Métodos de cribado de HPLC rápido para detectar esteroides

La demanda de métodos de cribado rápido para la detección de esteroides ha ido aumentando sin cesar debido a la importancia de los esteroides en la regulación de bioprocesos. La HPLC es una técnica analítica muy considerada para aplicaciones farmacéuticas debido a sus inigualables características de validación analítica, que incluyen exactitud, precisión, límite de detección, especificidad, linealidad y rango, y robustez.

Las demandas de elevados números de muestras analizadas para análisis cuantitativos de esteroides requieren tiempos de análisis más rápidos y, de esta forma, se centran los esfuerzos en desarrollar métodos de cribado de HPLC rápido para detectar esteroides como hidrocortisona, testosterona y progesterona.

Los recientes desarrollos en la tecnología de la columna de HPLC, como las columnas totalmente porosas de sub-2 μm y las superficialmente porosas de 3 μm, han ofrecido mejoras en la velocidad de separación y la prestación mediante una reducción

en los tiempos de análisis y un aumento en la eficacia de separación.  Estas mejoras en la tecnología de la columna se traducen en que se puede conseguir el cribado de HPLC rápido para la detección de esteroides.

AUMENTO DE LA SELECTIVIDAD PARA MEJORAR LA SEPARACIÓN DE ESTEROIDESLa selectividad es la herramienta más potente para optimizar las separaciones en HPLC y se puede manipular para mejorar las separaciones.   Como resultado, se puede mejorar drásticamente el análisis de esteroides con la selección de la columna de HPLC óptima para la separación.  Se puede aumentar la selectividad si se cambia la composición de la fase móvil, la temperatura de la columna y la composición de la fase estacionaria. Por ejemplo, la corta longitud de la columna y la alta eficacia de las columnas Poroshell 120 HPLC  proporcionan tiempos de análisis de HPLC rápidos y un rápido equilibrio que se traduce en rápidas investigaciones de selectividad.

CONSEGUIR UNA SELECTIVIDAD MEJORADA CON POROSHELL 120Con el uso de la columna de HPLC óptima para la separación, es posible mejorar la selectividad.

Una función clave de las columnas Agilent Poroshell 120 es el relleno de columnas de micropartículas superficialmente porosas.   Las partículas Poroshell 120 tienen un núcleo de sílice sólido de 1,7 μm con una capa externa porosa de 0,5 μm. Esta configuración única proporciona todas las ventajas de prestación de las partículas de columnas de sub-2 μm con una retropresión de una partícula de columnas de sub-3 μm. Con las columnas Agilent Poroshell 120 se puede conseguir entre un 80 y un 90% o más de la eficacia esperada de una columna de LC/UHPLC rápida de sub-2 μm, pero a presiones de HPLC (por debajo de 400 bares). Esta capacidad para realizar separaciones rápidas a bajas presiones puede mejorar dramáticamente la productividad permitiendo analizar más muestras en menos tiempo, incluso con el uso de los sistemas de HPLC existentes.

En un experimento que investigó la mejor prestación para aumentar la separación de esteroides, se utilizaron cuatro columnas Agilent Poroshell 120:

Poroshell 120 StableBond de Agilent Poroshell 120 EC-C18 de Agilent Poroshell 120 Bonus-RP de Agilent Poroshell 120 Phenyl-Hexyl de Agilent

Los compuestos examinados incluían hidrocortisona, acetato de noretindrona, estradiol, progesterona, testosterona, etinilestradiol y boldiona. Los resultados demostraron que la Poroshell 120 Bonus-RP en acetonitrilo o Poroshell 120 Phenyl-Hexyl arrojaron mejores resultados que las columnas de fase C18.   Las columnas Poroshell 120 Bonus RP (VÍNCULO a la página del producto Poroshell) se pueden utilizar para muchas de las mismas separaciones que una columna C18, pero evita inconvenientes como una permeabilidad deficiente en fases móviles muy acuosas.

La familia de columnas Poroshell 120 ofrece las ventajas de un rendimiento excepcional, mayor velocidad y más resolución, incluso en los instrumentos HPLC convencionales.  Descargue la nota de aplicación “Fast Screening Methods for Steroids by HPLC with Agilent Poroshell 120 Columns” (Métodos de cribado rápido para esteroides para HPLC con columnas Agilent Poroshell

La calidad mejorada de columnas de partículas de sub-2 μm en HPLC rápida tiene menos pérdida de eficacia a altas velocidades de flujo. El cribado de HPLC rápido con columnas cortas rellenas con partículas pequeñas y altas velocidades de flujo es una solución efectiva para reducir el tiempo de análisis. El uso de columnas de selectividad alternativas como Poroshell 120 permite a los laboratorios conseguir tiempos de respuesta y de presentación de resultados más rápidos. Esto permite a los laboratorios generar mejores resultados cromatográficos con mayor rapidez, de forma que pueden aumentar el número de muestras analizadas.  El uso de columnas de selectividad de HPLC permite que la resolución de los compuestos sea mejor que la