meios de cultura
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MEIOS DE CULTURA
Prof MSc: Priscila MartinsAULA 3
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Como preparar
Meios comerciais devem ser hidratados
Primeiramente devem ser pesados
Transferir para um frasco
Hidratar em pequena quantidade e misturar
Depois deve-se acrescentar o restante da gua
Levar o meio para fundir aquecer
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Distribuir o meio antes de autoclavar - os tubos noprecisam estar esterilizados previamente
Esterilizar em autoclave por 15 minutos e temperatura
de 121C
Distribuir o meio aps a autoclavagem - tubos, frascos,placas, pipetas e vidrarias estreis
Os meios devem ser autoclavados com as tampas semi-abertas - tampas fechadas no permitem a entrada dovapor
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Classificao dos meios
Meios para transporte e conservao
Meios para cultivo e isolamento
Meios comerciais para provas de identificao
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Transporte e conservao
Cary Blair
Salina Tamponada
Meio Stuart Agar nutriente
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Cary Blair
Microrganismos intestinais patognicos e outroscoliformes fecais sobrevivem bem neste meio.
A carncia de uma fonte de nitrognio impede
consideravelmente a multiplicao dos microrganismose a composio nutritiva garante a sobrevivncia deles.
Utilizado para transporte de material fecal e
consequente conservao dos microrganismos.
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Salina Tamponada
Meio lquido tamponado que mantm a bactria vivel.
Usado como meio de transporte de amostras biolgicas.
Contm NaCl, fosfato dipotssico anidro, Glicerinabidestilada e gua destilada.
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Meio Stuart
A carncia de uma fonte de nitrognio impedeconsideravelmente a multiplicao de microrganismos ea composio nutritiva garante a sobrevivncia deles.
Usado para transporte de diversos materiais econsequente conservao dos microrganismos.
Conservao de microorganismos patognicos como:Haemophilus spp., Pneumococcus, Salmonella spp.,
Shigellaspp. entre outros.
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Agar Nutriente
um meio relativamente simples, de fcil preparao ebarato, muito usado nos procedimentos do laboratriode Microbiologia.
Usos: Anlise de gua, alimentos e leite Meio para cultivo preliminar das amostras submetidas a
exames bacteriolgicos Isolamento de organismos para culturas puras.
Observar esporulao de espcies de bacilos Grampositivos. O uso mais frequente - conservao de culturas em
temperatura ambiente, para os laboratrios que nodispem de crioconservao (freezer - 70C).
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Cultivo e Isolamento
gar TSA gar Chocolate gar MacConkey gar Sangue
gar CLED gar Salmonella-Shigella gar Manitol (MSA) gar EMB
gar Mycosel gar Sabouraud gar Verde Brilhante (BGA) Caldo Tioglicolato com indicador Caldo Tioglicolato sem indicador
Caldo BHI Caldo Selenito Caldo Tetrationato Lwenstein Jensen
Meio bifsico: Lwenstein eMiddlebrook,
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Tryptic Soy Agar (TSA)
Caldo Triptona de Soja com 0,1% Agar
Tambm chamado de CASO Agar (Casein-peptone
soymeal-peptone agar)
recomendado para o cultivo de bactrias nofastidiosas uso geral.
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Pseudomonas
aeruginosa
Staphy lococcus
aureus
Escher ichia col i
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Caldo BHI
Brain Heart Infusion
meio enriquecido um meio derivado de nutrientes de crebro e corao,
peptona e dextrose.
Fornece fontes de nitrognio, carbono, enxofre evitaminas.
Meio para cultivo de estreptococcos, pneumococos,meningococos, enterobactrias, no fermentadores,leveduras e fungos.
Pode ser utilizado na preparao do inculo para teste
de susceptibilidade aos antimicrobianos Realizao de teste de coagulase em tubo
Teste de crescimento bacteriano a 42 e 44C
Teste de motilidade em lmina.
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Agar Sangue
Meio enriquecido e diferencial
Compra-se a base comercial, depois de autoclavada eresfriada, adiciona-se sangue.
A conservao dos eritrcitos ntegros favorecem aformao de halos de hemlise ntidos.
Diferenciao de Streptococcusspp. e Staphylococcusspp.
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InterpretaoCor original do meio: vermelho.Beta hemlise: presena de halotransparente ao redor das colniassemeadas (lise total dos eritrcitos).Alfa hemlise: presena de haloesverdeado ao redor das colnias
semeadas (lise parcial dos eritrcitos).Gama hemlise (sem hemlise):ausncia de halo ao redor das colnias
(eritrcitos permanecem ntegros).
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PARCIALTOTAL
SEMHEMLISE
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Baci l lus
cereus
-hemoltico
Estreptococcus
-hemoltico
Enterococcus
faecalis
No hemoltico ()
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Agar Chocolate
Meio de cultura enriquecido
base do meio, adicionado sangue de cavalo,carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz comque as hemcias lisem, liberando hemina e hematina,compostos fundamentais para o crescimento dosmicrorganismos exigentes.
Utilizado no cultivo de organismos fastidiosos (Ex.:Neisseria, Haemophilus)
Alguns organismos que no crescem em meios comunsso capazes de crescer neste meio
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Meios de Culturagar Chocolate (AC):
InterpretaoCor original do meio: castanho escuro(chocolate).Colnias de tamanho pequeno a mdio,com pigmento amarelo: sugestivo deNeisseriaspp, Branhamella catarrhalis
ou Moraxella spp.Colnias pequenas e delicadas, compigmento creme claro: sugestivo de
Haemophilusspp.
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Micr ob iolo gia Clnic a Prof MSc. Prisc ila Martin s
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Neisseria
gonorrhoeae
Staphy lococcus
aureusEscher ichia col i
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Agar Thayer-Martin
Thayer-Martin Chocolate um meio rico seletivo
superior a outros meios de cultivo destinados para oisolamento de Neisseria gonorrhoeae e Neisseriameningitidis
Contm em sua frmula antibiticos que inibem ocrescimento de Neisserias saprfitas e outras bactrias,evitando contaminaes.
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gar Thayer Martin (TM): um meio rico e superior a outrosmeios de cultivo destinados para o
isolamento de Neisseria gonorrhoeaeeNeisseria meningitidis, pois contmem sua frmula antibiticos que inibem
o crescimento de Neisserias saprfitase outras bactrias, quando emamostras colhidas de stioscontaminados.
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Neisser ia gon orrh oeae
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Agar Salmonella-Shigella(SS)
Seletivo e diferencial
Possui componentes (sais de bile, verde brilhante ecitrato de sdio) que inibem microrganismos Grampositivos.
O meio possui lactose, que permite diferenciar bactriaslactose positivas e negativas
Lactose positivas- produzem cido que na presenado indicador vermelho - formao de colnias de cor
rosa Lactose negativas- formam colnias transparentes.
Permite a deteco de H2S - formao de colnias decor negra no centro.
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gar Salmonel la-Shiguel la(SS):Interpretao
Cor original do meio: vermelho alaranjado.Colnias com centro negro (H
S) ou colniasincolores: suspeita de Salmonella.Colnias incolores: suspeita de Shigella spp.Colnias cor de rosa ou vermelho: suspeita deEscherichia coliou Klebsiella spp.
As bactrias no fermentadoras de lactose soincolores.As bactrias fermentadoras de lactoseaparecem na cor rosa.
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Agar MacConkey
Seletivo e diferencial
O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismosGram positivos.
A concentrao de sais de bile relativamente baixa,por isso no to seletivo para Gram negativos como,por exemplo, o gar SS.
Usado para isolar bacilos Gram negativos(enterobactrias e no fermentadores) e verificar afermentao ou no da lactose.
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Pseudomonas
aeruginosa
Escher ichia
col i Salmo nel la sp.
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CONTINUAO NA PRXIMA AULA...
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Meio Hektoen
um meio seletivo e diferencial
Utilizado para detectar a fermentao de lactose eproduo de H2S
Possui a capacidade de inibir o crescimento de bactriasno-entricas
Fermentados de lactose - amarelo ou salmo
No fermentadores - sem cor Produo de H2S - precipitado preto
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Escher ichia col i
Salmo nel la enter idis
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Agar Sal Manitol
Meio seletivo e diferencial
Utilizado para selecionar Staphylococcus, que crescemem altas concentraes de sal
Diferencia Staphylococcus aureus de outrosStaphylococcus
Aps o crescimento,Staphylococcus aureus amarelo(fermenta o manitol), outros Staphylococcus sobrancos
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Staphy lococcus
epidermidis
Staphy lococcus
aureus Escher ichia col i
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Agar CLED
Cystine Lactose Eletrolyte Deficient Seletivo ediferencial
A deficincia de eletrlitos inibe o vu de cepas de
Proteus. Usado para isolamento e quantificao de
microrganismos presentes em amostras urina.
Eficiente para isolar e quantificar microrganismos Grampositivos, Gram negativos e leveduras.
Colnias lactose positivas: cor amarela/ negativas: corazul.
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Micr ob iolo gia Clnic a Prof MSc. Prisc ila Martin s
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Meios de CulturaCaractersticas de crescimento:Escher ich ia co l i: colnias opacas, amarelas com ligeira cor
amarelo escuro no centro, com cerca de 1,25 mm de dimetro,as no fermentadoras de lactose colnias azuisEspcies de Klebsiel la: colnias muito mucosas, cor varivelde amarelo a branco azuladoEspcies de Proteus: colnias azul translcidas, geralmentemenor que E.coliEspcies de Salmonel la: colnias planas, cor azulEnterococcus faecalis: colnias amarelas, com cerca de 0,5mm de dimetroStaphyloc occu s aureus: colnias amarelas, com cerca de 0,75mm de dimetroStaphylococcuscoagulase negativa: colnias amarelo palhae brancasCorynebacter ium: colnias pequenas e cinzaLactobaci los: colnias pequenas e com superfcie rugosaPseudom onas aeruginosa: colnias verdes, com superfcie
prateada e periferia rugosa
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Micr ob iolo gia Clnic a Prof MSc. Prisc ila Martin s
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St h l
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Staphy lococcus
aureus
Proteus
mirabi l is Escher ichia col i
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Agar verde brilhante (BGA)
um meio altamente seletivo, usado para oisolamento de outras salmonelas que no a S. Typhi,existentes nas fezes e em outros materiais.
A presena de extrato de levedura e duas peptonas
fornecem os nutrientes A lactose e a sacarose, juntamente com o vermelho de
fenol, fornecem um sistema de diferenciao defermentadores da lactose e/ou sacarose (ex: E. Coli).
Salmonelas no produzem cido a partir destesacares.
O verde brilhante o agente seletivo que inibe a florade acompanhamento.
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S l l l
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Escher ichia
col i
Salmonel la
sp.
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Agar Eosina Azul de Metileno
Agar EMB um meio para diferenciao ligeiramenteseletivo
Utilizado para o isolamento e diferenciao de bacilosentricos gram-negativos (Enterobacteriaceae e outrosbastonetes gram-negativos).
Corantes Eosina Y e azul-de-metileno inibem as bactriasgram-positivas num determinado grau - diferenciar osfermentadores
Coliformes produzem colnias pretas-azuladas
Salmonellae Shigellaso incolores ou tm uma cor mbartransparente, no fermentam lactose
Escherichia coli podero apresentar um reflexo verdemetalizado caracterstico, devido rpida fermentao da
lactose
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Escher ichia
col i
Klebsiel la
pneumoniae
Salmonel la
enter idis
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Meio Lwenstein Jensen
A base do meio constituda por ovos integrais, o quepermite amplo crescimento das micobactrias
O crescimento satisfatrio para o teste de niacina (que
positivo para Mycobacterium tuberculosis) Utilizado para isolamento primrio das micobactrias
Crescimento bom a excelente (colnias amarelas) -
Mycobacterium tuberculosise Mycobacterium avium
Incubao por 60 dias
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Mycobacter iumtuberculos is
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Agar Mycosel
A Cicloheximida, um dos componentes do meio, servepara selecionar dermatfitos.
O cloranfenicol inibe o crescimento de bactrias ealguns fungos filamentosos.
Usado para isolamento de fungos patognicos,principalmente dermatfitos, a partir de material deinvestigao contaminado.
Crescimento bom a excelente: Trichophytonverrucosum, Candida albicans
Crescimento inibido: Aspergillus niger , Candidatropicalis, Penicillium spp.
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Cand ida albicans
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Cand ida albicans
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Agar Sabouraud
Meio com nutrientes que favorece o crescimentode diversos fungos leveduriformes efilamentosos.
Cultivo e crescimento de espcies de Candidase fungos filamentosos, particularmenteassociados a infeces superficiais.
Caracterizao macroscpica do fungofilamentoso (colnia gigante).
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Cand ida albicans
Sporothr ix
schenck i i
Mic rosporum
canis
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Meios para identificao
gar TSI CaldoTSB Meio SIM gar Citrato Simmons
gar Fenilalanina gar base uria Caldo Triptona Caldo Nitrato Caldo Malonato gar Blis-Esculina gar Sangue Caldo base de Moeller
gar Dnase gar Esculina CTA Cystine Tryticase Agar
Meio base para oxidao efermentao - OF Base de nitrognio para
leveduras