manual de laboratorio de instrumentacion bÁsica
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Justificacin
La interpretacin de la metodologa que se requiere en cada una de las determinaciones
que s efectan en el laboratorio clnico depende del grado de exactitud en su
procesamiento, estando a su vez sujeto al conocimiento, habilidad y destreza en el manejo
de los instrumentos y equipo de laboratorio.
Por lo anterior se considera necesario que el estudiante de Qumica Clnica tenga
conocimientos suficientes sobre el manejo, cuidados y aplicaciones de los instrumentos delaboratorio, por lo que se incluy la presente experiencia educativa en el mapa curricular
de la licenciatura.
Objetivos:
Al terminar el curso el estudiante:
Seleccionar adecuadamente el instrumento requerido de acuerdo al tipo de muestra y
estudio solicitado.
Emplear apropiadamente los instrumentos bsicos del laboratorio de acuerdo a la
metodologa seleccionada.
Valorar la importancia de la interpretacin de los datos obtenidos en cada uno de losinstrumentos y su implicacin con el ser humano.
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INDICE
PRACTICA N NOMBRE DE LA PRACTICA
1 DESCRIPCION DEL MICROSCOPIO COMPUESTO2 MANEJO Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIO COMPUESTO3 ILUMINACION DE KOHLER4 MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO5 MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE6 MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA7 BALANZAS GRANATARIAS8 BALANZAS ANALTICAS9 CENTRFUGAS
10 INFLUENCIA DE LA FUERZA CENTRIFUGA SOBRE LA
VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN11 CENTRIFUGACION DE MUESTRAS BIOLGICAS12 a) DESCRIPCION Y MANEJO DE ESPECTROFOTOMETROS
b) ANALIZADOR QUIMICO13 ESPECTRO DE ABSORCION DE DOS COLORANTES14 CURVA DE CALIBRACION15 REFRACTMETROS16 MEDIDOR DE pH
REGLAS DE LABORATORIO
Las prcticas se iniciarn a la hora indicada en los horarios, con una tolerancia de 10 min.
No se permitir la entrada al laboratorio al alumno que llegue 10 min. despus de la hora
de entrada.
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Durante el desarrollo de la prctica, queda estrictamente prohibida la estancia en el
laboratorio de personas ajenas al grupo.
Es obligatorio usar bata blanca en todas las sesiones.
Todos los objetos personales deben de quitarse de la mesa de trabajo.
El alumno deber estar provisto del material personal y biolgico indicado en la prctica de
lo contrario no podr permanecer en el laboratorio.
El alumno deber traer su manual en cada sesin de laboratorio que se imparta. Al final de
la prctica deber presentar un reporte preliminar y a los ocho das de realizada la prcticadeber entregar su reporte en limpio.
Queda estrictamente prohibido comer, beber, fumar y en general llevarse las cosas a la
boca dentro del laboratorio.
Debe evitarse establecer conversaciones a voces con los vecinos de otras mesas.
Todo el material no contaminado tal como: Algodn, papeles, cerillos etc. deben de ser
depositados en el bote de la basura municipal. No se debe tirar la basura en el suelo ni en
el lavadero
Limpiar las mesas al terminar las prcticas.
En caso de romper o derramar material contaminado, verter fenol cloro sobre l y djelo
cuando menos 20 min. despus limpiar.
El material contaminado (pipetas, tubos de ensaye, placas de vidrio, puntas de pipetas,etc.) debern depositarse en un recipiente que contenga agua con hipoclorito de sodio en
una solucin 6%, dejarlo cuando menos 24 hrs.
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Si durante la prctica se emplean orinas, no tirarlas directamente a la tarja, antes ponerles
hipoclorito de sodio en la cantidad necesaria para que se obtenga una solucin al 6%.
Usar guantes si va a manejar lquidos corporales o excretas contaminados.
Lavar las manos inmediatamente en caso de una probable contaminacin.
El material de laboratorio se entregar por equipo de dos personas y ambos integrantes se
harn responsable de l.
Revisar los instrumentos al recibirlos, reportar al personal tcnico del laboratorio o al
docente cualquier desperfecto encontrado en l.
Reportar al personal tcnico cualquier falla mecnica observada en los instrumentos
durante su uso.
No tocar los instrumentos elctricos que estn funcionando con las manos mojadas
INTRODUCCINEn la actualidad el uso de los instrumentos, unos relativamente sencillos y otros bastantes
complejos, facilitan el procesamiento de muestras en el laboratorio. A medida que
continan las investigaciones para un diagnstico ms rpido y un perfilamiento ms
precoz de los resultados, se estn perfeccionando ms y ms instrumentos, y la
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automatizacin, de una u otra manera, adelanta a pasos agigantados. Sin embargo, estos
no pueden introducirse inmediatamente en el laboratorio sin que el usuario tenga un
entendimiento bsico y rutinario de ellos. Es importante, que antes de desenvolverse en el
manejo de instrumentos se adquieran las bases tericas que los sustentan.
A su vez se tiene que el Licenciado en Qumica Clnica es un profesional que se
desempea principalmente en los laboratorios de institucionales pblicas o privados, por lo
que se requiere que tenga una slida formacin terica metodolgico de los instrumentos.
Por tal motivo, en el mapa curricular de la carrera en el rea de formacin de iniciacin a la
disciplina se implement la experiencia educativa de instrumentacin bsica que tiene
como finalidad proporcionar los conocimientos tericos prcticos necesarios que permitanal alumno utilizar correctamente cada uno de los instrumentos de uso rutinario en el
laboratorio, de acuerdo al tipo de anlisis, aplicando la metodologa correspondiente en
cada una de las determinaciones, as como diferenciar, analizar e interpretar resultados
obtenidos en cada uno de ellos.
La experiencia educativa se imparte en sesiones tericas y de laboratorio, en las primeras
se abordan los principios tericos bsicos en los que funda el instrumento y en las
segundas se dan a conocer las partes que los integran, su manejo, aplicaciones y
cuidados. Esta ltima de gran importancia debido a que es la parte que permitir integrar
los conocimientos obtenidos de cada uno de ellos.
Por tal motivo el presente manual tiene como objetivo
Proporcionar al estudiante la informacin necesaria para comprender el funcionamiento de
los instrumentos ms empleados en el laboratorio, favoreciendo su manejo, cuidado y
aplicacin en el diagnstico clnico.
En el manual se plantean 16 prcticas relacionadas con las unidades de teora,
cada una contiene una seccin de datos de identificacin, titulo, fundamento terico
introductoria (es importante mencionar que es solo una gua para que el alumno realice un
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trabajo de investigacin relacionado con l, que recibe el nombre de generalidades
debido que dentro de los objetivos de aprendizaje est que logre incorporar la teora
expuesta en clase, lo que observa del instrumento en la prctica, y la teora documentada
en libros, artculos, revistas etc., de tal manera que en base a ello pueda realizar unaconclusin del trabajo), material empleado.
El desarrollo de la practica consta de tres secciones. La primera, se enfoca a detectar las
partes del instrumento y sus funciones, por lo que se dan esquemas de cada instrumento
para que el alumno identifique las partes que lo integran, adems se le piden que realice
esquemas de algunas partes del instrumento (estas estn relacionadas con las partes en
las que el alumno debe poner ms atencin u observar mejor debido a que son las msimportantes de los instrumentos o que lo van a ser diferentes a otros), y finalmente se le
proporciona un cuadro de anotacin de observaciones.
La segunda, se orienta al manejo del instrumento dndose la tcnica, cuadros de
observaciones (donde har anotaciones encontradas al realizar la tcnica) y en algunas se
pedirn esquemas muy especficos sobre detalles encontrados o vistos al manipular el
instrumento.
La ltima seccin se relaciona con el cuidado del instrumento, en algunas se dan una serie
de indicaciones escritas y en otras se les proporcionan durante el manejo del instrumento.
Adems, en todas las prcticas se piden conclusiones con las que se espera evaluar el
conocimiento adquirido durante todo el proceso.
DESCRIPCION DEL MICROSCOPIO COMPUESTO
1.- INTRODUCCINPocos instrumentos han dado el rendimiento cientfico del microscopio; la ciencia en general ledebe progresos admirables, siendo aplicable a sin nmero de reas como son; fsica, qumica,medicina, metalurgia, entre otras. El microscopio como su nombre lo indica, es un instrumentoptico que amplifica la imagen de un objeto pequeo, las imgenes microscpicas pueden aumentarde 100 a 2000 veces el tamao original. No obstante, la funcin ms importante del instrumento no
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es solo ver los objetos pequeos sino interpretar lo que se ve, debido a esto, el empleo delmicroscopio exige ms que en ningn otro caso, un gran conocimiento del instrumento y suadecuado manejo para lograr imgenes amplificadas con la menor cantidad posible de defectospticos y el logro de contraste adecuado.
El microscopio es el instrumento que ms se usa en los laboratorios que estudian imgenespequeas. Actualmente existen dos tipos de microscopios: el ptico y el electrnico. En elmicroscopio ptico el aumento del objeto se consigue usando un sistema de lentes que manipula elpaso de los rayos de luz entre el objeto y los ojos. El microscopio electrnico utiliza un rayo deelectrones controlado por un campo magntico.
A nivel del laboratorio, en donde el Qumico Clnico desempea su principal funcin, elmicroscopio es un instrumento fundamental de trabajo, por lo anterior, se considera necesario que enla formacin del Qumico Clnico se ponga principal inters en su enseanza.
2.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACINEl microscopio es un instrumento ptico de precisin que proporciona laamplificacin de las imgenes de los objetos, lo que hace posible, ver con detallesy claridad sus estructuras pequeas o invisibles a la vista humana, facilitando deesta manera su estudio. Esta integrado por tres sistemas; ptico, mecnico y deiluminacin, a su vez cada sistema esta constituido por varios componentes y cadauno tiene funciones especificas, las que son necesarias conocer para su buenfuncionamiento.
3.- LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1 Reactivos
NUM. CLAVE NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDAD1 - Ninguno -
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3.2 Equipo de Laboratorio
1. Microscopios de campo claro diferentes marcas y modelos
3.3 Materiales de laboratorio
NUM. CANTIDA
D
DESCRIPCION
- - Ninguno
4.- TCNICA O PROCEDIMIENTO4.1.-Preparacin del sistema de medicin
Seleccionar un microscopio de campo claro que cuente con todos suscomponentes
Proporcionar al estudiante algunos componentes del microscopio de campoclaro.
4.1.2.- Sistema de medicin
1. Identifique las partes del sistema mecnico del microscopio.2. Identifique las partes del sistema ptico del microscopio.3. Identifique las partes del sistema de iluminacin del microscopio.4. Describa las principales caractersticas de cada uno de los componentes que
integran el sistema mecnico, ptico y de iluminacin del microscopio.5. Describa la funcin que tienen cada una de las partes que integran los
sistemas antes mencionados.
4.3 Uso del sistema de medicin
4.3.1 Procurar que cuando menos se proporcione un microscopio por dos alumnos4.3.2 Proporcionar al alumno las hojas de registro de datos antes de iniciar la
practica
5.-PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS
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5.1 De acuerdo al estudio realizado a los diferentes microscopios proporcionadosen el laboratorio Identificar sus partes en el esquema siguiente y poner los nombrescorrespondientes a cada una
Microscopio compuesto
5.2 Dibujar las siguientes partes del microscopio identificando cada uno de susconstituyentes
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Objetivo Oculares
Condensador Fuente luminosa
Tubo ptico Platina
5.3 Redactar en el siguiente cuadro la descripcin y funciones de cada una de laspartes que integran el microscopio compuesto
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SISTEMA PARTE DESCRIPCION FUNCIONBase
Estativo
Tornillomacromtrico
Tornillo
Mmicromtrico
PlatinaE
Tornillo deajuste de
C La platinatornillo deltope
A
Pinzas deN la platina
TornilloI de centrado
delcondensador
CTornillo delcondensador
OCarro
Tornillosdel carro
Revolver
Control deIntensidadluminosa
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SISTEMA PARTE DESCRIPCIN FUNCIONCondensador
I
L Lente auxiliar
U Lente frontal
MI Diafragma iris
N
A Lmpara
C
I Diafragma
O de campo
N
OOculares
P
TObjetivos
I
C
Tubo ptico
O
Conclusiones
6.- CONFIABILIDAD ANALTICA6.1 Procurar que el microscopio a emplear sea solo para campo claro6.2 Disponer de microscopios de campo claro de diferentes marcas
7.- PRACTICABILIDAD
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7.1 En caso de no contar con el microscopio el equipo podr ser sustituido pordiapositivas, fotografas, acetatos.
BIBLIOGRAFA
Atlas R. M. MICROBIOLOGA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES Mxico DF. Ed. C.E.C.S.A.
Barrera Escorcia R. EL MICROSCOPIO OPTICO. Ed Escuela Nacional de Estudios Profesionales Iztacala,UNAM. Mxico DF
Brock BIOLOGA DE LOS MICROORGANISMOS ed. Prentice Hall, Madrid Espaa
Carl Zeiss http://www.zeiss.com.mx/mx/home.nsf/allBySubject/Launch+-+Zeiss-ngl+JavaNavigatorLich, Raphael. MTODOS DE LABORATORIO, Segunda edicin Ed. Interamericana S.A. .C.V. Mxico DF
Marcel Locquin, Mauricel Langeron PRINCIPIOS BSICOS DE MICROSCOPIA Mxico , Ed. Labor S.A.
EL MICROSCOPIO http://mrmbers.nbci,com/microscopio/main.htmlMICROSCOPIOS http://microcirncia.com/Principal%20microscopios.htm
MICROSCOPIOS http://www.opticaroma.com/microscopios/index.html
MICROSCOPE WORLD http://www.microscopeworld.com/
MICROSCOPIA http://charfacnu.cie.umn.edu/glossary/
MUSEUM MICROSCOPY http://micro.magnet.fsu.edu/primer/museum/index.html
NIKN MICROSCOPES ttp://www.nikonusa.com/usa_category/category.jsp?cat=5
Rincn Snchez A.R., Reyes Ortiz N. MANUAL DE MICROSCOPIA PTICA Editado: Asociacin deQumicos del Instituto Nacional de Nutricin Salvador Subirn. Mxico
Sanpedro J. TCNICA MICROGRFICA Y DE ORGANOGRAFIA MICROSCPICA. Universidad NacionalAutnoma de Mxico
MANEJO Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIOCOMPUESTO
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http://www.opticaroma.com/microscopios/index.htmlhttp://www.microscopeworld.com/http://micro.magnet.fsu.edu/primer/museum/index.htmlhttp://www.opticaroma.com/microscopios/index.htmlhttp://www.microscopeworld.com/http://micro.magnet.fsu.edu/primer/museum/index.html -
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1.- INTRODUCCINEl microscopio, es uno de los instrumentos de uso ms frecuente en loslaboratorios clnicos, muchos de los errores diagnsticos no tienen su base en elpreparado, sino en la errnea manipulacin del instrumento. El uso adecuado de los
recursos pticos del microscopio permitir reconocer detalles y variaciones tintoriales, queayudarn al correcto diagnstico, es por eso importante, que para su manejo, secuente con tcnicas adecuadas que permitan obtener imgenes claras en el menortiempo posible y que adems, mantengan al instrumento en buenas condiciones.
2.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACIN
El microscopio es un instrumento ptico de precisin, mediante un sistema delentes y fuentes de iluminacin puede hacer visible un objeto microscpico yproporciona la amplificacin de las imgenes de los objetos, lo que hace posible,ver con detalles y claridad sus estructuras pequeas o invisibles a la vista humana,facilitando de esta manera su estudio. Las lentes de un microscopio ptico seencuentran en el condensador, el objetivo y el ocular. El condensador se utiliza paraenfocar la luz sobre la preparacin. Elevando o bajando el condensador puedealterarse el plano del foco de luz y elegirse una posicin que consiga el focopreciso. El objetivo es la lente situada cerca del objeto que se observa. El aumentoprimario del objeto es producido por la lente objetivo y la imagen se transmite alocular, donde se realiza el aumento final. En los microscopios modernos el tuboptico tiene una medida estndar y produce aumentos de 1x, no obstante esteaumento varia de acuerdo a su medida. Por lo tanto, el aumento total de unmicroscopio compuesto se debe calcular tomando en cuenta el producto delaumento de su objetivo, tubo ptico y de su ocular .
3.- LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1 Reactivos
NUM. CLAVE NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDADXilolMezcla de alcohol-cetona -eter 80%/10%/10%) 100 ml
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3.2 Equipo de Laboratorio
2. Microscopios de campo claro diferentes marcas y modelos
3.3 Materiales de laboratorio
NUM. CANTIDA
D
DESCRIPCION
- - Porta objetosCubre objetosPapel para lentes
4.- TCNICA O PROCEDIMIENTO4.1 Muestra
Cortes histolgicos, frotis sanguneos y bacterianos.
4.2 Preparacin del sistema de medicin4.2.1. Seguir las instrucciones para enfocar en el microscopio una muestra
biolgica
4.2.2. Disponer cuando menos de dos laminillas por alumno .
4.3- Sistema de medicinSeguir las indicaciones para enfocar adecuadamente con el microscopio
compuesto
1. Colocar el microscopio en una mesa que permita una cmoda observacin atravs del ocular.
2. Limpiar el sistema ptico y el de iluminacin.3. Subir el condensador hasta el tope y cerrar el diafragma iris
aproximadamente a la mitad.
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4. Seleccionar con el revolver el objetivo de menor aumento (10 X).
Bajar la platina y colocar la preparacin (fijarse que quede firmemente sujeta alcarro, y que el cubre objetos y el objeto estn situados hacia arriba)acomodando la porcin de la preparacin que se va examinar en la aperturacentral de la platina
5. Mirando por los extremos subir la platina hasta el tope, si no hay topeacercar la platina lo ms cerca posible a la lente objetiva, hasta apoyarlolevemente sobre la preparacin. Normalmente los microscopiosconvencionales poseen un tope que impide su ascenso por arriba de ciertamarca. Sin embargo, puede darse el caso que tal tope no exista. (este tope
solo existe en la lente objetiva de 10X)
6. Mirando por los oculares bajar la platina con el tornillo macromtrico hastaque empiecen a distinguirse los detalles de la preparacin.
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7. Afinar los detalles de la imagen moviendo el tornillo micromtrico.8. Ajustar la distancia interpupilar ( distancia entre los ojos).
9. Ajustar dioptras (agudeza visual) en el porta ocular izquierdo, o bien con elocular enfocable izquierdo
10 Una vez conseguido el enfoque correcto, recorra todo la preparacin, a fin de ir
reconociendo imgenes que le sean familiares. recordar que el objetivo de 10Xpermite ver la visin panormica del preparado. Es decir, los tejidos, suubicacin, y sus relaciones (funcin importante al inicio del estudio queahorrar tiempo dedicado al anlisis de la muestra).
11 Cambiar a un objetivo de ms aumento (sin bajar la platina con el tornillomacromtrico) y enfocar nicamente con el tornillo micromtrico.
12 Para usar el objetivo de 100X, aleje la lente de la muestra, deposite una gotade aceite de inmersin en el portaobjetos (sin quitar la laminilla de la platina)
en el punto de mayor concentracin luminosa, acerque la lente de 100lentamente hasta que esta se encuentre en contacto con el aceite (observarlateralmente ste movimiento). Observe por el ocular y mueva ligeramente eltornillo micromtrico hasta encontrar la imagen.
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13 Recordar que los objetivos de 40X y 100X, permiten ver detalles de una clula,o la conformacin celular de una estructura. Se puede observar la forma ytamao de clulas o grupo de ellas, aspecto que permite analizar la muestra
de manera eficiente.14 Al finalizar su observacin, apague la fuente de luz, colocar la lente de menor
aumento. Aleje la platina del objetivo. Retire la laminilla y limpie las lentesobjetivas y la platina.
Si al llevar a cabo el proceso no enfoco con la lente objetiva de 10X la lenteobjetiva de 40X, Checar los siguientes aspectos:
1) No enfoco con la lente objetiva de 10X
Ver si la iluminacin es correctaUna mala iluminacin puede hacer que el punto mximo de enfoque se veapoco ntido, dndonos la falsa impresin de un problema en el sistema delentes.La bsqueda de la mejor iluminacin o la apertura del diafragma resolver elproblema.Limpiar el ocular.Muchas veces ocurre que la inexperta (y comprensible) manipulacin delmicroscopio, hace que uno toque el ocular con los dedos, dejando la
impronta de las huellas digitales. La simple limpieza del ocular puederesolver el problema (error muy frecuente cuando no se observa unaimagen).
Acomodar correctamente el revlver
Generalmente los revlveres de cualquier microscopio tienen una traba paracada objetivo. Acomodarlo incorrectamente, o no trabarlo en su punto exacto,puede desalinear el objetivo del ocular, impidindonos una correctaapreciacin de la muestra. Al acomodar el revlver correctamente, alinear al
objetivo 10X con el ocular, y permitir ver correctamente.Limpiar el cubreobjetos.
Al acomodar la preparacin en la platina, muchas veces apoyamos nuestrosdedos sobre el cubreobjetos. La simple limpieza garantizar la resolucin.
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2) No enfoco con la lente objetiva de 40X
Fijarse en las caractersticas del cubreobjetos
El cubreobjeto est colocado hacia el objetivo, un error tan simple se comete diariamente.Por eso es necesario garantizar, antes de acomodar la preparacin en la platina, que elcubreobjetos est colocado hacia arriba. Su incorrecta acomodacin nos permitir ver lapreparacin en 10X, pero ser imposible su observacin en 40X. Checar el grosor del cubreobjetos si este es demasiado grueso impide cualquier enfoque o es de mala calidad.
Fijarse el estado del objetivo de 40X
La gran mayora de los objetivos 40X presentan un sistema de resorte en sulente inferior (el que se encuentra cercano a la preparacin), a fin de evitar la
rotura del cubreobjetos. Sin embargo, muchas veces dicho resorte nofunciona correctamente, desacomodando de esta manera los lentes queconforman al objetivo al quedar trabado en un tramo de su recorrido. Enestos casos es conveniente avisar al personal del laboratorio, debido a que lamanipulacin errnea se podra transformar en un error irreparable.
Fijarse si se est utilizando el objetivo correctoLos microscopios presentan a la par de los dos objetivos convencionales(10X y 40X), un tercer objetivo llamado de inmersin (100X). Este objetivoutiliza como fundamento el uso de un aceite especial (aceite de inmersin)interpuesto entre dicho objetivo y el cubreobjeto. De esta manera, se altera elndice de difraccin del medio interpuesto entre el preparado y el objetivo, ypor simple frmula de lmite de resolucin, se consigue un mayor aumento.Puede darse el caso que errneamente hayamos acomodado el objetivo deinmersin en lugar del objetivo 40X, imposibilitando la visin correcta almicroscopio. En las lentes objetivas de 100X las causas de no observacinde la imagen son las mismas que para el de 40X, la diferencia es quesiempre usan aceite de inmersin.
4.4.- Uso del sistema de medicin
4.4.1 Checar el sistema ptico, de iluminacin y mecnico del microscopio4.4.2 Confirmar que el sistema ptico se encuentre limpio4.4.3 Revisar el sistema elctrico del instrumento (clavijas en buenas condiciones)4.4.4 Seguir las instrucciones para el enfoque de la muestra4.4.5 Terminado el trabajo apagar el microscopio, limpiar su sistema ptico y entregarlo al
encargado del laboratorio
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4.4.6 5.-PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS
5.1 DIBUJAR LOS CAMPOS MICROSCPICOS OBSERVADOS AL ENFOCAR
SIN ENFOCAR
AL CAMBIAR A 40 X (sin enfocar)
10 X ENFOCADO
40 X ENFOCADO
AL CAMBIAR A 100 X (sin enfocar) 100 X ENFOCADO
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5.2 De acuerdo a las imgenes observadas al microscopio redactar en el cuadrosiguiente tomando como base el aumento y poder de resolucin las diferencias
encontradas en cada una de ellas
Al enfocar con el objetivo de10 X
Al cambiar al objetivo 40X (sinenfocar)
Imagen enfocada con elobjetivo 40X
Cambiar al objetivo 100 X (sinenfocar)
Imagen enfocada con elobjetivo 100 X
5.3 Analizando las indicaciones sobre el uso del microscopio
y lo observado en el manejo del instrumento redactar los
principales cuidados que se deben dar a:
Objetivos
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Oculares
Fuenteluminosa
Sistemamecnico
REDACTAR CONCLUSIONES
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6.- CONFIABILIDAD ANALTICA
6.1 Lo ms conveniente es dejar fijo el microscopio en la mesa de trabajocubierto con una funda para evitar el polvo cuando no se utiliza o bienguardarlo en un armario.
6.2 La mesa que se vaya a utilizar debe ser estable para evitar molestasvibraciones de la muestra durante el examen, estar alejada de las ventanas yde preferencia ser de fondo negro.
6.3 Mantener el microscopio por lo menos 15 cm del borde de la mesa de
laboratorio.6.4 La posicin ante el microscopio debe ser cmoda y estar a una alturacorrecta.
6.5 Mantener limpio el sistema ptico y el de iluminacin (libre de polvo, aceite,grasa, etc)
6.6 Al limpiar las lentes primeramente eliminar las partculas de polvo, ya sea conun bulbo inyector de aire, un pincel o bien soplando fuertemente sobre lalente. Posteriormente usar de preferencia papel para lentes seco, en caso deestar sucios de grasa o aceite usar una mezcla de alcohol acetona- ter(80%/10%/10%) y en ltima instancia con xilol . Esta limpieza debe de
realizarse antes y despus de usar el microscopio.6.7 Las partes externas del microscopio se limpian con un lienzo seco, o en suefecto humedeciendo un algodn con un detergente suave, posteriormentelimpiar con un trapo hmedo, nunca limpiar con alcohol o acetona.
6.8 Evitar que las lentes estn en contacto con saliva debido a que al mezclarsecon el polvo forma una capa difcil de remover .
6.9 Cuando se observe a travs del ocular no pegar los ojos a la lente(loscosmticos las daan).
6.10 Evitar que las lentes objetivas se rayen o quiebren al enfocar. Para realizar elenfoque hay una de operaciones que facilita y acelera el enfoque y evita al
mismo tiempo que se estropee la preparacin o el microscopio la msindicada y sencilla para el enfoque inicial es el usar el objetivo de 10X,porque la mayora de los microscopios tienen un tope que impide que estalente pegue con el portaobjetos.
6.11 Al enfocar hacerlo siempre tratando de alejar la lente de la muestra y nuncaen sentido contrario.
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6.12 Nunca deje la lente sumergida en el aceite o en contacto con muestraslquidas.
6.13 No quitar las lentes objetivas y oculares de su lugar.6.14 No cambiar las lentes objetivas tomndolas con los dedos por su estructura
metlica, ya que el sudor contiene cidos grasos y otras sustancias que losdaan, adems al moverlos de esta forma los desajusta.
6.15 No quitar el condensador, ni tratar de ver si estos tienen diafragma con eldedo usar siempre en dispositivo provisto por fabricante para hacerlo.
6.16 Al desconectar los enchufes del microscopio no tirar del alambre, sujetarfirmemente el enchufe y luego desconectarlo de la toma.
6.17 El microscopista que use anteojos debe quitrselos cuando vaya a observaral microscopio, excepto el que sufre astigmatismo, o que las lentes ocularestengan indicaciones de que pueden usarse con gafas, en este caso evitar elcontacto de las lentes oculares con los anteojos pues los oculares pueden
rayarse e inutilizarse.6.18 Nunca mueva ninguna parte del microscopio si antes no sabe para que sirve.6.19 Siempre que enfoque primero localice visualmente las partes que va utilizar y
posteriormente proceder a moverlas.
7.- GARANTIA DE CALIDAD
7.1 Dar al microscopio cuidados y mantenimiento Diario, Mensual y Semestral
8.- PRACTICABILIDAD
8.1 Las indicaciones del manejo y cuidados del microscopio pueden llevarse a caboen cualquier microscopio moderno
9.- BIBLIOGRAFA
Barrera Escorcia R. EL MICROSCOPIO OPTICO. Ed Escuela Nacional de Estudios Profesionales Iztacala,UNAM. Mxico DF
www.quimicaclinicauv.blogspot.com 25
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Carl Zeiss http://www.zeiss.com.mx/mx/home.nsf/allBySubject/Launch+-+Zeiss-ngl+JavaNavigator
MANEJO DEL MICROSCOPIO http://www.fmv- uba.org.ar/grado/medicina/ciclo_biomedico/primer_ao/histologia/ma_mami/manejo_%20de_%20microscopio.htm
Marcel Locquin, Mauricel Langeron PRINCIPIOS BSICOS DE MICROSCOPIA Mxico , Ed. Labor S.A.
MICROSCOPEWORLD http://www.microscopeworld.com/
MUSEUM MICROSCOPY http://micro.magnet.fsu.edu/primer/museum/index.html
NIKN MICROSCOPES http://www.nikonusa.com/usa_category/category.jsp?cat
Rincn Snchez A.R., Reyes Ortiz N. MANUAL DE MICROSCOPIA PTICA Editado: Asociacin deQumicos del Instituto Nacional de Nutricin Salvador Subirn. Mxico
Sanpedro J.TCNICA MICROGRFICA Y DE ORGANOGRAFIA MICROSCPICA. Universidad NacionalAutnoma de Mxico
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ILUMINACION DE KHLER
1.- INTRODUCCINEn microscopia, la iluminacin de la muestra es la variable ms importante para obtener imgenesde alta calidad. No obstante, con frecuencia la mayora de los sofisticados y bien equipadosmicroscopios no pueden rendir las imgenes excelentes debido al uso incorrecto de la fuente de luz,que conduce generalmente a la iluminacin inadecuada de la muestra. Toda muestra correctamenteiluminada debe estar libre de brillo y la luz dispersada uniformemente en el campo visual.
Los cambios ms importantes en la microscopia surgieron a partir de los comienzos del siglo XX,cuando el gran fsico Alemn, el Dr. August Khler, desarroll un nuevo sistema de iluminacin, quean hoy en da se maneja y lleva su nombre. esta es recomendada por todos los fabricantes de losmicroscopios modernos del laboratorio permitiendo as que el microscopista utilice el microscopio a
su capacidad mxima.
2.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACINLa iluminacin Khler consiste en regular la marcha de los rayos de luz, centrandola mayor intensidad de luz y cubriendo exactamente el dimetro frontal de cadalente objetiva en su apertura numrica especfica, de esta manera, poderaprovechar al 100% la luz emitida por la fuente emisora. Esta tcnica utiliza dosdiafragmas; un diafragma denominado de campo, situado al nivel de la lmparacolectora de bajo poder y un diafragma llamado de abertura (iris) situado en elcondensador, en la prctica, la imagen del diafragma de campo es proyectada en el
plano de la preparacin por el condensador, el cual se desplaza verticalmente hastaobtener una imagen lo ms ntida posible del diafragma de campo. El diafragma decampo sirve para regular la abertura de la iluminacin, es decir, el contraste, laprofundidad de campo y el poder de resolucin y el diafragma iris controla el ngulode los rayos luz que emergen del condensador y que alcanzan la muestra, tienegran ingerencia en la resolucin, contraste, profundidad de foco y en el brillo de laimagen.
3.- LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1 Reactivos
NUM. CLAVE NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDADXilol
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Mezcla de alcohol-acetona -eter 80%/10%/10%) 100 ml
3.2 Equipo de Laboratorio
3. Microscopios de campo claro diferentes marcas y modelos
3.3 Materiales de laboratorio
NUM CANTIDAD DESCRIPCIONPorta objetosCubre objetosPapel para lentes
4.- TCNICA O PROCEDIMIENTO
4.3 MuestraCortes histolgicos, frotis sanguneos y bacterianos.
4.4 Preparacin del sistema de medicin
4.4.1 Proporcionar un microscopio ptico que tenga en su lmpara diafragma decampo
4.4.2 Disponer cuando menos de dos preparaciones teidas
4.3- Seguir las indicaciones para regular la iluminacin en el microscopio compuesto.
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1. Enfocar la muestra (proceder de acuerdo a la tcnica de la prctica 2, delinciso 3 -10)
2. Cerrar gradualmente el diafragma de la fuente de luz hasta ver una imagenpoligonal.
3. Descender, ligeramente el condensador hasta ver ntido el borde deldiafragma de campo.
4. Si la imagen poligonal no est en el centro, centrarla utilizando los tornillosdel condensador.
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5. Una vez centrado el condensador abrir el diafragma de la fuente de luz hastaque el polgono abarque todo el campo, realizado este paso ya no mover eldiafragma de campo ni la altura del condensador.
6. Abrir completamente el diafragma del condensador, volver a cerrar lonecesario (hasta que la imagen tenga un buen contraste).
7. Al cambiar de objetivo, enfocar con el tornillo micromtrico y contrastar laimagen con el diafragma iris y para ajustar el brillo modificar la intensidad dela fuente luminosa o colocar filtros.
4.4. Uso del sistema de medicin
4.4.1 Previo al uso del microscopio limpiar su sistema ptico y de iluminacin4.4.2 Enfocar primero la muestra usando la lente objetiva de 10X4.4.3 Proceder a regular la iluminacin4.4.4 Terminada la observacin de la muestra apagar la lmpara del instrumento y
desconectarlo.
4.4.5 Limpiar el sistema ptico4.4.6 Entregar el instrumento al encargado del laboratorio
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5.-PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS5.1 De acuerdo a los pasos seguidos al regular la iluminacin en el microscopiodibujar las imgenes captadas en los campos microscpicos al efectuar cada unode los pasos de la tcnica de iluminacin de Kohler
Sin regular la iluminacin Al cerrar el diafragma de campo
Bajar el condensador Tener el diafragma de campo enfocado
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Al abrir el diafragma de campo Con la iluminacin regulada
5.2 Describir en la tabla siguiente las imgenes de los campos observados al llevara cabo cada uno de los pasos de la tcnica de iluminacin
IMAGEN CAPTADA AL DESCRIPCIONEnfocar con 10 Xsin regular la iluminacin
Cerrar el diafragmade campo
Bajar el condensador
Tener enfocado eldiafragma de campo
Abrir el diafragmade campo
Cerrar el diafragmade condensador
Tener reguladala iluminacin
REDACTAR CONCLUSIONES
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6.- CONFIABILIDAD ANALTICA6.1 Colocar el microscopio en una mesa alejada de las ventanas.6.2 Al mover el diafragma iris o el de campo hacerlo con suavidad6.3 Al desplazar el condensador hacerlo lentamente y siempre procurar alejarse de la platina nunca
en sentido contrario
6.4 El diafragma de campo se mueve cuando se regula la trayectoria de la luz y solo se utiliza
con la lente objetiva de 10X
6.5 Para regular la luz en las lentes objetivas de 40X 100X solo se mueve el diafragma iris o
el botn de encendido (control de intensidad de luz).
6.6 Generalmente las muestras teidas requieren ms luz y las traslucidas menos.
7.- GARANTIA DE CALIDAD7.1 Regular la iluminacin siempre que use el microscopio
8.- PRACTICABILIDAD8.1 Se pueden utilizar diferentes muestras teidas
9.- BIBLIOGRAFA
Barrera Escorcia R. EL MICROSCOPIO OPTICO. Ed Escuela Nacional de Estudios Profesionales Iztacala,UNAM. Mxico DF
Carl Zeiss http://www.zeiss.com.mx/mx/home.nsf/allBySubject/Launch+-+Zeiss-ngl+JavaNavigator
MANEJO DEL MICROSCOPIO http://www.fmv- uba.org.ar/grado/medicina/ciclo_biomedico/primer_ao/histologia/ma_mami/manejo_%20de_%20microscopio.htm
Marcel Locquin, Mauricel Langeron PRINCIPIOS BSICOS DE MICROSCOPIA Mxico , Ed. Labor S.A.
MUSEUM MICROSCOPY http://micro.magnet.fsu.edu/primer/museum/index.html
NIKN MICROSCOPES http://www.nikonusa.com/usa_category/category.jsp?cat
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Rincn Snchez A.R., Reyes Ortiz N. MANUAL DE MICROSCOPIA PTICA Editado: Asociacin deQumicos del Instituto Nacional de Nutricin Salvador Subirn. Mxico
Sanpedro J.TCNICA MICROGRFICA Y DE ORGANOGRAFIA MICROSCPICA. Universidad NacionalAutnoma de Mxico
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MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO
1.- INTRODUCCIN
La microscopia de campo oscuro es una tcnica de iluminacin especial que secaracteriza en la iluminacin oblicua para realzar el contraste en las muestras queno son reflejadas bien bajo condiciones normales de la iluminacin del campo claro,observndose partculas que aparecen como puntos brillantes sobre un fondooscuro. Este tipo de iluminacin se utiliza en preparaciones en fresco o sincoloracin y cuando se quiere estudiar el relieve de las estructuras a observar(bordes, grietas, flagelos, bacterias, fibras, cristales) o aquellos objetos que, acausa de la falta de contraste apenas se distinguen o no se aprecian en campoclaro. Las estructuras internas de los objetos no se reproducen tansatisfactoriamente. Las partes principales de este microscopio son: un condensador
y un objetivo especial.2.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACIN
En el microscopio de campo oscuro, los rayos centrales de luz son suprimidoscompletamente dando lugar a un campo negro, los rayos perifricos slo puedenpenetrar al sistema ptico cuando algn objeto presente en el campo de visinmicroscpica los desva de su trayecto, al chocar la luz con algn elemento delpreparado se reflejan o refractan penetrando en el eje ptico, entonces se puedenver, partculas que aparecen como puntos brillantes sobre un fondo oscuro,. Paraobtener este tipo de iluminacin se utilizan diafragmas o interceptores para campooscuro (obturadores). Tambin hay condensadores formados por una lente gruesaoscura plano convexa, cuya curvatura es paraboloide o cardiode; su finalidad esconcentrar los rayos en la cara superior del portaobjeto. Una caractersticaimportante en este instrumento es que siempre la apertura numrica del objetivodebe ser inferior a la abertura del condensador.
3.- LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1 Reactivos
NUM. CLAVE NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDADXilolMezcla de alcohol-acetona -eter 80%/10%/10%) 100 ml
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3.2 Equipo de Laboratorio
4. Microscopio de campo oscuro
3.3 Materiales de laboratorio
NUM CANTIDAD DESCRIPCIONPorta objetosCubre objetos
Papel para lentes
4.- TCNICA O PROCEDIMIENTO
4.5 Muestreo y muestra4.1.1.Recolectar una muestra de orina (primera miccin de la maana previa
limpieza de genitales)4.1.2. Mezclar la muestra, despus centrifugar a 2000 rpm durante 5 minutos4.1.3. Obtener el sedimento y colocarlo entre porta y cubre objetos
4.6 Preparacin del sistema de medicin4.6.1 Instalar un microscopio de campo oscuro4.6.2 Seleccionar el lugar adecuado para su colocacin, colocarlo en una mesa
alejada de las ventanas de preferencia en un rea oscura.4.6.3 Alistar muestras biolgicas para su observacin al microscopio
4.7 Sistema de medicin
4.3.1 Descripcin del microscopio de campo oscuro6. Identifique las partes del sistema mecnica del microscopio de campo
oscuro.7. Identifique las partes del sistema ptico del microscopio.8. Identifique las partes del sistema de iluminacin del microscopio.
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9. Describa las principales caractersticas de cada uno de los componentes queintegran el sistema mecnico, ptico y de iluminacin del microscopio.
10.Describa la funcin que tienen cada una de las partes que integran los
sistemas antes mencionados.
4.3.2 Manejo del microscopio de campo oscuro1. Colocar la fuente luminosa al microscopio y centrarla (la lmpara se centra
con el objetivo seco dbil y con el condensador de campo claro).2. Una vez centrada la luz colocar el condensador de campo oscuro3. Colocar el porta objeto con muestra en la platina.4. Seleccionar con el revolver el objetivo de menor aumento ( 10 X ).5. Bajar la platina y colocar la preparacin (fijarse que quede firmemente sujeta
al carro, y que el cubre objetos y el objeto estn situados hacia arriba)acomodando la porcin de la preparacin que se va examinar en la aperturacentral de la platina
6. Mirando por los extremossubir la platina hasta el tope, si no hay tope acercarla platina lo ms cerca posible a la lente objetiva, hasta apoyarlo levementesobre la preparacin. Normalmente los microscopios convencionales poseenun tope que impide su ascenso por arriba de cierta marca. Sin embargo,puede darse el caso que tal tope no exista. (este tope solo existe en la lenteobjetiva de 10X)
7. Mirando por los oculares bajar la platina con el tornillo macromtrico hastaque empiecen a distinguirse los detalles de la preparacin.
8. Afinar los detalles de la imagen moviendo el tornillo micromtrico.9. Una vez conseguido el enfoque correcto, recorra todo la preparacin, a fin de
ir reconociendo imgenes que le interesen. Cambiar a un objetivo de msaumento (sin bajar la platina con el tornillo macromtrico) y enfocarnicamente con el tornillo micromtrico.
10.Para usar el objetivo de 100X, aleje la lente de la muestra, deposite una gota
de aceite de inmersin en el portaobjetos (sin quitar la laminilla de la platina)en el punto de mayor concentracin luminosa, acerque la lente de 100lentamente hasta que esta se encuentre en contacto con el aceite (observarlateralmente ste movimiento). Observe por el ocular y mueva ligeramente eltornillo micromtrico hasta encontrar la imagen.
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11. Al finalizar su observacin, apague la fuente de luz, colocar la lente de menoraumento. Aleje la platina del objetivo. Retire la laminilla y limpie las lentesobjetivas y la platina.
4.4. Uso del sistema de medicin
4.4.1 Checar que el sistema ptico y de iluminacin del microscopio se encuentrenlimpios.
4.4.2 Previo a la observacin de las muestras regular la trayectoria de la luzutilizando la tcnica de iluminacin de Khler.
4.4.3 Enfocar la muestra de acuerdo a las indicaciones establecidas
5.-PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS5.1 De acuerdo al estudio realizado al microscopio de campo oscuro proporcionadoen el laboratorio Identificar las partes del instrumento en el esquema siguiente yponer los nombres correspondientes a cada una.
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5.2 DIBUJAR LOS SIGUIENTES COMPONENTES DEL MICROSCOPIO DE CAMPO
OSCUROCondensador vista frontal Condensador vista lateral
Obturador Lente objetiva
5.3 DE ACUERDO A LOS ESQUEMAS ANTERIORES REDACTAR LADESCRIPCION DE LAS PARTES DEL MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO
(solo se citan las partes que son diferentes al microscopio de campo claro)
SISTEMA PARTE DESCRIPCIN FUNCIONCondensador
I
LLente auxiliar
U
M Lente frontal
I
N Obturador
A
C
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I Tornillos de
O centrado
N
DESCRIPCION DE LAS PARTES DEL MICROSCOPIO DE CAMPO OSCUROSISTEMA PARTE DESCRIPCIN FUNCIN
ObjetivosOPTI OcularesCO
El sistema mecnico esta integrado por las mismas partes que constituyen al microscopio de campo claro
5.4 DE ACUERDO A LOS PASOS SEGUIDOS AL ENFOCAR CON EL MICROSCOPIO
DE CAMPO OSCURO DIBUJAR LAS IMGENES CAPTADAS
Campo observado antes de enfocar la muestra
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Campo con la muestra enfocada
5.5 DE ACUERDO A LAS IMGENES CAPTADAS ANTERIORMENTE REDACTAR SUSOBSERVACIONES EN EL SIGUIENTE CUADRO
CAMPO DESCRIPCIONINICIAL
FINAL
CONCLUSIONES
6.- CONFABILIDAD ANALTICA
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6.1 Para una mejor observacin de los objetos utilizar muestras sin teir.6.2 Checar que el condensador este colocado en el microscopio de forma
adecuada.
6.3 Utilizar porta objetos cuyo espesor se encuentre entre 0.9 1.1mm y cubreobjetos de 0.17mm.
6.4 Cuidar que la abertura numrica del objetivo sea aproximadamente 0.1menor que la abertura lmite inferior del condensador.
6.5 Usar cubre objetos, portaobjetos nuevos (libres de araazos) perfectamentelimpios.
6.6 Confirmar la perfecta limpieza del sistema ptico (sin grasa y polvo)6.7 Al montar la preparacin procurar que no sea demasiado gruesa.6.8 Evitar que se formen burbujas al colocar el cubre objeto o el aceite de
inmersin a la preparacin.
6.9 Los objetos a examinar deben de estar en el seno de un lquido lmpido(agua, aceite de inmersin, etc,) de ningn modo al aire o en un lquido turbio
7.- GARANTIA DE CALIDAD7.1 Checar constantemente el sistema elctrico7.2 Cada vez que el instrumento se use revisar el sistema ptico, mecnico y
de iluminacin
8.- PRACTICABILIDAD
8.1. Se pueden utilizar acetatos o diapositivas para describir al microscopio8.2. La muestras pueden ser sustituidas por otras
9.- BIBLIOGRAFA
Barrera Escorcia R. EL MICROSCOPIO OPTICO. Ed Escuela Nacional de Estudios Profesionales Iztacala,UNAM. Mxico DF
Brock BIOLOGA DE LOS MICROORGANISMOS ed. Prentice Hall, Madrid Espaa
Carl Zeiss http://www.zeiss.com.mx/mx/home.nsf/allBySubject/Launch+-+Zeiss-ngl+JavaNavigatorLich, Raphael. MTODOS DE LABORATORIO, Segunda edicin Ed. Interamericana S.A. .C.V. Mxico DF
Marcel Locquin, Mauricel Langeron PRINCIPIOS BSICOS DE MICROSCOPIA Mxico , Ed. Labor S.A.
EL MICROSCOPIO http://mrmbers.nbci,com/microscopio/main.html
MICROSCOPIOS http://microcirncia.com/Principal%20microscopios.htm
MICROSCOPIOS http://www.opticaroma.com/microscopios/index.html
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http://www.zeiss.com.mx/mx/home.nsf/allBySubject/Launch+-+Zeiss-engl+JavaNavigatorhttp://www.opticaroma.com/microscopios/index.htmlhttp://www.zeiss.com.mx/mx/home.nsf/allBySubject/Launch+-+Zeiss-engl+JavaNavigatorhttp://www.opticaroma.com/microscopios/index.html -
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MICROSCOPE WORLD http://www.microscopeworld.com/
MICROSCOPIA http://charfacnu.cie.umn.edu/glossary/
MUSEUM MICROSCOPY http://micro.magnet.fsu.edu/primer/museum/index.htmlNIKN MICROSCOPES ttp://www.nikonusa.com/usa_category/category.jsp?cat=5
Rincn Snchez A.R., Reyes Ortiz N. MANUAL DE MICROSCOPIA PTICA Editado: Asociacin deQumicos del Instituto Nacional de Nutricin Salvador Subirn. Mxico
Sanpedro J. TCNICA MICROGRFICA Y DE ORGANOGRAFIA MICROSCPICA. Universidad NacionalAutnoma de Mxico
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http://www.microscopeworld.com/http://micro.magnet.fsu.edu/primer/museum/index.htmlhttp://www.microscopeworld.com/http://micro.magnet.fsu.edu/primer/museum/index.html -
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MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE
1.- INTRODUCCINEl ojo humano es capaz de observar diferencias de color y de intensidades de color, noas diferencias de fases (producidas por distintos ndices de refraccin que tienen losobjetos), por eso se recurre al microscopio de contraste de fase. La microscopia decontraste de fases hace posible observar clulas en estado vivo ms fcilmente,ayudando as a evitar la creacin de condiciones artificiales tales como las introducidaspor la tincin (aparicin de artefactos que interfieren con la correcta visin y alteracin
de las estructuras naturales de las clula). En muchos laboratorios de bacteriologa, elmicroscopio de contraste de fases ha reemplazado prcticamente el microscopio pticocomn como instrumento de investigacin.
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2.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LADETERMINACIN
El microscopio de contraste de fases tiene como objetivo transformar la diferencia defase, insensible al ojo, en diferencia de amplitud, visibles por medios puramentepticos. Cuando la luz pasa por las muestras se originan dos tipos de haces: hacesdirectos y difractados. Estos inciden sobre las lentes convergentes del objetivo de modotal que originan en el plano focal posterior, una imagen de difraccin (imagen deamplitud). Desde el punto de vista del espectro de difraccin un objeto de fase, difierede uno de amplitud, en que el de fase tiene los rayos difractados retrasados un cuartode longitud de onda. Por tal motivo para transformar un objeto de fase en uno deamplitud, se debe corregir esa diferencia de fase de tal forma que los rayos difractadosy los no difractados experimenten fenmenos de interferencia destructiva, formando deesa manera la imagen de la estructura en observacin. Desde el punto de vista delfuncionamiento se puede recurrir por medio de la placa de fase que se encuentra en lalente objetiva a un atraso de la marcha de los rayos difractados en un cuarto delongitud de onda, significa un medio de retardo total. De esta manera se produce unfenmeno de interferencia destructiva lo que permite que las estructuras enobservacin resalten en color negro sobre fondo claro. Este fenmeno recibe el nombrede contraste de fase negativa. Por otra parte, se puede atrasar la luz directa un cuartode longitud de onda, por lo cual se elimina la diferencia de fase permitiendo que losrayos directos y difractados interfieran entre s en forma constructiva. Las estructurasen observacin se muestran brillantes y se llama contraste de fase positiva.
3.- LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1 Reactivos
NUM. CLAVE NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDADXilolMezcla de alcohol-acetona -eter 80%/10%/10%) 100 ml
3.2 Equipo de Laboratorio
5. Microscopio de contraste de fase
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3.3 Materiales de laboratorio
NUM CANTIDAD DESCRIPCIONPorta objetosCubre objetosPapel para lentes
4.- TCNICA O PROCEDIMIENTO
4.8 Muestreo y muestra4.1.1.Recolectar una muestra de orina (primera miccin de la maana previa
limpieza de genitales)4.1.2. Mezclar la muestra, despus centrifugar a 2000 rpm durante 5 minutos4.1.3. Obtener el sedimento y colocarlo entre porta y cubre objetos
4.9 Preparacin del sistema de medicin4.9.1 Instalar un microscopio de contraste de fase4.9.2 Seleccionar el lugar adecuado para su colocacin, colocarlo en una mesa
alejada de las ventanas de preferencia en un rea oscura.4.9.3 Alistar muestras biolgicas para su observacin al microscopio
4.3. Sistema de medicin4.3.1. Descripcin del microscopio de contraste de fase
1. Identifique las partes del sistema mecnica del microscopio de contraste defase
2. Identifique las partes del sistema ptico del microscopio.3. Identifique las partes del sistema de iluminacin del microscopio.4. Describa las principales caractersticas de cada uno de los componentes que
integran el sistema mecnico, ptico y de iluminacin del microscopio.5. Describa la funcin que tienen cada una de las partes que integran los
sistemas antes mencionados.
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4.3.2 Manejo del microscopio de contraste de fase.12.Colocar la fuente luminosa al microscopio y centrarla (la lmpara se centra
con el objetivo seco dbil y con el condensador de campo claro).13. Ajustar el condensador de fase, colocando la ranura anular de 10 X y la lente
objetiva de 10X14.Quitar el ocular de la izquierda y sustituirlo por el ocular de fase. Enfocar la
imagen girando el ocular de fase y con la ayuda de los botones de ajustesituados en el condensador, centrar los anillos.
15.Retirar el ocular de fase y colocar nuevamente el ocular normal.16.Bajar la platina y colocar la preparacin (fijarse que quede firmemente sujeta
al carro, y que el cubre objetos y el objeto estn situados hacia arriba)acomodando la porcin de la preparacin que se va examinar en la apertura
central de la platina.17. Mirando por los extremossubir la platina hasta el tope, si no hay tope acercar
la platina lo ms cerca posible a la lente objetiva, hasta apoyarlo levementesobre la preparacin.
18. Mirando por los oculares bajar la platina con el tornillo macromtrico hastaque empiecen a distinguirse los detalles de la preparacin.
19.Afinar los detalles de la imagen moviendo el tornillo micromtrico20. Una vez conseguido el enfoque correcto, recorra todo la preparacin, a fin de
ir reconociendo imgenes que le interesen.
21. Al cambiar a un objetivo de mayor aumento (sin bajar la platina con el tornillomacromtrico), cambiar la posicin del condensador colocando la ranuraanular correspondiente y enfocar nicamente con el tornillo micromtrico.
22.Al finalizar su observacin, apague la fuente de luz, colocar la lente de menoraumento. Aleje la platina del objetivo. Retire la laminilla y limpie las lentesobjetivas y la platina.
4.4 Uso del sistema de medicin
4.4.1 Checar que el sistema ptico y de iluminacin del microscopio se encuentrenlimpios.
4.4.2 Previo a la observacin de las muestras regular la trayectoria de la luzutilizando la tcnica de iluminacin de Khler.
4.4.3 Enfocar la muestra de acuerdo a las indicaciones establecidas
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5.-PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS5.1 De acuerdo al estudio realizado al microscopio de contraste de faseproporcionado en el laboratorio Identificar las partes del instrumento en el esquema
siguiente y poner los nombres correspondientes a cada una.
5. 2 DIBUJAR LOS SIGUIENTES COMPONENTES DEL MICROSCOPIO DECONTRASTE DE FASE
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Condensador vista frontal Ranuras anulares del Condensador
Lente objetiva vista lateral Placa de fase
Ocular de fase Ocular normal
5.3 DE ACUERDO A LOS ESQUEMAS ANTERIORES REDACTAR LA DESCRIPCIONDE LAS PARTES DEL MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE
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SISTEMA PARTE DESCRIPCION FUNCIONOcularnormal
Ocular defase
O
P Objetivo de
T fase
I Placa de fase
C
O Anillo circu-lar
Zona comple-mentariaCondensador
I
L Lentes frontal
U condensador
M Lente auxiliar
I condensador
N
A Ranuras anu-
C larres
I
O Lmpara
N
El sistema mecnico esta integrado por las mismas partes que constituyen al microscopio de campoclaro
5.4 DIBUJAR LOS CAMPOS MICROSCOPICOS DETECTADOS AL LLEVAR ACABO LA REGULACIN DE LA TRAYECTORIA DE LA LUZ Y EL ENFOQUE DELA MUESTRA EN EL MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES
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OCULAR NORMAL AL COLOCAR EL OCULAR DE FASE
CON OCULAR DE FASE ENFOCADO ANILLOS CENTRADOS
IMAGEN EN CAMPO CLARO IMAGEN EN CONTRASTE DE FASE
5.5 REDACTAR LAS OBSERVACIONES AL REGULAR LA TRAYECTORIA DE LALUZ EN EL MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE
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5.6 DESCRIPCION DE LAS IMAGENES OBSERVADAS EN EL MICROSCOPIODE CONTRASTE DE FASE AL ENFOCAR LA MUESTRA
CAMPO DESCRIPCIONImagen en campoclaro
Imagen encontraste de fase
CONCLUSIONES
6.- CONFIABILIDAD ANALTICA6.1 Las estructuras a observar deben estar sin teir o escasamente teidas
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PASO EFECTUADOEN LA TECNICA
DESCRIPCION DEL CAMPO
Con el ocular normal
Colocar el ocular defase
Con el ocular de faseenfocado
Anillos centrados
Al colocarnuevamente el ocularnormal
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6.2 Los objetos a estudiar no deben tener paredes gruesas y deben serextremadamente delgados
6.3 Las superficies pticas, tanto del microscopio como de la preparacin debende estar perfectamente limpias.
6.4 La fuente luminosa deber tener una luz muy intensa.6.5 Checar que este colocado en el microscopio el condensador de contraste de
fase y las lentes objetivas de fase adecuadas.6.6 Confirmar que coincida la ranura anular con el tipo de lente objetiva a utilizar6.7 Evitar que se formen burbujas al colocar el cubre objeto o el aceite de
inmersin a la preparacin.6.8 Los objetos a examinar deben de estar en el seno de un lquido lmpido
(agua, aceite de inmersin, etc,) de ningn modo al aire o en un lquido turbio
7.- GARANTIA DE CALIDAD
7.1 Checar constantemente el sistema elctrico del instrumento7.2 Cada vez que el instrumento se use revisar el sistema ptico, mecnico y de
iluminacin
8.- PRACTICABILIDAD8.1. Se pueden utilizar acetatos o diapositivas para describir al microscopio8.2. La muestras pueden ser sustituidas por otras
9.- BIBLIOGRAFABrock ( 1997) BIOLOGA DE LOS MICROORGANISMOS ed. Prentice Hall, Madrid Espaa
Carl Zeiss http://www.zeiss.com.mx/mx/home.nsf/allBySubject/Launch+-+Zeiss-ngl+JavaNavigatorLich, Raphael.(1998) MTODOS DE LABORATORIO, Segunda edicin Ed. Interamericana S.A. .C.V. Mxico DF
Prescot (1999). Microbiologa cuarta edicin editoria MacGrawHill-Interamericana Espaa
EL MICROSCOPIO http://mrmbers.nbci,com/microscopio/main.html
MICROSCOPIOS http://microcirncia.com/Principal%20microscopios.htm
MICROSCOPIOS http://www.opticaroma.com/microscopios/index.html
MICROSCOPE WORLD http://www.microscopeworld.com/
MICROSCOPIA http://charfacnu.cie.umn.edu/glossary/
MUSEUM MICROSCOPY http://micro.magnet.fsu.edu/primer/museum/index.html
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http://www.zeiss.com.mx/mx/home.nsf/allBySubject/Launch+-+Zeiss-engl+JavaNavigatorhttp://www.opticaroma.com/microscopios/index.htmlhttp://www.microscopeworld.com/http://micro.magnet.fsu.edu/primer/museum/index.htmlhttp://www.zeiss.com.mx/mx/home.nsf/allBySubject/Launch+-+Zeiss-engl+JavaNavigatorhttp://www.opticaroma.com/microscopios/index.htmlhttp://www.microscopeworld.com/http://micro.magnet.fsu.edu/primer/museum/index.html -
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MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
1.- INTRODUCCINLa fluorescencia es la propiedad que tienen ciertas sustancias de emitir luz delongitudes de onda larga, cuando son expuestas a una radiacin de longitud de ondacorta. Esta capacidad de fluorescencia puede ser dbil o alta o que no la tengan; peroeste ltimo puede ser corregido con el coloreado con sustancias fluorescentes llamadafluorocromo que inducen fluorescencia que facilitan diferenciarlos. La microscopa defluorescencia utiliza dispositivos especiales que permiten aprovechar este fenmenopara visualizar estructuras que con otro tipo de microscopa no se puede realizar. En laactualidad el microscopio e fluorescencia se ha convertido en un instrumento esencialen el rea de inmunologa, autoinmunologa, bacteriologa, micologa, virologa,
parasitologa citologa, gentica, etc. Otras reas en donde se aplica la microscopia defluorescencia son; industria textil para la deteccin de fibras especificas, en lapidariapara la certificacin de gemas, materiales metlicos, petrleo y sus derivados.
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2.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LADETERMINACINLa mayora de los microscopios producen una imagen a partir de la luz que pasa atravs de una muestra, pero un objeto se puede verse tambin porque emite luz; esta esla base del microscopio de fluorescencia. Cuando algunas molculas absorben energaradiante quedan excitadas electrnicamente y posteriormente liberan energa en formade luz. Cualquier luz emitida por una molcula excitada (luz fluorescente) tendr unalongitud de onda superior (o de energa inferior) a la radiacin original absorbida. Laluz fluorescente es emitida muy rpidamente por una molcula excitada al liberarenerga atrapada y recuperar un estado ms estable. Si un objeto que fluoresce esiluminado a su longitud de onda absorbente y visualizado a travs de un filtro que slopermita pasar la luz de longitud de onda igual a la de la luz emitida, el componenteaparece brillante sobre un fondo oscuro. La intensidad y el color de la luz es unapropiedad caracterstica de la molcula fluorescente utilizada. Los colorantesfluorescentes empleados para la tincin celular son detectados con ayuda delmicroscopio de fluorescencia. Este microscopio es similar al microscopio convencional,a excepcin de que la luz incidente que procede de una potente fuente atraviesa unprimer filtro que selecciona la longitud de onda capaz de excitar al fluorocromo, antesde incidir sobre la muestra. La luz emitida por la muestra (reflejada y fluorescente)atraviesa un segundo filtro que selecciona la longitud de onda de emisin delfluorocromo.
3.- LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1 Reactivos
NUM. CLAVE NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDADXilolMezcla de alcohol-acetona -eter 80%/10%/10%) 100 ml
Equipo para la deteccin deanticuerpos antinucleares
1
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3.2 Equipo de Laboratorio
6. Microscopio de fluorescencia
3.3 Materiales de laboratorio
NUM CANTIDAD DESCRIPCIONPorta objetosCubre objetosPapel para lentes
4.- TCNICA O PROCEDIMIENTO
4.10 Muestreo y muestra4.1.1.Obtener sangre venosa de un paciente con ayuno de 8 horas. Sin
anticoagulante.4.1.2. Dejar coagular por lo menos durante 30 minutos, despus centrifugar a 2000
rpm durante 15 minutos4.1.3. Obtener con pipeta Pasteur aproximadamente 0.5 ml de suero
4.11 Preparacin del sistema de medicin4.11.1Instalar un microscopio de fluorescencia4.11.2Seleccionar el lugar adecuado para su colocacin, colocarlo en una mesa
alejada de las ventanas de preferencia en un rea oscura.4.11.3Alistar muestras biolgicas para su observacin al microscopio
4.12 Sistema de medicin
4.3.1 Descripcin del microscopio de fluorescencia11.Identifique las partes del sistema mecnica del microscopio de fluorescencia12.Identifique las partes del sistema ptico del microscopio.13.Identifique las partes del sistema de iluminacin del microscopio.14.Describa las principales caractersticas de cada uno de los componentes que
integran el sistema mecnico, ptico y de iluminacin del microscopio.
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15.Describa la funcin que tienen cada una de las partes que integran lossistemas antes mencionados.
4.3.2Manejo del microscopio de fluorescencia
1. Colocar el tablero de defensa de la luz.2. Poner el condensador en posicin DF.3. Introducir el filtro excitador (Presione el tornillo de la derecha).4. Checar que el obturador este hacia afuera.5. Prender la lmpara de halgeno.6. Bajar la platina para colocar la muestra
7. Subir la platina hasta el tope.8. Bajar la platina lentamente hasta encontrar la imagen del objeto.9. En caso de que la imagen sea demasiado brillante, regular el brillo con la
ayuda de los filtros ND.10.Si por algn motivo no esta revisando la preparacin introduzca el obturador
para evitar perdida de fluorescencia de la muestra.
4.5 Uso del sistema de medicin4.5.1 Checar que el sistema ptico y de iluminacin del microscopio se encuentren
limpios.4.5.2 Previo a la observacin de las muestras regular la trayectoria de la luz
utilizando la tcnica de iluminacin de Khler.4.4.3. Colocar al microscopio la placa protectora4.5.3 Utilizando la tcnica de anticuerpos antinucleares proceder a teir dos
laminillas4.4.4 Enfocar la muestra de acuerdo a las indicaciones establecidas5.-PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS5.1 De acuerdo al estudio realizado al microscopio de fluorescencia proporcionadoen el laboratorio Identificar las partes del instrumento en el esquema siguiente yponer los nombres correspondientes a cada una.
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DIBUJAR LOS SIGUIENTES COMPONENTES DEL MICROSCOPIO DEFLUORESCENCIA
Lmpara Filtros ND
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O ObjetivoPTI Ocular C
O Filtro debarrera
Lmpara
I Filtros NDLU Diafragma deM campoI Tornillo deN centradoA Obturador C
I Filtro exitador ON
5.4 DIBUJAR LOS CAMPOS MICROSCOPICOS OBSERVADOS AL ENFOCARCON EL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
CAMPO CLARO EN FLUORESCENCIA
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5.5 DESCRIPCION DE LOS CAMPOS OBSERVADOS EN EL MICROSCOPIO DEFLUORESCENCIA, De acuerdo a las imgenes captadas anteriormente redactarsus observaciones en el siguiente cuadroCAMPO DESCRIPCION
CAMPOCLARO
ENFLUORESCENCIA
CONCLUSIONES
6.- CONFIABILIDAD ANALTICA
6.1 Evite trabajar con el microscopio frente a una ventana ya que impedirapreciar la fluorescencia en su totalidad
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6.2 Ajuste la trayectoria de la luz de acuerdo a las indicaciones establecidas enel manual de operaciones del instrumento.
6.3 Debido a que la vida media de la lmpara es corta y lo que limita su vida esel numero de encendidas, se recomienda usarla por periodos de 2 horas
mnimo cada vez tratando de programar horarios especficos6.4 Una vez apagada la iluminacin de fluorescencia, es importante esperar 30
minutos antes de volver a prenderla.6.5 Utilizar lentes objetivas de abertura numrica elevada, ya que tienen mayor
luminosidad y mejor resolucin.6.6 En epifluorescencia se recomienda usar objetivos de inmersin debido a que
la imagen aparece ms luminosa.6.7 Los objetivos acromticos y planacromticos solo se deben utilizarse para
fluorescentes excitables de 450nm en adelante.6.8 Checar que el condensador este colocado en la posicin DF
7.- GARANTIA DE CALIDAD7.1 Checar constantemente el sistema elctrico del instrumento7.2 Cada vez que el instrumento se use revisar el sistema ptico, mecnico y de
iluminacin
8.- PRACTICABILIDAD8.1. Se pueden utilizar acetatos o diapositivas para describir al microscopio8.2. La muestras pueden ser sustituidas por otras
9.- BIBLIOGRAFAEL microscopio http://mrmbers.nbci,com/microscopio/main.html
MicroscopioS http://microcirncia.com/Principal%20microscopios.htm
Microscopios http://www.opticaroma.com/microscopios/index.html
Microscope world http://www.microscopeworld.com/
MicroscopiA http://charfacnu.cie.umn.edu/glossary/
Museum Microscopy http://micro.magnet.fsu.edu/primer/museum/index.html
Nikn MIcroscopes http://www.nikonusa.com/usa_category/category.jsp?cat=5
Presccott, Harlesy, Klein. (1999) MICROBIOLOGIAED. MC GRAW-HILL.interamericana, cuarta edicin,Espaa S.A.
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BALANZA GRANATARIAS
1.- INTRODUCCINHabitualmente en los laboratorios es necesario obtener medidas de masa.Para ello se utiliza la balanza, que no es solo un instrumento bsico sinotambin el ms preciso. Pueden ser de diferentes tipos y modelos pero todasestn constituidas bsicamente por una palanca de primer gnero que seencarga de comparar la masa de dos cuerpos valindose de sus pesos. En ellaboratorio clnico las balanzas pueden ser de dos tipos; granataras yanalticas. En general las balanzas granataras poseen una sensitividad de0.1 g, carga mxima de 2610 g y son menos sensibles que las analticas.Pueden ser mecnicas (uno o dos platillos) electrnicas (un platillo).
Algunos perfeccionamientos recientes han permitido hacer ms fcil y msrpido el empleo de las balanzas, pero no se ha modificado los principios desu funcionamiento.
2.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACINEn las balanzas la operacin de pesar, consiste en comparar una masa estndar(pesas) con la masa del objeto. El proceso se basa en la ecuacin de Newton queestablece: P = m. g. Este ltimo valor, vara en los diferentes lugares de lasuperficie de la tierra, por lo tanto el producto m. g tambin variar. En la igualdad
anterior m se mantiene constante. Al comparar el peso desconocido con losestndares conocidos de las pesas, se tiene que:P estndar = m estndar . gP objeto = m Objeto . gEn estado de equilibrio g, acta con el mismo valor tanto sobre las pesas comosobre el objeto, de donde resulta:m estndar = m objetoP estndar = P objetoPor consiguiente cuando la masa de los dos cuerpos son iguales sus pesostambin lo son. Generalmente no se usa la expresin masa al emplear la balanza,sino la expresin peso, y a su determinacin se le denomina pesada. Para llevar acabo la pesada se utilizan recipientes adecuados (vidrios de reloj, cpsulas deporcelana, etc,) aunque tambin es posible emplear papel de filtro. En cualquiercaso, lo primero que se debe hacer es tarar el instrumento, posteriormente seadiciona la cantidad de slido deseada, se apaga y por ltimo se limpia. Esimportante seguir una serie de reglas para obtener pesos exactos.
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4.3.- Sistema de medicin4.3.1Descripcin de la balanza granatara
16.Identifique las partes principales de la balanza granatara17.Describa las principales caractersticas de cada uno de los componentes que
integran a la balanza granatara .18.Describa la funcin que tienen cada una de las partes que describi
anteriormente.
4.3.2- Seguir las indicaciones para pesar sus muestras en la balanza granatara
1. Nivelar la balanza usando los tornillos niveladores, la balanza estar niveladacuando coincida la aguja o fiel con el centro de la escala o cuando coincida lalnea de la escala mvil con la lnea de la escala fija.
2. Colocar en el centro del platillo el objeto que se va a pesar.3. Agregar pesas hasta que la balanza quede nuevamente nivelada (calcular
primero el peso aproximado del objeto, colocar la pesa de mayor valor, si elpeso del objetos es menor regresar la pesa a su lugar y colocar una demenor valor, repetir el procedimiento hasta encontrar el peso del objeto)
4. Anotar el peso del objeto el cual se obtiene sumando las pesas empleadas.5. No colocar sobre los platillos objetos o sustancias que los deteriore, para
esto se emplearn recipientes adecuados por ejemplo; vidrio de reloj, pesafiltros, cpsulas de porcelana, crisoles, papel, etc.
6. En caso de usar recipientes pesar primero este, luego agregar la sustancia ypesarlo nuevamente, el peso de la sustancia se obtiene por diferencia
4.4.- Uso del sistema de medicin
4.4.1 Antes de pesar checar que la balanza este nivelada4.4.2 Al pesar el objeto confirmar que nuevamente se establece el equilibrio4.4.3 Mantener siempre los platillo libre de muestra o polvo.4.4.4 Al usar la balanza hacer la pesada con cuidado y lo ms rpido posible
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5.-PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS5.1 De acuerdo al estudio realizado balanza granatara proporcionada en ellaboratorio Identificar las partes del instrumento en el esquema siguiente y ponerlos nombres correspondientes a cada una.
BALANZA GRANATARA
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5.2 DIBUJAR LOS SIGUIENTES COMPONENTES DE LA BALANZA GRANATARA
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Brazo de escalas
Pesa de escala 100 g Pesa de escala de 10 g
Botn calibracinTornillo de pesas adicionales
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5.3 DE ACUERDO A LOS ESQUEMAS ANTES REALIZADOS REDACTAR SUSOBSERVACIONES EN EL SIGUIENTE CUADROPARTE DESCRIPCION FUNCION
BASE
PALANCA
PUNTODE APOYOFIEL
BRAZO DEESCALAS
PESAS
TORNILLODECALIBRADO
PLATILLO
5.4 REDACTAR SUS OBSERVACIONES AL LLEVAR A CABO LA PESADA DELOBJETO
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5.5 ANOTAR LAS OPERACIONES REALIZADAS PARA DETECTAR EL PESO DELOBJETO
5.6 ANOTAR EL PESO DE LA SUSTANCIA PESADA
CONCLUSIONES
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6.- CONFIABILIDAD ANALTICA
6.1 Siempre que sea posible, la habitacin en donde se coloque la balanza debe tener slo unacceso, para que no pueda usarse como habitacin de paso. Como puesto de trabajo son
particularmente idneos los rincones de una habitacin.6.2 No colocar la balanza muy cerca de ventanas, pues existe el peligro deque los rayos solares directos la calienten irregularmente. Lo mismoocurre con los radiadores prximos que, adems de la radiacin trmicadirecta, suelen producir corrientes de aire bastante fuertes.
6.3 La mesa donde se coloque la balanza debe ser rgida de manera que noceda o se incline durante las operaciones de medida transmita unmnimo de vibraciones posible. Ser antimagntica (no contener metales oacero) y protegida de cargas electrostticas
6.4 La balanza no debe montarse cerca de acondicionadores de aire ni de
ventiladores, los cuales producen turbulencias del aire demasiado fuertes.6.5 Nunca pesar muestras retiradas directamente de estufas, muflas orefrigeradores. Dejar siempre que la muestra alcance la mismatemperatura del laboratorio
6.6 Lo ms conveniente es una iluminacin artificial, una habitacin sinventanas. Los aparatos de iluminacin deben estar instalados a suficientedistancia de la mesa de pesar. Para evitar radiacin trmica perturbadora,no deben instalarse lmparas de gran potencia. Son recomendables lostubos fluorescentes
7.- GARANTIA DE CALIDADCalibrar la balanza regularmente, ms todava cuando est siendo operada porvez primera, si fue cambiada de sitio, despus de cualquier nivelacin y despusde grandes variaciones de temperatura o de presin atmosfrica.
8.- PRACTICABILIDAD8.1 En la descripcin de balanza el equipo puede ser sustituido por diapositivas8.2 La muestra a pesar puede ser sustituida.8.3 Las indicaciones sealadas en este apartado pueden ser aplicadas para la
mayora de las balanzas granataras.9.- BIBLIOGRAFA
Balanzas http://www.tecservice.com.ar/11.htm
Harris ANLISIS QUMICO CUANTITATIVO, Editotial Iberoamricana Mxico DF Mosqueira, FSICA
GENERAL, ed. Patria S.A. Universidad Nacional de Mxico , Mxico DF
Orozco, ANLISIS QUMICO CUANTITATIVO, editorial Porrua S.A. Mxico DF
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BALANZAS ANALTICAS
1.- INTRODUCCINLa balanza analtica ms comn es la de un solo platillo cuya capacidad es de 100a 200g y su sensitividad de 0.01 a 0.1 mg. Existen varios tipos de balanzas entrelas ms frecuentes se tienen a las: mecnicas y electrnicas y las menosfrecuentes las de tipo manual. Todas ellas estn dentro de una caja de vidrio que seabren en la parte lateral y permiten la cmoda introduccin de la muestra. En elinterior se encuentra la balanza propiamente dicha. Las balanzas analticasmecnicas estn formadas por una barra horizontal. Las pesas forman parteintegrante del instrumento, encontrndose suspendidas en la misma cuchilla que el
platillo. A diferencia de la balanza analtica manual los brazos de la cruz son dediferente longitud, el corto soporta al platillo y a las pesas y el largo a uncontrapeso, el movimiento de las pesas se realiza haciendo girar botones que seencuentran fuera de la caja del instrumento. Por su parte, las electrnicas poseenun solo platillo pero no contienen pesas integradas y funcionan en base a camposelectromagnticos. Esta ltima balanza tienen errores potenciales que no seobservan en las mecnicas. Por ejemplo, se pueden producir errores al pesarmateriales magnticos, quizs la limitante ms importante radica en el hecho de
que la calibracin se realiza con masas patrn en la fabrica, en donde la fuerza degravedad es diferente de la que existe en el laboratorio donde se utilizar elinstrumento, por lo que es importante calibrar con una masa patrn en ellaboratorio en donde se emplee la balanza.
2.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACIN
Las balanzas analticas mecnicas aunque tienen luz elctrica para iluminar laescala de lectura. La pesada se realiza quitando pesas incorporas al instrumento,
en cantidad equivalente al peso del cuerpo por pesar (mtodos de pesadas porsustitucin). La cruz se vuelve a una posicin cercana a la original, y la desviacinresidual se lee en la escala iluminada. La balanza electrnica, no tiene pesasincorporadas. En ella se utiliza una accin electromagntica para volver a la cruz asu posicin original. La corriente elctrica necesaria para generar dicha accin esproporcional a la masa del objeto que se pesa.
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3.- LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1 Reactivos
NUM. CLAVE NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDADCloruro de sodio 200 g
3.2 Equipo de Laboratorio
8. Balanza analtica elctrica9. Balanza analtica electrnica
3.3 Materiales de laboratorio
NUM CANTIDAD DESCRIPCIONVidrio de reloj
EsptulaBrocha
4.- TCNICA O PROCEDIMIENTO
4.15 Muestreo y muestra4.1.1.Se utilizar muestras de cloruro de sodio para efectuar distintas pesadas
4.16 Preparacin del sistema de medicin4.16.1Seguir las instrucciones de operacin del instrumento4.16.2Disponer de diferentes muestras para pesar
4.3.Sistema de medicin4.3.1.Descripcin de la balanza analtica
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19.Identifique las partes principales de la balanza analtica elctrica y electrnica20.Describa las principales caractersticas de cada uno de los componentes que
integran a la balanza granatara .
21.Describa la funcin que tienen cada una de las partes que describianteriormente.
4.3.2. Manejo de la balanza analtica elctrica1. Al efectuar las pesadas observar que el nivel de burbuja de la balanza se
encuentre centrado, en caso de no estarlo, mover los tornillos que seencuentran en la parte inferior.
2. Disparar la balanza con la palanca de pesas y platillo (en pesada final), verque las escalas que aparecen en la pantalla luminosa marquen cero. De ser
as proceda a pesar, si no esta nivelada mover el botn indicado para estefin, el ajuste del cero debe de hacerse siempre que sea necesario.
3. Al efectuar la pesada, primero marcar el peso aproximado del objeto con laayuda de los botones giratorios destinados para las pesas, luego proceder amover la palanca de pesas y platillos en posicin de pesada inicial , ver si laescala aparece, si es as, apagar y volver a accionar la palanca pero ahoraen posicin de pesada final. Si la escala no aparece quitar poner pesaschecando cada cambio con la palanca en posicin de pesada inicial y por
ltimo en pesada final4. Apagar la balanza y sacar el objeto pesado, colocar las pesas en su posicinoriginal.
Nota No disparar la balanza en pesada final si antes no se conoce el pesoaproximado del objeto o sustancia a pesar.
No se aadirn o quitarn pesas u objetos a la balanza mientras seencuentre disparada.
4.3.3. Manejo de la balanza analtica electrnica1. Ver que la balanza se encuentre nivelada con respecto a la mesa de trabajo
(nivel de burbuja centrado), en caso de no estarlo, mover los tornillos que seencuentran en la parte inferior.
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BALANZA ANALTICA ELECTRICA
BALANZA ANALTICA ELECTRNICA
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5.2 DIBUJAR LOS SIGUIENTES COMPONENTES DE LA BALANZA ANALTICAELECTRICA
ESCALA DE LECTURA P LATILLO
PALANCA DE PESAS Y PLATILLO NIVEL DE BURBUJA
5.3 DE ACUERDO A LOS ESQUEMAS DE LA BALANZA ANALTICA ELECTRICAANTES REALIZADOS REDACTAR SUS OBSERVACIONES EN EL SIGUIENTECUADRO
PARTE DESCRIPCION FUNCIONNIVEL DEBURBUJA
TORNILLOSNIVELADORES
TORNILLO DECALIBRACION
PALANCADE PESAS YPLATILLO
PLATILLO
ESCALALUMINOSA
BOTONES
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ESCALALUMINOSA
5.6. REDACTAR SUS OBSERVACIONES AL LLEVAR A CABO LA PESADA DELOBJETO (balanza analtica elctrica)
5.7 ANOTAR LAS OPERACIONES REALIZADAS PARA DETECTAR EL PESO DEL
OBJETO (balanza analtica elctrica)
5.8 ANOTAR EL PESO DE LA SUSTANCIA PESADA (balanza analtica elctrica)
5.9 REDACTAR SUS OBSERVACIONES AL LLEVAR A CABO LA PESADA DE LASUSTANCIA (balanza analtica electrnica)
5.10 ANOTAR EL PESO DE LA SUSTANCIA PESADA (balanza analticaelectrnica)
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5.11. ANOTAR LAS DIFERENCIAS DETECTADAS ENTRE LA BALANZA
ANALTICA ELECTRICA Y ELECTRNICA
CARACTERSTICAS DE LA ELECTRICA CARACTERSTICAS DE LA ELECTRNIC
CONCLUSION
6.- CONFIABILDAD ANALTICA
6.1Conecte la balanza por lo menos 30 minutos antes de la primera pesada. Mejoran, siempre que sea posible, deje la balanza conectada de modo permanente.As se eliminan las posibles desviaciones del cero y de sensibilidad, producidaspor la fase de calentamiento de la balanza
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6.2Antes de iniciar la pesada, vea si la balanza seala exactamente cero6.3Abra las ventanillas de la balanza slo lo necesario para colocar la muestra
cmodamente sobre el platillo. Cada vez que se abre la cmara de pesadapueden originarse cambios de temperatura y turbulencias de aire.
6.4Coloque la carga en el centro del platillo.6.5No meta las manos en la cmara de pesada. Utilice pinzas largas o algo
parecido. Ud. puede cambiar as la temperatura y la humedad de la cmara6.6Cierre la cmara de pesada inmediatamente despus de colocar el recipiente de
tara o la carga en el platillo. Cuanto ms tiempo se mantenga abierta la cmarade pesada, mayor peligro hay de que vare su temperatura y humedad y seoriginen turbulencias de aire.
6.7Haga la lectura en cuanto el resultado de la pesada sea estable. Su carga puedeceder o absorber humedad y as podra cambiar el peso
6.8Mantenga limpios la cmara de pesada y el platillo. Utilice para pesar
exclusivamente recipientes de tara limpios. El peso de cuerpos extraos y lasuciedad pueden falsear su resultado de pesada.6.9Si la lectura del peso es inestable, el resultado aumenta o disminuye
lentamente, o simplemente aparecen valores errneos, muchas veces se debe aefectos fsicos desfavorables. Los moti