Mekanisme kerja aminoglikosida adalah dengan mengikat ribosom subunit 30S, mengganggu sintesis protein dalam tiga cara: 1. Menghambat inisiasi sintesis protein. 2. Jika protein sudah diterjemahkan, aminoglikosida akan menghentikan terjemahan sebelum waktunya. 3. Menginduksi salah baca dan penggabungan asam amino yang salah ke dalam protein. Dapat menyebabkan terganggunya integritas dinding sel dan ketidakseimbangan gradien ion (misalnya K + mengalir keluar). Mekanisme terakhir ini unik untuk aminoglikosida, dan dapat menjelaskan mengapa ia lebih bersifat bakterisida daripada bakteriostatik seperti obat anti-ribosom lainnya.

Sintesis protein dan perusakan membraneDeprival dari asam amino menstimulasi pemutusan protein yang membuat asam amino berhamburan. Kesalahan membaca diinduksi oleh kontribusi Str untk membai mensistesis protein dengan mmbiarkan aminoasil-transfer RNA yang salah untuk mengganti kesalahan tersebut.