mikrobiologi - laporan isolasi

8/11/2019 Mikrobiologi - Laporan Isolasi

1/10

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakan

Selama mempelajari mikroba, kita tahu satu hal bahwa ukuran

mikroorganisme atau mikroba sangat kecil, oleh karena itu informasi yang dapat

diperoleh tentang sifat-sifatnya dari pemeriksaan terhadap individu itu terbatas.

Pengamatan sifat-sifat seperti bentuk, susunan, permukaan, pengkilatan dan

sebagainya dapat dilakukan dengan pandangan biasa tanpa menggunakkan

mikroskop, pengamatan ini disebut pengamatan makroskopi. Supaya sifat-sifat

tersebut tampak jelas, bakteri perlu dibiakkan pada medium padat yaitu dengan cara

isolasi bakteri. Isolasi adalah mengambil mikroorganisme yang terdapat di alam dan

menumbuhkannya dalam suatu medium buatan.

Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan

mikroba lainnya yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba. Cara

isolasi bakteri dilakukan dengan metode tuang (pour plate), metode goresan (streak

plate), metode miring (slant culture), dan metode tegak (stab culture).

Praktikum kali ini kami semua menggunakan medium NA (Nutrien Agar).

Dimana medium ini berfungsi sebagai tempat mikroba itu tumbuh. Mikroorganisme

yang dibiakkan di laboratorium pada medium yang terdiri dari bahan nutrient.

Biasanya pemilihan medium yang dipakai bergantung kepada banyak faktor seperti

seperti apa jenis mikroorganisme yang akan ditumbuhkan.

Perbenihan untuk pertumbuhan bakteri agar dapat tetap dipertahankan harus

mengandung semua zat makanan yang diperlukan oleh organisme tersebut. Faktor

lain seperti PH, suhu, dan pendinginan harus dikendalikan dengan baik.

1.2

Tujuan

Mempelajari dan mempraktekkan beberapa tahapan dalam isolasi bakteri.


2/10

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

Isolasi adalah mengambil mikroorganisme yang terdapat di alam dan

menumbuhkannya dalam suatu medium buatan. Prinsip dari isolasi mikroba adalah

memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lainnya yang berasal dari campuran

bermacam-macam mikroba. Hal ini dapat dilakukan dengan menumbuhkannya dalam media

padat sel-sel mikroba akan membentuk suatu koloni sel yang tetap pada tempatnya. Isolasi

bakteri atau biakan yang terdiri dari satu jenis mikroorganisme (bakteri) dikenal sebagai

biakan murniatau biakan aksenik.Biakan yang berisi lebih dari satu macam mikroorganisme

(bakteri) dikenal sebagai biakan campuran, jika hanya terdiri dari dua jenis mikroorganisme,

yang dengan sengaja dipelihara satu sama lain dalam asosiasi, dikenal sebagai biakan dua-

jenis

Persyaratan utama bagi isolasi dan kultivasi fage adalah harus adanya

kondisi optimum untuk pertumbuhan organisme inangnya. Sumber bakteriofage yang paling

baik dan paling utama adalah habitat inang. Sebagai contoh fage koli yang di jumpai di dalam

pencernaan dapat diisolasi dari limbah atau pupuk kandang. Hal ini dilakukan dengan

sentifugasi atau filtrasi bahan sumbrnya dan penambahan kloroform untuk membunuh sel-selbakterinya (Adams, 2000).

Ada beberapa cara yang digunakan untuk bakteri, fungi, dan khamir dengan metode

garis, metode tuang, metode sebar, metode penuangan, serta micromanipulator. Dua

diantaranya yang paling sering banyak digunakan adalah teknik cawan tuang dan cawan

gores. Kedua metode ini didasarkan pada prinsip yang sama yaitu mengencerkan organisme

sedemikian rupa sehingga individu species dapat dipisahkan (plezar, 2006)

Mikroorganisme dibiakkan di laboratorium pada medium yang terdiri dari bahan nutrient.

Biasanya pemilihan medium yang dipakai bergantung kepada banyak faktor seperti seperti

apa jenis mikroorganisme yang akan ditumbuhkan. Perbenihan untuk pertumbuhan bakteri

agar dapat tetap dipertahankan harus mengandung semua zat makanan yang diperlukan oleh

organisme tersebut. Faktor lain seperti PH, suhu, dan pendinginan harus dikendalikan dengan

baik (Buckle, 2007)

Selain untuk tujuan diatas medium juga memiliki fungsi lain, seperti tempat untukmengisolasi, seleksi, evaluasi dan diferensiasi biakan yang didapatkan. Agar tiap-tiap


3/10

medium memilki karakteristik yang sesuai dengan tujuan sehingga seringkali digunakan

beberapa jenis zat tertentu yang mempunyai pengaruh terhadap pertumbuhan dan

perkembangbiakan mikroba (Suriawiria, 2005). Beberapa indikasi pembiakan pada

laboratorium mikrobiologi meliputi:

1. Pengasingan (isolasi) mikroba pada biakan bakteri

2. Menunjukan sifat khas mikroba.

3. Untuk menentukan jenis mikroba yang diisolasi dengan cara-cara tertentu.

4. Untuk mendapatkan bahan biakan yang cukup untuk membuat antigen dan percobaan

serologi lainnya.

5. Menentukan kepekaan kuman terhadap antibiotik.

6. Menghitung jumlah kuman

7. Mempertahankan biakan mikroba.

Mikroorganisme tidak memerlukan banyak ruangan untuk perkembangannya, sebab

itu media buatan (agar) dapat dimasukkan ke dalam sebuah tabung percobaan labu atau

cawan Petri. Pada permulaannya tabung atau cawan Petri harus dalam keadaan steril (bebas

dari setiap mikroorganisme hidup) lalu setelah itu dimasukkan mikrobia yang diinginkan,

tabung atau cawan harus dilindungi terhadap kontaminasi dari luar. Sumber utama

pencemaran dari luar adalah udara, yang banyak mengandung mikroorganisme yang

berterbangan. Bentuk cawan petri, dengan tutup yang saling menyelubungi, dirancang untuk

mencegah pencemaran udara. Pencemaran tabung atau labu dihindari dengan cara

menyumbat mulutnya dengan penutup yang cocok, biasanya dengan kapas.

Permukaan luar cawan biakan yang menjadi sasaran pencemaran, dan bagian dalam

labu atau tabung akan tercemar bila dibuka untuk memasukkan atau mengeluarkan bahan.

Bahaya ini dapat dihindari dengan cara membakar bibir atau pinggiran cawan, tabung atau

labu dalam api, segera setelah penutup dibuka dan dibakar sekali lagi pada waktu akan

ditutup.


4/10

Karakteristik koloni bakteri hasil inokulasi merupakan salah satu bagian dalam identifikasi

bakteri. Beberapa bentuk koloni spesifik koloni bakteri pada media agar datar yaitu

(Sutedjo dalam Sari, 2009) :

1. Ukuran

Titik

Kecil

Sedang

Besar

2. Warna koloni

Bakteri yang hidup hampir tidak berwarna dan tidak kontras dengan air, di mana sel-sel

bakteri tersebut disuspensikan. Oleh karena itu pengamatan tanpa pewarnaan menjadi lebih

sukar dan tidak dapat digunakan untuk melihat bagian-bagian sel dengan teliti

3. Bentuk koloni

Bundar

Tidak beraturan

Rhizoid (tersebar seperti akar)

4. Bentuk bagian tepi koloni (margin )

Rata (entire)

Tidak rata, bergelombang secara beraturan (lobate )

Bergelombang (undulate )

Bergerigi (serrate )

Seperti filamen (filamentous)


5/10

Ada empat cara isolasi bakteri yaitu :

a.

Pour plate atau shake culture

Beberapa ml suspensi bakteri dicampur dengan mediaum yang masih cair (belum membeku)

dengan demikian akan diperoleh piaraan adukan. Digunakan untuk mengencerkan atau

mengisolasi yang terdapat pada contoh. Setelah inkubasi pada suhu dan waktu tertentu,

koloni akan tumbuh pada permukaan dan bagian bawah agar.

b. Streak Plate atau culture

Ujung kawat imokulasi yang membawa bakteri digesekkan atau digoreskan dengan bentuk

zig-zag pada permukaan agar-agar dalam cawan Petri sampai meliputi seluruh permukaan.

Untuk memperoleh hasil yang baik diperlukan keterampilan, yang biasanya diperoleh dari

pengalaman. Metode cawan gores yang dilakukan dengan baik kebanyakan akan

menyebabkan terisolasinya mikroorganisme yang diinginkan. Dua macam kesalahan yang

umum sekali dilakukan adalah tidak memanfaatkan permukaan medium dengan sebaik-

baiknya untuk digores sehingga pengenceran mikroorganisme menjadi kurang lanjut dan

cenderung untuk menggunakan inokulum terlalu banyak sehingga menyulitkan pemisahan sel

- sel yang digores.

c. Slant culture

Ujung kawat yang membawakan bakteri digesekkan pada permukaan agar-agar miring dalam

tabung reaksi. Dapat dilakukan dengan cara menggoreskan secaa zig-zag pada permukaan

agar miring menggunakan jarum ose yang bagian atasnya dilengkungkan. Cara ini juga

dilakukan pada agar tegak untuk meminimalisir pertumbuhan mikroba dalam keadaan

kekurangan oksigen. (Rusdimin, 2003)

d. Stab culture

Ujung kawat yang membawakan bakteri ditusukkan pada media padat (agar-agar) dalam

tabung reaksi, berbeda dengan slant culture permukaan agar-agar ini tidak miring. Media agar

setengah padat dalam tabung reaksi, digunakan untuk menguji gerak bakteri secara

makroskopis


6/10

BAB III

METODE PRAKTIKUM

3.1 Alat dan Bahan

1. Cawan petri

2. Hot Plate Stirrer

3. Autoclave

4. Inkubator

5. Laminar Air Flow

6.

Rubber Bulb

7.

Pipet volum

8.

Sendok tanduk

9. Bekker gelas

10.Tabung reaksi

11.

Alat timbang

12.Lampu Bunchen

13.Batang L

14.

Aquades15.Sampel Tanah

3.2 Cara Kerja (Sample Tanah)

1. Tanah seberat 1 g dimasukkan ke dalam tabung pengenceran 10-1 secara aseptis dan

selanjutnya dilakukan pengenceran bertingkan sampai 10-8.

2. Tiga pengenceran terakhir diambil 0,1ml untuk ditanam secara spread plate pada

medium NA, setelah selesai, diingkubasi pada 370C selama 1x24 jam

3. Koloni akan tumbuh pada ketiga cawan tersebut, kemudian dipilih koloni yang relatif

terpisah dari koloni lain dan koloni yang mudah dikenali

4.

Koloni yang terpilih kemudian ditumbuhkan atau dimurnikan ke NA baru dengan

teknik streak kuadran

5. Inkubasi 1x24 jam.


7/10

BAB IV

PEMBAHASAN

Dalam praktikum kali ini, kami melakukan isolasi mikroorganisme. Isolasi

mikroorganisme yaitu memisahkan mikroba dari campurannya sehingga didapat kultur murni

yang terdiri dari satu jenis yang dapat dipelajari morfologi, sifat dan kemampuan

biokimiawinya.

Teknik Pengambilan Sampel

Sebelum melakukan isolasi terlebih dahulu dilakukan pengambilan sampel. Berikutmerupakan prosedur pengambilan sampel.

1. Sampel tanah

Jika mikroorganisme yang diinginkan kemungkinan berada di dalam tanah, maka cara

pengambilannya disesuaikan dengan tujuan dan kebutuhan. Misal jika yang diinginkan

mikroorganisma rhizosfer maka sampel diambil dari sekitar perakaran dekat permukaan

hingga ujung perakaran..

2. Sampel air

Pengambilan sampel air bergantung kepada keadaan air itu sendiri. Jika beerasal dari air

sungai yang mengalir maka botol dicelupkan miring dengan bibir botol melawan arus air.

Bila pengambilan sampel dilakukan pada air yang tenang, botol dapat dicelupkan dengan tali,

jika ingin mengambil sampel dari air keran maka sebelumya keran dialirkan dulu beberapa

saat dan mulut kran dibakar.

Cara Kerja Isolasi Bakteri dari Sampel Tanah :

1. Tanah seberat 1 g dimasukan ke dalam tabung pengenceran 10-1 secara aseptis dan

selanjutnya dilakukan pengenceran bertingkat sampai 10-8

2. Tiga pengenceran terakhir diambil 0,1 ml untuk ditanam secara spread plate pada

medium NA, setelah selesai, diinkubasi pada 37oC selama 1x24 jam


8/10

3. Koloni akan tumbuh pada ketiga cawan tersebut kemudian dipilih koloni yang relatif

terpisah dari koloni lain dan koloni yang mudah dikenali

4. Koloni yang terpilih kemudian ditumbuhkan atau dimurnikan ke NA baru dengan

teknik streak kuadran

5. Inkubasi 1x24 jam.

Setelah di inkubasi selama 24 jam di dalam incubator, hasil praktikum yang di dapat yaitu

gagal. Karena tidak ada bakteri yang tumbuh dalam media agar. Hal ini terjadi karena :

1. Media agar kurang padat

2. Cara pembuatan yang tidak sesuai pada saat pengerjaan


9/10

BAB V

KESIMPULAN

Kesimpulan yang dapat kami ambil dari praktikum kali ini adalah isolasi

mikkroorganisme dari sampel tanah tidak menunjukkan bahwa adanya pertumbuhan bakteri

di dalamnya. Hal ini diakibatkan karena cara pembuatan yang tidak sesuai pada saat

pengerjaan. Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan

mikroba lainnya yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba. Hal ini dapat

dilakukan dengan menumbuhkannya dalam media padat sel-sel mikroba akan membentuk

suatu koloni sel yang tetap pada tempatnya.


10/10

DAFTAR PUSTAKA

- Panduan Praktikum Mikrobiologi oleh ;

I Made Agus Sunadi Putra,S.Si.,M.Biomed.,Apt

Drs. I Gede Made Saskara Edi,M.Psi.,Apt

Kadek Duwi Cahyadi,S.Farm.,M.Sc.,Apt

Ni Made Dharma Santini Suena,S.Farm.,Apt

- http://fikapuspita.blogspot.com/2014/01/laporan-praktikum-mikrobiologi-

dasar.html

mikrobiologi - laporan isolasi

Documents