La Cromatografia Gaseosa (CG) es una tcnica utilizada para la separacin y anlisis de mezclas de sustancias voltiles. La muestra es vaporizada e introducida en un flujo de un gas apropiado denominado de fase mvil (FM) o gas de arrastre (Figura 1). Este flujo de gas con la muestra vaporizada pasa por un tubo conteniendo la fase estacionaria FE (columna cromatogrfica), donde ocurre la separacin de la mezcla. La FE puede ser un slido adsorbente (Cromatografia Gas-Slido) o, ms comunmente, una pelcula de un lquido poco voltil, soportado sobre un slido inerte (Cromatografia Gs-Lquido con Columna Empaquetada o Rellenada) o sobre la propria pared del tubo (Cromatografia Gaseosa de Alta Resolucin). En la cromatografia gas-lquido (CGL), los dos factores que gobiernan la separacin de los constituyentes de una muestra son:- solubilidad en la FE: cuanto mayor es la solubilidad de un constituyente en la FE, ste avanza ms lentamente por la columna.- volatilidad: cuanto ms voltil es la sustancia (o, en otros trminos, cuanto mayor es la presin de vapor), mayor es su tendencia de permanecer vaporizada y ms rapidamente avanza por el sistema.Las sustancias separadas salen de la columna disolvidas en el gas de arrastre y pasan por un detector; dispositivo que genera una seal elctrica proporcional a la cantidad del material eluido. El registro de esta seal en funcin del tiempo es el cromatograma, en donde las sustancias aparecen como picos con reas proporcionales a sus masas, lo que posibilita el anlisis cuantitativo (Figura 2).

Material elaborado por: Fbio Augusto (Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Qumica), a partir de la literatura.Traduccin:Maria Del Pilar Taboada Sotomayor (Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Qumica)Creado en: JUL/2000

Los constituyentes bsicos de un sistema cromatogrfico son:- Depsito del Gas de Arrastre. El gas de arrastre est contenido en cilindros sobre presin. As, la eleccin del gas de arrastre es independiente de la muestra a ser separada. El parmetro ms importante es su compatibilidad con el detector (algunos detectores trabajan mejor cuando se utilizan determinados gases). Los gases ms usados so H2, He e N2 y el flujo del gas de arrastre, que debe ser controlada, es constante durante el anlisis.- Sistema de Introduccin de la muestra. En la CG, la seccin del cromatgrafo gaseoso donde es hecha la introduccin de la muestra es el inyector (o vaporizador). En la versin ms simple, se trata de una pieza de metal conectada a la columna cromatogrfica y a la alimentacin del gas de arrastre. Esta pieza contiene un orificio con un septo, generalmente de caucho de silicona, por la cual las muestras lquidas o gaseosas pueden ser inyectadas con microjeringas hipodrmicas. Las muestras slidas pueden disolverse en un solvente apropiado. El inyector debe calentarse a una temperatura mayor del punto de ebullicin de los componentes de la muestra, para que la muestra se volatilize completa e instantaneamente y sea introducida en la columna. Si la temperatura fuera excesivamente elevada, puede ocurrir la descomposicin de la muestra. La muestra debe entrar en la columna en la forma de un segmento estrecho, para evitar alargamiento de los picos.La cantidad de muestra inyectada depende de la columna y del detector empleado. Para columnas empaquetadas, volmenes de 0,1 l a 3,0 l de muestra lquida son tpicos. Los volmenes altos perjudican la calidad de la inyeccin (alargamiento de los picos) o saturan la columna cromatogrfica. Para la cromatografia gaseosa de alta resolucin (CGAR), los volmenes de inyeccin deben ser del orden de nanolitros. Sin embargo, no existe un medio simple de medirse semejante volumen pequeo con la precisin necesaria. As, los inyectores para CGAR son dotados de un "divisor de muestra", de modo que apenas una fraccin del volumen injectado (tpicamente entre 1/10 e 1/300) llega a la columna, siendo descartado lo restante.- Columna Cromatogrfica y Control de la temperatura de la columna. Despus de inyectada y vaporizada, la muestra ingresa en la columna cromatogrfica, donde es efectuada la separacin. En la CG la "afinidad" de un soluto por la FM es determinada por la volatilidad del soluto, su presin de vapor, que es funcin de la estructura del compuesto y de la temperatura. Modificandose la temperatura, se altera tambin la presin de vapor y, por consiguiente, la "afinidad" de una sustancia por la FM.Si la temperatura de la columna fuera excesivamente baja, todos los constituyentes de la muestra tendrn presiones de vapor muy bajas y permaneran casi todo el tiempo disolvidos en la FE, haciendo con que su migracin por la columna sea muy lenta. El resultado puede ser un tiempo excesivo de anlisis y picos muy anchos y bajos (cuanto ms tiempo la sustancia pasa en la columna, ms esta se dispersa). Eventualmente, el compuesto no puede ni salir de la columna. Por otro lado, una temperatura muy elevada tambin implica presiones de vapor muy grandes y los compuestos apenas pasan algun tiempo disuelto en la FE, salindo muy rpidamente de la columna sin ser separados. As, la temperatura de la columna es una condicin que debe ser ajustada para obterse una determinada separacin. Adems de las consideraciones sobre la separacin, la temperatura usada debe ser compatible con la FE empleada, pues las FE lquidas se volatilizan o se degradan con temperaturas excesivas. La temperatura de la columna debe controlarse estrictamente, para asegurar la reproductibilidad de los anlisis.En el caso de muestras que contienen constituyentes con presiones de vapor muy diferentes, si la temperatura se ajusta para la separacin apropiada de los compuestos menos voltiles (temperaturas altas), los voltiles sern retenidos muy poco y no sern separados. Por otro lado, si se hace el ajuste para separar los voltiles (temperaturas bajas), los constituyentes pesados se presentarn sobre la forma de picos excesivamente anchos y bajos o sern retenidos en la columna. Este problema puede contornarse usando la programacin lineal de temperatura (PLT), a travs del cual la temperatura de la columna va aumentndose gradualmente durante el anlisis. La PLT permite separaciones de muestras muy complejas (petrleo, aceites esenciales, etc.), no analisables con temperatura constante de la columna (CG Isotrmica).- Detector. El ltimo bloque de un CG es el detector, que ser discutido detalladamente ms adelante.

Las caractersticas fundamentales de un sistema de CG son: retencin/ selectividad, eficiencia y resolucin. - Retencin y Seletividad. En CG, el parmetro de retencin es el tiempo de retencin, tr. Este es definido como el tiempo transcurrido entre la inyeccin de la muestra y el mximo del pico cromatogrfico. Aun as, mismo que la sustancia no interactuase de alguna forma con la FE, su tiempo de retencin no sera nulo, porque pasara algn tiempo entre su inyeccin y su pasaje por el detector. Este tiempo corresponde al tiempo que el gas de arrastree demora para recorrer la columna, y es denominado tiempo de retencin del compuesto no retenido (o tiempo muerto), tm. El parmetro que realmente refleja las caractersticas fsico-qumicas de retencin de un determinado compuesto es el tiempo de retencin descontado del tiempo muerto, llamado de tiempo de retencin ajustado, :

La selectividad, capacidad de un sistema de diferenciar dos compuestos, es definida por

siendo una caracterstica que, en CG, se asocia ms a la columna cromatogrfica.- Eficiencia. En CG, la eficiencia es expresada por el nmero de platos tericos, que es calculado usndose el parmetro de retencin (tr) y el ancho del pico cromatogrfico - en este caso, el ancho de la bas, wb:

La altura equivalente a un plato terico es calculada por:

siendo L la longitud de la columna cromatogrfica. La dependencia de h con la velocidad de la FM es descrita por la ecuacin de van Deemter:

donde es la velocidad del gas de arrastre. El trmino A est relacionado con el agrandamiento del pico y el trmino B con la difusin molecular del soluto en la fase mvil.- Resolucin. En CG, la resolucin entre dos sustancias es la proporcin entre la diferencia de las distancias de migracin y el promedio de los anchos de las bandas y esta definida como:

o, si el ancho de los picos fuesen prximos,

En CG existe un gran nmero de fases estacionarias lquidas y slidas disponibles comercialmente, de modo que la naturaleza de la FE es la variable ms importante en la optimizacin de la selectividad.Las FE lquidas son las ms utilizadas en CG. FE slidas (carbn activo, slica, tamizes moleculares y polmeros porosos) son aplicadas para la separacin de gases y compuestos de bajo peso molecular. En principio, para que un lquido sea usado como FE en CG este debe ser poco voltil (presin de vapor hasta 0,1 mmHg o 13,332 Pa a la temperatura de trabajo) y termicamente estable. Para esta fase ser usada en una separacin en particular, ella necesita:- ser un buen solvente para los componentes de la muestra, caso contrrio el efecto ser el mismo que el de la temperatura excesivamente elevada de la columna (los compuestos permaneceran casi todo el tiempo en el gs de arrastre, siendo eluidos muy rpidamente y sin separacin);- ser un buen solvente diferencial, esto es, adems de disolver bin a todos los constituyentes de la muestra, hacerlo con solubilidades suficientemente diferentes para que ellos puedan ser separados; y- ser qumicamente inerte en relacin a la muestra.En general, FE con estructuras similares a la de la muestra disolvern mejor sus constituyentes, proporcionando mejores selectividades y separaciones. FE polares disuelven mejor compuestos polares, etc. Por ejemplo: hidrocarburos pueden ser separados eficientemente usando escualano (un alcano de peso molecular elevadoLas FE ms populares son las siliconas. Las siliconas son polmeros sumamente estables e inertes, lo que las vuelve especialmente apropiadas a la CG. En esta clase, los polidimetilsiloxanos son los menos polares. La substitucin de los grupos metila en la cadena por otros grupos (fenila, ciano, trifluoropropila, etc.) proporciona FE con polaridades crecientes. De este manera, estas pueden usarse en la separacin de mezclas de las ms variadas polaridades. Comercialmente, estn disponibles bajo varias denominaciones, muchas de ellas prcticamente equivalentes. SE-30, OV-1 y DC-200 son nombres comerciales para polidimetilsiloxanos de fabricantes diferentes.Otra clase de FE importante es la de los poliglicoles. Son polmeros de etilenoglicol y epxido, preparados con diferentes tamaos de cadena polimrica. Son FE moderadamente polares, apropiados para la separacin de alcoholes, aldehidos, eteres, etc. La denominacin comercial "Carbowax" designa la serie de poliglicoles ms conocidos (p. ej., Carbowax 20M es polietilenoglicol con peso molecular medio de 20.000.000 g/mol).Un tercer grupo importante de FE son los de polisteres. Son obtenidos por condensacin de dicidos con glicoles. Son fases altamente polares. Las fases ms comunes de esta categoria son el succinato de dietilenoglicol (DEGS) y el adipato de dietilenoglicol (DEGA).

La columna cromatogrfica es el lugar donde ocurre la interaccin entre la muestra y la FE. Existen dos geometrias bsicas de columnas para CG: las columnas empaquetadas (o rellenadas), y las columnas tubulares abiertas (o capilares).En las columnas empaquetadas, la FE lquida es depositada bajo la forma de una pelcula delgada y uniforme sobre las partculas de un soporte apropiado. El soporte debe ser un slido poroso con gran rea superficial, inerte y de buena resistencia mecnica. El tamao de las partculas y de los poros deben ser lo ms uniforme posible. El material ms empleado como soporte es la diatomita, esqueletos fosiles de algas microscpicas (diatomceas), compuestos principalmente de SiO2 amorfo y trazas de xidos metlicos. Muchas veces, el material es sometido a tratamientos qumicos para disminuir su actividad superficial, y volverlo ms inerte. La diatomita preparada para soporte de CG es comercializada con el nombre de "Chromosorb", entre otros.Para preparar una columna empaquetada, el material de relleno (FE sobre soporte) es colocado de la forma ms uniforme y compacta posible ("empaquetado") en un tubo de longitud y dimetro apropiados. Los materiales ms usados para los tubos de las columnas son de acero inoxidable y de vidrio, siendo el primero preferido por la manipulacin ms fcil. Si el material de relleno no es colocado en la columna de forma compacta y uniforme, los espacios vacos resultantes funcionaran como cmaras de dilucin para la muestra. El resultado ser picos ms anchos y menor eficiencia.El tamao de la columna es variable. Tpicamente son usadas columnas con dimetros internos de 1 mm a 4 mm y 1 m a 3 m de longitud. Cuanto ms larga la columna, mayor la eficiencia; sin embargo, tambin aumenta el tiempo de anlisis. Columnas muy largas ofrecen una resistencia muy alta al pasaje del gas, exigiendo presiones excesivamente altas.Adems de la naturaleza de la FE y de la calidad del empaquetamiento, existen dos variable importantes que influyen en el desempeo de una columna empaquetada:- El porcentaje de la FE en el material de relleno. El porcentaje de la FE sobre el soporte es un parmetro que debe controlarse rigidamente. Si la cantidad de la FE fuese muy baja, se expondrn partes de la superficie del soporte a la muestra, que puede ser adsorvida. El resultado es el agrandamiento o deformacin de los picos. Esto es, cuanto ms cantidad de FE, mayor es la retencin. La selectividad tambin aumenta, aunque a expensas del aumento del tiempo de anlisis y disminucin de la eficiencia. Actualmente, columnas conteniendo de 2 % a 10 % de FE son las ms usadas, dificilmente se usan columnas con ms de 30 %.- El dimetro de las partculas del soporte. Cuanto ms pequeo el dimetro de las partculas del soporte, mayor la eficiencia de la columna. Tambin, es importante la uniformidad de las partculas. Los rellenos con partculas cuya distribucin segn su tamao son muy grandes no sern muy eficazes. Normalmente, se usan soportes con 80-100 mesh (149 m a 177 m de dimetro) o 100-120 mesh (125 m a 149 m). Si fuese usado soporte con partculas excesivamente pequeas, la resistencia al pasaje de gas ser muy alta.

En las columnas tubulares abiertas (genericamente denominadas de "columnas capilares"), la FE es depositada en la forma de una pelcula sobre la superfcie interna de un tubo fino. Su gran ventaja sobre las columnas empaquetadas es que, por el hecho de ser tubos abiertos, pueden hacerse columnas capilares de grandes longitudes. Como, cuanto mayor la longitud, ms platos tericos contiene la columna (y mayor su eficiencia), columnas capilares son mucho ms eficientes que las empaquetadas. Normalmente, se encuentran columnas de 5 m hasta 100 m, aunque ya se ha fabricado una columna con 2175 m. Pueden usarse tubos metlicos, de vidro o de slica fundida, siendo actualmente preferidos los ltimos por su flexibilidad e inrcia qumica.En las columnas empaquetadas, el desempeo es afectado por el dimetro y uniformidad de las partculas del relleno y por la carga de FE. En las columnas capilares, son importantes el dimetro interno de la columna y el espesor de la pelcula de la FE. Cuanto ms fina sea la columna, ms eficiente ella ser. Sin embargo, columnas muy estrechas soportan poca FE, lo que disminuye su selectividad. Tpicamente, se usan columnas con dimetros internos entre 0,1 mm y 0,5 mm. El espesor de la pelcula de la FE equivale al porcentaje de FE en las columnas empaquetadas, de manera que cuanto mayor es el espesor de la pelcula, mayor ser la retencin y la selectividad. Pelculas excesivamente espesos causan el agrandamiento de los picos y tiempos de anlisis grandes. Normalmente, se utilizan pelculas de 0,1 m a 3,0 m.Las FE son las mismas usadas para las columnas empaquetadas. Muchas veces, para minimizar las prdidas de la fase por volatilizacin durante el uso, la FE es fijada a las paredes del tubo por algn medio. Puede polimerizarse parcialmente a la fase despus de la deposicin (fases inmobilizadas) o entonces enlazarla qumicamente a las paredes (fase enlazada).La capacidad de procesamiento de muestra de las columnas capilares es ms pequea que en las columnas empaquetadas. Dependiendo de la columna, esta puede saturarse con cantidades muy pequeas como 0,001 l de muestra. Como la inyeccin directa de volmenes de muestra de esta orden de grandeza es enviable, debe recurrirse al artifcio de la divisin de la muestra en la inyeccin. Sin embargo, el uso de la divisin de muestra presenta algunos inconvenientes. Es difcil ajustar reproductiblemente la proporcin de la divisin (fraccin de la muestra inyectada que entra en la columna), lo que puede provocar errores en el anlisis cuantitativo. Adems de eso, las muestras conteniendo constituyentes con volatilidades muy diferentes pueden ser alterados por la divisin: la fraccin de la muestra que realmente va para la columna se enriquece con los componentes menos voltiles.Dada la gran eficiencia de las columnas capilares, pueden realizarse separaciones de mezclas sumamente complejas: fracciones de petrleo, esencias, muestras biolgicas, etc. En el caso especfico de anlisis de inters ambiental (por ejemplo, poluentes en aguas y aire), es casi obrigatrio su uso. La tendencia actual es que la mayoria de los anlisis se hagan con el uso de columnas capilares. Esto no significa que las columnas empaquetadas estn siendo abandonadas, aun as su uso debe restringirse a aplicaciones especficas.

El detector es un dispositivo que indica y cuantifica los componentes separados por la columna. Un gran nmero de detectores han sido descritos y usados en CG. Existen, sin embargo, algunas caractersticas bsicas comunes para describir su desempeo:- Selectividad. Algunos detectores presentan respuestas para cualquier sustancia diferente del gas de arrastre que pasa por este. Estos son los llamados detectores universales. Por otro lado, existen detectores que slo responden a compuestos que contengan un determinado elemento qumico en su estrutura, que son los detectores especficos. Entre estos dos extremos, algunos detectores responden a ciertas clases de compuestos (detectores selectivos).- Ruido. Son los desvios y oscilaciones en la linea de base (seal del detector cuando slo pasa el gas de arrastre). Puede ser causado por problemas electrnicos, impurezas y suciedades en los gases y en el detector, etc. Por mejor que sea el funcionamiento del sistema, siempre existe rudo.- Tipo de Respuesta. Algunos detectores presentan una seal que es proporcional a la concentrao del soluto en el gas de arrastre; en otros, la seal es proporcional a la fraccin de masa del soluto que entra en el detector. Esto depende del mecanismo de funcionamiento de cada detector.- Cantidad Mnima Detectable (CMD). Es la cantidad de muestra mnima para generar una seal dos vezes ms intensa que el ruido. Es una caracterstica intrnseca del detector. Cuanto menor la CMD, ms sensible es el detector.- Factor de Respuesta. Es la intensidad de seal generada por una determinada masa de soluto, que depende del detector y del compuesto estudiado. Puede visualizarse como la inclinacin de la recta que correlaciona la seal con la masa de un soluto (curva de calibracin). Cuanto mayor es el factor de resposta, ms confiable el anlisis cuantitativo.- Rango Lineal Dinmico. Es la razn entre la menor y la mayor masa entre las cuales el factor de respuesta de un detector para un soluto es constante, esto es, donde la curva de calibracin es lineal.Los dos detectores ms significativos en CG son el Detector por Conductividad Trmica (DCT) y el Detector por Ionizacin en flama (DIF).

El funcionamiento del DCT esta basado en el hecho que la velocidad de prdida de calor de un cuerpo caliente para un cuerpo ms fro es proporcional, entre otros factores, a la conductividad trmica del gs que separa estos cuerpos. Un filamento metlico muy delgado (de W, Au o aleacin W-Re) es calentado por el pasaje de una corriente elctrica constante. Este filamento est colocado dentro de un orifcio en un bloque metlico (celda), calentado a una temperatura ms baja que aquella del filamento, por donde el gas de arrastre proveniente de la columna pasa continuamente (Figura 3). Mientras pasa gas de arrastre puro por la celda, la proporcin de prdida de calor del filamento para el bloque es constante y la temperatura del filamento no vara. Cuando un componente es eluido de la columna, este sale mezclado con el gas de arrastre y pasa por el detector. Si la conductividad de esta mezcla es diferente de aquella del gas de arrastre puro, el filamento pasa a perder calor para el bloque en una proporcin diferente de aquella del equilbrio. Por ejemplo, si la proporcin de prdida de calor disminuye, el filamento se calienta cuando la muestra es eluida. El calentamiento del filamento causa una variacin en su resistencia elctrica y la resistividad de un metal aumenta con la temperatura. El filamento es montado en un circuito puente de Wheatstone, que transforma la variacin en resistencia elctrica del filamento en una variacin de voltaje, que es colectada en un registrador generando el cromatograma.El DCT es un detector universal, sensible a la concentracin del soluto en el gas de arrastre. Generalmente, cuando se usa DCT, el gas de arrastre es He o H2. Por el hecho de que estos gases tienen conductividades trmicas altas, las mezclas gas de arrastre ms soluto siempre tendrn conductividades trmicas menores que la del gas de arrastre puro, lo que impede seales negativas, adems de obternerse factores de respuesta ms grandes. Sin embargo, es considerado un detector poco sensible. La CMD de un modelo moderno, para propano, es de 400 pg/ml de gas de arrastre, con un rango lineal de 106. A pesar de eso, el hecho de ser universal, barato y de funcionamiento simple, lo hace extremamente til para anlisis que no necesitan de alta sensibilidad.

Durante la quema de un compuesto orgnico, son formados varios iones y como consecuencia, la flama resultante se hace conductora de electricidad. El funcionamiento del DIF est baseado en este fenmeno. El gas de arrastre saliendo de la columna cromatogrfica es mezclado con H2 y quemado con aire o O2. La flama resultante se queda contenida entre dos electrodos, polarizados por un voltaje constante (Figura 4). Como la flama de H2 forma pocos iones, este es un psimo conductor elctrico y casi ninguna corriente pasa entre los electrodos. Al eluir un compuesto orgnico, este es quemado ye son formados iones en la flama, que pasa a conducir corriente elctrica. La corriente elctrica resultante, del orden de pA, es amplificada y constituye la seal cromatogrfica.Casi todos los compuestos orgnicos pueden ser detectados por el DIF. Apenas sustancias no inflamables (CCl4, H2O) o algunas pocas que no forman iones en la flama (HCOOH) no dan seal. As, este es un detector practicamente universal. De una manera general, cuando el compuesto tiene enlaces C-H, mayor es su respuesta (mayor sensibilidad). Este detector es mucho ms sensible que el DCT, porque dependiendo del compuesto, pueden ser detectados entre 10 pg e 400 pg, con un rango lineal dinmico de 107. Probablemente es el detector ms usado en CG.

La CG es una tcnica eminentemente cuantitativa. El principio bsico de la cuantificacin es que el rea de los picos registrados en el cromatograma es proporcional a la massa del compuesto inyectado. As, es fundamental para la confiabilidad del anlisis que el rea de los picos sea medida lo ms exacta y reproductible posible. Existen varias maneras de medirse el rea de un pico cromatogrfico:

- Tcnicas Manuales. Cuando el cromatograma es colectado por un registrador analgico, normalmente el rea de los picos es medida manualmente. El procedimiento ms empleado consiste en suponer que el pico cromatogrfico se aproxima a un tringulo issceles. Se mide la altura del pico (h) y el ancho de la base (wb) o a la mitad de la altura (wh), y se calcula el rea por las frmulas usadas para el clculo del rea de un tringulo:ou La conveniencia de usarse una o otra forma depende del ancho del pico, de la asimetra, etc. Tambin, puede substituirse el rea por la altura del pico. Esto es posible slo para picos estrechos y simtricos.

- Integradores Electrnicos. Los Integradores son dispositivos basados en microprocesadores que colectan la seal cromatogrfica, digitalizandola (transforman la seal elctrica en nmeros), detectan la presencia de picos y calculan su rea. Los integradores son mucho ms precisos y rpidos que cualquier mtodo manual de medida, desde que usados convenientemente. Aunque sean dispositivos caros, cuando es necesario rapidez en la produccin de resultados, su uso es casi que indispensable.- Computadores. El integrador puede ser substituido por un computador, desde que este tenga un dispositivo para convertir la seal elctrica en nmeros que puedan guardarse em memoria (conversor analgico-digital), y se disponga de programas adecuados para hacer el anlisis del cromatograma digitalizado. El costo de un computador con los accesorios necesarios para coleccionar y analizar cromatogramas es, por lo general, inferior al de un buen integrador. Adems de eso, con un software y funcionamiento apropiado, puede proporcionar resultados ms confiables que este ltimo.Cualquiera que sea la forma usada para medir el rea de los picos, el procedimiento general de un anlisis cuantitativo por CG involucra la obtencin del cromatograma de la muestra, la medida del rea de los picos de inters y el clculo de la masa correspondiente a cada uno de los picos. Este clculo debe hacerse empleando una curva de calibracin: un grfico correlacionando el rea del pico con la masa del compuesto. La curva de calibracin es obtenida cromatografiandose patrones conteniendo masas conocidas de los compuestos a ser cuantificados. Para cada sustancia, debe hacerse una curva de calibracin propia, ya que cada compuesto responde de manera diferente al detector.El esquema general propuesto anteriormente es llamado de patronizacin externa. Como es muy difcil conseguir buena reproductibilidad entre inyecciones diferentes, esto es muchas veces sujeto a gran imprecisin y inexactitud. Para contornar este problema, puede usarse la llamada patronizacin interna, donde a cada solucin a ser inyectada se adiciona una cantidad exactamente igual de un compuesto que sea separable de los componentes de la muestra, y que no exista en ella (patrn interno). Como para todas las soluciones, tanto de las muestras como de los patrones existe la misma masa del patrn interno, el rea de su pico debe ser la misma. Este hecho hace con que este pico pueda ser usado para corregir el rea de los picos de los constituyentes de la muestra y de los patrones, eliminandose, por lo menos parcialmente muchas deficiencias de la inyeccin.