ISOLASI CAWAN TUANG DAN CAWAN GORES

LAPORAN UTAMA

Oleh :

Nama:Tresna Eka Putri

NRP:133020064

Meja:2

Kelompok:C

Asisten:Noordiansyah

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI PANGAN

JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN

FAKULTAS TEKNIK

UNIVERSITAS PASUNDAN

BANDUNG

2014

LEMBAR PENGESAHAN

ISOLASI CAWAN TUANG DAN CAWAN GORESLaporan ini telah diperiksa dan disetujui untuk memenuhi Persyaratan Kelulusan Praktikum Mikrobiologi Pangan Program Studi Teknologi Pangan Fakultas Teknik Universitas Pasundan, Bandung 2014

Menyetujui,

Firmansyah, ST. Noordiansyah

Koordinator Asisten Asisten

KATA PENGANTAR

Alhamdulillah puji dan syukur penulis panjatkan ke hadirat Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat dan hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan laporan utama ini, tidak lupa pada Nabi besar Muhammad SAW beserta keluarga-Nya, para sahabat dan semua umat islam yang ikut berjuang bersama-Nya. Penyusunan laporan utama ini guna memenuhi persyaratan kelulusan praktikum mikrobiologi pangan.

Laporan utama praktikum mikrobiologi pangan disusun berdasarkan percobaan yang dilaksanakan di Laboratorium Mikrobiologi Pangan Jurusan Teknologi Pangan Fakultas Teknik Universitas Pasundan.

Dalam menyelesaikan laporan ini penulis banyak mendapatkan bantuan dari berbagai pihak. Maka ucapan terima kasih penulis sampaikan kepada :

1. Allah SWT, karena memberikan kepercayaan kepada penulis untuk menyelesaikan laporan utama ini.

2. Kedua orang tua dan keluarga yang selalu mendoakan dan memberi dukungan baik moril maupun materil.3. Adik penulis, Davor Ray Putra yang telah mengganggu penulis selama pengerjaan laporan.4. Bapak Dr. Ir. H. Dede Zainal Arief, M. Si dan Ibu Ir. Neneng Suliasih, MP. sebagai koordinator praktikum laboratorium Mikrobiologi Pangan.

5.Koordinator asisten Mikrobiologi Pangan Kang Firmansyah,ST.

6.Asisten Pembimbing, Kang Noordiansyah yang telah membimbing dan memberikan semangat untuk penulis dalam penyusunan laporan utama ini.

7. Seluruh asisten yang telah membimbing dalam pelaksanaan praktikum.

8. Teman-teman, Emas (Hindun), Anggie (Oneng), Adinda (Minah), Azizah (Bajaj), Kimei, Bona, Meme, Vita, Winjum, Devi, Devian yang telah memberikan semangat dan kerjasamanya.

9. Teman semeja, Anggi Nugraha dan Filmansah yang telah bekerjasama untuk menyelesaikan setiap praktikum.10. Teman Kelompok C, Muthia, Novia, Risti dan seluruh teman-teman kelompok C yang telah memberikan dukungan, candaa, kerjasama selama praktikum.

11. Deviana, Innosanda, Della, Harumi, Siswi, Sarah, Wanda, Indah yang telah memberikan semangat.

11. Semua pihak yang membantu dalam penyelesaian laporan utama ini yang tidak bisa disebutkan satu persatu.

Tidak lupa penulis meminta kritik dan saran karena dalam penyusunan laporan utama ini masih memiliki banyak kekurangan.

Semoga laporan utama ini berguna bagi penulis khususnya dan umumnya bagi semua pihak yang dapat memanfaatkannya.

Bandung, November 2014

Penulis DAFTAR ISI

Halaman

LEMBAR PENGESAHAN

KATA PENGANTARi

DAFTAR ISI ivDAFTAR TABEL viDAFTAR GAMBAR....vii DAFTAR LAMPIRAN ..viiiI PENDAHULUAN 1

1.1. Latar Belakang Percobaan 1

1.2. Prinsip Percobaan41.3. Tujuan Percobaan4II ALAT, BAHAN DAN PROSEDUR PERCOBAAN .52.1. Bahan yang Digunakan .52.2. Alat yang Digunakan.52.3. Metode Percobaan .6III HASIL PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN .93.1. Hasil Pengamatan.93.1.1. Hasil pengamatan Isolasi Cawan Gores.93.1.2. Hasil pengamatan Isolasi Cawan Tuang.93.2. Pembahasan 10IV KESIMPULAN DAN SARAN 314.1. Kesimpulan 314.2. Saran 31DAFTAR PUSTAKA 32LAMPIRAN34 DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1. Hasil Pengamatan Isolasi Cawan Gores8

Tabel 2. Hasil Pengamatan Isolasi Cawan Tuang 8Tabel 3. Penggolongan Bakteri Berdasarkan Suhu17

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Prosedur Percobaan Isolasi Cawan Tuang6Gambar 2. Prosedur Percobaan Isolasi Cawan Gores7

Gambar 3. Fase Pertumbuhan Mikroba 26

Gambar 4. Bagian-bagian Mikroskop38DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Pengenalan Mikroskop34Lampiran 2. Pemakaian Mikroskop35Lampiran 3. Sel Total39Lampiran 4. Sel Hidup dan Sel Mati41Lampiran 5. Pewarnaan Gram43Lampiran 6. Pembiakan Lapuk45Lampiran 7. Pewarnaan Negatif47Lampiran 8. Pewarnaan Spora53Lampiran 9. Tetesan Bergantung55Lampiran 10. Pemeriksaan Air57Lampiran 11. Uji Mutu Makanan 64Lampiran 12. Zat Anti Mikroba 69Lampiran 13. Pembentukan AMK dari Glukosa71Lampiran 14. Pembentukan Indol dari Pepton73Lampiran 15. Perubahan Air Susu75Lampiran 16. Pembentukan Gas oleh Bakteri78Lampiran 17. Pembentukan H2S dari Pepton80Lampiran 18. Isolasi Cawan Tuang dan Gores82Lampiran 19. Peragian Gula85Lampiran 20. Sterilisasi Alat dan Bahan87Lampiran 21. Pembiakan Serratia marcescens dan Sarcina Lutea89Lampiran 22. Penguraian Enzim91I PENDAHULUAN

Bab ini menguraikan mengenai : (1) Latar Belakang, (2) Tujuan Percobaan, dan (3) Prinsip Percobaan.

1.1. Latar Belakang

Populasi mikroba di alam sekitar kita besar lagi kompleks. Beratus-ratus spesies berbagai mikroba biasanya menghuni bermacam-macam bagian tubuh kita, termasuk mulut, saluran pencernaan, dan kulit. Mereka terdapat dalam jumlah yang luar biasa besarnya. Sebagai contoh, sekali bersin dapat menyebarkan beribu-ribu mikroorganisme.

Alam sekitar kita, udara, tanah, dan air juga dihuni kumpulan mikroorganisme. Penelitian yang layak mengenai mikroorganisme dalam berbagai habitat ini memerlukan teknik untuk memisah-misahkan populasi campuran yang rumit ini, atau biakan campuran menjadi spesies-spesies yang berbeda-beda sebagai biakan murni. Biakan murni terdiri dari suatu populasi sel yang semuanya berasal dari satu sel individu.Pemanfaatan mikroorganisme dalam bidang teknologi semakin banyak digunakan misalnya dalam menghasilkan berbagai produk seperti bahan pangan, industri, pertanian, obat-obatan, dan lain sebagainya. Pemilihan mikroorganisme yang tepat untuk suatu tujuan tertentu dan pemanfaatan mikroorganisme secara maksimal perlu didukung oleh suatu metode isolasi dan identifikasi yang baik.

Isolasi adalah merupakan cara memisahkan mikroorganisme tertentu dari lingkungan, sehingga dapat diperoleh biakan yang sifatnya murni, sehingga biakan tersebut disebut kultur murni. Pekerjaan memindahkan mikroba dari medium lama ke medium yang baru harus dilaksanakan secara teliti. Terlebih dahulu harus diusahakan agar semua alat-alat yang sangkut paut dengan medium dan pekerjaan inokulasi (penanaman) itu benar-benar steril, hal ini untuk menghindarkan kontaminasi, yakni masuknya mikroorgasnisme yang tidak kita inginkan.Dalam mengisolasi suatu mikroorganisme, dilakukan dengan cara yang aseptis untuk menghindari terjadinya kontaminasi dengan mikroorganisme lain. Kebanyakan mikroorganisme dapat diisolasi dan diinokulasi dalam biakan murni dengan memindahkan suatu koloni secara cermat, mensuspensikan kembali dalam cairan dan menanamnya kembali pada medium yang selektif.

Isolasi dan inokulasi merupakan percobaan yang sangat penting, karena melihat kondisi lingkungan di sekitar kita yang banyak terdapat mikroorganisme baik yang patogen maupun yang non patogen, sehingga pemisahan dan identifikasi bakteri yang satu dengan lainnya juga dibutuhkan.

Flora mikroba di lingkungan mana saja pada umumnya terdapat dalam populasi campuran. Boleh dikatakan amat jarang mikroba dijumpai sebagai satu spesies tunggal di alam. Untuk mencirikan dan mengidentifikasi suatu spesies tersebut harus dapat dipisahkan dari organisme lain yang umum dijumpai dalam habitatnya, lalu ditumbuhkan menjadi biakan murni. Sesungguhnya ada beberapa metode untuk memperoleh biakan murni dari suatu biakan campuran. Dua diantaranya yang paling sering digunakan yaitu: Metode cawan gores dan Metode cawan tuang.1.2. Tujuan Percobaan

Tujuan dari percobaan isolasi cawan tuang dan gores adalah untuk mengetahui cara-cara mengisolasi (mendapatkan) biakan yang baik dan memisahkan satu jenis mikroba yang lain yang beraal dari bermacam-macam mikroba dengan teknik cawan gores dan cawan tuang.1.3. Prinsip Percobaan

Prinsip dari percobaan isolasi cawan tuang dan cawan gores yaitu berdasarkan pengenceran terhadap organisme sehingga individu spesies dapat dipisahkan dari lainnya dengan anggapan bahwa setiap koloni terpisah yang tampak pada cawan petri setelah diinkubasi berasal dari 1 sel tunggal.II ALAT, BAHAN , DAN PROSEDUR PERCOBAAN

Bab ini menguraikan mengenai : (1) Alat yang Digunakan, (2) Bahan yang Digunakan, dan (3) Prosedur Percobaan.

2.1. Alat yang Digunakan

Alat yang digunakan dalam percobaan ini adalah cawan petri steril, jarum oase, tabung reaksi, korek api dan pembakar spirtus.

2.2. Bahan yang Digunakan

Bahan yang digunakan dalam percobaan ini adalah Nutrient Agar dan biakan murni Serratia marcescens.2.3. Prosedur Percobaan

2.3.1. Isolasi Cawan Gores

Gambar 1. Prosedur Isolasi Cawan TuangCawan petri dibagi menjadi empat bagian dengan diberi nomor I, II, III, IV. Inokulum digoreskan dipermukaan medium agar nutrient, dalam cawan petri dengan jarum oase. Diantara garis-garis goresan akan terdapat sel-sel yang terpisah-pisah sehingga dapat tumbuh menjadi koloni-koloni terpisah.2.3.2. Isolasi Cawan Tuang

Gambar 2. Prosedur Isolasi Cawan GoresDengan menggunakan lup inokulasi, pindahkan satu lup penuh suspensi ke tabung, setelah itu tabung yang sudah tercampur dihomogenkan agar bercampur secara merata, seterlah itu dipindahkan kedalam cawan petri berdasarkan ukuran masing-masing 10-1, 10-2, 10-3. Lalu diinkubasi pada suhu 35C selama 48 jam. Setelah diinkubasi, cawan-cawan tersebut diperiksa jika ada koloni yang terisolasi. Dari cawan yang berisikan koloni-koloni terisolasi, dapat diisolasi biakan murni mikroorganisme dengan memindahkan sebagian dari satu koloni kedalam tabung berisi medium steril.III HASIL PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN

Bab ini menguraikan mengenai : (1) Hasil Pengamatan dan (2) Pembahasan.

3.1. Hasil Pengamatan

3.1.1. Hasil Pengamatan Isolasi Cawan Gores

Tabel 1. Isolasi Cawan GoresGambarKesimpulan

Semakin jauh goresan, semakin murni biakannya.

(Sumber: Tresna Eka Putri, Meja 2, Kelompok C, Tahun 2014)3.1.2. Hasil Pengamatan Isolasi Cawan TuangTabel 2. Isolasi Cawan TuangPCA 10-1PCA 10-2PCA 10-3

koloni = 179koloni = 328koloni = 317

(Sumber : Tresna Eka Putri, Meja 2, Kelompok C, Tahun 2014)Syarat:

1. Jika koloni 30 maka ambil yang paling pekat

2. Jika 30< koloni < 300 maka gunakan syarat :

A = koloni / Pengenceran terbesar

koloni / Pengenceran terkecil

Jika A 2 maka ambil rata-rata

Jika A > 2 maka ambil yang paling pekat

3. Jika koloni 300 ambil yang paling encer

Pada hasil pengamatan isolasi cawan tuang terjadi LA, syarat 1 ambil yang paling pekat.

sel/ml = koloni

Pengenceran

sel/ml =179

10-1sel/ml = 1,79 x 103 cfu/ml

3.2. PembahasanMedium pertumbuhan mikroba merupakan suatu bahan yang terdiri dari campuran nutrient yang diperlukan mikroba untuk pertumbuhan. Dengan menggunakan medium pertumbuhan, aktivitas mikroba dapat dipelajari dan dengan medium tumbuh dapat dilakukan isolasi mikroba dengan struktur murni (Hadioetomo, 1990).Pembiakan mikroba dalam laboratorium memerlukan medium yang berisi zat hara serta lingkungan pertumbuhan yang sesuai dengan mikroorganisme. Zat hara yang digunakan oleh mikroba untuk pertumbuhan, sintesis sel, keperluan energi dalam metabolisme, dan pergerakan, lazimnya medium biakan berisi air, sumber energi, zat hara sebagai sumber karbon, nitrogen, sulfur, fosfat, oksigen, hidrogen, serta unsur-unsur lainnya (Lim, 1998).Telah diketahui bahwa mikroorganisme tersebar di alam dengan berbagai macam jenis dan sifat fisiologis yang beragam, dimana mikroorganisme tersebut mempunyai kebutuhan akan nutrien yang berbeda-beda pula. Namun demikian susunan kimia selnya hampir sama atau lebih sama yaitu terdiri atas air yang merupakan bagian terbesar yaitu 80-90%, sedangkan sisanya berupa komponen lainnya seperti protoplasma, dinding sel, membran protoplasma, cadangan makanan (lemak, polisakarida, polifosfat, protein dan lain-lain) yang berat keringnya kurang lebih 0-20% (Bohari, 2011).Klasifikasi medium berdasarkan fungsinya digolongkan menjadi 7 golongan, yaitu:a) Medium umum, media yang ditambahkan bahan-bahan yang bertujuan menstimulasi pertumbuhan mikroba secara umum. Contoh Nutrien Agar (NA) untuk menstimulasi pertumbuhan bakteri, Potato Dextose Agar (PDA) untuk menstimulir pertumbuhan fungi.

b) Medium khusus, merupakan medium untuk menentukan tipe pertumbuhan mikroba dan kemampuannya untuk mengadakan perubahan-perubahan kimia tertentu misalnya, medium tetes tebu untukSaccharomyces cerevisiae.c) Media diperkaya (enrichment media), media yang ditambahkan bahan-bahan tertentu untuk menstimulasi pertumbuhan mikroba yang diinginkan. Hal ini dilakukan untuk menstimulasi pertumbuhan mikroba yang jumlahnya sedikit dalam suatu campuran berbagai mikroba contoh Chocolate media dan Yeast-Extract-poptasium Nitrat Agar.

d) Media selektif, merupakan media yang ditambahkan bahan-bahan tertentu yang akan menghambat pertumbuhan mikroba yang tidak diinginkan yang ada dalam suatu spesimen. Inhibitor yang digunakan berupa antibiotik, garamk dan bahan-bahan kimia lainnya.

e) Media differensial, merupakan media yang ditambahkan bahan-bahan kimia atau reagensia tertentu yang menyebabkan mikroba yang tumbuh memperlihatkan perubahan-perubahan spesifik sehingga dapat dibedakan dengan jenis lainnya.

f) Medium penguji (Assay medium), yaitu medium dengan susunan tertentu yang digunakan untuk pengujian senyawa-senyawa tertentu dengan bantuan bakteri misalnya medium untuk menguji vitamin-vitamin, antibiotika dan lain-lain.

g) Medium perhitungan jumlah mikroba yaitu medium spesifik yang digunakan untuk menghitung jumlah mikroba dalam suatu bahan, misalnya medium untuk menghitung jumlah bakteriE. coliair sumur.

Mikroorganisme dapat ditumbuhkan dan dikembangkan pada satu substrat yang disebut medium. Medium yang digunakan untuk menumbuhkan dan mengembangbiakkan mikroorganisme tersebut harus sesuai susunannya dengan kebutuhan. Jenis-jenis mikroorganisme yang bersangkutan. Beberapa mikroorganisme dapat hidup pada medium yang sangat sederhana yang hanya mengandung garam anorganik ditambah sumber karbon organik, seperti gula, sedangkan mikroorganisme lainnya memerlukan medium yang sangat kompleks yaitu berupa medium ditambahkan darah atau bahan-bahan kompleks lainnya . (Anonim,2009)Suatu medium yang mengandung substansi kompleks seperti ekstrak daging, trifton, darah dan juga dapat disebut medium buatan atau medium kompleks. Sebagai lawannya kita aduk medium yang masing-masing medium yang ditentukan. Medium sintetik mungkin sangat rumit atau sangat berbeda sesuai dengan mikroorganisme tertentu yang hendak ditumbuhkan untuk sebagian besar medium sintetik hanya digunakan untuk pertumbuhan mikroorganisme dilaboratorium penelitian. Banyak medium saringan lain yang serupa dengan kaldu yang mengandung makanan (Pelozar, 1996).Mikroorganisme dapat menggunakan makanan dalam bentuk padat dan dapat pula yang hanya menggunakan bahan-bahan dalam bentuk cairan atau larutan. Mikroorganisme yang menggunakan makanannya dalam bentuk padat tergolong tipe holozoik. Mikroorganisme yang dapat menggunakan makanannya dalam bentuk cairan atau larutan disebut holofitik. Ada beberapa mikroorganisme yang dapat menggunakan makanannya dalam bentuk padatan, tetapi makanan tersebut sebelumnya harus dicerna, di luar sel dengan bantuan enzim ekstraseluler (Anonim, 2009).

Peran utama nutrien adalah sebagai sumber energi, bahan pembangun sel, dan sebagai aseptor elektron dalam reaksi bioenergetik (reaksi yang menghasilkan energi). Oleh karenanya bahan makanan yang diperlukan terdiri dari air, sumber energi, sumber karbon, sumber aseptor elektron, sumber mineral, faktor pertumbuhan, dan nitrogen. Selain itu, secara umum nutrient dalam media pembenihan harus mengandung seluruh elemen yang penting untuk sintesis biologik oranisme baru (Anonim, 2009).

Tiap sel harus mensintesis sendiri konstituen tubuhnya dari zat-zat sederhana yang ditemukan dalam lingkungannya. Kebanyakan dari zat-zat ini berupa makanan dalam bentuk suspensi atau larutan yang ditemukan dalam air laut, sungai, danau, air selokan (gorong), atau bahan-bahan organik lain yang mengalami penguraian, dan sebagainya. Sifat kimia dan fisika dari habitat ini menentukan jenis organisme yang dapat tumbuh atau hidup di lingkungan itu (Anonim, 2009).

Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan bakteri adalah penyediaaan nutrien yang sesuai untuk kultivasi bakteri, faktor fisika, dan faktor kimia. Meskipun medium yang digunakan amat beragam, namun sebagai makhluk hidup bakteri mempunyai kebutuhan dasar yang sama, yaitu meliputi air, karbon, dan mineral.

Kemampuan mikroorganisme untuk tumbuh dan tetap hidup merupakan suatu hal yang penting untuk diketahui. Pengetahuan tentang faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan mikroba sangat penting di dalam mengendalikan mikroba.A. Faktor AbiotikBerikut ini faktor-faktor abiotik yang mempengaruhi pertumbuhan mikroba :

1. Air

Air merupakan kompunen utanma dalam sel mikroba dan medium. Fungsi air ialah sebagai sumber oksigen untuk bahan organik sel pada respirasi. Selain itu air berfungsi sebagai pelarut dan alat pengangkut dalam proses metabolise.2. Suplai Nutrisi

Mikroba sama dengan makhluk hidup lainnya, memerlukan suplai nutrisi sebagai sumber energi dan pertumbuhan selnya.

Unsur-unsur dasar tersebut adalah : karbon, nitrogen, hidrogen, oksigen, sulfur, fosfor, zat besi dan sejumlah kecil logam lainnya. Kekurangan sumber-sumber nutrisi ini dapat mempengaruhi pertumbuhan mikroba hingga pada akhirnya dapat menyebabkan kematian.

a. Sumber Karbon (Carbon Source)

Setiap bakteri memiliki kebutuhan sumber karbon yang berbeda. Berat unsur karbon merupakan setengah dari berat kering bakteri.

Berdasarkan sumber karbon yang diperlukan bakteri digolongkan menjadi :

(1) Golongan Khemoheterotrof : Golongan bakteri yang memerlukan bahan-bahan organik sebagi sumber karbon seperti protein, karbohidrat dan lipid.

(2) Golongan Khemoototrof : Golongan bakteri yang sebagian sumber karbonnya berasal dari CO2

(3) Golongan Fototrof : Golongan bakteri yang memerlukan sumber karbon seluruhnya dari CO2

b. Sumber Nitrogen, Sulfur, Fosfor

Untuk menyusun bagian-bagian sel misalnya untuk menyintesis protein diperlukan nitrogen dan sulfur sedangkan untuk menyintesis DNA dan RNA diperlukan nitrogen dan fosfor.3. Suhu / Temperatur

Suhu merupakan salah satu faktor penting di dalam mempengaruhi dan pertumbuhan mikroorganisme. Setiap bakteri memilik daya tahan terhadap suhu yang berbeda-beda.

Berdasarkan hal di atas, maka suhu yang berkaitan dengan pertumbuhan mikroorganisme digolongkan menjadi tiga, yaitu :

a. Suhu minimum yaitu suhu yang apabila berada di bawahnya maka pertumbuhan terhenti.

b. Suhu optimum yaitu suhu dimana pertumbuhan berlangsung paling cepat dan optimum. (Disebut juga suhu inkubasi).

c. Suhu maksimum yaitu suhu yang apabila berada di atasnya maka pertumbuhan tidak terjadi.

Sehubungan dengan penggolongan suhu di atas, maka mikroba digolongkan menjadi :Tabel 3. Penggolongan Mikroba Berdasarkan SuhuKelompokSuhu MinimumSuhu OptimumSuhu Maksimum

Psikrofil- 15C.10C.20C.

Psikrotrof- 1C.25C.35C.

Mesofil5 10C.30 37C.40C.

Thermofil40C.45 55C.60 80C.

Thermotrof15C.42 46C.50C.

Berdasarkan ketahanan panas, mikroba dikelompokkan menjadi tiga macam, yaitu :

a.Peka terhadap panas, apabila semua sel rusak apabila dipanaskan pada suhu 60C selama 10-20 menit.

b.Tahan terhadap panas, apabila dibutuhkan suhu 100C selama 10 menit untuk mematikan sel.

c. Thermodurik, dimana dibutuhkan suhu lebih dari 60C selama 10-20 menit tapi kurang dari 100C selama 10 menit untuk mematikan sel.4.Kelembaban

Air sangat penting untuk kehidupan bakteri terutama karena bakteri hanya dapat mengambil makanan dari luar dalam bentuk larutan (holophytis). Semua bakteri tumbuh baik pada media yang basah dan udara yang lembab. Dan tidak dapat tumbuh pada media yang kering. Mikroorganisme mempunyai nilai kelembaban optimum.

Pada umumnya untuk pertumbuhan ragi dan bakteri diperlukan kelembaban yang tinggi diatas 85%, sedang untuk jamur dan aktinomiset diperlukan kelembaban yang rendah dibawah 80%. Kadar air bebas didalam larutan merupakan nilai perbandingan antar tekanan uap air larutan dengan tekanan uap air murni, atau 1 / 100 dari kelembaban relatif. Nilai kadar air bebas didalam larutan untuk bakteri pada umumnya terletak diantara 0,90 sampai 0,999 sedang untuk bakteri halofilik mendekati 0,75.

Banyak mikroorganisme yang tahan hidup didalam keadaan kering untuk waktu yang lama seperti dalam bentuk spora, konidia, arthrospora, kamidiospora dan kista. Seperti halnya dalam pembekuaan, proses pengeringan protoplasma, menyebabkan kegiatan metabolisme terhenti. Pengeringan secara perlahan menyebabkan kerusakan sel akibat pengaruh tekanan osmosa dan pengaruh lainnya dengan naiknya kadar zat terlarut.5.Keasaman atau Kebasaan (pH)

Setiap organisme memiliki kisaran pH masing-masing dan memiliki pH optimum yang berbeda-beda. Bakteri memiliki jarak pH yang sempit yaitu sekitar pH 6,5-7,5 atau pada pH netral. Adapula bakteri yang dapat hidup dibawah pH 4, tetapi ada juga bakteri yang dapat hidup pada pH alkalis.

Oleh karena itu bakteri termasuk makhluk hidup dimana proses biokimiawi, misalnya proses metabolisme, memerlukan peranan enzim maka, masing-masing bakteri juga memiliki pH optimal untuk pertumbuhannya.6. Ketersediaan Oksigen

Mikroorganisme memiliki karakteristik sendiri-sendiri di dalam kebutuhannya akan oksigen. Mikroorganisme dalam hal ini digolongkan menjadi :

a. Aerobik : dapat tumbuh jika ada oksigen bebas.b. Anaerob : dapat tumbuh jikatidak ada oksigen bebas.c. Aerob Fakultatif : Anaerob fakultatif : dapat tumbuh baik dengan atau tanpa oksigen bebas.d. Aerob Obligat : mutlak membutuhkan oksigen bebas.

e. Anaerob Obligat : mutlak tidak membutuhkan oksigen bebas.

7.Tekanan osmosis

Suatu tekanan osmose akan sangat mempengaruhi bakteri jika tekanan osmose lingkungan lebih besar (hipertonis) sel akan mengalami plasmolisis.Plasmolisis yaitu keluarnya cairan dari sel bakteri melalui membrane sitoplasma.

Sebaliknya tekanan osmose lingkungan yang hipotonis akan menyebabkan sel membengkak dan juga dapat mengakibatkan rusaknya sel. Oleh karena itu dalam mempertahankan hidupnya, sel bakteri harus berada pada tingkat tekanan osmose yang sesuai, walaupun sel bakteri memiliki daya adaptasi, perbedaan tekanan osmose dengan lingkugannya tidak boleh terlalu besar.8.Faktor kimiaMengubah permeabilitas membran sitoplasma sehingga lalu lintas zat-zat yang keluar masuk sel mikroorganisme menjadi kacau. Oksidasi, beberapa oksidator kuat dapat mengoksidasi unsur sel tertentu sehingga fungsi unsur terganggu. Misal, mengoksidasi suatu enzim.

Terjadinya ikatan kimia, ion-ion logam tertentu dapat megikatkan diri pada beberapa enzim. Sehigga fungsi enzim terganggu. Memblokir beberapa reaksi kimia,misal preparat zulfat memblokir sintesa folic acid di dalam sel mikroorganisme. Hidrolisa, asam atau basa kuat dapat menghidrolisakan struktur sel hingga hancur. Mengubah sifat koloidal protoplasma sehingga menggumpal dan selnya mati.

Faktor zat kimia yang mempengaruhi pertumbuhan:

1. Logam-logam berat

2. Klor dan senyawa klor

3. Fenol dan senyawa-senyawa sejenis

4. Zulfonomida

5. Alkohol

6. Detergen

7. Aldehid8. Zat pewarna

9. Yodium

10. PeroksidaB. Faktor Biotik

Di alam jarang sekali ditemukan mikroba yang hidup sebagai biakan murni, tetapi selalu berada dalam asosiasi dengan jasad-jasad lain. Antar jasad dalam satu populasi atau antar populasi jasad yang satu dengan yang lain saling berinteraksi.1. Interaksi dalam satu populasi mikroba

Interaksi antar jasad dalam satu populasi yang sama ada dua macam, yaitu interaksi positif maupun negatif. Interaksi positif menyebabkan meningkatnya kecepatan pertumbuhan sebagai efek sampingnya. Meningkatnya kepadatan populasi, secara teoritis meningkatkan kecepatan pertumbuhan. Interaksi positif disebut juga kooperasi. Sebagai contoh adalah pertumbuhan satu sel mikroba menjadi koloni atau pertumbuhan pada fase lag (fase adaptasi). Interaksi negatif menyebabkan turunnya kecepatan pertumbuhan dengan meningkatnya kepadatan populasi. Misalnya populasi mikroba yang ditumbuhkan dalam substrat terbatas, atau adanya produk metabolik yang meracun. Interaksi negatif disebut juga kompetisi. Sebagai contoh jamur Fusarium dan Verticillium pada tanah sawah, dapat menghasilkan asam lemak dan H2S yang bersifat meracun.

2. Interaksi antar berbagai macam mikroba

Apabila dua populasi yang berbeda berasosiasi, maka akan timbul berbagai macam interaksi. Interaksi tersebut menimbulkan pengaruh positif, negatif, ataupun tidak ada pengaruh antar populasi mikroba yang satu dengan yang lain. Nama masing-masing interaksi adalah sebagai berikut:a. Netralisme

Netralisme adalah hubungan antara dua populasi yang tidak saling mempengaruhi. Hal ini dapat terjadi pada kepadatan populasi yang sangat rendah atau secara fisik dipisahkan dalam mikro habitat, serta populasi yang keluar dari habitat alamiahnya. b. Komensalisme

Hubungan komensalisme antara dua populasi terjadi apabila satu populasi diuntungkan tetapi populasi lain tidak terpengaruh.

c. Sinergisme

Asosiasi (hubungan hidup) antara kedua spesies, bila mengadakan kegiatan tidak saling menganggu, akan tetapi kegiatan masing-masing justru merupakan urut-urutan yang saling menguntungkan. Misalnya, ragi untuk membuat tape terdiri atas kumpulan spesies Aspergillus, Saccharomyces, Candida, Hansenula, dan Acetobacter. Masing-masing spesies mempunyai kegiatan-kegiatan sendiri, sehingga amilum berubah menjadi gula, dan gula menjadi bermacam-macam asam organik, alkohol, dan Iain-Iain. Asosiasi komensalisme dan sinergisme tidak ada perbedaan yang tegas.d. Mutualisme

Hubungan hidup antara dua populasi mikroba yang keduanya saling tergantung dan sama-sama mendapat keuntungan. Mutualisme sering disebut juga simbiosis. Simbiosis bersifat sangat spesifik (khusus) dan salah satu populasi anggota simbiosis tidak dapat digantikan tempatnya oleh spesies lain yang mirip.e. Kompetisi

Hubungan negatif antara 2 populasi mikroba yang keduanya mengalami kerugian. Peristiwa ini ditandai dengan menurunnya sel hidup dan pertumbuhannya. Kompetisi terjadi pada 2 populasi mikroba yang menggunakan nutrient (makanan) yang sama atau dalam keadaan nutrien terbatas. f. Amensalisme

Satu bentuk asosiasi antar spesies mikroba yang menyebabkan salah satu pihak dirugikan, pihak lain diuntungkan atau tidak terpengaruh apapun. Umumnya merupakan cara untuk melindungi diri terhadap populasi mikroba lain. Misalnya dengan menghasilkan senyawa asam, toksin, atau antibiotika. g. Parasitisme

Parasitisme terjadi antara dua populasi, populasi satu diuntungkan (parasit) dan populasi lain dirugikan (host / inang). Umumnya parasitisme terjadi karena keperluan nutrisi dan bersifat spesifik. Ukuran parasit biasanya lebih kecil dari inangnya. Terjadinya parasitisme memerlukan kontak secara fisik maupun metabolik serta waktu kontak yang relatif lama.

h. PredasiHubungan antara Amoeba dengan bakteri disebut predatorisme. Amoeba merupakan pemangsa (predator), sedangkan bakteri merupakan mangsa. Kematian mangsa berarti kehidupan pemangsa Berbeda dengan parasitisme adalah dalam hal ukuran besar kecilnya saja; parasit lebih kecil daripada hospes, sedangkan predator lebih besar daripada organisme yang dimangsa. Seperti parasit, tidak dapat hidup tanpa hospes, maka predator pun tidak dapat hidup tanpa mangsa.Pertumbuhan merupakan salah satu karakteristik yang dimiliki oleh semua mikroorganisme hidup. Menurut Benefield dan Randall (1980) pertumbuhan bakteri sederhana didefinisikan sebagai peningkatan jumlah mikroorganisme per unit waktu. Kebanyakan bakteri bereproduksi dengan cara membelah diri, di mana akan terbentuk dua sel baru dari satu sel induk. Waktu yang dibutuhkan untuk membentuk dua sel baru tersebut dinamakan waktu generasi. Waktu generasi bervariasi tergantung pada spesies dan kondisi pertumbuhan, ada yang hanya beberapa menit ada yang sampai beberapa jam.

Jika bakteri ditanam dalam suatu larutan biak, maka bakteri akan terus tumbuh sampai salah satu faktor kebutuhannya mencapai minimum dan pertumbuhan menjadi terbatas. Kalau sepanjang peristiwa ini tidak terjadi tidak terjadi penambahan nutrisi atau penyaluran keluar produkproduk metabolisme, maka pertumbuhan dalam lingkungan hidup seperti ini mematuhi hukum hukum, yang tidak hanya berlaku bagi organisme bersel tunggal saja, tetapi juga untuk organisme bersel banyak dengan pertumbuhan yang dibatasi secara genetik.Perkembangbiakan bakteri dapat dinyatakan dalam grafik logaritma jumlah sel hidup setiap waktu. Menurut Monod (1949) terdapat beberapa tahap pertumbuhan, yaitu:

Gambar 3. Fase Pertumbuhan Mikroba1. Fase lag atau adaptasiFase ini merupakan fase yang dilakukan mikroorganisme untuk beradaptasi dengan lingkungannya yang baru sebelum memulai pertumbuhan. Waktu yang dibutuhkan untuk berkembang biak cukup lama, kecepatan pertumbuhan berada pada titik yang rendah mendekati nol dengan waktu generasi yang panjang. Ukuran serta kecepatan aktivitas metabolisme berada pada kondisi maksimum. Fase log akan pendek jika inokulum yang dipakai adalah bakteri pada pertumbuhan eksponensial dan media memiliki komposisi yang sama dengan media pertumbuhan sebelumnya. Inokulasi bakteri pada fase stasioner atau inokulasi ke media dengan komposisi berbeda akan menghasilkan fase lag sepuluh sampai dua puluh jam lebih lama. Fase lag mengindikasikan waktu yang diperlukan bakteri untuk mensintesis enzim yang dibutuhkan dalam metabolisme nutrisi baru.2. Fase akselerasiSetelah aklimatisasi sel akan mengalami fase percepatan pertumbuhan eksponensial, di mana nutrisi digunakan untuk membentuk materi sel baru. Pada tahap ini waktu yang dibutuhkan untuk berkembang biak semakin pendek dan terjadi peningkatan kecepatan pertumbuhan.3. Fase eksponensialPada tahap ini waktu yang dibutuhkan untuk berkembang biak atau waktu generasi berada pada kondisi minimal atau konstan, kecepatan pertumbuhan spesifik berada pada kondisi maksimal atau konstan. Terjadinya kondisi ini ditandai dengan nilai DNA/sel, RNA/sel, protein/sel dan kerapatan sel berada pada kondisi konstan, sedangkan untuk ukuran sel biasanya minimum. Karena kecepatan pembelahan diri relatif konstan maka tahap ini paling cocok untuk menetapkan kecepatan pembelahan diri dan kecepatan pertumbuhan. Selain dapat juga digunakan untuk mempelajari faktor faktor lingkungan dan untuk mengetahui kemampuan mikroorganisme dalam menggunakan substrat.

4. Penurunan fase pertumbuhanPada fase ini terjadi penurunan kecepatan pertumbuhan spesifik yang disebabkan oleh penurunan konsentrasi substrat dan akumulasi hasil metabolisme yang bersifat toksik.

5. Fase stasionerPada fase ini nutrien telah habis, konsentrasi tinggi dari hasil metabolisme yang bersifat toksik, serta mempunyai kepadatan populasi yang tinggi. Fase stasioner merupakan fase keseimbangan antara pertumbuhan dan kematian sel. Sebenarnya dalam fase ini sel berada pada tahap tidak melakukan aktivitas (suspended animation) (Wilkinson, 1975).

6. Fase endogenusDengan berakhirnya fase stasioner akan diikuti dengan mulainya fase kematian. Pada fase ini proses metabolisme berhenti, laju kematian meningkat dan ada kemungkinan sel sel dihancurkan oleh pengaruh enzim yang berasal dari sel itu sendiri (autolisis). Ketika proses lisis terjadi nutrien intraselular terlepas ke dalam medium yang kemudian dapat digunakan oleh mikroorganisme lain yang masih hidup.

Isolasi bakteri merupakan suatu cara untuk memisahkan atau memindahkan mikroba tertentu dari lingkungan sehingga diperoleh kultur murni atau biakan murni. Ada beberapa cara yang dapat dilakukan yaitu dengan cara goresan (streak plate), cara tuang (pour plate), cara sebar (spread plate), dan micromanipulator. ( Buckle,1998).Ada beberapa metode yang digunakan untuk mengisolasi biakan murni mikroorganisme yaitu :

1. Metode Cawan GoresTeknik ini lebih menguntungkan jika ditinjau dari sudut ekonomi dan waktu, tetapi memerlukan ketrampilan-ketrampilan yang diperoleh dengan latihan. Penggoresan yang sempurna akan menghasilkan koloni yang terpisah. Inokulum digoreskan di permukaan media agar nutrien dalam cawaan petri dengan jarum pindah (lup inokulasi). Di antara garis-garis goresan akan terdapat sel-sel yang cukup terpisah sehingga dapat tumbuh menjadi koloni (Winarni, 1997).Cara penggarisan dilakukan pada medium pembiakan padat bentuk lempeng. Bila dilakukan dengan baik teknik inilah yang paling praktis. Dalam pengerjaannya terkadang berbeda pada masing-masing laboratorium tapi tujuannya sama yaitu untuk membuat goresan sebanyak mungkin pada lempeng medium pembiakan (Kus Irianto, 2006).2. Metode Cawan TuangCara lain untuk memperoleh koloni murni daripopulasi campuran mikroorganisme adalah dengan mengencerkan spesimen dalam medium agar yang telah dicairkan dan didinginkan (50oC) yang kemudian dicawankan. Karena konsentrasi sel-sel mikroba di dalam spesimen pada umunya tidak diketahui sebelumnya, maka pengenceran perlu dilakukan beberapa tahap sehingga sekurang-kurangnya satu di antara cawan tersebut mengandung koloni terpisah di atas permukaan ataupun di dalam agar.Metode ini memboroskan bahan dan waktu namun tidak memerlukan keterampilan yang tinggi. Pertumbuhan mikroorganisme tidak ada kaitannya degan lamanya inkubasi dan suhu penyimpanannya. Akan tetapi pertumbuhan mikroorganisme berkaitan erat dengan jumlah factor pengenceran yang dilakukan. Semakin tinggi faktor pengenceran, maka semakin banyak mikroorganisme yang tumbuh, sebaliknya jika faktor pengencerannya semakin rendah (semakin encer suatu larutan pengencer), maka semakin sedikit mikroorganisme yang tumbuh dan didapatkan biakan yang murni.IV KESIMPULAN DAN SARANBab ini menguraikan mengenai : (1) Kesimpulan dan (2) Saran.

4.1. Kesimpulan

Berdasarkan hasil pengamatan isolasi cawan gores dapat disimpulkan bahwa semakin jauh goresan maka biakan tersebut semakin murni, sedangkan pada isolasi cawan tuang didapatkan jumlah koloni sebanyak 17,9 x 102 cfu/ml.4.2. Saran

Percobaan isolasi cawan tuang dan cawan gores perlu diperhatikan kebersihan alat dan bahan yang akan digunakan serta dalam pengerjaannya harus aseptis dan dalam pengerjaannya dibutuhkan ketelitian dan keterampilan yang tinggi.DAFTAR PUSTAKAHadioetomo, Ratna. 1990. Mikrobiologi Dalam Praktek. Gramedia: Jakarta.

Hafsah. 2009. Mikrobiologi Umum. Universitas Islam Negeri Alauddin:Makassar.

Lim, D., 1998 Dasar-Dasar Mikrobiologi I. Microbiology. WCB Mc Graw Hill, Missouri.

Buckle,K. 1998. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan : Malang.

Pelczar, M.1986. Dasar-dasar Mikrobiologi. Erlangga : Jakarta.Waluyo, L. 2005. Mikrobiologi Umum. MM Press: Malang. Winarni, D. 1997. Diktat Teknik Fermentasi. Program Studi D3 Teknik Kimia FTI-ITS : Surabaya. Anonim, 2009. Iptek. http://www.beritaiptek.com/images/ratnon. Diakses : 15 November 2014Anonim, 2009. Media pertumbuhan bakteri. http://freebussines.blogspot.com/. Diakses : 15 November 2014Anonim, 2009. Media pertumbuhan bakteri. http://www.blogger.com/blog-this-g. Diakses : 15 November 2014Anonim, 2009. Mikrobiologi. http://avalonstar.com/. Diakses : 15 November 2014Anonim, 2009. Sebuah Esensi Dasar Untuk Kehidupan Mikroba.http://zaifbio.wordpress.com/2009/01/31/nutrisi-mikroba-sebuah-esensi-dasar-untuk-kehidupan-mikroba/. Diakses : 15 November 2014

Bohari, Mega. 2012. Medium. http://megabohari.blogspot.com/2011/12/laporanlaporan-mikrobiologi-medium.html. Diakses : 15 November 2014 I

0

III II

Pada atas cawan buat beberapa daerah lalu tandai dengan 0, I, II, III.

Tuang NA cair, lalu ratakan dan diamkan sampai membeku

I

0

III II

Gesekan Serratia marcescens secara berurutan dari 0-III dengan bentuk gesekan zig-zag

I

0

III II

913