai, siejami su maisto
tvarkymo subjektų veikla 2014-2018
8 10 13 14 15
62
143
160 168
124
5 6 9 11
13
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
2014 2015 2016 2017 2018
Protrūkių skaičius Susirgusių asmenų skaičius Salmonelių sukelti protrūkiai
-
Protrūkių, siejamų su maisto tvarkymo subjektų veikla,
sukėlėjų etiologija 2014-2018
0 2 4 6 8 10 12 14
2014
2015
2016
2017
2018
5
6
9
11
13
2
4
4
2
2
1
1
Maisto toksinės infekcijos Nenustatytos etiologijos žarnyno infekcijos Salmoneliozės
-
Ūmių infekcinių žarnyno susirgimų protrūkiai, siejami
su maisto tvarkymo subjektų veikla 2014-2018 m.
3
4
5
6
8
2
5
7
6
7
1 1
2 2
1
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
2014 2015 2016 2017 2018
Vaikų ugdymo įstaigos Viešojo maitinimo įmonės Konditerijos cechai Prekybos centrai
-
Pagrindinės priežastys protrūkiams atsirasti
Kryžminė tarša
80%
Laikymo sąlygų
pažeidimai
5%
Higienos pažeidimai
4%
Savikontrolės pažeidimai
4%
Priežastis neišaiškinta
7%
-
• Salmonella spp. aptikimas LST EN ISO 6579-1:2017;
• Salmonella spp. aptikimas BAX sisteme Q7 SDP M.4 (alternatyvus metodas)
• Listeria monocytogenes aptikimas LST EN ISO 11290-1:2017;
• Listeria monocytogenes aptikimas BAX sistema Q7 SDP M.2 (alternatyvus metodas);
• Listeria monocytogenes skaičiaus nustatymas LST EN ISO 11290-2:2017;
• Escherichia coli O 157 H:7 aptikimas SDP M.3 (alternatyvus metodas);
• Campylobacter spp. aptikimas LST EN ISO 10272-1:2017;
• Campylobacter spp. skaičiaus nustatymas LST EN ISO 10272-2:2017;
• Koagulazę gaminančių stafilokokų skaičius LST EN ISO 6888-1+A1:2005;
• Enterobakterijų skaičius LST EN ISO 21528-2:2017;
• E. coli skaičius LST ISO 16649-2:2002;
• Aerobinių mikroorganizmų skaičius LST EN ISO 4833-1:2013.
Maisto produktų mikrobiologinių tyrimų
skyriuje taikomi tyrimo metodai
-
• Salmonelių (Salmonella spp.) aptikimas LST EN ISO 6579-1:2017;
• Salmonella spp. kultūros serotipo nustatymas CEN ISO/TR 6579-3:2014;
• Monocitogeninių listerijų (Listeria monocytogenes) aptikimas LST EN ISO
11290-1:2017;
• Listeria spp. aptikimas SDP B.39 (8 leidimas);
• Labiausiai tikėtinas numanomų žarninių lazdelių (Escherichia coli) skaičius
LST ISO 7251:2006;
• Koliforminių bakterijų aptikimas SDP 5.4.4.B.17 (5 leidimas);
• Auksinio stafilokoko (Staphylococcus aureus) aptikimas SDP B.28 (5
leidimas);
• Verotoksinių Escherichia coli nustatymas realaus laiko PGR metodu SDP
5.4.4.G.25;
• Campylobacter spp. nustatymas PGR metodu SDP 5.4.4.G.26;
• Gyvūninės kilmės komponentų nustatymas realaus laiko PGR metodu SDP
5.4.4.G.15.
Bakteriologinių tyrimų ir Molekulinės biologijos ir GMO
tyrimų skyriuose taikomi tyrimo metodai
-
Tyrimų
protokolas
MĖGINIŲ
INFORMACIJOS
VALDYMO SKYRIUS
Bakteriologinių
tyrimų skyrius
Mikrobiologinių
tyrimų skyrius
GMO/MB
tyrimų skyrius
Veterinarijos rizikos
vertinimo skyrius
Maisto rizikos vertinimo
skyrius
Kokybės
vadybos skyrius
-
Maisto produktų
mikrobiologinių tyrimų
skyrius
Rezultatas ATITINKA
teisės aktų reikalavimus
Rezultatas NEATITINKA teisės aktų
reikalavimus
Bakteriologinių tyrimų
skyrius
GMO/MB tyrimų
skyrius
Maisto
mėginys
Tyrimų
protokolas
Tyrimų
protokolas
-
VTEC aptikimas (SDP 5.4.4.G.25)
Maisto produktų
mikrobiologinių tyrimų skyrius
Maisto produktų
mikrobiologinių tyrimų skyrius
Rezultatas ATITINKA
teisės aktų reikalavimus
Genų (vtx1, vtx2, eae)
nustatymas
Maisto
mėginys
Rezultatas
NEATITINKA
teisės aktų
reikalavimus
Tyrimų
protokolas
Tyrimų
protokolas
GMO/MB tyrimų
skyrius
-
Next generation sequencing (NGS)
Duomenų analizė
Laboratorijoje bus naudojama
BioNumerics duomenų
apdorojimo ir analizės platforma
Naujos kartos sekvenavimas
Illumina MiSeq sekvenatoriumi
Patogenų identifikavimas, MLST tipavimas, antimikrobinio
rezistentiškumo genų nustatymas, virulentiškumo faktorių
nustatymas
-
Metodo privalumai
Viso genomo sekvenavimo duomenys – pilna organizmo DNR informacija:
• Pilna informacija, reikalinga rūšių ir porūšių identifikavimui ir charakterizavimui
• Duomenys rūšių tarpusavio ryšių nustatymui ir palyginamumui
• Pilna informacija genų nustatymui
• Duomenų pakartotinis naudojimas įvairiems tikslams
• Duomenų banko kaupimas, dalyvavimas LT ir ES protrūkių tyrime
• Palyginimas su iš žmonių išaugintų bakterijų kultūrų tipu
-
NMVRVI žingsniai diegiant NGS metodus laboratorijoje:
• Įsigytas naujos kartos sekvenatorius Illumina MiSeq
• Standartinių metodų ruošimas ir vystymas
• Dalyvavimas mokymuose : DTU Food organizuojamuose NGS mokymuose „ EURL-AR Training Course on Whole Genome Sequencing “ (2018 ir 2019 metais, Danijos technikos Universitetas, Lungbiu, Danija)
Mokymai skirti Listeria monocytogenes tipavimui NGS „Listeria monocytogenes typing by Whole Genome Sequencing : DNA preparation“ (ANSES, Paryžius, Prancūzija)
Mokymai „Training course on Bioinformatics Tools for Next Generation Sequencing data mining: use of bioinformatics tools for typing pathogenic E. coli“ (Istituto Superiore di Sanita, Roma, Italija)
• Listeria monocytogenes, Salmonella – WGS, duomenų bazės kūrimas analizuojant išskirtus sukėlėjus, antimikrobinio rezistentiškumo genų nustatymas
• Šigatoksinių E.coli štamų viso genomo sekvenavimas (WGS): (Antimikrobinio rezistentiškumo genų nustatymas, virulentiškumo faktorių nustatymas)
• Campylobacterijų – WGS, molekulinis tipavimas MLST, virulentiškumo faktorių nustatymas
• Tolimesnis naujos kartos sekvenavimo technologijos panaudojimas: gyvūnų genotipavimas, virusinių patogenų identifikavimas, naujų GMO linijų analizė.
-
Listeria monocytogenes augimo potencialo įvertinimas
• KOMISIJOS REGLAMENTAS (EB) Nr. 2073/2005 „Dėl maisto
produktų mikrobiologinių kriterijų“
-
Komisijos reglamento (EB) Nr. 2073/2005 3 straipsnis: 2. Prireikus, už produkto gamybą atsakingi maisto verslo operatoriai atlieka tyrimus pagal II priedą, stengdamiesi išsiaiškinti, ar
produkto tinkamumo vartoti laikotarpiu laikomasi kriterijų.
Visų pirma tai taikytina gataviems maisto produktams, kuriuose yra palankios sąlygos Listeria monocytogenes dauginimuisi ir kurie
gali kelti Listeria monocytogenes riziką visuomenės sveikatai.
Listeria monocytogenes augimo potencialo
vertinimas NMVRVI
NRL
* Tinkamumo vartoti tyrimų ir bandymų apibūdinimas
-
Produkto
charakteristika
visą galiojimo
laikotarpį (fiziko-cheminis ir mikrobiologinis
įvertinimas)
Pagrindiniai
produkto
gamybos etapai
Produkto
įpakavimo tipas (vakuumuotas, modifikuotos
dujos ir kt.)
Laikymo sąlygų
analizė (gamintojo, rinkos ir namų
sąlygų įvertinimas)
Produkto sudėtis
Produkto vertinimo kriterijai
-
Listeria monocytogenes augimo
potencialo nustatymas
• Įvertinama:
Listeria monocytogenes augimo potencialas;
Listeria monocytogenes skaičius produkto galiojimo laiko
pabaigoje.
-
Kaip mes galime kontroliuoti maisto saugą?(1)
Nulinė mikroorganizmų tolerancija dažnai neįmanoma!
• Natūrali tarša
• Neįmanoma visko patikrinti
• Koks efektyvus yra galutinio produkto tyrimas?
- tarša (patogenais) yra reta
• Ką galima pasiekti atrenkant mėginius?
-
Kaip mes galime kontroliuoti maisto saugą? (2)
Ūkis
Perdirbimas
Rinka
Vartotojas
Dozė
Liga?
Didelis paplitimas, bet
toli nuo suvartoto
produkto
Arti nuo suvartoto
produkto, bet žemas
paplitimas
Vartotojas negali būti
kontroliuojamas
Maisto grandinės
metodas
• Proceso kontrolė
• RVASVT
• Rizikos analizė
-
Temperatūros įtaka mikroorganizmų dauginimuisi
• Pavojinga zona +4 oC iki +60 oC • Esant +4oC +5oC pradeda daugintis mikroorganizmai, kurie buvo maiste prieš užšaldant
• Kambario temperatūroje kiekviena bakterija gali padvigubėti kas 20 min.
• Per 7 val. greitai gendančiame maiste gali išaugti iki 2 097 152 bakterijų.
• Mielės išlieka atsparios iki -7oC -10oC
• Pelėsiniai grybai iki -12oC -15oC
Mikroorganizmų proteolitiniai ir lipolitiniai egzo- ir endofermentai išlieka aktyvūs iki -28oC -35oC
-
Salotų mikrobiologinės taršos tyrimas
• Tikslas – įvertinti kaip plovimas įtakoja salotų mikrobiologinę taršą.
• Mėginiai atrinkti iš įvairių turgaviečių.
• 2 tyrimo etapai: prieš ir po plovimo (kiekvienas lapelis buvo atskirtas ir kruopščiai
nuplautas po tekančiu vandeniu).
• Mikroorganizmai: salmonelės, žarninės lazdelės (E. coli), koliforminės bakterijos,
aerobiniai mikroorganizmai, sulfitus redukuojančios klostridijos.
https://jp.lt/wp-
content/uploads/2019/04/vilniaus-
kalvariju-turgus-
5943c3313919b.jpg
https://images.wisegeek.com/wa
shing-vegetables-near-sink.jpg
-
Rodiklis Mėginiai
Neplautų salotų
tyrimų
rezultatai
Plautų
salotų
tyrimų
rezultatai
Skirtumas
kartais
Skirtumas
proc.
Salmonelių aptikimas, 25 g
1 Neaptikta Neaptikta - -
2 Neaptikta Neaptikta - -
3 Neaptikta Neaptikta - -
4 Neaptikta Neaptikta - -
5 Neaptikta Neaptikta - -
E coli skaičius 1 g
1
-
Salotų mikrobiologinės taršos tyrimas
• Rezultatai:
- Patogeninių mikroorganizmų nenustatyta;
- Ženklus mikroorganizmų skaičiaus sumažėjimas: aerobinių mikroorganizmų ir
koliforminių bakterijų po plovimo sumažėjo 60-97,8 proc.
• Išvados: salotų plovimas sumažina bakterijų skaičių jose, todėl kruopštus jų plovimas
tekančiu vandeniu yra efektyvi apsaugos priemonė nuo įvairių žarnyno infekcijų!
https://jp.lt/wp-
content/uploads/2019/04/vilniaus-
kalvariju-turgus-
5943c3313919b.jpg
https://images.wisegeek.com/wa
shing-vegetables-near-sink.jpg
-
Laboratorinių tyrimų pagrindu NMVRVI parengtos moksliškai pagrįstos nuomonės
Nuomonė dėl VTEC maisto produktuose galimos rizikos sveikatai
Nuomonė dėl B. cereus prieskoninėje dašio žolėje
Nuomonė dėl E. coli šviežiose lapinėse salotose
Nuomonė dėl nustatytų koagulazę gaminančių stafilokokų migdoliniame braškių torte
Nuomonė dėl salmonelių serotipų patogeniškumo
Nuomonė dėl mažiems vaikams skirtų produktų mikrobiologinių tyrimų rizikos įvertinimo
Nuomonė dėl grietinės mėginyje nustatytų enterobakterijų
Nuomonė dėl E. coli mėsoje
Nuomonė apie nustatytą stafilokokų kiekį salotose bei galimą riziką sveikatai
Nuomonė dėl nustatytos Salmonella Derby šviežioje paukštienoje
Nuomonė dėl prieskonių mikrobiologinės taršos
Nuomonė dėl L. monocytogenes rizikos įvertinimo šaldytose daržovėse bei termiškai neapdorotuose mėsos
gaminiuose
-
Perduodami duomenys EFSA‘i
Zoonozių, antimikrobinio atsparumo ir per maistą plintančių ligų protrūkių duomenys
perduodami:
XML
Duomenys perduoda bei patvirtina paskirtas duomenų
perdavėjas (Data provider/validator). Duomenys
perduodami, juos koduojant specialiai sukurtu vieningu
duomenų klasynu – Standard Sample Description.
* „Norint dirbti kartu – privalėjome rasti bendrą duomenų perdavimo kalbą, kitu atveju būtų kilę labai daug
nesusipratimų bei netikslumų !!!“ - EFSA
DUOMENŲ EKSPORTAS
IŠ DB IR PIRMINĖ
PATIKRA, TRŪKSTAMŲ
DUOMENŲ SUVEDIMAS
DUOMENŲ
RINKINIŲ
SUDARYMAS, JŲ
SUTIKRINIMAS SU
TAISYKLĖMIS
(BUSINESS RULES)
Duomenų
validavimas
Duomenų rinkinio
galutinis
patvirtinimas DWH
DUOMENŲ
TEIKIMAS DCF
PLATFORMOJE
NMVRVI
VMVT
ULAC
ULAC
VMVT
NMVRVI
-
Dalyvavimas EFSA Keitimosi
kylančiomis rizikomis tinklo
(EREN) veikloje
-
Dalyvavimas EFSA
Mikrobiologinės rizikos
vertinimo tinklo veikloje
-
AČIŪ UŽ JŪSŲ DĖMESĮ