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Crescimento bacteriano
O crescimento é um somatório dos processos
metabólicos progressivos, que normalmente
conduz à divisão com concomitante produção
de células-filhas a partir de uma bactéria
U.F.C. ("unidades formadoras de colônias“)
C.F.U. ("colony forming units“)
U.F.C. ("unidades formadoras de colônias“)
C.F.U. ("colony forming units“)
Tempo para 1 ciclo completo
E. coli => 20 min
Micobactérias => 13 – 15 hs
CrescimentoTensão de Oxigênio atmosférico
Aeróbias estritas
Mycobacterium sp
Anaeróbias estritas
Clostridium sp
Anaeróbias facultativos
Streptococcus sp
Microaerófilas
Neisseria sp
Anaeróbias não estritas
Lactobacillus sp
Meios de Cultura
Aspectos gerais
Cultivar e manter microrganismos viáveis no
laboratório
Substâncias essenciais para o crescimento das
bactérias
Crescimento seletivo
Demonstração de propriedades biológicas (hemólise
produção de pigmentos e enzimas, fermentação etc...
Isolamento
Meio de Cultura
Principais produtos e compostos utilizados
Hidrolizados de proteínas peptonas, infusão de carne, triptona, caseína
Carboidratos Dissacarídeos (lactose, sacarose e maltose)
Hexoses (glicose)
Pentoses (xilose)
Tampões Fosfatos monossódicos e dissódicos ou potássicos
Enriquecimento Sangue, soro, vitaminas, extratos de levedura
Inibidores Corantes de anilina (eosina, verde brilhante etc...)
Metais pesados (bismuto)
Produtos químicos (azida de sódio, citrato, desoxicolato, álcool feniletílico)
Agentes antimicrobianos (oxacilina, vancomicina, novobiocina....)
Meio de Cultura
Principais produtos e compostos utilizados
Indicadores de pH Vermelho de fenol
Vermelho neutro
Púrpura de bromocrezol
Azul de bromotimol etc...
Outros indicadores Íons férrico e ferroso – H2S (sulfeto ferroso)
Ágar Extrato gelatinoso extraído de algas vermelhas
Substratos para a ação de enzimas Uréia, tiossulfato de sódio, triptofano, lisina etc....
Composição
Nutrientes indispensáveis ao crescimento do organismo
Concentração não inibitória
Meio deve ser submetido a esterilização, eliminando contaminantes
Classificação:
Formulação
Finalidade Funcional
Meios de Cultura
Principais características-continuar
Classificação
Formulação
Sólidos (ágar) 1 a 2,0 %
Caldos Ativação das culturas, repiques de microrganismos,
provas bioquímicas
Semi-sólidos (ágar) 0,05 a 0,3 %
Meios de Transporte e Conservação
Meios para Crescimento e isolamento
Meios comerciais para provas de
identificação
Meios para teste de sensibilidade aos
antimicrobianos
ClassificaçãoClassificação
FunçãoFunção
Meios de Transporte e Conservação
Meio Stuart
Caldo Lactosado
Cary Blair
Salina Tamponada
Ágar Nutriente
Meios de Transporte e Conservação
Meio Stuart
Impede a multiplicação do microrganismos e garante
apenas sua sobrevivência.
Haemophilus sp., Pneumococcus,Salmonella sp., Shigella
sp.
Cor original do meio: Branco opalescente.
Não há evidência de crescimento bacteriano.
Microrganismos (MO) injuriados Ex: Água peptonada, Caldo lactosado -Salmonella sp
Meios de Transporte e Conservação
Caldo Lactosado
Meios de Transporte e Conservação
Ágar Nutriente
Análise de água, alimentos e leite, cultivo e isolamento
preliminar das amostras
Cor original do meio: branco opalescente.
Positivo: Crescimento na superfície do ágar.
Negativo: Ausência de crescimento.
Meios para Crescimento e IsolamentoMeios para Crescimento e Isolamento
Ágar Chocolate
Ágar Thayer-Martin - Chocolate
Ágar Salmonella-Shigella (ss)
Caldo Selenito
Caldo Tetrationato
Caldo Tioglicolato com indicador
Caldo Tioglicolato sem indicador
Ágar MacConkey
Ágar Sangue
Ágar CLED – cystine lactose electrolyte deficient
Caldo BHI – infusão de cérebro e coração
Löwenstein Jensen
Meios para Crescimento e Meios para Crescimento e IsolamentoIsolamento
Ágar Chocolate
Microrganismos exigentes
Base - sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta (hemina e hematina)
Haemophilus sp., Neisseria sp.,
Cor original do meio: castanho escuro (chocolate).
Colônias de tamanho pequeno a médio, com pigmento amarelo: sugestivo de Haemophilusa sp.
Colônias pequenas e delicadas, com pigmento creme claro: sugestivo de Neisseria sp.
Meios para Crescimento e Isolamento
Thayer Martin
Ágar Chocolate – Vancomicina (G+), Colistina (G-), Nistatina (f)
e Trimethoprim (PM)
Gram negativo e Gram positivo, fungos filamentosos(bolores) e leveduras
Eritrócitos íntegros (padrões de hemólise nítidos)
Verificação de hemólise dos Streptococcus eStaphylococcus
Prova de satelitismo (para identificação presuntiva deHaemophilus spp.).
Cor original do meio: vermelho.
Beta hemólise
Alfa hemólise
Gama hemólise
Meios para Crescimento e Isolamento
Ágar Sangue
Meios para Crescimento e Isolamento
Ágar MacConkey
Isolamento de bacilos Gram negativo (seletivo)
Inibe Gram positiva (cristal violeta)
Utilização de lactose (diferencial)
Lactose positiva – coloração avermelhada
Lactose negativa – coloração inalterada
Eventualmente, podem crescer Enterococcus, Candida e Bacillus
Meios para Crescimento e Isolamento
Ágar Salmonella-Shigella (SS)
Inibem microrganismos Gram positivos (sais de bile, verde
brilhante e citrato de sódio)
Tiossulfato de sódio e o citrato férrico
Colônias com centro negro (H2S) ou colônias incolores: suspeita de Salmonella.
Colônias incolores: suspeita de Shigella spp.
Colônias cor de rosa ou vermelho: suspeita de Escherichia coli ou Klebsiella spp.
As bactérias não fermentadoras de lactose cor inalterada.
As bactérias fermentadoras de lactose aparecem na cor rosa.
Salmonella Escherichia coli
Klebsiella sp
Salmonella e Shigella
Meios para Crescimento e Isolamento
Ágar Salmonella-Shigella (SS)
Amostras de Urina.
Deficiência de eletrólitos inibem o crescimento de Proteus.
Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram
negativos e leveduras.
Cor original do meio: azul claro.
Colônias lactose positiva: cor amarela.
Colônias lactose negativa: cor azul.
Meios para Crescimento e Isolamento
Ágar CLED – cystine lactose electrolyte deficient
Meios para Crescimento e Isolamento
Löwenstein Jensen
Base ovos integrais
Teste de niacina (positivo para Mycobacterium
tuberculosis).
Isolamento primário de micobactérias.
Cor original do meio: verde claro
Positivo: Crescimento de colônias amarelas/vermelhas
Negativo: ausência de crescimento.
Meios para Crescimento e Isolamento
Löwenstein Jensen
Brometo Brometo cianogêniocianogênio + + benzidinabenzidina
Meios Comerciais para Provas de
Identificação e Classificação
Ágar Citrato Simmons
Ágar Bile-Esculina
Ágar Sangue
Caldo base de Moeller
Ágar DNAse
Ágar Esculina
Ágar Fenilalanina
CTA – Cystine Tryticase
Ágar Caldo Triptona
Caldo Malonato
Caldo Nitrato
Ágar Müeller - Hinton
Ágar TSI – Triplo Açúcar Ferro
Ágar base Uréia (Christensen)
Vermelho de Metila, Voges-Proskauer
Gram negativo e Gram positivo, fungos filamentosos(bolores) e leveduras
Eritrócitos íntegros (padrões de hemólise nítidos)
Verificação de hemólise dos Streptococcus eStaphylococcus
Prova de satelitismo (para identificação presuntiva deHaemophilus spp.).
Cor original do meio: vermelho.
Beta hemólise
Alfa hemólise
Gama hemólise
Identificação e classificação
Ágar Sangue
S. aureus - colônias -hemolíticas
Alpha-hemólise
(Streptococcus pneumoniae)
Beta-hemólise
(Streptococcus pyogenes)
Gama-hemólise
(Enterococcus faecalis)
Identificação e Classificação
Ágar Sangue
Teste de Camp
Staphylococcus aureus
Streptococcus a ser identificado
Streptococcus agalactiae
Identificação e Classificação
Ágar Sangue
Provas de Identificação
ÁgarÁgar DNAseDNAse
Hidrólise de ácido desoxirribonucléico (DNA)
DNase positivos: Staphylococcus aureus , Serratia sp. e Proteus sp....
DNase negativos: Staphylococcus coagulase negativa, enterobactérias....
Revelação com HCl 1 N:
Cor original do meio: amarelo claro
Positivo: Presença de halo claro na parte inferior e em volta da colônia.
Negativo: Ausência de halo claro em volta da colônia.
Revelação com azul de toluidina :
Cor original do meio: azul claro
Positivo: Coloração rosa na parte inferior e em volta da colônia.
Negativo: Ausência de cor rosa. O meio permanece com a cor original, azul.
Provas de Identificação
Caldo Caldo MalonatoMalonato
Malonato de sódio como única fonte de carbono,
resultando em alcalinização do meio.
Diferenciar gêneros e espécies de enterobactérias e não
fermentadores.
Cor original do meio: verde.
Positivo: azul.
Negativo: inalterado (verde).
• Hidrolise da esculina.
• Identificação de Streptococcus x Enterococcus
• Esculina > glicose + esculetina
• esculetina + íons férricos
Provas de Identificação
Ágar Bile Esculina
Identificação
Ágar base Uréia (Christensen) Ação da enzima urease - resultando na alcalinização do meio.
Bacilos Gram negativos fermentadores e não fermentadores, Staphylococcus e Haemophilus.
Cor original do meio: amarelo palha.
Positivo: alteração do meio para cor de rosa, pink.
Negativo: sem alteração de cor do meio.
Identificação
CTA (Cystine-tryptic-agar )
•Semi-sólido – fermentação de carboidratos
•Usado para diferenciar espécies de Haemophilus sp., Branhamella catarrhalis
e Corynebacterium spp. Neisseria sp.
Identificação
Ágar Manitol
Crescimento e fermentação do Manitol em meio hipertônico
S. aureus +, S. saprophyticus +/-, S. epidermidis -
Identificação
Ágar Müeller - Hinton
H.influenzaeH.influenzae
Fastidiosas
Requerem hemina (Fator X)
Nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD ou Fator V)
Identificação
TSI (Tríplice açucar e ferro)
Teste bioquímico para identificação Família Enterobacteriaceae
•Fermentação de glicose, lactose e sacarose; produçaõ de gás e H2S
Família Enterobacteriaceae
VM : Fermenta glicose - via de ácida-mista ( ác. Acético;
láctico; fórmico)
Ex E. coli +; Klebsiella sp –
VP : Fermenta glicose – via butilenoglicólica ( acetoína,
butilenoglicol e poucos ácidos ) + KOH e O2 a acetoína é
convertida em diacetila + alfa-naftol - vermelho ( indicador
Vermelho de metila)
Ex Klebsiella sp +; E. coli –
Identificação
Vermelho de Metila, Voges-Proskauer
Kirby e Bauer e pelo NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory
Standards ) - condições de crescimento das principais bactérias.
Avaliação da resistência aos antimicrobianos - métodos de difusão em disco
e E-test para enterobactérias, não fermentadores, Staphylococcus,
Enterococcus sp.
A zona do diâmetro é particular para cada droga e organismo, sendo
comparado com diâmetros padronizados pelo NCCLS, que determina
cada microrganismo sendo sensível, intermediário ou resistente.
Sensibilidade aos Antimicrobianos
Ágar Mueller Hinton
Sensível - S. epidermidis
Zona de inibição > 16mm
Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos
Ágar Mueller Hinton
Detecção da resistência à oxaclina ( meticilina)
E-test
Susceptibilidade à oxacilina
Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos
Ágar Mueller Hinton