UDK: 637.128

STAFILOKOKE U MLEKU I PROBLEMI KONTROLE MLEKA U PROMETU

Dr Zora M I J A C E V I C , prof, dr Vieslava MILJKOViC, Veterinarski fakultet, Beograd

S a e t a k

Osnova problema stafilokoka pri kontroli mleka proizlazi iz visoke frekvencije nalaza koagulaza pozitivnih stafilokoka u mleku (6, 7, 8), srazmerno este enterotoksinosti (2, 3, 5) izolovanih sojeva i termostahilnosti enterotok-sina. Za nastajanje trovanja ljudi enterotoksinim stafilokokama potreban je visok broj stafilokoka koji se stvara u neodgovarajuim uslovima uvanja i transporta mleka.

uvanjem mleka ohlaenog odmah posle dobijanja na 4^0 i lO^C TN-aza i enterotoksin nisu dokazani u intervalu od 48 asova, ni pri visokim poetnim populacijama stafilokoka. uvanjem mleka 9 asova na S'^C enterotoksin i TN-aza su pozitivni. U mleku hlaenom 5 asova posle mue TN-aza se dokazuje posle 24 i 36 asova u zavisnosti od poetne kontaminacije. Iz iznetih rezultata moe se zakljuiti da pri nepravilnoj primarnoj obradi mleka postoje uslovi za stvaranje dovoljnih koliina enterotoksina koje mogu izazvati trovanja kod ljudi. TN-aza testom mogu se otkriti uzorci u kojima je enterotoksin na nivou detekcije.

Uvod

U niziu uzroka higijensko zdravstvene neispravnosti mleka u prometu nalaz stafilokoka zasluuje posebnu panju. Razlog za to je to predstavnik ovog roda Staph, aureus, ili u iroj definiciji koja je prihvaena i propisima, koagulaza pozitivnih stafilokoka mogu da stvaraju enterotoksine (1, 2, 3, 4, 5). Osnova problema stafilokoka pri kontroli mleka proizilazi iz visoke frekvencije nalaza koagulaza pozitivnih stafilokoka u mle'ku (6, 7, 8), srazmerno este enterotoksogenosti (2, 3, 5) izolovanih sojeva, termoistabilnosti enterotoksina, bolje i due odrivosti enterotoksina u mleku i proizvodima od mleka od sojeva koji su produkovali enterotoksine i drugih inioca (3).

Propisima o mikrobiolokoj ispravnosti namirnica mleko je neupotrebljivo i posle termike obrade ako sadri koagulaza pozitivne stafilokoke u 0,01 ml (SI. list SFRJ br. 2/80 i 25/81). Veterinarskim propisima mleko krava obolelih od subklinikog mastitisa izazvanog Staph, aureusom je neupotrebljivo (SI. list SFRJ 48/78). Iz ovog kratkog izvoda propisa vidi se da su preduzete mere zatite oveka od tetnog dejstva stafilokoka u mleku. Pa ipak, pod pretpostavkom da se one slede, u kontroli postoji rizik u sluaju da su stafilokoke dokazane, a imleko otilo u promet. Ovo je najrealnija pretpostavka jer se u

Mliekarstvo 34 (2) 1984. 35

praksi mleko veeg broja proizvoaa mesa (9) i tako mu se gubi trag potreban za identifikaciju i isMjiuenje iz prometa u sluaju potreibe.

Prema naem miljenju bilo bi neophodno da se u prqpisima kojima se definie postupak sa mle

Tablica 1. Razmnoavanje stafilokoka u mleku pri razliitim temperaturama uvanja

Poetn i n i v o kontamiinadije

Staph, aureuslml T e m p e r a t u r a

uvan j a m l e k a Cu' vanje mleika u i n t e r v a l u (h) Poetn i n i v o

kontamiinadije Staph, aureuslml

T e m p e r a t u r a uvan j a m l e k a 0 3 6 9

103 105

4C 5,0X10-6,0X10 4,9X105

3,0X103 6,0X103 4,9X105

3,0X102 6,5X103 4,8X105

3,0X102 6,4X103 5,0X105

102 103 105

lOOC 3,0X10-6,0X103 5,5X105

3,2X102 6,0X103 5,5X105

3,4X102 6,5X103 7,0X105

3,9X102 8,5X103 9,5X10''

102 103 105

250C 2,5X102 3,5X103 1,5X105

5,0X102 6,0X103 6,0X105

2,0X103 4,1X10* 5,0X10

1,0X10* 5,2X105 1,5X10^^

Legenda: "^ = dokazan enterotoksin

P

Iz tablice se uoava da se stafilokoke razmnoavaju u intervalu do 48 asova i da je poveanje broja ovih mikroorganizama najintenzivnije u prvih 10 asova to (ukazuje na znaaj poetka hlaenja imleka. Uzorci mleka sa viom poetnom kontaminacijom stafilokoka u uslovima nepravilnog hlaenja posle 24 i 36 asova stvaraju TN-azu koja je indikativna za enterotoksin.

Mogunost otkrivanja stafilokoknog enterotoksina prethodnim dokaz^iva-njem TN-aze prikazano je u tablici 3.

Tablica 3. Dokazivanje enterotoksina i TN-aza stafilokoka u mleku uvanom pri razliitim

temperaturama

25C

Tem,peiratura N ivo kontanuinac i je stafi'lokofka

V r e m e i n k u b a c i j e u asov ima milefea

N ivo kontanuinac i je

stafi'lokofka 0 3 6 9

4^0 lOVml lOVml

6,0X10 1,5 XIO

4,1X10^ 1,5X10^

2,0X103 1,0X105

2,0X10 2,1X105

lO^C 10-/ml lO^/ml lOVml

4,0X102 6,0 XIO 6,5 X 10^

4,0 X 10^ 6,0X10 5,5 X 10^

4,2X102 6,5X10 7,0X105

8,0X102 8,5X10 9,5X105

15'^ C 10-/,ml lOViml

2,0 X 10^ 2,0X10*

3,5X10-3,5X10*

4,5X10-3,5X10*

3,0X102 3,5X10*

20"C lOVanl 10 Vani

2,5X102 2,0X10*

5,5X10-6,7X10*

5,5X10-6,6X10*

1,5X10 1,5X105

102/iml 2,5X102 5,0X102 2,0X10 1,0X10* lOVnil 3,5X10 6,0X10 4,1X10* 5,2X105 io*/ma 2,0X10* 7,0X10* 1,8X105 1,5X10^ 105/ml 1,5X105 6,0X105 5,0X10^ 1,5X10^^

30C 102/ml 10*/nil

2,5X102 2,5X10*

8,0X102 3,4X105

4,5X10* 1,2X10''

5,6X108" 9,0X107"

Legenda: "^ = dokazana TN-aza Legenda:^ = dokazan enterotoksin

TN-aza i enterotoksin se ne stvarajiu u mleku uvanom 9 asova na 4"C Na temperaturama 10,15 i 20"C poveanje populacije stafilokoka zavisi od poetnog nivoa i u ispitivanoim intervalu (9 asova) ne dostie nivo na kome se dokazuju TN-aza i enterotoksin. U uzorcima mleka uvanim 9 asovima na 25^0 TN-aza i enterotoksin se dokazuju u zavisnosti od poetne kontaminacijt stafilokokama.

TN-aza se dokazuje u uzorcima mleka posle 9 asova pri poetnoj kontaminaciji 10* ili ve posle 6 asova pri poetnoj kontaminaciji 10^ stafiloko-ka/iml. Enterotoksin je dokazan u uzorcima mleka kontaminiranim 10^ stafi-lokoka/iml posle 9 asova. Dranjem mleka na SO^ 'C TN-aza se dokazuje poslt 6 19 asova ako je poetna kontaminacija iznosila 10^ i lOVml stafilokoka. Ente-rotoksini se dokazuju posle 9 asova lu uzorcima mleka sa poetnom kontaminacijom 10* stafilokoka/ml.

38 Mliekarstvo 34 (2) 1984

u p rav i lno oh laenom mleku nema uslova za nastajanje visoke populaci je stafilokoka pa s t im u vezi n i s tvaran ja enterotoksina, to predstavl ja efikasnu m e r u zatite od t rovan ja l judi enterotoksinima stafilokoka.

Na pr i jemnoj r a m p i u mlekar i nemogue je u tv rd i t i pre thodne usilove u kojima se nalazi lo mleko, pa je stoga pot rebno b rzam kontrolom izdvojiti uzorke sumnj ive n a pr isus tvo enterotoksina. Da bi se poboljalla kontrola mle -ka pot rebno je u mldku u t v r d i t i pr isus tvo TN-aze, je r bi se na taj nain p o veala zati ta po t roaa od konzumiranja mleka koje sadr i enterotoksin.

Zakljuci

Hlaenjem mleka posle mue na 4^C i lO^C ne nas ta je intenzivno poveanje populaci je stafitlokoka zbog ega ni enteroltoksin ni je dokazan.

U neprav i lno h l aenom mleku pr i razliit im v remensk im in te rva l ima (2436^) st iu se uslovi za razmnoavanje stafi lokoka i nastajanje dovoljnih koliina en tero toks ina koji se m o g u dokazati .

P r imenom TN-aze tes ta postie se efikasna mera zat i te potroaa od t ro vanja s taf i lokoknim enterdtoksinima, jer se ovim testom otkr ivaju uzorci anle-ka u kojima je nas ta la visoka populacija stafilokoka, a s t im u vezi i s tvaran je enterotoksina.

Summary

A basic problem dealing with the control of m,ilk rejeres to the high frequency by wich the coagulase of the positive staphilococci is found in milk (6, 7, 8) as related to the enterotoxicity (2, 3, 5) of the isolated strains and the thermolability of enterotoxines. A high count of staphilococci is necessary to get people poisoned by enterotoxic staphilococci which use to grow under inadequate milk storage and transport conditions.

By storing milk cooled down to 4"C, and lO^C just after it was milked, no TN-ase and enterotoxine were recorded within 48 hours, even not in cases when a high initial population of staphilococci was observed. By storing milk for 9 hours at 25^C the enterotoxines and TN-ase were positive. In milk, cooled for 5 hours after milking, a TN-ase was observable after 24 an 36 hours dependent on the value of the initial contamination. From the results presented the conclusion can be drawn that an incorrect processing of milk help tc create conditions favouring form,ation of a sufficient quantity of enterotoxins capable of getting people poisoned. By a TN-ase test it was posible to screen out samples indicative of enterotoxines the quantity of which was recorded on the detection level.

L i t e r a t u r a

MAHMOUD, S. A. Z., SABBOUR, M. M. NAGUIB N., HAZAM, A, 1 SHARAF, O. M., 1980: Archiv f. Lebenismittelhyg. 31 (1) 56. BERGDOLL, M.S., 1970: Bnteroitoxjin p .p . 265326. In T. C. MANTIC, S. KADiC and S. J. AYL (edc) Microbiol. Toxins. Vol. 3, Academic Press. New York and London. STOJANOVIC L., 1980: Uticaj ekolokih inilaca na dinamiku stvaranja i odrivost stafilakaknih enteroitoksina u mlenim praizivodima, doktorsika disertacija, Beograd.

Mliekarstvo 34 r2) 1984. 39

NISKANEN, A., iKOIRANEN, L., iROINE, K., 1978: Infection and Immunity 19 (2] 493498. LOMBAI, G., JiANOiSI, L., KATONA, F., MAJOR, P., MILCH, H., ORNAJ, L., TA-KACS, J., 1980: Arcbiv f. Lebensmiitteilhyg. 31 (6) 206. GLISOVIC, B., STANKOVIC JELENA, RUDlC RAJNA, KOSANOVIC, M., 1979: ir Jugoslavenski simpozijum o suzbijanju mastitisa krava, Sabac, 315. ILIC, M., OLUJIC MIROSLAVA, MILJKOVIC, V., ANBARI A. A., CERIC, S., JO-VANOVflC, Z., 1979: II Jugoslavenski siimpoizdjum o suzibijanjiu mastitisa krava, Sabac, 145149. MARIC, J., MAJIC B., 1979: II Jugoslovenislki sdmpczljum o suzibijanju mastitiiisa krava, .Saibac, 4771. M I J A C E V I C , Z., 1983: Biiahemijislka aMtivnast s,tafilokolka u mlelku pri irazlliitim tehnolokim iuslovima obrade i prerade -mleika, doktorska 'diiisentaoija, Beograd. LACHICA, R. V. F., GENIGEORGIS, C , HOEPRICH, P. D., 1971: Appl. Microbiol. 21 : 585587. PARK, C , EL DEREA, H. B. RAYMAN, M. K., 1979: Can. J. Microbiol. 25, 44. VON SCHONWENBURG VON FOEKKEN, A. W. J., STANDHOUDERS, J., JANS, J. A., 1978: Netherlands Milk and Dairy Journal, 32, 217231. ZAADHOFF, K. J., 1978: AroMv. f. Lbenismittelhyg. 29 (4) 138. Internacionalni istandard 83: 1978: Milchwissenschaft, 34 (5) 292294. Pravilnik o usl'ovima u pogledu miilkrobioloke ispravnosti kojima moraju odgova-ratii namirnice u promeitu (SI. list SFRJ 2/80). Pravilnik o izimenama i dopunama Pravilnika o uslovima u pogledu mikrobioloke ispravnosti kojima moraju odgovarati nam^irnice u prometu (SI. list 25/81). Pravilnik o nainu vrenja stalnog veterinarsko-isanitarnog pregileda ivotinja za klanje i proizvoda ivoti nj is kog poreikla (SI. list SFRJ 47/78).

40 Mljekarstvo 34 (2) 1984.