“AÑO DE LA INTEGRACIÓN NACIONAL Y EL RECONOCIMIENTO DE

NUESTRA DIVERSIDAD”

Universidad Nacional “Hermilio Valdizán”

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

E.A.P. AGRONOMÍA

DOCENTE : Ing. MARIA GUTIEREZ SOLORZANO

CURSO : MICROBIOLOGIA Y NEMATOLGIA AGRICOLA

INTEGRANTES:

DURAN VILLANUEVA JORGE LUIS HUARAUYA GERONIMO ADRIANO EDGAR ESPINOZA FIRMA BEATRIZ RODRIGUEZ ARTETA JAUN

AÑO/ SEMESTRE : tercero - VI

HUÁNUCO – PERÚ

2013-I

INFORME DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA

MEDIOS DE CULTIVO

1. DEFINICIONES

(Eduardo y Teddy 1980: 33) sostienen las siguientes

definiciones:

MEDIOS DE CULTIVO

Son soluciones estériles que tienen macro y

micronutrientes, sustancias que permiten el crecimiento

de organismos.

Un medio de cultivo es un sustrato o una solución

de nutrientes que permite el desarrollo de

microorganismos. En las condiciones de laboratorio para

realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de

cultivo elegido las muestras en las que los

microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar

colonias

LOS MICROORGANISMOS

Son los seres más abundantes de la tierra, pueden

vivir en condiciones extremas de pH, temperatura y

tensión de oxígeno, colonizando una amplia diversidad

de nichos ecológicos. Entre los requerimientos más

importantes para su desarrollo están el carbono, el

oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno.

Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra

de factores de crecimiento específicos en forma de

suero, sangre y extracto de levadura entre otros.

CULTIVO

Es el producto del crecimiento de organismos o

grupos de organismos, establecidos con fines

experimentales o industriales.

CULTIVO PURO

Es la presencia de una sola especie de

microrganismo libre de todo contaminante, a esto que

también se le denomina AXENICO.

OBJETIVO

Aprender la clasificación y uso de los medios de

cultivo.

Preparar medios de cultivo y manejar adecuadamente

la autoclave.

PROCEDIMIENTO

1) Sacar las proporciones.

2) Pesar sustancias.

3) Medir el agua destilada y trasvasarlo a matraz de

Erlenmeyer.

4) Homogenizar las sustancias más el agua

5) Hervir, este proceso se realiza de acuerdo a que medio

se va a preparar.

6) Añadir y homogenizar las sustancias, hasta disolver las

sustancias.

7) Trasvasar a la botella.

8) Acondicionar el medio.

9) Rotular

10) Esterilizar (autoclave)

11) usar el medio de cultivo.

AGENTES SOLIDIFICANTES

1. AGAR-AGAR

(Eduardo y Teddy 1980: 34) refiere que el agar

agar es una gelatina vegetal, un polisacárido que se

extrae de las algas por medio del ácido sulfúrico

diluido a una temperatura de 80 ºC. La especie de

producción comercial se extrae de las siguientes

especies: Gelidium corneum; gracillaria; gigartina y

pterocladia.

PROPIEDADES

(Eduardo y Teddy 1980: 35) indica las propiedades

del agar agar:

Se derrite a 80 -100 ºC. Tolera altas temperaturas

de esterilización sin descomponerse.

Se solidifica a 35 – 50 ºC.

Adquiere firmeza en medios de cultivos a

concentraciones de 1,5 a 2,0 %.

Se hidroliza a pH de 2 y pH 9. Su valor nutritivo

es casi nulo y contiene algunos factores de

crecimiento.

2. GELATINA

(Eduardo y Teddy 1980: 35) es una sustancia

derivada de huesos, ligamentos y piel de animales, por

ebullición de ácido clorhídrico diluido.

Propiedades

Se derrite a 37 ºC

Se solidifica a 20 a 25 ºC, usando 10 a 12 % en

solución y también se derrite a esa temperatura.

Se descompone a 121 ºC y es digerida por los

microorganismos.

A pH extrema se hidroliza.

A pH ácidos no se solidifica.

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVOS

POR SU CONSISTENCIA:

1. Líquidos

(Eduardo y Teddy 1980: 35) indican que los medios

líquidos se usan en principalmente en el incremento de

bacterias, en la determinación de sus propiedades

fisiológicas, para el incremento masivo de bacterias y

hongos con fines de experimentales (generalmente bajo

agitación) y para estudios de crecimiento de

microorganismos. Industrialmente tienen uso en la

preparación de productos accesorios al crecimiento los

microorganismos, (ácidos orgánicos, antibióticos,

etc.).

2. Sólidos

(Eduardo y Teddy 1980: 35) también sostiene que el

uso de principal de medios solidos es para el aislamiento

de hongos y bacterias, y para su mantenimiento. Se prepara

en frascos, placas Petri y tubos de prueba.

SEGÚN SUS PROPIEDADES NUTRITIVAS

(Eduardo y Teddy 1980: 35) indican las siguientes

propiedades:

A. CARENTES DE NUTRIENTES

Agua

El agua es para el mantenimiento de bacterias en

estado latente e inmutable, o clamidosporas de fusarium

(el agua destilada en destiladores metálicos es a veces

toxico y letal para las bacterias; es preferible usar

agua desmineralizada o agua potable no clorinada).

Sustancias que son carentes de nutrientes:

Laboratorio

Caño

Destilatorio

Dicionizada

Agar agua (sustancia solida)

Nitrógeno líquido: componente para mantener y

preservar sustancias como semen de animales.

B. NUTRITIVAS

1. NATURALES

Constituyen únicamente de material vegetal natuarl

2. SEMISINTETICOS COMPLEJOS

El componente posee 50 % natural y 50 % de

sustancias químicas.

3. SINTÉTICOS DEFINIDOS

Es químicamente definido.

PROCEDIMIENTO EN LA PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVOS

Se realiza el cálculo de la proporciones para 500

ml de preparado del medio del cultivo, utilizando 1

litro de agua destilada.

1. Sacar las proporciones

A. PDA (PAPA AGAR DEXTROSA)

PAPA: 200 gramos.

DEXTROSA: 10 gramos.

AGAR - AGAR: 15-18 gramos.

EXTRACTO DE CARNE: 5 gramos.

AGUA DESTILADA: 1000 ml/ 1lt.

500 ml de preparado

Proporciones para preparado de 1 litro de medio

del cultivo

PAPA: 𝟐𝟎𝟎𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶

𝑿 → 𝟓𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶

𝑿 = 𝟏𝟎𝟎 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.

DEXTROSA:

𝟏𝟎𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶

𝑿 → 𝟓𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶

𝑿 = 𝟓 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.

AGAR - AGAR:

𝟏𝟓𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶

𝑿 → 𝟓𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶

𝑿 = 𝟕. 𝟓 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.

EXTARCTO DE CARNE:

𝟓𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶

𝑿 → 𝟓𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶

𝑿 = 𝟐. 𝟓 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.

PREPARADO DEL MEDIO DE CULTIVO

I. PDA (AGAR PAPA DEXTROSA).

PROCEDIMIENTO

1. proporciones para preparado de 115 ml.

PAPA: 𝟐𝟎𝟎𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶

𝑿 → 𝟏𝟏𝟓𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶

𝑿 = 𝟐𝟑 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.

DEXTROSA:

𝟏𝟎𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶

𝑿 → 𝟏𝟏𝟓𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶

𝑿 = 𝟏. 𝟏𝟓 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.

AGAR AGAR:

𝟏𝟓𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶

𝑿 → 𝟏𝟏𝟓𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶

𝑿 = 𝟏. 𝟕𝟐𝟓 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.

EXTARCTO DE CARNE:

𝟓𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶

𝑿 → 𝟏𝟏𝟓𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯𝟐𝑶

𝑿 = 𝟎. 𝟓𝟕𝟓 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.

2. LAVADO, PELADO Y PICADO DE PAPA

FIGURA 1

FIGURA 2

3. PESADO DE SUSTANCIAS

FIGURA 3

4. MEDIR AGUA DESTILADA

FIGURA 4

5. HOMOGENIZAR EL AGUA MÁS LA PAPA

FIGURA 5

6. HERVIR: durante 30 minutos

FIGURA 6

7. COLAR: con gaza o tamiz ( si hubiera)

FIGURA 7

8. HOMOGENIZAR LA SOLUCIÓN DE PAPA MÁS OTROS COMPONENTES

QUÍMICOS, HASTA DISOLVER LAS PARTÍCULAS.

FIGURA 8

9. TRASVASAR: se transfiere del matraz a la botella antes

que se enfrié el medio.

FIGURA 9

10. ACONDICIONAR: (con una torunda de algodón y sobre

ello sellarlo con parafilm)

11. ROTULAR

12. USAR

II. OMA (OAL MEAL AGAR)

(Sifuentes 1990: 9) es medio de cultivo adecuado

para Pythium sp, Phytophthora sp, Fusarium sp., Phoma

sp, y otros patógenos.

Ingredientes

Quaker: 20 – 60 g.

Dextrosa: 10 g.

Agar: 15 – 18 g.

Agua destilada: 1000 ml.

Para preparado de 100 ml.

1. CALCULO DE PROPORCIONES

Quaker: 20𝑔𝑟 → 1000𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻2𝑂

𝑋 → 100 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻2𝑂

𝑋 = 200 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠.

Dextrosa: 10𝑔𝑟 → 1000𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻2𝑂

𝑋 100𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻2𝑂

𝑋 1 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜.

Agar - Agar: 15𝑔𝑟 → 1000𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻2𝑂

𝑋 100 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻2𝑂

𝑋 15 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠.

2. PESO DE SUSTANCIAS

FIGURA 1

3. MEDIR AGUA DESTILADA

4. Medir el agua destilada

5. HOMOGENIZAR

6. HERVIR: este proceso tiene una duración de 30 a

45 minutos, removiendo constantemente, para

evitar la ebullición.

7. HOMOGENIZAR HASTA DISOLVER LAS OTRAS

PARTICULAS.

8. HOMOGENIZAR LA SOLUCIÓN DE PAPA MÁS OTROS

COMPONENTES QUÍMICOS, HASTA DISOLVER LAS

PARTÍCULAS.

9. TRASVASAR

13. ACONDICIONAR (con una torunda de algodón y sobre

ello sellarlo con parafilm).

14. ROTULAR

15. USAR

III. AGAR HARINA DE MAÍZ (AHM)

(Eduardo y Teddy 1980: 38) menciona que es útil

para el aislamiento y esporulación de algunas especies

de Phytophthora.

PROCEDIMIENTO

1) CALCULO DE PROPORCIONES

Harina de maíz:

1000 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎 − − − − − − − − − −20𝑔𝑟. 𝑑𝑒 ℎ𝑎𝑟𝑖𝑛𝑎

600 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎 − − − − − − − − − − − − − 𝑋

𝑿 = 𝟏𝟐𝒈𝒓. 𝒅𝒆 𝒉𝒂𝒓𝒊𝒏𝒂 𝒅𝒆 𝒎𝒂í𝒛

Para dextrosa:

1000𝑚𝑙. 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎 − − − − − − − 10𝑔𝑟. 𝑑𝑒 𝑑𝑒𝑥𝑡𝑟𝑜𝑠𝑎

600𝑚𝑙. 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎 − − − − − − − − − − − − − − − 𝑋

𝑿 = 𝟔 𝒈𝒓 𝒅𝒆 𝒅𝒆𝒙𝒕𝒓𝒐𝒔𝒂

Para agar:

1000𝑚𝑙. 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎 − − − − − − − − − − − 15𝑔𝑟. 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑎𝑟

600𝑚𝑙. 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎 − − − − − − − − − − − − − − − − − 𝑋

𝑿 = 𝟗 𝒈𝒓 𝒅𝒆 𝒂𝒈𝒂𝒓

2) PESAR 2.6GR DE MAÍZ, 1.3GR DE DEXTROSA Y 1.95GR DE AGAR.

FIGURA 1

3) LUEGO EN UN ERLENMEYER ADICIONAR 130ML. DE AGUA

DESTILADA CON LA AYUDA DE LA PROBETA.

4) HOMOGENIZAR AGUA MÁS HARINA DE MAÍZ

5) HERVIR

6) ADICIONAR LA DEXTROSA Y AGAR.

7) HOMOGENIZAR HASTA QUE QUEDE UNIFORME.

8) TRASVASAR

9. ACONDICIONAR CON UNA TORUNDA DE ALGODÓN Y PARAFIL

10. ROTULAR

11. USAR

IV. SABOURAUD

(Cañedo 2004: 21) sostiene que es el medio de

cultivo muy utilizado para aislar hongos de animales.

Sirve para el aislamiento y mantenimiento de hongos en

tubo inclinado. Debido a su composición, los hongos

crecen exageradamente y esporulan bien.

Además, al medio de cultivo, pueden agregarse

otros agentes selectivos de crecimiento.

FORMULACION

CUADRO N° 01: Fórmula gramos por litro

PEPTONA 5,0

TRIPTEINA 5,0

GLUCOSA 40,O

CLORANFENICOL 0,05

AGAR - AGAR 15,0

pH Final : 5,6 ± 0,2

Fuente: Laboratorios Británicos S.A. 2001

USO

Medio utilizado para el aislamiento, identificación y

conservación de hongos patógenos y saprófitos.

También es útil para el cultivo de levaduras.

CARACTERISITCAS DEL CULTIVO

Medio de cultivo deshidratado: color beige claro,

homogéneo, libre deslizamiento.

Medio de cultivo preparado: color ámbar claro,

ligeramente opalescente sin precipitado.

RESULTADOS

En el siguiente cuadro se muestran las

características que tiene el medio de cultivo para el

crecimiento adecuado de los microorganismos.

Cuadro N° 02: Crecimiento de los Microrganismos.

Microorganismos Crecimiento

Saccharomyces cerevisiae Bueno

Aspergillus niger Bueno

Candida albicans Bueno

Fuente: Laboratorios Británicos s.a. 2001.

NOTA: mantener en lugar fresco, pues la exposición

al calor aumenta la hidrólisis de los componentes.

PROCEDIMIENTO PARA EL PREPARADO ADECUADO DEL

MEDIO.

1. Calculo de proporciones

Para un

litro de agua

47 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜.

𝑝𝑟𝑒𝑝𝑎𝑟𝑎 150 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛

47 𝑔 → 1000 𝑚𝑙 𝐻20

𝑋 → 150 𝑚𝑙 𝐻20

𝑋 = 7,05 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑠𝑎𝑏𝑜𝑢𝑟𝑎𝑢𝑑

2. Pesar sustancias

3. En un Erlenmeyer adicionar 150 ml de agua destilada.

4. Homogenizar el sabouraud más agua destilada

5. Calentar hasta desaparecer las partículas

6. Trasvasar el contenido a una botella.

7. Acondicionar

8. Rotular

CONCLUSIONES:

Al concluir la práctica se concluyó en lo

siguiente:

Se logró conocer los diferentes medios de cultivos

para sembrar microorganismos.

Aprendimos los pasos para elaborar un medio de

cultivo, sus cálculos respectivos de las cantidades

necesarias para su preparación.

Se determinó la importancia que tiene los medios

de cultivo en una investigación en el campo agrícola

como en la medicina, industria alimentaria ya que

gracias a ello se puede hacer el aislamiento de

microorganismos tanto patógenos como benéficos y así

identificarlos para su posterior uso.

Como estudiantes de agronomía gracias a la

práctica en el laboratorio de microbiología

desarrollamos nuestros conocimientos en lo que respecta

a medios de cultivo y así poder aplicar en nuestra vida

profesional.

AISLAMIENTO DIRECTO

Objetivo general

Purificar hongos y bacterias.

Objetivos específicos

Aprender las técnicas generales para separar a los

Hongos de los demás microorganismos.

Obtener y comprobar la pureza de los cultivos aislados.

Equipos

Cámara microboy

Cámara de incubación

Horno microondas

Materiales

Muestra: Hoja

Medio de cultivo PDA

Mechero alcohol

Placa Petri

Vaso de precipitados

Matraz de Erlenmeyer

Alcohol de 96°

Bisturí

Pinza

Algodón

Papel toalla

Papel aluminio

Parafilm

Lapicero de tinta indeleble

EQUIPOS Y MATERIALES UTILIZADOS.

EQUIPOS:

MATERIALES:

CAMARA

MICROBOY

INCUBADOR

A

HORNO

MICROOND

AS

ALCOHOL

96º

PLUMON

INDELEBLE

NEGRO

MECHERO

PDA PLACAS

PETRI

VASO

PRECIPITA

DO

PDA

NOTA: Cuando una enfermedad causada por hongos no

puede ser identificada fácilmente a través de la

consulta bibliográfica, o la producción de signo en

cámara húmeda es necesario proceder al AISLAMIENTO.

BISTURI Y PINZA HOJA DE ROSA PAPEL

TOALLA

PROCEDIMIENTO

1. licuar el medio de cultivo (PDA) en el horno microondas

hasta que se disuelva, posteriormente se hace el proceso

de plaqueado.

2. Luego se procede a desinfectar la cámara microboy (parte

interna y externa), utilizando alcohol, para evitar la

contaminación de los medios de cultivo durante el

aislamiento.

1 2

3. Lavar el material vegetal (hoja) con agua de caño.

4. En un vaso precipitado con contenido de alcohol

introducimos el material enfermo por 2 segundos.

5. Luego esterilizar el material vegetal enfermo con una

solución de Hipoclorito de sodio por un espacio de dos

minutos.

4

6. Plaquear, se procede la siguiente manera: El matraz de

Erlenmeyer se destapa cerca del mechero, se flamea el

extremo del matraz por la llama y se vierte el medio de

cultivo a un medio estéril, se vuelve a flamear el

extremo del matraz y se lo tapa nuevamente.

7. Realizar pequeños cortes de la zona de avance de la

infección, donde el patógeno está en activo desarrollo.

8. 4 pedacitos de igual tamaño más o menos de 1 cm deben

ser colocados en una placa Petri contenida con PDA en

forma de un cuadrado.

9. Acondicionarlo y utilizando un lapicero de tinta

indeleble se procede a la rotulación.

10. Para concluir la práctica, incubar la placa de

Petri a 25ºC, aproximadamente de 4 a 5 días.

RESULTADOS:

11. A la semana siguiente a partir de los trozos

sembrados se observó la formación de los micelios del

hongo, en función de los tipos de micelio desarrollados

será el número de repiques a realizar para llegar a

obtener un cultivo puro.

AISLAMIENTOS POR ESTRÍAS

Fundamento

(García y paredes 1994:78) sostiene que se

practica para obtener cultivos puros de muestras que

contienen flora polimicrobiana; es también útil para

estudiar la morfología y propiedades hemolíticas de las

colonias asociadas.

Preparar el medio de cultivo ya sea: OMA; PDA;

BAUVERIA.

Esterilizar el anza de pt

Inocular Beauveria al medio de cultivo en forma de

estrías, zig-zag

Esterilizar otra vez el anza de pt

Rotular

Sellar

Colocar las placas en bolsa de propileno

Acondicionar en la incubadora.

AISLAMIENTO CON LA ESPÁTULA DE DRIGASKY

Se realiza el mismo procedimiento del aislamiento

por estrías solo que es con la espátula de drigalsky.

Preparar el medio de cultivo

Esterilizar la espátula de drigalsky

Inocular Beauveria al medio de cultivo en forma de

zig-zag

Esterilizar otra vez la espátula de drigalsky

Rotular

Sellar

Colocar las placas en la bolsa de propileno

Acondicionar en el autoclave

CONCLUSIONES

Una de las actividades más apasionante del trabajo

con hongos es el aislamiento de hongos. Entre las miles

de especies que existen en la naturaleza el micólogo o

el cultivador necesita aislar una para poder trabajar

con ella.

Para el que se inicia en esta actividad es bueno conocer

las técnicas más usuales que le ayuden rápidamente a

desarrollar su intuición y su habilidad. El aislamiento

de hongos de la naturaleza es uno de los primeros

aprendizajes que debe adquirir quién desee trabajar con

hongos.

AISLAMIENTO POR SERIES DE DILUCION O DILUCIONES

SUCECIVAS

Se aprovecha la propiedad que tienen los medios de

cultivo con agar (medios sólidos), de permanecer

líquidos a temperatura relativamente baja, lo que

permite la incorporación de la mezcla microbiana, o

bien se realizan diluciones en solución fisiológica del

inoculo primario se vuelcan en cajas de Petri estériles,

se les agrega el medio de cultivo fundido a baja

temperatura.

El material incorporado se disemina por toda la

masa del medio de cultivo y una vez solidificado, quedan

los microorganismos inmovilizados y separados uno de

otro, originando colonias que se pueden contar.

Siembra por diluciones seriadas este método

consiste en realizar diluciones sucesivas de la muestra

con el objeto de sembrar después cantidades conocidas

de esas diluciones en capsulas de Petri.

Este método nos permite conocer el número de

microorganismo viable. La viabilidad en microorganismo

se define como la capacidad del microorganismo para

multiplicarse en un medio de cultivo.

Dado es muy pequeña una probabilidad de orden 0.05

cuando se siembra un gran número de tubos con un inoculo

de esta dimensión puede calcularse mediante la teoría

de probabilidades que la fracción que el tubo recibe el

organismo es 0.048: la fracción que recibe tres

organismos es 0.00002. Como resultado de ello si un

tubo muestra algo de crecimiento, existe una elevada

probabilidad de que este en crecimiento sea el resultado

de la introducción de un solo organismo disminuye

rápidamente a medida que aumente el número medio de

organismo en el inocuo

Por lo tanto es esencial aislar a partir de una

serie de tubos cuya gran mayoría no muestre ningún

crecimiento.

Objetivo.

Que el estudiante conozca el aislamiento por dilución

y otra forma para aislar microorganismos de tejido

vegetal enfermo, particularmente bacteria.

El método de dilución para el caso de bacterias ofrece

mayor sencillez y menor cantidad de contaminantes y es

uno de las maneras más comunes en el aislamiento de

este tipo de microorganismos

Es inocular una serie de tubos con una suspensión

microbiana tan diluida que la probabilidad de

introducir siquiera un solo individuo dentro de un tubo

Materiales:

Matraz.

Erlenmeyer.

Tubos de ensayo.

Mechero de bunsen

Placa Petri.

Hipoclorito de sodio 1%Agua destilada

Esterilizada.

Pipeta.

Tubo de ensaye.

plástico adherente.

Material vegetal enfermo

Cámara de aislamiento.

Gradilla.

Cinta.

Tubos con caldo y agar Nutritivo

PROCEDIMIENTO

Limpieza (desinfección, del material)

Factores de inoculación.

Temperatura.

Densidad de siembra.

Luz.

Nutrición.

Uniformización de inocuo(cantidad calidad)

Por diluciones sucesivas consiste en hacer

diluciones seriadas de la muestra o del inóculo, ésta

se utiliza cuando se tienen muestras líquidas agua, se

realiza haciendo diluciones a las muestras: 1:100, 1:1

000, 1:10 000 etc. Luego se siembra cada dilución en

placas de Petri con medios de cultivo.

Una vez obtenidos los cultivos, se puede proceder

al examen macroscópico: morfología de las colonias,

actividades bioquímicas o características.

METODOLOGÍA:

Manejo del asa bacteriológica o de siembra:

30 Tomado de Microbiología Tomo II de Granados 2ª

edición

Técnica de siembra por diluciones sucesivas

ANEXO

BIBLIOGRAFÍA

Eduardo R, French y Teddy t Heber. 1980 Métodos De

Investigación Fitopatológica. COSTA RICA.

Pedro García Y Fernando Paredes 1994.Microbiologia

Clínica (Practica) 2º Edición. UNIVERSIDAD DE CADIZ.

Practica De Patología Vegetal 1990. Universidad De

Murcia.

Verónica Cañedo Teresa Ames Cip 2004. Manual De

Laboratorio Para Manejo De Hongos Entomopatógenos. Lima

Perú.